本发明涉及一种生脉饮通过微生态研究方法制备的中药复方组合物及其制备方法，以及该组合物在辅助治疗病毒性心肌炎方面的应用，属于生物医药技术领域。
背景技术：
生脉饮由古方“参脉散”衍生而来。“参脉散”出自元代名医李东垣所著的《内外伤辨惑论》，由人参、麦冬、五味子三味药组成。方中人参大补元气，麦冬养阴生津，五味子敛汗生津，三药合用，共同发挥益气生津、敛阴止汗的作用，适于气阴两亏、心悸气短、脉微自汗等证。
现代医学药理作用研究表明（周军.生脉饮注射液治疗气阴两虚型冠心病心绞痛60例）：生脉饮处方中的人参能改善心肌的代谢，增加心肌能量储备，促进dna和rna的合成，提高机体耐缺氧能力，从而增强心肌收缩力，扩张外周血管。人参还可以抑制na+-k+-atp酶的活性，影响na+-k+和na+-ca2+交换，使ca2+内流增加，从而增加心肌收缩力，降低血管阻力，还可清除自由基，增加心肌抗缺氧能力，并兼有抗心律失常作用。麦冬可稳定细胞膜，能够提高机体的耐缺氧能力；扩张周围血管，减轻心脏负荷，具有正性肌力的作用。五味子能增强机体对各种刺激的非特异性抵抗能力。生脉饮主要药理作用为抗缺氧，保护心肌细胞，同时能扩张血管，降低血小板粘附率，故对改善受损心肌的微循环，增加心脏供血，心肌细胞的恢复，有很大的促进作用，且没有毒副作用，值得临床推广应用。
2015年版《中国药典》中生脉饮的制备方法为：人参100g、麦冬200g、五味子100g，以上三味药，粉碎成粗粉，用65%乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集渗漉液约4500ml．减压浓缩至约250ml，放冷，加水400ml稀释，滤过，另加60%糖浆300ml及适置防腐剂，并调节ph值至规定范围，加水至1000ml．搅匀，静置，滤过，灌封，灭菌，即得。此方法需用大量酒精提取并回收乙醇浓缩，操作繁琐。且由于口感不佳，需加入大量的糖浆调口感，而现有的生脉饮主要用于具有高脂血症、糖尿病和冠心病等慢性病的患者，这类患者本身的糖代谢和脂质代谢就有一定障碍，且需长期服药治疗，由此可见长期服用这种含糖量高的生脉饮不利于患者健康的恢复。有专利（专利号：cn201510353909.x）制备了无糖型生脉饮口服液，但其制备方法也是传统的醇提方法，操作繁琐。
技术实现要素：
肠道菌群被喻为人体的“微生物器官”，参与、辅助宿主能量代谢，调节先天与获得性免疫，构成人体肠道的生物学屏障。研究表明，肠道菌群结构紊乱不仅与消化系统、内分泌系统、肿瘤等疾病有关，而且与心血管疾病的发生相关，肠道菌群可能通过参与调节宿主胆固醇代谢、氧化应激和炎症导致动脉粥样硬化发生，从而促进心血管疾病的发生、发展。
为克服现有技术的不足，本发明提供了一种制备方法简单，口感适中，状态佳，吸收快，安全高效的生脉饮组合物。
本发明的一个目的是提供一种生脉饮组合物，该组合物由复方生脉饮药粉带渣提取液经复合肠道益生菌发酵后制得。采用的技术方案为：
将中药复方生脉饮药粉混合水浸后加热，高温淀粉酶酶解后加入不同配比的营养物、无机盐，调节ph值，高温高压灭菌，接入肠道益生菌带渣发酵完成后加热煮沸，离心，离心液中加入牛磺酸和低聚果糖浆，稳定化处理即得；
所述的中药复方由以下重量份的中药成分组成：人参60～180份、麦冬120～240份、五味子40～120份；
所述的营养物为葡萄糖、蛋白胨、酵母膏和酵母粉；
所述的肠道益生菌为双歧杆菌和/或乳杆菌。
