本发明涉及药物，特别是一种芍药花提取物在制备治疗前列腺增生药物中的应用。
背景技术：
：前列腺增生的早期由于代偿，症状不典型，随着下尿路梗阻加重，症状逐渐明显，临床症状包括储尿期症状，排尿期症状以及排尿后症状。由于病程进展缓慢，难以确定起病时间。1、储尿期症状：尿频、夜尿增多；2、尿急、尿失禁；3、排尿期症状：排尿困难；3.排尿后症状：尿不尽、残余尿增多。芍药的根鲜脆多汁，可供药用。根据分析，芍药根含有芍药甙和安息香酸，用途因种而异。中医认为：中药里的白芍主要是指芍药的根，它具有镇痉、镇痛、通经作用。对妇女的腹痛、胃痉挛、眩晕、痛风、利尿等病症有效。但至今未见有芍药花提取物在用于治疗前列腺增生的公开报道。技术实现要素：针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的是提供一种芍药花提取物在制备治疗前列腺增生药物中的应用，芍药花作为唯一活性成分，可有效解决治疗前列腺增生的用药问题。本发明解决的技术方案是，所述的芍药花提取物是，将干芍药花粉碎成粗粉，先加石油醚回流提取，脱脂，弃去石油醚提取液；芍药花药渣挥干石油醚，加乙醇浸泡，回流提取，过滤两次，合并两次滤液，减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水分散至相当于含生药0.3g/ml的分散液，分散液上ab-8型大孔吸附树脂，先用2倍柱体积蒸馏水洗脱，弃去水液；继用4倍柱体积的、质量浓度10%乙醇洗脱，弃去洗脱液；再用6倍柱体积的、质量浓度80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，冷冻干燥，粉碎，得芍药花提取物。本发明提取物原料丰富，制备方法简单，成本低，芍药花作为唯一活性成分，可有效用于治疗前列腺增生，开拓了芍药花的药用价值，有良好的经济和社会效益。具体实施方式以下结合实施例对本发明的具体实施方式做详细说明。本发明一种作为唯一活性成分芍药花提取物在制备治疗前列腺增生药物中的应用，所述的芍药花提取物是，将干芍药花粉碎成过20-30目筛的粗粉，先加干芍药花10倍重量的石油醚30-60℃，回流提取1h，脱脂，弃去石油醚提取液；芍药花药渣挥干石油醚，加芍药花10倍重量的、质量浓度80%乙醇浸泡0.5h，回流提取1h，过滤，得第一次滤液；药渣再加芍药花10倍重量的、质量浓度80%乙醇，回流提取1h，过滤，得第二次滤液，合并两次滤液，减压回收乙醇至无醇味，加蒸馏水分散至相当于含生药0.3g/ml的分散液，分散液上ab-8型大孔吸附树脂，先用2倍柱体积蒸馏水洗脱，弃去水液；继用4倍柱体积的、质量浓度10%乙醇洗脱，弃去洗脱液；再用6倍柱体积的、质量浓度80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，冷冻干燥，粉碎，得芍药花提取物。本发明原料丰富，制备方法简单，易生产，成本低，芍药花提取物作为唯一活性成分，可用于有效制备治疗前列腺增生的药物，并经试验取得了非常好的有益技术效果。有关试验资料如下：一、动物试验：芍药花提取物对大鼠tia模型的影响1.实验材料1.1实验药物及试剂本发明芍药花提取物，河南中医药大学化学室提供；养血清脑颗粒，由天津天士力制药股份有限公司；氯化钠注射液，由郑州永和制药有限公司生产；水合氯醛，由上海山浦化工有限公司生产；甲醛溶液，由莱阳市双双有限公司生产；过氧化叔丁醇（t-bhp），由国药集团化学试剂有限公司生产；ld（lacticacid）检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产，批号；ldh（lactatedehydrogenase）检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；atp（adenosine-triphosphate）检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产；lpa（lysophosphatidicacid）检测试剂盒，由r&d生产。