专利名称：：芍药甘草提取物及其制剂在制备治疗肠易激综合症药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药领域，具体涉及芍药甘草提取物的医药新用途，特别是芍药甘草提取物在制备治疗肠易激综合症的药物中的应用。
背景技术：
：肠易激综合症(irritablebowelsyndrom,IBS)属于胃肠运动功能紊乱性疾患，主要表现为广泛性胃肠道动力学反应过强，是最常见的消化系统疾病之一,约占正常人群的9%26%，占胃肠专科门诊的1/3以上。这实际上是一组无器质性原因、慢性或间歇性的上消化道征候群。症状是上腹部或胸骨后疼痛或不适、烧心、恶心、呕吐或其他有关上腹部胃肠道的症状，并持续4周以上，与体力活动、局部及全身病无关的患者，临床常表现有三种现象便秘、腹泻或兼有便秘腹泻。对该病的研究还是近10年来的发展。引起IBS的病理生理学原因是多方面的，只有部分已清楚。其中多种原因引起的胃肠运动功能紊乱被认为是重要的病理生理机制。功能性肠道紊乱的病理生理学认为胃肠道运动障碍(运动过慢或过快)导致肠腔内容物处理异常而产生症状，IBS的治疗应基于症状的特点(腹泻!便秘或疼痛)和严重性，生理失调和功能损伤的程度。在人体中，减慢结肠的运输，并抑制个体的结肠对食物的动力反应，对腹泻型IBS显示有较好的治疗作用。对于本病的治疗药物，西医主要是采取对症处理。如胃肠运动功能障碍者，给予促动力药替加色罗、吗丁啉和西沙比利。胃酸分泌过多者，给予抑酸剂泰胃美、雷尼替丁、法莫替丁，或给予质子泵抑制剂奥美拉唑、兰索拉唑等。亦可给予黏膜保护剂如硫糖铝、胶体铋等。有研究发现胃肠道中5-羟色胺(5-HT)可能作为一种局部的胃肠激素和肠壁神经递质发挥作用，对哺乳动物胃肠道有明显兴奋作用。5-HT是人类神经递质中最重要的一种，具有多种生物学功能，近年来由于其在调节胃肠道运动方面的作用逐渐受到重视。对肠运动功能的影响，研究发现静脉内注射5-HT或给予选择性5-HT再吸收抑制剂后，小肠蠕动增强，推进速度加快，通过回盲部的时间縮短，移行性综合运动出现次数增多，小肠张力提高，给予大鼠腹膜内注射5-HT能显著增强其结肠的推进性运动，使肠内容物由近端向远端结肠快速至直肠排出，可以导致腹湾。现代医学研究也巳证实，在一些实验模型中，胃肠道确实是5-羟色胺(5-HT)的最大来源，5-HT可提高在胃肠道和中枢神经系统间传递的内脏神经元的敏感性。研究表明由胃肠道中的肠类嗜铬细胞释放的5-HT,被证明可对胃肠道产生动力效应，提示5-HT受体配体在IBS中的基本原理主要基于此。芍药甘草提取物(简称芍甘提取物)是申请人之前以张仲景《伤寒论*辨太阳病脉证并治上》中经典古方——芍药甘草汤为基础方研究开发的。芍甘汤是长期用于民间和临床的古方，用于多方面的疾病治疗。申请人从芍药和甘草中提取出三个有效部位群(白芍总苷，甘草总黄酮，甘草三萜酸)，三个有效部位群可以为单独或几个以不同的比例组合在一起，组成提取物并制成制剂，参见中国专利ZL02156681.X。在以前的对芍甘提取物药效学研究(中国专利ZL02156681X)中，本发明人提到，芍甘提取物可明显降低胃酸分泌、胃液总酸度及总酸排出量、并使胃蛋白酶活性明显降低，保护胃粘膜(参见药理实验五)，提示出其可作为胃溃疡、胃炎、胃消化功能障碍等药物的应用；虽然该发明中提到芍甘提取物可使正常小鼠的胃排空、胃蠕动减慢，减慢小肠推进速度(参见药理实验二)，但这不足以验证其可以用作与胃肠运动功能紊乱病症的治疗药物，尤其在IBS疾病上可发挥治疗作用的应用没有提及。
发明内容本发明的目的在于，选择与IBS病症和机理密切相关联的胃肠运动功能紊乱动物模型，通过有针对性的病理和药理学研究，提供芍药甘草提取物在制备治疗肠易激综合症药物中的应用。本发明的更进一步目的，在于提供芍药甘草提取物的制剂在制备治疗肠易激综合症药物中的应用。很显然，本发明同时期望提供的还有利用芍药甘草提取物制备的用于治疗IBS疾患的药物。该药物包括芍药甘草提取物本身，也包括以芍药甘草提取物为活性成分的合剂或制剂，剂型可为片剂、丸剂、粉末混合物、胶囊剂、包衣剂、溶液、乳剂、分散剂、注射剂和栓剂中的一种。具体实施例方式本发明针对肠易激综合症主要发病机理，研究了芍甘提取物对胃肠运动功能异常动物模型(患病动物)以及对不同介质引起的小肠平滑肌运动所产生的影响，研究结果证明，芍甘提取物对胃肠平滑肌运动功能的紊乱有明显的调节作用，可以用于治疗IBS。