优选的，所述的中药复方由以下重量份的中药成分组成：人参100份、麦冬200份、五味子100份。
本发明的另一个目的是提供所述的生脉饮组合物的制备方法，步骤如下：
1）将人参粉碎，过80-100目筛，麦冬冷冻后粉碎过40～65目筛，五味子粉碎过20～40目筛，按处方量称取各药粉混合，加入8～20倍量的水浸泡0.5～1.5小时，得药粉浸泡液，加热浸泡液至85～90℃；调节ph值至5.5～6.5，加入高温淀粉酶，保持温度在85～90℃，酶解10min，得中药酶解液；
2）向上述中药酶解液中加入营养物葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉及无机盐，使溶解并搅拌均匀，调节ph值至7.0，于115℃高温高压灭菌1小时，得无菌中药提取物；
3）当上述无菌中药提取物温度降至38℃时，接种预培养的各体积百分比为0.5%～2.0%的一种或两种及以上双歧杆菌菌液和/或一种或两种及以上的乳杆菌菌液，37℃培养1～3天，当ph值降至4.0～4.1，室温下放置5～7天，得发酵液；
4）将上述发酵液加热煮沸并保持微沸10分钟后，离心，得发酵上清液，加入牛磺酸，低聚果糖浆，搅匀后过滤，定容，于115℃高温高压灭菌40min，即得。
上述制备方法中，所述的双歧杆菌选自短双歧杆菌、青春双歧杆菌或婴儿双歧杆菌；所述的乳杆菌选自德氏乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌。
上述制备方法中，所述葡萄糖的加入量为0.50g/100ml，所述酵母膏的加入量为0.10g/100ml，所述酵母粉的加入量为0.05g/100ml，所述蛋白胨的加入量为0.20g/100ml。
上述制备方法中，所述的无机盐为k2hpo4•3h2o0.10g/100ml、kh2po40.10g/100ml、硫酸亚铁•7h2o5.0mg/100ml、硫酸锌•7h2o4.4mg/100ml、硫酸镁•7h2o70mg/100ml、亚硒酸钠•5h2o24µg/100ml。
上述制备方法中，所述的牛磺酸加入量为0.01～0.05g/100ml，低聚果糖浆加入量为0～0.7g/100ml。
上述制备方法中，为了改善口感，在制备方法步骤2）中的调节ph值前或步骤4）中的定容前还加入了甜味剂，所述甜味剂为0～0.02g/100ml的三氯蔗糖。
本发明的再一个目的是提供所述的生脉饮组合物在制备辅助治疗抗病毒性心肌炎产品中的应用。
可在生脉饮组合物中添加一种或多种具有相同、相似或不同生物学活性，并对基本活性成分表现有辅助或协同作用，但彼此间又互不拮抗的天然或合成的其他药物成份或其混合物，配制成适于口服给药的液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如合剂、乳剂、糖浆等；或:
将所述的生脉饮组合物通过适当的干燥方法，制得固体粉末，添加一种或多种具有相同、相似或不同生物学活性，并对基本活性成分表现有辅助或协同作用，但彼此间又互不拮抗的天然或合成的其他药物成份或其混合物，配制成适于口服给药的胶囊、片剂、颗粒剂等固体剂型的药物。
