本发明涉及医药领域，且特别涉及一种流产药物。
背景技术：
为消除非意愿妊娠，需要进行终止妊娠的措施。终止妊娠或人工流产的措施目前有两类：一类是手术(人工)流产，一类是药物流产。
其中，手术(人工)流产过程中，因为要进行宫腔操作，不可避免地会损伤生殖道。而且进行时会疼痛，体虚者可能会出现休克，若手术时的器械不净或其他情况，容易使生殖器官感染。药物流产由于没有人工器械的介入，能避免生殖器损伤或感染，是很多害怕手术的女性的最佳选择。目前常用的流产药物为米非司酮，用于无保护性行为后72小时内；对于已建立的妊娠终止，其推荐使用的有效时间为49天内的妊娠。
但是在实际应用中，现有的终止非意愿妊娠药物仅能在一定时期内起作用，例如在无保护性交72小时到35天这段时间，由于黄体未充分发育，米非司酮无黄体上的作用靶点，因此使用后不会产生终止妊娠的效果。在无保护性交72小时到35天这段时间，目前国内外还缺乏有效的终止妊娠的方法。同时，现有的药物都是口服，即全身给药方式，药物吸收后会作用于神经内分泌中枢和外周内分泌腺，现有的多数流产药物具有比较明显的副作用，包括恶心、呕吐、眩晕、疲乏、头痛、乳房触痛和下腹部疼痛等。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种流产药物，旨在解决上述问题。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
本发明提出一种流产药物，其包括芸豆植物凝集素，芸豆植物凝集素在流产药物中的浓度为40-60mg/ml。
本发明提出一种流产药物，其包括芸豆植物凝集素、低聚糖、nacl以及ph缓冲液，芸豆植物凝集素在流产药物中的浓度为40-60mg/ml，低聚糖在流产药物中的浓度为40-50mg/ml，以及nacl在流产药物中的浓度为6-9mg/ml。
本发明实施例提供的流产药物的有益效果是：
经发明人研究发现，芸豆植物凝集素(yunnankidneybeanlectin，kblorphytohemagglutinin，pha)的糖结合位点有半乳糖，甘露糖和乙酰氨基葡萄糖。而半乳糖对胚胎的植入有非常重要的关系。胚胎表面和子宫内膜表面存在大量半乳糖基，如果封闭了半乳糖基，就会干扰胚胎的着床。因此芸豆pha可利用其与半乳糖结合的特点用于终止胚胎着床，在终止10-60天的妊娠方面，尤其是在芸豆植物凝集素在流产药物中的浓度为40-60mg/ml时，该流产效果明显，且对人体无毒副作用。该阶段芸豆植物凝集素可通过如下途径发挥作用：1.作用于子宫内膜的、腺上皮及基膜，干扰胚胎着床；2.作用于胚胎滋养层及基膜；3.作用于蜕膜细胞及周围的细胞外基质；4.在胚胎着床后阶段可特异性作用于胎盘的合体滋养层。同时由于芸豆植物凝集素是一种非免疫原性物质，使用后不会产生免疫抗-原抗体反应，不会产生免疫记忆作用，对人体无副作用。同时低聚糖、nacl以及ph缓冲液对该药物具有优化作用，使治疗效果更佳。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的一种流产药物进行具体说明。
一种流产药物，其包括芸豆植物凝集素，芸豆植物凝集素在流产药物中的浓度为40-60mg/ml，例如芸豆植物凝集素在流产药物中的浓度为40mg/ml、45mg/ml、50mg/ml、55mg/ml或60mg/ml等。
本发明还提供另一种流产药物，其包括芸豆植物凝集素、低聚糖、nacl以及ph缓冲液，芸豆植物凝集素在流产药物中的浓度为40-60mg/ml，低聚糖在流产药物中的浓度为40-50mg/ml，以及nacl在流产药物中的浓度为6-9mg/ml。
由于受精卵在输卵管完成受精后就进行早期的胚胎发育，约受精后第6-9天从输卵管进入子宫。此时子宫内膜增厚，糖基数量增加。胚胎和子宫内膜发生对话，胚胎经过定位、黏附、穿透三个过程完成胚胎植入子宫内膜的过程。在此阶段，胚胎与子宫内膜识别的作用依靠胚胎表面的糖基，因此糖基是顺利完成胚胎植入的重要物质基础。若此时胚胎或子宫内膜的任何一方糖基发生问题，胚胎就无法完成植入。胚胎表面和子宫内膜表面存在大量半乳糖基，若封闭半乳糖基，就会干扰胚胎的着床。而芸豆植物pha的糖结合位点有半乳糖，因此，可利用芸豆植物凝集素与半乳糖结合的特点作为终止胚胎着床的药物。同时，芸豆植物凝集素是一种非免疫原性物质，使用后不会产生免疫抗-原抗体反应，不会产生免疫记忆作用。从而可以重复多次使用，更为健康安全。
