本发明属于天然活性成分提取技术领域，具体而言，涉及一种以山矾花鲜品为原料提取制备的皮肤创伤清洗液及其制备方法。
背景技术：
伤口清洗的目的是尽快清除失去生机的组织，使已污染的伤口变为新鲜而清洁的伤口，为伤口尽早愈合创良好的条件。然而，目前除了严重创伤和外科手术伤口等因病人在医院由医生护士严格按照标准执行伤口清洗的情况，其他病人自己在家或其他地方都是随意处理的，这样会使得人体被病毒感染的风险增加。比如，被动物(犬)抓咬伤后注射疫苗和血清蛋白，不对伤口按规范进行处理，感染狂犬病毒的风险仍然非常高。因此清洗是伤口处理的一个重要环节。
目前，国内用于皮肤消毒清创的主要药物有医用酒精、稀碘酊、碘伏、呋喃西林溶液、新洁尔灭溶液等，然而临床应用发现这些药物有的刺激性太强，不能大面积应用，有的清创效果不理想，甚至有过敏反应。另外，这些药物均没有促进肉芽生长及镇痛等功能。现代西医外科学对手术造成的创伤伤口的处理方法是，对伤口灭菌、消毒，应用抗生素防止感染，缝合伤口后用医用纱布包扎的方法。缝合具有闭合伤口，促进止血及组织愈合作用，是现代外科最基本的技术，因此手工缝合是目前应用最广泛的方法。另外，现代外科不在伤口上用药，伤口的愈合是靠机体自身的组织来修复的。一般在术后2-3天，患者更换一次敷料，目的是为观察和清洁伤口。由此可见，西医对于术后伤口的愈合完全依靠患者本身的组织修复能力，伤口愈合缓慢。
山矾(symplocoscaudatawallexa.dc.)为山矾科山矾属灌木或小乔木，又名山桂花。生于山谷、溪边灌丛中或山坡林下，分布江西、浙江、湖北、湖南、四川、福建、广东等地。目前，研究人员一直停留在对山矾花香气成分的研究(不同花期山矾花的香气成分及其相对含量.王艺光；付建新；张超；胡绍庆；赵宏波.浙江农林大学学报)(新鲜山矾花头香成分的研究.余爱农；谭志斗；甘华兵.精细化工)，尚没有文献报道山矾花有效部位的药理活性。
技术实现要素：
鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种皮肤创伤清洗液及其制备方法。
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究并不懈努力，获得了一种促进伤口愈合的山矾花鲜品提取物，通过该提取物可配制成皮肤创伤清洗液。
具体地，本发明的山矾花鲜品提取物按如下步骤制备而成：
(1)将新鲜的山矾花高速匀浆，所得浆液加入提取装置中，并加入5-25倍体积的高浓度异丙醇水溶液，在3～7℃的低温条件下搅拌提取5-12h，离心；
(2)将步骤(1)所得提取液真空浓缩并冷冻干燥后，用纯化水溶解并用稀盐酸调节ph为2～4，静置8-24h；
(3)取步骤(2)所得上清液加入碱性硅藻土，于25-35℃搅拌0.5-1.5h，然后旋转离心1-4次，分离上清液，真空浓缩；
(4)将步骤(3)所得浓缩液加入大孔吸附树脂柱，先用1-3倍体积的纯化水进行洗脱除杂，弃去水洗脱液，再用1-3倍体积的70-75％乙醇进行洗脱，最后用1-3倍体积的85-90％乙醇进行洗脱；
(5)收集步骤(4)得到的乙醇洗脱液，合并，真空浓缩，冷冻干燥，得山矾花鲜品提取物。
进一步优选地，如上所述的山矾花鲜品提取物，其中步骤(1)中所述的异丙醇水溶液的体积分数为90％-95％。
进一步优选地，如上所述的山矾花鲜品提取物，其中步骤(2)中所述的稀盐酸的质量分数为8-15％。
进一步优选地，如上所述的山矾花鲜品提取物，其中步骤(3)中所述的碱性硅藻土按如下方法制得：将硅藻土粉末加入质量分数10-20％氢氧化钠溶液中，在40-50℃搅拌反应0.5-2.0h，将反应液旋转离心，离心后得沉淀物，沉淀物用乙醇冲洗，然后置于55-60℃烘箱中烘干，将烘干物粉碎至40-80目，即得碱性硅藻土，在密封干燥条件下保存备用。
进一步优选地，如上所述的山矾花鲜品提取物，其中步骤(4)中所述的大孔吸附树脂层析柱为hpd750或hpd826层析柱。
进一步优选地，如上所述的山矾花鲜品提取物，其中步骤(2)、(3)和(5)中所述真空浓缩的温度为40℃～50℃。
进一步优选地，如上所述的山矾花鲜品提取物，其中步骤(2)和(5)中冷冻干燥温度为-32℃～-25℃。
另外，本发明根据上述方法制备的山矾花鲜品提取物，配制出了一种皮肤创伤清洗液，配制方法包括如下步骤：称取山矾花鲜品提取物和氯化钠，加入30-40℃注射用水中，调节ph值6.5-7.5，过滤除菌，灌封，即得。