牛磺酸在心脏中的含量较为丰富，约占心脏全部游离氨基酸的一半以上，因而它对心脏的作用较为广泛，且外源的补充之，可对抗心脏的多种病理状态。牛磺酸作为一个广谱的细胞保护剂有以下功能：（1）维持细胞内外渗透压平衡；（2）直接的膜稳定作用；（3）钙离子调节作用，可以调节钙的代谢，维持正常心肌细胞的功能；（4）抗脂质过氧化损伤，消除氧自由基；（5）调节内皮舒张因子、内皮素等血管活性物质合成释放的紊乱状态。因此，细胞保护效应是牛磺酸在抗心肌缺血、抗心律失常、抗再灌注损伤、心肌保护等方面的作用基础。牛磺酸还是人体肠道内双歧菌的促生因子，优化肠道内菌群结构；还具有抗氧化、延缓衰老作用。
牛磺酸(tau)清除自由基作用突出。许多实验已证实了tau能减少氧自由基的生成，使还原性谷胱甘肽(gsh)生成增加，保护细胞膜的稳定性。心肌损伤时，tau含量成倍增加，明显地减轻心肌缺血再灌注损伤的程度。临床上在小儿心脏畸形纠治术中，口服天然tau能有效地提高机体组织tau水平，预防心肌缺血损伤的效应。心肌损伤的另一特征是细胞内钙超载，钙作为第二信使，可激活胞浆内多种效应酶，破坏膜的完整性，使atp生成减少，并损害线粒体中atp的再生能力。tau对钙具有双向调节作用，在心肌高钙时，可促进钙与线粒体、肌浆网膜等结合，减少钙内流和增加钙与细胞的亲合力。tau作用于心肌纤维膜，增加钙与低亲合位点的结合，并直接与钠钾泵相互作用，防止高钙对钠钾atp酶的抑制作用。当细胞内可交换钙降低时，结合钙又游离出来，增加心肌收缩力。总之，tau的心肌保护作用与它的抗脂质过氧化损伤及抗心肌内钙的增加有关，因而影响了心肌的收缩力和细胞内酶的漏出。
有益效果：
1、本发明的生脉饮组合物，与传统方法制备的生脉饮比较，制备方法简单，且口感酸甜，易于接受，不含大量糖浆，对于患有高脂血症、糖尿病和冠心病等慢性病的患者也可长期服用，适用范围更广。
2、本发明的生脉饮组合物中的中药药材粉碎后带药渣直接通过益生菌发酵，可以充分利用中药材中的营养物质，提高了药材的利用率。
3、本发明的生脉饮组合物通过益生菌发酵后将提取物中的大分子物质转化为小分子物质，可加快营养物质在人体内的吸收，快速发挥功效。
4、本发明的生脉饮组合物首先选用了治疗心脏疾病疗效显著的生脉饮组方，保证了组合物的药效基础，同时通过益生菌发酵助力药效的提升，最后加入益生元和牛磺酸，促进肠道菌群的平衡，协助心脏功能的改善；共同协调改善受损心肌的微循环，消除炎症，增加心脏供血，促进心肌细胞的恢复。
5、本发明的生脉饮组合物与对应的同浓度的传统方法制备的生脉饮比较，清除自由基的能力显著提高，有显著的进步意义。
6、本发明的制备方法制备的生脉饮组合物的辅助治疗病毒性心肌炎的总有效率远高于传统方法制备的生脉饮，具有显著的进步意义。
具体实施方式
下面结合实施例和实验例对本发明作进一步说明。
实施例1：生脉饮组合物a的制备
按下列处方量称取药材：人参600g、麦冬2400g、五味子400g。将人参粉碎，过80目；麦冬冷冻后粉碎过65目，五味子粉碎过20目。按处方量称取各药粉混合，加入8倍量的水浸泡1.5小时，得药粉浸泡液，加热浸泡液至85～90℃；调节ph值至5.5，加入高温淀粉酶，保持温度在85～90℃，酶解10min，得中药酶解液；向上述中药酶解液中加入葡萄糖50g，酵母膏10g，酵母粉5g，蛋白胨20g，k2hpo4•3h2o10g，kh2po410g，硫酸亚铁•7h2o500mg，硫酸锌•7h2o440mg，硫酸镁•7h2o7g，亚硒酸钠•5h2o2.4mg，使溶解并搅拌均匀，调节ph值至7.0，于115℃高温高压灭菌1小时，得无菌中药提取物；当上述无菌中药提取物温度降至38℃时，接种预培养的体积百分比为0.5%的短双歧杆菌菌液和体积百分比为0.7%的德氏乳杆菌菌液，37℃培养2天后，测ph值降至4.07，室温下放置7天，得发酵液；将上述发酵液加热煮沸并保持微沸10分钟后，离心后得发酵上清液，加入牛磺酸5g，低聚果糖浆70g，搅匀后过滤，定容至10000ml，于115℃高温高压灭菌40min，即得所述的生脉饮组合物a。