本发明中较佳的实施例中，芸豆植物凝集素可以为红芸豆植物凝集素或白芸豆植物凝集素，在此不做具体限定。
由于芸豆植物凝集素在作用过程中，可根据芸豆植物凝集素浓度的高低对靶细胞起到不同的作用，发明人发现，芸豆植物凝集素在中浓度时可诱导细胞发生凋亡，而高浓度时可引起细胞坏死。因此，在空间维度上，芸豆植物凝集素可作用于胚胎及胚胎发育的周围环境；在时间维度上，在非妊娠期，围着床期和着床后芸豆植物凝集素都可以特异性地和胚胎、子宫内膜以及滋胚层细胞结合而发挥作用，此为芸豆植物凝集素终止妊娠的独特作用的基础，即作用方式为直接的接触并发生反应。
因此，优选地，流产药物的剂型为凝胶剂、膏剂或溶液剂，例如流产药物的剂型为凝胶剂，或流产药物的剂型为膏剂，或流产药物的剂型为溶液剂。并且优选流产药物的给药方式为子宫腔内给药，具体地，采用子宫腔内注射给药方式。使芸豆植物凝集素流产作用最佳，同时采用子宫腔内局部给药方式，给药方式相对简便。
具体地，根据时间的不同采用不同的给药方式，流产效果更佳：
无保护或意外性交后1-9天，可采用仰卧位，对外阴进行简单的消毒处理，用扩阴器扩开阴道，暴露子宫颈口，再用给药管经宫颈口插入子宫腔，给药管例如可以为9cm长，外径为0.2cm的一次性塑料直肠给药管。无保护或意外性交后1-9天，可注射本发明较佳实施例提供的流产药物3-4ml用于流产。
无保护或意外性交后10-60天，可采用仰卧位或肘膝位，对外阴进行简单的消毒处理，用扩阴器扩开阴道，暴露子宫颈口。再用给药管经宫颈口插入子宫腔，给药管例如可以为9cm长，外径为0.2cm的一次性塑料直肠给药管。无保护或意外性交后10-60天，可注射本发明较佳实施例提供的流产药物4-6ml用于流产。
由于芸豆植物凝集素为大分子糖蛋白，其分子量约为32kd，因此采用子宫腔内局部给药方式后不会对神经内分泌轴的高级部分下丘脑及垂体内分泌激素产生影响。
由于给药方式为子宫腔内给药，因此优选地，低聚糖在流产药物中浓度为20-50mg/ml，例如低聚糖在流产药物中浓度为20mg/ml、23mg/ml、25mg/ml、28mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、37mg/ml、40mg/ml、45mg/ml或50mg/ml等。同时芸豆植物凝集素具有增加妇女阴道内乳酸杆菌数量的作用，而低聚糖的添加可以有效促进阴道有益菌生长，降低给药过程中阴道受到感染的几率。另外，低聚糖对蛋白质也有一定的保护作用；一定浓度的低聚糖还可促进细胞的生长。因此，在配方中含有低聚糖是对人体有益无害。
低聚糖可以为异麦芽低聚糖、低聚果糖、水苏糖或棉籽糖等等。由于在凝集素的提取液中存在天然的水苏糖或棉籽糖，因此不需要额外添加，因此本发明较佳的实施例中，低聚糖可为水苏糖或棉籽糖中的至少一种，例如低聚糖可以为水苏糖或棉籽糖，还可以为水苏糖和棉籽糖中的至少一种。
进一步地，由于，给药方式为子宫给药，为了避免给药过程中药物从阴道流出，优选流产药物的剂型为凝胶剂，即优选流产药物还包括增稠剂，一方面由于子宫内给药方式，需要流产药物具有一定的流动性，另一方面为了增大特异性与胚胎，子宫内膜和滋胚层细胞结合的几率，优选地，增稠剂在流产药物中的浓度为4-20mg/ml，例如增稠剂在流产药物中的浓度为4mg/ml、6mg/ml、10mg/ml、12mg/ml、15mg/ml、17mg/ml或20mg/ml。
增稠剂的种类很多，例如白芨胶等，在此不一一例举，本发明较佳的实施例中，增稠剂选自银耳多糖或羧甲基纤维素钠中的至少一种。其中，银耳多糖是担子菌多糖类免疫增强剂，具有改善机体免疫功能及升高白细胞的作用。