进一步优选地，所述的山矾花鲜品提取物在清洗液中的质量分数为0.1-0.5％，氯化钠在清洗液中的质量分数为0.6-0.9％。
与现有技术相比，本发明涉及的皮肤创伤清洗液根据民间验方由山矾花鲜品制备而成，对伤口进行清洗时病人疼痛减轻，伤口愈合速度加快，同时无任何副反应。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的制备过程和使用效果进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1创伤清洗液的制备
(1)在山矾花盛开季节，采摘新鲜的山矾花1.2kg，高速匀浆，所得浆液加入提取装置中，并加入10倍体积的92％异丙醇水溶液，在5℃的低温条件下搅拌提取5h，5000rpm离心10min。
(2)分离离心后的上清液，40℃下真空浓缩，-30℃冷冻干燥，干燥物用5倍量的纯化水溶解，并用10％的稀盐酸调节ph为3.0，静置12h。
(3)将硅藻土粉末加入10倍量的质量分数15％氢氧化钠溶液中，在45℃、100rpm条件下搅拌反应1h，将反应液旋转离心，8000rpm离心10min，离心后得沉淀物，沉淀物用95％乙醇冲洗，然后置于55-60℃烘箱中烘干，将烘干物粉碎至60目，即得碱性硅藻土，在密封干燥条件下保存备用。
(4)取步骤(2)静置所得上清液加入碱性硅藻土，于30℃搅拌1h，然后旋转离心2次，每次8000rpm离心10min，分离上清液，40℃下真空浓缩。
(5)将步骤(4)所得浓缩液加入hpd750大孔吸附树脂柱，先用2倍柱体积的纯化水进行洗脱除杂，弃去水洗脱液，再用2倍柱体积的75％乙醇进行洗脱，最后用2倍柱体积的90％乙醇进行洗脱，洗脱时的流速均为3倍柱体积/小时。
(6)收集步骤(5)得到的乙醇洗脱液，合并，40℃下真空浓缩，-30℃下冷冻干燥，得山矾花鲜品提取物。
(7)称取山矾花鲜品提取物和氯化钠，加入35℃注射用水中，使山矾花鲜品提取物在清洗液中的质量分数为0.3％，氯化钠在清洗液中的质量分数为0.9％，调节ph值7.0，过滤除菌，灌封，即得。
实施例2创伤清洗液的制备(山矾花浆液采用乙醇提取)
(1)在山矾花盛开季节，采摘新鲜的山矾花1.2kg，高速匀浆，所得浆液加入提取装置中，并加入10倍体积的92％乙醇水溶液，在5℃的低温条件下搅拌提取5h，5000rpm离心10min。
(2)分离离心后的上清液，40℃下真空浓缩，-30℃冷冻干燥，干燥物用5倍量的纯化水溶解，并用10％的稀盐酸调节ph为3.0，静置12h。
(3)将硅藻土粉末加入10倍量的质量分数15％氢氧化钠溶液中，在45℃、100rpm条件下搅拌反应1h，将反应液旋转离心，8000rpm离心10min，离心后得沉淀物，沉淀物用95％乙醇冲洗，然后置于55-60℃烘箱中烘干，将烘干物粉碎至60目，即得碱性硅藻土，在密封干燥条件下保存备用。
(4)取步骤(2)静置所得上清液加入碱性硅藻土，于30℃搅拌1h，然后旋转离心2次，每次8000rpm离心10min，分离上清液，40℃下真空浓缩。
(5)将步骤(4)所得浓缩液加入hpd750大孔吸附树脂柱，先用2倍柱体积的纯化水进行洗脱除杂，弃去水洗脱液，再用2倍柱体积的75％乙醇进行洗脱，最后用2倍柱体积的90％乙醇进行洗脱，洗脱时的流速均为3倍柱体积/小时。
(6)收集步骤(5)得到的乙醇洗脱液，合并，40℃下真空浓缩，-30℃下冷冻干燥，得山矾花鲜品提取物。
(7)称取山矾花鲜品提取物和氯化钠，加入35℃注射用水中，使山矾花鲜品提取物在清洗液中的质量分数为0.3％，氯化钠在清洗液中的质量分数为0.9％，调节ph值7.0，过滤除菌，灌封，即得。
实施例3创伤清洗液的制备(无步骤2)
(1)在山矾花盛开季节，采摘新鲜的山矾花1.2kg，高速匀浆，所得浆液加入提取装置中，并加入10倍体积的92％异丙醇水溶液，在5℃的低温条件下搅拌提取5h，5000rpm离心10min。
(2)将硅藻土粉末加入10倍量的质量分数15％氢氧化钠溶液中，在45℃、100rpm条件下搅拌反应1h，将反应液旋转离心，8000rpm离心10min，离心后得沉淀物，沉淀物用95％乙醇冲洗，然后置于55-60℃烘箱中烘干，将烘干物粉碎至60目，即得碱性硅藻土，在密封干燥条件下保存备用。