1.2实验仪器uv－2000紫外可见分光光度计，尤尼柯(上海)仪器有限公司生产；tgl-16g台式离心机，上海安亭科学仪器厂生产；电子分析天平，奥豪斯（上海）公司生产；dzkw-4型电子恒温水浴锅，北京永光明医疗仪器厂生产；dy89-1型电动玻璃匀浆机，宁波新芝生物科技有限公司生产；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司生产。酶免仪，680microplatereader，bio-radlaboratories；1.3实验动物wistar大鼠，雄性，spf级，体重300～310g，河北省实验动物中心提供，合格证号：9110202.实验方法2.1造模与给药取体重300～320g的wistar雄性大鼠，随机均匀分为：空白对照组，模型组，养血清脑颗粒组，大、中、小剂量芍药花提取物组，每组14只。除空白组外，其余5组造大鼠tia模型，给药组分别灌服大、中、小剂量芍药花提取物（0.4g/kg、0.2g/kg、0.1g/kg，）、养血清脑颗粒（1g/kg），模型组、空白对照组灌服同体积生理盐水，给药体积均为2ml/100g。连续给药3天为1周期，每周期进行一次tia诱发及行为学评分，共2个周期。（第1次诱发时，尾静脉注射0.11mol/l过氧化叔丁醇5.2ml/kg10min后，置于1l的密封广口瓶中，缺氧10min后取出，进行行为学评分。大鼠第2次诱发时，尾静脉注射0.154mol/l过氧化叔丁醇5.2ml/kg，10min后，置于1l的密封广口瓶中，缺氧10min后取出，进行行为学评分。）2.2实验检测指标行为学评分标准：正常0；少动或轻度激惹1；激惹性亢进（跳或窜）2；四肢颤抖或僵直3；腹部贴地，不能站立，四肢瘫痪，全身细小震颤4。于第2次诱发tia及评分后第二天给药1h后，立即眼眶取血（用肝素抗凝管抗凝），离心，取血浆，-20℃低温保存，测定血浆中的溶血磷脂酸（lpa）含量。在冰盘中分离脑，把脑从矢状线分开成对称的脑，一半迅速放入倒有10%福尔马林溶液的瓶子中浸泡固定，做海马区组织病理切片；另一半放在滤纸上洗干净上面的血迹，然后用分析天平称量其重量，根据此重量计算应加入的冰冷的生理盐水的量，以脑组织(g):生理盐水(ml)=1∶9的比例在低温下用玻璃匀浆机进行匀浆。4℃，3000r/min离心20min。取上清液于-20℃以下低温保存。制成10%的脑匀浆按测试盒说明操作，分别测定脑组织ld、ldh水平、atp酶活力。2.3统计学处理方法数据分析用spss13.0forwindows医用统计包进行数据资料的统计学处理，计量资料组间比较用方差分析，用平均数±标准差表示，等级资料采用ridit检验。3.结果与分析3.1芍药花提取物对大鼠tia模型行为学评分的影响表1芍药花提取物对大鼠tia模型行为学评分的影响组别剂量(g/kg)第1次评分第2次评分空白组-0.0±0.0**0.0±0.0**模型组-2.6±0.62.7±0.6养血清脑颗粒组11.8±0.6**1.5±0.7**大剂量芍药花提取物组0.41.6±0.5**1.3±0.4**中剂量芍药花提取物组0.21.9±0.6*1.7±0.5**小剂量芍药花提取物组0.12.1±0.5*1.9±0.6**:表示与模型组相比p<0.05；**：表示与模型组相比p<0.01从上表可看出，与空白组比较，模型组大鼠行为学评分显著升高（p<0.01），说明造模成功；与模型组比，芍药花提取物大剂量组、养血清脑颗粒组能显著降低tia模型大鼠行为学评分（p<0.01）；芍药花提取物中、小剂量组可明显降低tia模型大鼠行为学评分（p<0.05）。表明芍药花提取物对大鼠tia模型的行为学有明显的改善作用。3.2芍药花提取物对大鼠tia模型血浆lpa含量的影响表2芍药花提取物对大鼠tia模型血浆lpa含量的影响组别剂量(g/kg)lpa（μmol/l）空白组-360.7±90.5**模型组-598.9±91.1养血清脑颗粒组1431.2±71.6**大剂量芍药花提取物组0.4400.3±70.9**中剂量芍药花提取物组0.2451.9±88.3**小剂量芍药花提取物组0.1502.8±86.8**:表示与模型组相比p<0.05；**：表示与模型组相比p<0.01由表2可以看出，与空白组比较，模型组大鼠血浆lpa含量显著升高（p<0.01）；与模型组比，芍药花提取物大、中剂量组能显著降低血浆lpa水平（p<0.01）；芍药花提取物小剂量组可明显降低血浆lpa水平（p<0.05）；养血清脑颗粒组可显著降低血浆lpa水平（p<0.01）。