进一步地，为了避免给药过程中，孕妇感到疼痛不适，优选流产药物还包括麻醉剂，但由于麻醉剂浓度过高，易引发副作用，浓度过低，效果不佳，因此优选麻醉剂在流产药物中的浓度为0.2-0.8mg/ml，例如，麻醉剂在流产药物中的浓度为0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml或0.8mg/ml等，麻醉效果佳。
麻醉剂例如可以为利多卡因，例如利多卡因peg10000。
进一步地，为了保证给药过程中，保证子宫内细胞的正常生理活动，流产药物中nacl的浓度为6-9mg/ml，例如，nacl在流产药物中的浓度为6mg/ml、7mg/ml、7.5mg/ml、8mg/ml或9mg/ml等，保证细胞的正常渗透压。
进一步地，流产药物中的ph缓冲剂为磷酸-磷酸缓冲液、磷酸钠缓冲液或磷酸钾缓冲液等，用于调节子宫内部环境的ph，防止子宫内部环境变化引发的感染。其中，ph缓冲剂还可以自行配置，例如ph＝5.8的磷酸-磷酸缓冲液(1)称取nah2po4·2h2o31.2g(或nah2po4·h2o27.6g)，加入1000ml重蒸水溶解，配置0.2mol/l的nah2po4；(2)称取na2hpo4.12h2o71.632g(或na2hpo4·7h2o53.6g或na2hpo4·2h2o35.6g)，加入1000ml重蒸水至溶解，制得0.2mol/l的na2hpo4；(3)取92.0ml的nah2po4与8.0mlna2hpo4混合即可。
本发明提供的流产药物，其还可以包括医学上可接受剂量的载体，载体也为医学上可接受的载体，例如水、酒精、防腐剂等，其中防腐剂可以有效提高流产药物的保质期。
需要说明的是，本发明中芸豆植物凝集素的提取纯化和活性测定采用公开号为cn101508730a的中国专利文件所公开的技术进行，蛋白质含量采用通用的双缩脲法进行测定。需特别注意的是，本发明中所需的芸豆植物凝集素的凝集活性≧128u/mg。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
一种流产药物，包括芸豆植物凝集素、低聚糖、nacl和ph缓冲剂。其中，芸豆植物凝集素在流产药物中的浓度为45mg/ml，低聚糖在流产药物中浓度为30mg/ml，nacl在流产药物中的浓度为8mg/ml。
实施例2
一种流产药物，包括芸豆植物凝集素、低聚糖、nacl和ph缓冲剂。其中，芸豆植物凝集素在流产药物中的浓度为40mg/ml，低聚糖在流产药物中浓度为45mg/ml，nacl在流产药物中的浓度为9mg/ml。
实施例3
一种流产药物，包括芸豆植物凝集素、低聚糖、nacl、麻醉剂和ph缓冲剂。其中，芸豆植物凝集素在流产药物中的浓度为60mg/ml，低聚糖在流产药物中浓度为28mg/ml，nacl在流产药物中的浓度为8mg/ml，麻醉剂在流产药物中的浓度为0.7mg/ml，麻醉剂为利多卡因peg10000。
实施例4
一种流产药物，包括芸豆植物凝集素、低聚糖、增稠剂、nacl和ph缓冲剂。其中，芸豆植物凝集素在流产药物中的浓度为45mg/ml，低聚糖在流产药物中浓度为35mg/ml，nacl在流产药物中的浓度为8mg/ml，增稠剂在流产药物中的浓度为15mg/ml，增稠剂为羧甲基纤维素钠。
实施例5
一种流产药物，包括芸豆植物凝集素、低聚糖、增稠剂、麻醉剂、nacl和ph缓冲剂。其中，芸豆植物凝集素在流产药物中的浓度为40mg/ml，低聚糖在流产药物中浓度为30mg/ml，nacl在流产药物中的浓度为7mg/ml，增稠剂在流产药物中的浓度为10mg/ml，增稠剂为羧甲基纤维素钠。麻醉剂在流产药物中的浓度为0.3mg/ml，麻醉剂为利多卡因peg10000。
试验例
(1)动物试验
①芸豆植物凝集素的急性毒性试验