本发明中所用芍甘提取物，采用ZL02156681.X的方法制备得到。以下通过与治疗IBS病症相关的专属性实验说明芍甘提取物对胃肠运动机能的影响。实验中用到的营养性半固体糊的制备取10g羧甲基纤维素钠，溶于250ml蒸馏水中，非别加入16g奶粉、8g糖、8g淀粉和2g活性碳末，搅拌均匀。配制成300ml约300g的黑色半固体糊。1.对新斯的明所致小鼠胃排空和小肠推进兴奋的影响清洁级ICR小鼠40只，体重20-22g，随机分为5组芍苷提取物高中低剂量组(药物组，400、200、100mg/kgig给药10ml/kg)，模型对照组(ig给予蒸馏水10ml/kg)和空白对照组(每日正常进食)，药物组和模型对照组除每日正常进食外，每日一次灌胃药物或蒸馏水，连续5d。5d后，禁食供水18h后，药物组和模型对照组再次灌胃药物或蒸馏水，45min后，空白对照组腹腔注射生理盐水，药物组和模型对照组灌胃给予甲基硫酸新斯的明2mg/kg。15min后各组均灌胃给予营养性半固体糊0.8ml/只，20min后处死动物。打开腹腔，结扎胃喷门和幽门，取胃，用滤纸擦干后称全重，然后沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物后擦干，称净重。以胃全重和胃净重之差计算胃残留物重量，计算胃内残留物占所灌半固体糊的重量百分比为胃内残留率。同时取出小肠，分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的肠管，置于托盘上。轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为"小肠总长度"。从幽门至黑色固体糊前沿的距离作为"肠内推进距离"。小肠推进率(％)=肠内推进距离(cm)/小肠全长(cm)*100%实验结果参见表1，显示模型组小鼠的肠内推进距离、小肠推进率，均非常显著性的升高并与空白组相比有非常显著性差异(P<0.01);同时模型组的胃全重和胃残留率与空白组相比有非常显著性的降低，并且有非常显著性的差异(P<0.01)。表明模型组的动物在给予新斯的明后肠蠕动加快，胃排空功能增强，胃肠运动机能处于兴奋的病理模型状态，造模成功。以400、200mg/kg剂量的芍甘提取物灌胃给予5d后，与模型组比较，小鼠的肠内推进距离和小肠推进率，均显著性的下降，并且有显著性差异(P<0.05)。同时以400、200mg/kg的剂量灌胃给予小鼠芍苷5d后，其胃全重和胃残留率，与模型组比较，均显著性的升高，并且有显著性差异(P<0.05)。提示芍苷在400、200mg/kg剂量时，可以拮抗由新斯的明引起的肠运动和胃排空的兴奋作用，具有明显的舒缓胃和小肠推进作用，使胃肠排空明显降低表1芍苷对新斯的明所致小鼠胃排空和小肠推进兴奋的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注与空白组相比*P<0.05林P〈0.01.与模型组相比AP〈0.05AAP〈O.OL2、对阿托品所致小鼠胃排空和小肠推进抑制的影响-清洁级ICR小鼠40只，体重20-22g，随机分为5组芍苷提取物高中低剂量组(药物组，400、200、100mg/kgig给药10ml/kg)，模型对照组(ig给予蒸馏水10ml/kg)和空白对照组(每日正常进食)，药物组和模型对照组除每日正常进食外，每日一次灌胃药物或蒸馏水，连续5d。5d后，禁食供水18h后，药物组和模型对照组再次灌胃药物或蒸馏水，45min后，空白对照组腹腔注射生理盐水，药物组和模型对照组腹腔均注射硫酸阿托品0.3mg/kg。15min后各组均灌胃给予营养性半固体糊0.8ml/只，20min后处死动物，打开腹腔，结扎胃喷门和幽门，取胃，用滤纸擦干后称全重，然后沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物后擦干，称净重。以胃全重和胃净重之差胃残留物重量，计算胃内残留物占所灌半固体糊的重量百分比为胃内残留率。同时取出小肠，分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的肠管，置于托盘上。轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为"小肠总长度"。从幽门至黑色固体糊前沿的距离作为"肠内推进距离"。