表明芍药花提取物对tia模型大鼠的血浆lpa具有较好的清除作用。3.3芍药花提取物对大鼠tia模型脑组织ld、ldh水平的影响表3芍药花提取物对大鼠tia模型脑组织ld、ldh水平的影响组别剂量(g/kg)ld（mmol/gprot）ldh（u/gprot）空白组-4.882±0.343**1542.2±201.6**模型组-6.728±0.3141151.7±157.9养血清脑颗粒组15.465±1.002**1369.1±291.5**大剂量芍药花提取物组0.45.217±0.826**1470.9±289.4**中剂量芍药花提取物组0.25.526±0.647**1381.4±170.7**小剂量芍药花提取物组0.15.612±1.012*1341.9±198.9**:表示与模型组相比p<0.05；**：表示与模型组相比p<0.01由表3可以看出，与空白组比较，模型组脑组织ld含量显著升高（p<0.01），ldh含量显著降低（p<0.01），说明造tia模型成功；与模型组比，芍药花提取物大、中剂量组能显著降低ld水平（p<0.01）、升高ldh水平（p<0.01）；养血清脑颗粒组可显著降低ld水平（p<0.01）、升高ldh水平（p<0.01）；芍药花提取物小剂量组可明显降低ld水平（p<0.05）、升高ldh水平（p<0.05）。表明芍药花提取物对tia模型大鼠脑组织ld水平、ldh水平有明显的调节作用。3.4芍药花提取物对大鼠tia模型脑组织na+-k+-atp酶、ca++-atp酶、mg++-atp酶活性的影响表4芍药花提取物对大鼠tia模型脑组织na+-k+-atp酶、ca++-atp酶、mg++-atp酶活性的影响*:表示与模型组相比p<0.05；**：表示与模型组相比p<0.01从上表可看出，与空白组比较，模型组大鼠脑组织中的na+-k+-atp酶、ca++-atp酶、mg++-atp酶水平水平显著降低（p<0.01），说明造大鼠tia模型成功；与模型组比，芍药花提取物大剂量组、养血清脑颗粒组能显著升高na+-k+-atp酶、ca++-atp酶、mg++-atp酶水平（p<0.01）；芍药花提取物中剂量组可明显升高na+-k+-atp酶、ca++-atp酶、mg++-atp酶水平（p<0.05）。表明芍药花提取物对大鼠tia模型脑组织中na+-k+-atp酶、ca++-atp酶、mg++-atp酶水平有较好的改善作用。3.5芍药花提取物对大鼠tia模型脑部海马区病理改变的影响结果见附录1。各组大鼠脑组织海马区组织形态的观察结果：空白组神经细胞核大，核内染色质蓬松，核仁清晰，海马区内的毛细血管和内皮细胞均正常；模型组神经细胞核水肿体积增大呈球形，核内染色质淡然而透明，核仁清晰，海马区内的毛细血管增粗和内皮细胞也发生水肿和淡然；芍药花提取物大剂量组神经细胞明显恢复核大，核内染色质蓬松，核仁清晰，海马区内的毛细血管和内皮细胞基本恢复正常；芍药花提取物中剂量组神经细胞核体积明显缩小，部分核内染色质已开始有所恢复，核仁清晰，海马区内的毛细血管有所扩张和内皮细胞恢复正常；芍药花提取物小剂量组大部分神经细胞核萎缩体积明显缩小，核内染色质固缩，核仁清晰数神经细胞仍然处于水肿状态，海马区内的毛细血管减少和内皮细胞水肿；养血清脑颗粒组缩小，核内染色质溶解而透明，核仁清晰，海马区内的毛细血管有所扩张，内皮细胞恢复正常。