取18-22g昆明白小鼠80只，雌雄各半，雌雄分别测定腹腔注射红芸豆pha的半数致死量(ld50)。各设5个红芸豆pha剂量组，每组8只，按0.4ml/只给药。单次腹腔注射，观察7d，结果表明：雌雄不同性别小鼠的对pha的耐受性不同。雌鼠ld50为725.07mg/kg，ld50的95％的可信区间为(639.65-827.14)mg/kg，ld0为440mg/kg，ld100为1074mg/kg；雄鼠ld50为535.45mg/kg，ld50的95％的可信区间为(480.96-598.81)mg/kg，ld0为350mg/kg，ld100为783.64mg/kg。剖检部分死亡小鼠无异样，存活小鼠体重、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物等均未见明显异常。
②芸豆pha子宫给药对小鼠的影响
本实验考察高浓度芸豆pha对小鼠的影响。准备48只未孕雌鼠，随机分为6个组，每组8只。(1)50mg组：每只小鼠进行单侧子宫注射50mg/0.5ml芸豆pha；(2)20mg组：每只小鼠进行单侧子宫注射20mg/0.2ml芸豆pha；(3)10mg组：每只小鼠进行单侧子宫注射10mg/0.1ml芸豆pha；(4)5mg组：每只小鼠进行单侧子宫注射5mg/0.05ml芸豆pha；(5)生理盐水组：每只小鼠进行单侧子宫注射0.5ml生理盐水；以上各组实验的小鼠，手术后观察各组小鼠的死亡情况。结果见表1。
表1子宫注射不同浓度芸豆pha的小鼠的死亡率
由表1可以看出，单侧子宫注射5、10mg芸豆pha和生理盐水，小鼠的死亡率都为0，单侧子宫注射20mg芸豆pha的小鼠死亡率也仅为12.5％，而单侧子宫注射50mg芸豆pha的小鼠死亡率为37.5％。这表明单侧子宫注射≤10mg的芸豆pha，不会引起小鼠死亡。
③不同浓度的芸豆pha对小鼠胚胎发育的影响
取6-10周龄雌鼠经皮下注射7.5-10iu的孕马血清促性腺激素(pmsg)，间隔48h后腹腔注射同样剂量的人绒毛膜促性腺激素(hcg)，注射hcg后与雄鼠合笼，次日上午检查阴栓，有栓者为见栓第1d。在见栓的第2d取2-细胞胚胎，平均分为相应的10组，然后将胚胎分别移入培养液小滴中，置于37℃，5％co2，95％空气，饱和湿度的co2培养箱中培养72-96h，每24h取出观察一次，96h后记录每组的发育情况。重复实验5次。结果如表2所示：
表2不同浓度的芸豆pha对小鼠2-细胞胚胎体外培养的影响(72h)
注:同一列中实验组与对照组比较，a:b，p<0.05；a:c，p<0.01；孵化囊胚(％)＝孵化囊胚数/囊胚数。
从表2可以看出，纯化50μg/ml组中的胚胎形成囊胚的比率(86.0％)最高，纯化50μg/ml和粗提200μg/ml组的胚胎发育到囊胚的比率与对照组相比有显著差异(p<0.05)，都明显高于对照组。纯化100μg/ml、粗提100μg/ml组的胚胎发育到囊胚的比率都比对照组高，但是差异不显著。并且纯化50、100μg/ml和粗提100、200μg/ml组中胚胎形成孵化囊胚的比率均显著高于对照组(p<0.05)。而含1000μg/ml芸豆pha的试验组中，只有极少数的胚胎能发育到桑葚胚，绝大多数胚胎都停滞在2-细胞和4-细胞时期了，在含2000和5000μg/ml芸豆pha的试验组，胚胎基本完全停滞或在2-细胞时期退化。在含5000μg/ml粗提芸豆pha培养液中，细胞膜破裂并死亡；在含1000μg/ml粗提芸豆pha培养液中的2-细胞胚胎，发育停滞在2-细胞期，细胞质膨胀，并出现空泡化。
④反复采用芸豆pha流产对小鼠随后胚胎发育的影响
取雌性昆明小白鼠，做超排处理后合笼，见栓小鼠为实验组，在其合笼见栓后第14天，手术法从单侧子宫角注入0.05ml(5mg)的芸豆植物凝集素终止妊娠。然后让流产的小鼠休息恢复10天，然后以同样的方法让小鼠第二次流产。两次流产之后，小鼠休息恢复十天，再次合笼，使其受孕，并观察其再次受生产的子代。本实验组按时成功完成连续两次受孕、流产、再受孕的雌鼠共7只。同时，取7只与实验组相同周龄的，未做过实验的雌鼠作为对照组，同时期合笼使其受孕，并生产子代。连续观察记录8周(即子代性成熟)子代的情况，包括子代的数量，性别比例，体重变化、身长尾长的变化、耳郭分离时间、门齿萌出时间、双眼睁开时间等。实验结果表明：与对照组比较，重复流产不影响小鼠再次妊娠，但是小鼠的平均产仔数稍许降低，幼崽生长速度稍快于对照组，其他各项指标均无明显差异。