实施例2：生脉饮组合物b的制备
按下列处方量称取药材：：人参1000g、麦冬2000g、五味子1000g。将人参粉碎，过85目；麦冬冷冻后粉碎过50目，五味子粉碎过30目。按处方量称取各药粉混合，加入15倍量的水浸泡1小时，得药粉浸泡液，加热浸泡液至85～90℃；调节ph值至6.0，加入高温淀粉酶，保持温度在85～90℃，酶解10min，得中药酶解液；向上述中药酶解液中加入葡萄糖50g，酵母膏10g，酵母粉5g，蛋白胨20g，k2hpo4•3h2o10g，kh2po410g，硫酸亚铁•7h2o500mg，硫酸锌•7h2o440mg，硫酸镁•7h2o7g，亚硒酸钠•5h2o2.4mg，使溶解并搅拌均匀，调节ph值至7.0，于115℃高温高压灭菌1小时，得无菌中药提取物；当上述无菌中药提取物温度降至38℃时，接种预培养的体积百分比分别为0.5%的青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌菌液和干酪乳杆菌菌液，37℃培养1.5天后，测ph值降至4.09，室温下放置6天，得发酵液；将上述发酵液加热煮沸并保持微沸10分钟后，离心后得发酵上清液，加入牛磺酸4g，低聚果糖浆50g，三氯蔗糖1g，搅匀后过滤，定容至10000ml，于115℃高温高压灭菌40min，即得所述的生脉饮组合物b。
实施例3：生脉饮组合物c的制备
按下列处方量称取药材：人参1800g、麦冬1200g、五味子1200g；将人参粉碎，过100目，麦冬冷冻后粉碎过40目，五味子粉碎过40目。按处方量称取各药粉混合，加入20倍量的水浸泡0.5小时，得药粉浸泡液，加热浸泡液至85～90℃；调节ph值至6.5，加入高温淀粉酶，保持温度在85～90℃，酶解10min，得中药酶解液；向上述中药酶解液中加入葡萄糖50g，酵母膏10g，酵母粉5g，蛋白胨20g，k2hpo4•3h2o10g，kh2po410g，硫酸亚铁•7h2o500mg，硫酸锌•7h2o440mg，硫酸镁•7h2o7g，亚硒酸钠•5h2o2.4mg，使溶解并搅拌均匀，调节ph值至7.0，于115℃高温高压灭菌1小时，得无菌中药提取物；当上述无菌中药提取物温度降至38℃时，接种预培养的体积百分比为1.0%的青春双歧杆菌菌液和体积百分比分别为0.5%的干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌菌液，37℃培养1天后，测ph值降至4.05，室温下放置5天，得发酵液；将上述发酵液加热煮沸并保持微沸10分钟后，离心后得发酵上清液，加入牛磺酸2g，低聚果糖浆30g，搅匀后过滤，定容至10000ml，于115℃高温高压灭菌40min，即得所述的生脉饮组合物c。
实验例1：生脉饮组合物清除自由基能力测定
本实验例通过水杨酸法测定本发明的生脉饮组合物的清除自由基的能力，来说明通过本发明的制备方法制备的生脉饮组合物与传统方法制备的生脉饮在清除自由基方面的显著性进步。
1、试剂：
1.16mmol/lfeso4溶液：准确称取feso4·7h2o0.1668g，加水溶解，定容至100ml。