(3)取步骤(1)所得上清液加入碱性硅藻土，于30℃搅拌1h，然后旋转离心2次，每次8000rpm离心10min，分离上清液，40℃下真空浓缩。
(4)将步骤(3)所得浓缩液加入hpd750大孔吸附树脂柱，先用2倍柱体积的纯化水进行洗脱除杂，弃去水洗脱液，再用2倍柱体积的75％乙醇进行洗脱，最后用2倍柱体积的90％乙醇进行洗脱，洗脱时的流速均为3倍柱体积/小时。
(5)收集步骤(4)得到的乙醇洗脱液，合并，40℃下真空浓缩，-30℃下冷冻干燥，得山矾花鲜品提取物。
(6)称取山矾花鲜品提取物和氯化钠，加入35℃注射用水中，使山矾花鲜品提取物在清洗液中的质量分数为0.3％，氯化钠在清洗液中的质量分数为0.9％，调节ph值7.0，过滤除菌，灌封，即得。
实施例4创伤清洗液的制备(无碱性硅藻土吸附处理)
(1)在山矾花盛开季节，采摘新鲜的山矾花1.2kg，高速匀浆，所得浆液加入提取装置中，并加入10倍体积的92％异丙醇水溶液，在5℃的低温条件下搅拌提取5h，5000rpm离心10min。
(2)分离离心后的上清液，40℃下真空浓缩，-30℃冷冻干燥，干燥物用5倍量的纯化水溶解，并用10％的稀盐酸调节ph为3.0，静置12h，分离上清液，40℃下真空浓缩。
(3)将步骤(2)所得浓缩液加入hpd750大孔吸附树脂柱，先用2倍柱体积的纯化水进行洗脱除杂，弃去水洗脱液，再用2倍柱体积的75％乙醇进行洗脱，最后用2倍柱体积的90％乙醇进行洗脱，洗脱时的流速均为3倍柱体积/小时。
(4)收集步骤(3)得到的乙醇洗脱液，合并，40℃下真空浓缩，-30℃下冷冻干燥，得山矾花鲜品提取物。
(5)称取山矾花鲜品提取物和氯化钠，加入35℃注射用水中，使山矾花鲜品提取物在清洗液中的质量分数为0.3％，氯化钠在清洗液中的质量分数为0.9％，调节ph值7.0，过滤除菌，灌封，即得。
实施例5清洗液对创面愈合的影响实验研究
1、复制模型：成年sd大鼠90只，清洁级，雌雄各半，体质量200-220g。适应性饲养一周后开始造模，方法为：用1％盐酸氯胺酮溶液腹腔注射麻醉，剂量为3ml/kg。局部备皮，常规消毒，大鼠背部取直径为1cm的圆形切口1个，剪开皮肤全层、皮下浅筋膜直至肌层，止血后在创面上加粪液1ml(正常人新鲜粪便10g，加生理盐水5ml，混匀，离心，取上清液，现配现用)，以油纱、敷料、胶带固定，48h后去除覆盖物，见伤口有脓性分泌物、有粪臭味者为造模成功。
2、分组并干预处理：将模型大鼠分为对照组、试验a组、试验b组、试验c组、试验d组，每组16只大鼠。各组大鼠采用生理盐水清洗伤口，采用碘伏消毒，包扎敷料。其中，对照组按青霉素钠14万u/kg腹腔注射给药。试验a组除按青霉素钠14万u/kg腹腔注射给药外，同时分别将实施例1制备的创伤清洗液(28-32℃)，采用棉球蘸取后轻轻擦洗伤口，每天早中晚各一次。试验b组、试验c组、试验d组按照同样的方法，分别对应于实施例2、3、4制备的创伤清洗液进行处理。
3、试验结果分析：在造模后第7、14天，分别处死各组8只大鼠，处死前计算创面闭合指数。创面闭合指数的计算公式：创面闭合指数＝(1-治疗后创面面积/原始创面面积)*100％。
各组创面闭合指数比较见表1。根据表1的试验统计结果可以看出，各试验组与对照组相比，大鼠创面闭合指数有不同程度的提高，尤其是试验a组相比对照组具有极显著差异(p＜0.01)。在试验开始后第14天时，试验a组相比其他试验组均具有极显著差异(p＜0.01)。
表1各组创面闭合指数比较(％)
与对照组比较，*p＜0.01；与试验b组比较，#p＜0.01；与试验c组比较，&p＜0.01；与试验d组比较，￥p＜0.01。
实施例6皮肤刺激实验
以实施例1制备的创伤清洗液作为受试物。选用健康大耳白兔4只，试验前24小时躯干背部脊柱两侧剪毛。24h后检查皮肤无破损，取受试物0.5ml涂于右侧剪毛皮肤上，油纸覆盖，橡皮膏固定。4小时后去除覆盖物，以清水清洗残留受试物。以左侧皮肤为对照，观察记录右侧皮肤1、24、48h、局部是否红斑、水肿形成。结果显示：受试动物皮肤无红斑、水肿形成，皮肤刺激反应积分均值为0，属无刺激性。
以上所述仅为本发明的部分实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。