小肠推进率(％)=肠内推进距离(cm)/小肠全长(cm)*100%实验结果参见表2，显示与空白组比较，模型组的肠内推进距离、小肠推进率,均非常显著性的降低并与空白组相比有非常显著性差异(尸<0.01);同时模型组的胃全重和胃残留率与空白组相比有非常显著性的升高，并且有非常显著性的差异(尸<0.01)。表明模型组的动物在给予阿托品后肠蠕动减缓，胃排空功能减弱，胃肠运动机能处于抑制的病理模型状态，造模成功。与小鼠灌胃给药芍苷提取物5d后的结果相比，模型组小肠推进率有升高作用趋势，但无统计学显著性差异(尸〉0.05)。表明芍苷提取物对阿托品引起的肠运动和胃排空抑制作用不显著，但具有一定的改善作用。表2芍苷对阿托品所致小鼠胃排空和小肠推进抑制的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注与空白组相比*P<0.05料P〈0.01.与模型组相比AP<0.05A厶P〈0.01.3.对大鼠离体小肠运动的影响该实验中保养液的制备NaC15.54g、KC10.35g、CaCl20.28g、葡萄糖2.1g、KH2PO40.16g、MgS04.7H200.29g、NaHC032.1g，加蒸馏水定容至1L。标本的制备大鼠禁食12h后，麻醉后打开腹腔取出肠段后，祛除系膜和脂肪，放在37'C的保养液中，洗去内容物后，制成12cm的肠组织标本。运动曲线的记录描记时将组织标本放于充氧的含有保养液的浴槽中，然后将组织的一端固定于支持杠上，另一端连线于张力换能器上(压力传感器)。给予l1.5g的拉力后，通过记录仪观察其运动曲线。待其运动曲线平稳后加入芍苷提取物药液、激动剂或空白溶媒观察其运动曲线的变化，记录给药前后运动频率和幅度的变化。1)对组胺(His)致肠平滑肌痉挛的拮抗作用大鼠随机分为4组，空白溶媒组和芍苷提取物高中低剂量组(药物组，加入浴槽后使芍苷提取物终浓度0.5、0.125、0.03mg/ml)。按上述方法取各组正常大鼠离体肠取材部位，制成肠组织标本。肠段稳定后，分别描记一段正常收縮曲线，然后分别给予1Xl(T'mol/LHis溶液0.2ml，此时肠平滑肌随即出现强直收缩，曲线上升。继续描记一段加入激动剂His溶液后的曲线，然后药物组分别给予芍甘提取物三个剂量。记录给药前后运动频率和幅度的变化。实验结果表明a)对His致肠平滑肌痉挛的运动频率的影响作用(参见表3)在肠样本运动曲线平稳后加入His后，其离体小肠的运动频率与给药前相比无显著性差异(/^0.05)，说明His的加入对离体小肠的运动频率无显著性的影响作用。同时芍苷提取物的三个剂量对离体小肠的运动频率与加入His后相比均无显著性差异("0.05)，说明芍苷提取物在终浓度为0.5、0.125、0.03mg/mll时，对离体小肠的运动频率无显著性的影响作用。表3芍苷对加入His后离体小肠收縮频率变化的影响(i士又/7二7)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>b)对His致肠平滑肌痉挛的运动幅度的影响作用(参见表4)离体小肠在其运动曲线平稳后加入1X10—"mol/LHis溶液0.2ral，4个实验组的离体小肠收縮幅度与给药前比较均有显著性差异(尸<0.05)，提示His溶液的加入使得离体小肠的收縮显著加强，并与给药前比较有显著性差异(尸<0.05)。而加入芍苷提取物后，在终浓度为0.125和0.5mg/ml剂量时，与加入His后的收縮幅度比较，其离体小肠的收縮幅度显著性的降低，并有显著性的差异(尸<0.05)。其对His致肠平滑肌痉挛的运动幅度的抑制率分别达到了42.62%和32.63%，提示芍苷提取物对His致肠平滑肌痉挛在终浓度为0.1250.5mg/ml剂量范围内有明显的拮抗作用，并且量效关系明显。表4芍苷对加入His后离体小肠收縮幅度变化的影响(王土5，/j=7)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注与给药前相比补<0.05林P〈0.01.与加入His相比AP〈0.05AAP〈0.01.2)对5-HT致肠平滑肌痉挛的拮抗作用大鼠随机分为4组，空白组和芍苷提取物高中低剂量组(药物组，加入浴槽后使芍苷提取物终浓度0.5、0.125、0.03mg/ml)。按上述方法取各组正常大鼠离体肠取材部位，制成肠组织标本。