1.26mmol/lh2o2溶液：准确吸取30%的h2o2溶液3.4ml，加水溶解，定容至50ml，再准确吸取上述定容液1ml，加水稀释定容至100ml。
1.36mmol/l水杨酸溶液：准确称取水杨酸0.083g，加水溶解，定容至100ml。
2、供试溶液制备：分别取实施例制备的生脉饮组合物a、b、c(以下简称：a、b、c)以及其对应的用传统醇提方法制备的生脉饮（以下简称：a1、b1、c1）离心后，取上清液，即为供试品溶液a、b、c、a1、b1、c1，备用。
3、测量比较：
依次向（按表1）试管中加入6mmol/lfeso4溶液、供试品溶液、6mmol/lh2o2溶液各1ml，摇匀，静置10min，加6mmol/l水杨酸溶液1ml，摇匀后，静置30ml，加水稀释至10ml，在510nm处测吸光度。
4、自由基清除率计算公式：
清除率（%）=
5、测定结果：见表2
6、结论：从表2可以看出本发明的生脉饮组合物与对应的同浓度的传统方法制备的生脉饮比较，自由基清除率有显著性差异，有显著的进步意义。
实验例2：本发明的生脉饮组合物辅助治疗病毒性心肌炎的临床资料研究
病毒性心肌炎是一种病毒引起的心功能障碍，对患者的心功能造成一定损害，使患者各个部位表现不同的症状，如果不及时治疗，会给患者带来生命危险。对这种疾病多采用药物治疗的方法，中药、西药和中西医结合治疗都被用于治疗此病，不同的药物疗效不同。我们于2016年1月至2017年6月对本发明的生脉饮组合物进行了临床观察研究，验证了本发明的生脉饮组合物辅助治疗病毒性心肌炎的疗效和安全性。
1、辅助治疗样品
选自实施例制备的生脉饮组合物a、b、c（以下简称：a、b、c)及其对应的传统醇提方法制备的生脉饮（以下简称：a1、b1、c1）
2、病例分组
经诊断符合病毒性心肌诊断标准的患者140例，随机分成7组，根据治疗样品分为对照组和辅助治疗组（a组、b组、c组、a1组、b1组、c1组）,每组20例。各组在性别、年龄、病程和病症等比较差异无统计学意义（p>0.05）。
3、方法
对照组：进行极化液、维生素c和心肌营养剂等常规治疗。治疗15天后观察患者的丙酮酸激酶（pk）、乳酸脱氢酶（ldh）、谷草转氨酶（ast）、肌酸激酶（ck）、肌酸激酶同工酶（ck-mb）情况。
辅助治疗组：在常规治疗的基础上，分别给与各辅助治疗样品原液，每次10ml，每天3次，一个疗程为15天。治疗15天后，观察患者的pk、ldh、ast、ck、ck-mb情况。
4、疗效判断标准
治愈：患者自觉症状消失，心电图、胸片、心肌酶谱恢复正常；
有效：患者有下列两项以上者，自觉症状基本消失，心肌酶谱接近正常，心电图基本正常，胸片显示心胸比值恢复正常；
无效：患者自觉症状无缓解，心电图、胸片、心肌酶谱与治疗前比较无明显改善。
总有效率=治愈率+有效率。
5、统计学方法
本临床资料所用数据spss22.0软件进行统计学分析，计数资料采用例（n），百分数（%）表示，组间比较采用x²检验，以p<0.05为差异具有统计学意义。
6、结果（见表3）
从表3可以看出，辅助治疗组a组、b组、c组和c1组与对照组比较，有显著性差异，说明生脉饮可以辅助治疗病毒性心肌炎。而a组与a1组相比，b组与b1组相比，c组与c1组相比，均有显著性差异，说明通过本发明的制备方法制备的生脉饮组合物的辅助治疗病毒性心肌炎的总有效率远高于传统方法制备的生脉饮，具有显著的进步意义。