表5芍药花提取物对大鼠tia模型脑组织海马区组织形态的影响组别剂量（g/kg）-++++++p空白组-14000<0.01模型组-0257养血清脑颗粒组14541<0.01大剂量芍药花提取物组0.48330<0.01中剂量芍药花提取物组0.27331<0.01小剂量芍药花提取物组0.14523根据实验各组的海马区神经细胞不同的病理改变，将其分为四级：“-”海马区神经细胞正常，海马区内的毛细血管和内皮细胞均正常；“+”神经细胞核水肿体积增大、核内染色质淡然而透明，核仁清晰，毛细血管减少和内皮细胞水肿；“++”神经细胞体积增大，核内染色质溶解而透明，核仁消失，毛细血管增粗；“+++”神经细胞核水肿体积增大呈球形，核内染色质淡然而透明，核仁消失，毛细血管增粗和内皮细胞也发生水肿和淡然。经ridit检验，空白组与模型组有显著的统计学意义(p<0.01)，说明造tia模型成功。与模型组比较，芍药花提取物大、中剂量组和养血清脑颗粒组均有显著的统计学意义(p<0.01)。4.讨论毛冬青具有清热解毒、活血等功效[4]，芍药花提取物为其有效成分[5]。现代药理研究表明，芍药花提取物能对血瘀合并脑缺血有较好的保护作用，可能与改善血液循环、改善能量代谢、减少自由基、减轻神经细胞损伤等方面作用有关[6]。行为学的改变是tia模型的宏观指标，模型动物的行为学变化可以反映出其神经系统的异常，其评分的高低可直接反应tia发作程度。lpa是有效影响血小板功能状态的重要指标，因此其与患者的微循环有一定的关系。脑缺血后,atp耗竭，引起神经元细胞线粒体本身的损伤，又可使细胞内离子调节的生化反应发生紊乱，激活许多降解酶，进一步导致神经元细胞的死亡。线粒体的能量代谢由有氧代谢转为无氧代谢,糖无氧酵解产生大量乳酸,导致脑组织酸中毒。ldh在脑组织含量较高且分布均匀，当神经细胞受到破坏时，胞质中的ldh大量溢出，胞内含量将随之减少。脑缺血后，脑组织、血液、脑脊液中多种兴奋性氨基酸水平异常升高，同时也会发生钙超载，产生神经毒性作用，导致神经元损伤。细胞内钙超载时，ca2+可与线粒体结合，导致线粒体肿胀，使细胞功能失调，甚至引起细胞死亡。谷氨酸是中枢神经系统主要的兴奋性神经递质，在脑缺血造成的神经元损伤过程中发挥重要作用，脑缺血时多种机制参与了谷氨酸释放的的调节，为相关指标[7]-[8]。实验结果表明，大鼠tia模型复制成功，与模型组比，芍药花提取物能显著降低tia模型大鼠行为学评分及lpa、ld水平，显著升高ldh，na+-k+-atp酶、ca++-atp酶、mg++-atp酶水平，显著改善大鼠脑部海马区病理变化。以大剂芍药花提取物作用效果为优，通过以上药理实验进一步证实了芍药花提取物具有好的治疗tia之功,为毛冬青临床应用提供了可靠的实验依据，也为我们提出的芍药花提取物治疗tia的功效提供实验支撑。二、临床资料：在动物试验确保安全的基础上，并经临床试验取得了非常好的有益技术效果，有关临床资料如下：芍药花提取物加氯吡格雷治疗短暂脑缺血40例选择符合全国第四次脑血管病学术会议制订的短暂脑缺血诊断标准:即为短暂的、可逆的、局部的脑血液循环障碍，可反复发作，少者1～2次，多至数十次，每次发作持续时间通常在数分钟至1h左右，症状和体征应该在24h内完全消失。abcd2评分标准:年龄＞60岁(1分);血压为收缩压＞140mmhg或舒张压＞90mmhg(1分);临床症状为单侧无力(2分)，不伴无力的言语障碍(1分);症状持续时间＞60min(2分)，10～59min(1分);患有糖尿病(1分)。危险分层:0～3分为低危组;4～5分为中危组;6～7分为高危组。选择abcd2评分标准在低危层的患者60人，随机分为2组，对照组口服氯吡格雷(商品名为波立维，75mg/片，法国赛诺菲公司)，每次75mg，1d1次，首剂300mg。治疗组除按对照组方法服用氯吡格雷外，加用芍药花提取物（芍药花民间可食用，其提取物每次1.2g，每天2次冲服。以上两组均治疗30d，治疗期间常规调控血压及血糖，停用其他能够影响凝血功能的药物。氯吡格雷组与氯吡格雷加芍药花提取物组7d内短暂脑缺血发作终止的例数分别为20例（有效率66.7%）、23例（有效率76.7%），30d内短暂脑缺血加重的例数均为0例，短暂脑缺血发作终止的例数分别为28例（有效率93.3%）、30例（有效率100%）。芍药花提取物加氯吡格雷对短暂脑缺血患者的总体疗效优于常规氯吡格雷治疗组。经统计学处理，取得了良好的有益的治疗效果，开拓了治疗急性前列腺炎药物的新途径，提高了泡桐花的药用价值和商业价值，有良好的经济和社会效益。当前第1页12