肠段稳定后，描记一段正常收縮曲线，然后分别给予1Xl(Tmol/L5-HT溶液0.2ml，肠平滑肌随即出现强直收縮，曲线上升。继续描记一段加入激动剂5-HT溶液后的曲线，药物组分别给予芍甘提取物三个剂量。记录给药前后运动频率和幅度的变化。实验结果表明a)对运动频率的影响作用(参见表5):在肠样本运动曲线平稳后加入5-HT后，其离体小肠的运动频率与给药前相比无显著性差异(i°>0.05)，说明5-HT的加入对离体小肠的运动频率无显著性的影响作用。同时芍苷提取物的三个剂量对离体小肠的运动频率与加入5-HT后相比均无显著性差异(冷0.05)，说明芍苷提取物在终浓度为O.5、0.125、0.03mg/mll时，对离体小肠的运动频率无显著性的影响作用。表5对加入5-HT后离体小肠收縮频率变化的影响<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>b)对运动幅度的影响作用(参见表6):离体小肠在其运动曲线平稳后加入1X10—7mol/L5-HT溶液0.2ml，实验结果参见表6。表6芍苷对5-HT引起离体小肠收縮幅度的影响<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注丄j给药前相比*P<0.05**P<0.01.与加入5-HT相比AP〈0.05AAP〈0.01.表6数据显示，四个实验组的离体小肠收縮幅度与给药前比较均有显著性差异(P<0.05)，提示5-HT溶液的加入使得离体小肠的收缩显著加强，并与给药前比较有显著性差异(P〈0.05)。而加入芍苷提取物后，在终浓度为0.125和0.5mg/ml剂量时，与加入5-HT后的收縮幅度比较，其离体小肠的收縮幅度显著性的降低，并有显著性的差异(P<0.05)。其对His致肠平滑肌痉挛的运动幅度的抑制率分别达到了49.03%和46.89%，提示芍苷提取物对5-HT致肠平滑肌痉挛在终浓度为0.1250.5mg/ml剂量范围内有明显的拮抗作用。上述通过体内、体外研究试验综合表明，芍苷提取物对肠道运动的异常兴奋有显著的拮抗作用，对于肠道运动被异常抑制显示一定的作用趋势，具有一定的改善作用，对于介质5—羟色胺5-HT、组胺(His)引起的平滑肌痉挛显示明显的拮抗作用。以上结果提示，芍苷提取物可以可以调节肠道功能的紊乱，对多种因素引起的内脏平滑肌运动紊乱有良好的的调节作用。说明芍药甘草提取物可以作为治疗IBS的药物。依据上述动物实验推算，本发明芍药甘草提取物作为治疗IBS的药物的有效剂量可以在15g/天'人的范围内。以本发明芍药甘草提取物为药用活性成分制成的治疗IBS的药物或组合药物也属于对本发明的应用，以该药物有效剂量用于对哺乳动物优选人的IBS治疗，药物有效剂量包括对所述疾病提供缓解或治疗作用的剂量，也属于对本发明的应用。本发明芍药甘草提取物或其组合物可用口服方法或其他方法用药。口服用药可以是片剂、丸剂、粉末混合物、颗粒剂、胶囊剂、包衣剂、溶液、乳剂、分散齐U，也可以用注射剂、栓剂或其它适宜的形式。这些制剂是按照本领域的技术人员所熟知的方法制备的。如制造片剂、胶囊剂、包衣剂所用的辅料是常规用的助齐U，例如淀粉，明胶，阿拉伯胶，硅石，聚乙二醇，液体剂型所用的溶剂例如水，乙醇，丙二醇，植物油类如玉米油，花生油，橄榄油等。含有本发明芍药甘草提取物的制剂中还可有其它助剂，例如表面活性剂，润滑剂，崩解剂，防腐剂，矫味剂，色素等。毫无疑问，制备这些可能的制剂也属于对本发明的应用。权利要求1、芍药甘草提取物在制备治疗肠易激综合症药物中的应用。2、根据权利要求l所述应用，其特征在于，包括以芍药甘草提取物为活性成分的合剂。3、根据权利要求l所述应用，其特征在于，包括以芍药甘草提取物为活性成分的制剂。4、根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述制剂为片剂、丸剂、粉末混合物、胶囊剂、包衣剂、溶液、乳剂、分散剂、注射剂和栓剂中的一种。全文摘要本发明是通过大量专属性药理学试验证明，芍药甘草提取物对胃肠平滑肌运动功能的紊乱有调节作用，因此提示芍药甘草提取物及其制剂可以用于制备治疗肠易激综合症的药物。文档编号A61K36/185GK101190266SQ20061014433公开日2008年6月4日申请日期2006年12月1日优先权日2006年12月1日发明者凌海燕,徐文豪,芳白,苑可武,晖蒋,礼郑申请人:中国医药研究开发中心有限公司