⑤对终止小鼠早中期妊娠的作用
取6-10周龄雌鼠经皮下注射7.5-10iu的pmsg，间隔48h后腹腔注射同样剂量的hcg，注射hcg后与雄鼠合笼，次日上午检查阴栓，见栓当天为妊娠第1d，见栓第二天为妊娠第2d，以此类推。80只随机准备的妊娠雌鼠分为：(1)妊娠第1d组；(2)妊娠第3d组；(3)妊娠第5d组；(4)妊娠第7d组；(5)妊娠第8d组；(6)妊娠第9d组；(7)妊娠第10d组；(8)妊娠第11d组。以上处理方式中，第(1)和(2)组属于着床前期；第(3)组属于着床期；第(4)，(5)，(6)组属于妊娠早期；第(7)和(8)组属于妊娠中期。小鼠麻醉后俯卧固定，于背部靠后皮肤中线开一纵口，再于两侧子宫上方背部切开肌肉，一侧子宫牵出后于离子宫颈分叉最近的位置进行结扎，结扎时避开血管只结扎子宫体。另一侧子宫牵出后于子宫角(靠近输卵管端)进行子宫注射，注射时缓慢注入。每组5只芸豆pha处理小鼠：一侧子宫结扎，另一侧子宫注射0.1ml(10mg)的pha；另外5只小鼠一侧子宫结扎，另一侧子宫注射0.1ml生理盐水，为对照组。
以上每组小鼠，到妊娠第20d时进行剖腹产，观察比较两侧子宫的形态，分别记录两侧子宫的正常胎儿及死胎数。
实验结果用卡方检验及方差分析进行统计学处理。实验组结果见表3。
表3不同妊娠期单侧子宫注射芸豆pha对小鼠胚胎发育的影响
注：同一列中a:b，p<0.05；b:c，p<0.05；a:c，p<0.01。
由表3可以看出，小鼠从妊娠第1-11d，注射芸豆pha的一侧子宫产仔数和产仔率均为0。经方差分析(p＝0.01<0.05)表明子宫结扎组、子宫注射芸豆pha组及注射生理盐水组的小鼠产仔率之间存在显著差异。而结扎组及注射生理盐水组均有怀孕及产仔的情况。实验结果表明，在小鼠的不同妊娠期(1-11d)，进行子宫注射芸豆pha可产生100％的妊娠终止作用。而对照组子宫注射生理盐水组的小鼠随着妊娠期的增长，产仔率增加。
(2)临床试验
试验对象：赵某某，女，24岁，无生产经历。
末次月经为2015年2月17日，出现早孕反应后于4月3日在昆明市圣爱中医馆进行了第一次下腹部b超检查。结果显示：后位子宫，大小约8.4*6.2*5.1cm，子宫内探及一大小约为1.4*1.0孕囊。其内可见卵黄囊及胎芽组织，胎芽长约0.6cm，可见原始心管搏动。双侧附件区未见明显异常回声。根据上述事实及检测结果推测妊娠天数为55-60天。2015年4月8日上午对试验者进行常规外阴及阴道消毒，然后采取仰卧体位卧床，扩阴器扩张阴道，宫颈钳固定子宫颈口侧边，采用9cm长，外径为0.2cm的一次性塑料直肠给药管经宫颈口插入子宫腔，缓慢推入4ml总剂量为20mg的rkbl生理盐水，给药时间是9:40。注射后即退出给药管。试验者卧床休息。注射后43min，试验者感觉下腹部坠痛后服用布洛芬缓释胶囊1粒，12:30腹痛消失，但还有坠胀感。测量血压为95/70mmhg，体温正常。2015年4月10日上午9:50阴道给予米索前列醇片3片计60mg。12：45分孕囊排出，之前出血约10ml。孕囊大小为：4.5*4.0*1.2cm，并可见一小胎体。23:00再次肌肉注射同上剂量的止血敏及缩宫素。体温血压正常。出血量观察：从4月10日有出血迹象到17日，一共出血8天，总共出血量为130-145ml。次月月经推迟到40天后来临，随后恢复正常。
综上，本发明较佳的实施例提供的一种流产药物，其可终止1-60天内妊娠，解决目前早期意外妊娠无任何方法全过程有效可用的问题，尤其覆盖现有药物和手术方法对4-35天妊娠终止的一个无为期或无效期。同时可缩短现有药物或手术处理后的恢复时间，对女性的伤害小。且不会产生相应的抗体，即不会影响该药物的再次使用；其次不会影响生殖内分泌中枢。最后给药方式为局部给药，相对简便。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。