本发明涉及羊雏胃有效成分提取物在预防和治疗应激性胃溃疡的药物中的用途，可将其作为治疗或预防胃病相关的药物或保健品的制备原料。
背景技术：
研究表明，情绪应激以及精神因素是胃溃疡产生的重要因素。应急刺激使大脑皮质中枢的兴奋和抑制过程失调，一方面使交感神经兴奋性增强，引起血管收缩，导致胃粘膜缺血、缺氧和抵抗力下降，另一方面使副交感神经-垂体-肾上腺系统兴奋性增强，使胃运动亢进，引起胃酸、胃蛋白酶和胃泌素分泌增多，最终导致应激性胃溃疡。因此，在精神抑郁患者中，多伴发胃肠道疾病。近年来，随着生活节奏的加快和社会竞争的加剧，人们的精神压力逐年增大，伴随着胃部疾病的患病率也逐年升高。目前，传统治疗胃溃疡的药物中，西药所占比例较大，其药理均是采用抑制胃酸分泌达到保护胃黏膜的作用，虽能有效快速抑制溃疡，但其副反应较大，容易复发，不能有效根除，所以寻找一种更为有效的，天然的抗溃疡药物尤为重要。
羊雏胃是羊的第四个胃，学名为反刍胃，是反刍动物特有的一种胃部结构。羊雏胃是羊肉加工厂的主要加工副产物，每年都有大量的羊雏胃被丢弃。目前对于羊雏胃的应用主要是凝乳酶的提取，用于干酪的生产。然而，近年来随着微生物和植物凝乳酶替代物的发展和生产，利用羊雏胃生产凝乳酶的市场需求逐年减少，越来越多的羊雏胃没有被利用。新疆畜牧业发达，羊类资源丰富。若以羊雏胃作为生产原料，进行生物制药，不仅可有效利用加工副产物，将其变废为宝，而且可将新疆得天独厚的生物资源转化为产业优势，具有极高的经济意义。
专利申请号201610431827.7一种羔羊第四胃有效成分提取物的制备方法及用途和201611004187.8一种超声波辅助提取羔羊第四胃有效成分的快速制备方法中主要记载了羔羊第四胃活性成分提取物的提取方法，所得的提取物因含有凝乳酶和胃蛋白酶等酶类，以及粘蛋白及双歧因子等多种活性成分，可应用于治疗胃病的药物原料，对慢性胃炎和浅表性胃炎，消化不良等胃部疾病具有显著的治疗效果。本发明是在前期工作的基础上，首次利用成年羊雏胃作为原料，提取其中的活性提取物，成年羊雏胃资源比羔羊雏胃来源更加丰富，可节约生产成本，同时研究了该提取物对应激性胃溃疡的治疗作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于，提供一种羊雏胃有效成分提取物在制备预防和治疗应激性胃溃疡的药物中的用途，是在专利申请号201610431827.7和201611004187.8的基础上进一步探讨成年羊雏胃提取物对束缚水浸应激性胃溃疡模型大鼠神经体液调节的影响，研究其在预防和治疗应激性胃溃疡中的用途。本发明采用束缚水浸大鼠应激胃溃疡模型，测定了羊雏胃提取物对大鼠胃溃疡指数的影响。同时测定了脑组织中单胺类神经递质5-羟色胺(5-ht)、去甲肾上腺素(ne)、多巴胺(da)及其代谢产物5-羟吲哚乙酸(5-hiaa)含量的影响。结果表明，灌胃给药羊雏胃提取物后，可明显降低应激性胃溃疡大鼠的溃疡指数，溃疡抑制率高。同时不同剂量羊雏胃提取物可不同程度降低大鼠脑组织单胺类神经递质浓度的升高，维持体液平衡。羊雏胃有效成分提取物对由束缚水浸造成的小鼠应激性胃溃疡和胃黏膜损伤具有显著的抑制和保护作用，与模型组比较，具有显著差异性(p＜0.05或p＜0.01)。因此，羊雏胃提取物可通过神经体液的调节作用，预防和治疗应激性胃溃疡损伤。可作为一种治疗胃部疾病的新型生化新药，且羊雏胃来源丰富，价格低廉，可有效利用该生物资源，变废为宝，提高经济效益。
本发明所述的一种羊雏胃有效成分提取物在制备预防和治疗应激性胃溃疡药物中的用途。
本发明所述的一种羊雏胃有效成分提取物在制备预防和治疗应激性胃溃疡的药物中的用途中羊雏胃提取物的制备：
a、取新鲜羊雏胃，利用预冷的蒸馏水流水清洗，剥除脂肪及结缔组织，剪碎后在温度-80℃下冷冻12小时，冷冻干燥，粉碎机粉碎，加入石油醚机械搅拌，脱脂2次，即得脱脂羊雏胃粉，放在温度-24℃下冷冻保存；
b、将步骤a所得脱脂羊雏胃粉1g加入22倍体积的预冷过的磷酸盐缓冲液(0.1mol/l，ph＝7.0)溶解，在超声功率260瓦下，超声18分钟，得到羊雏胃提取液；
c、将步骤b所得提取液用1mol/l的盐酸溶液调节ph值为3.3，温度-4℃下活化12小时；
d、将步骤c活化后的提取液用1mol/l的氢氧化钠溶液调节ph值为5.6，用纱布过滤，在8000转/分下，离心8分钟，弃渣，上清液透析脱盐后，在8000转/分下，离心8分钟去除沉淀，上清液进行冷冻干燥，即得羊雏胃有效成分提取物，冷冻保存。
该提取物外观呈白色粉末状，味腥，有引湿性，微溶于水。其蛋白水解活力为4951.3u/mg，提取率为14.33g/100g脱脂羊雏胃粉。
本发明所述的一种羊雏胃有效成分提取物在制备预防和治疗应激性胃溃疡的药物中的用途的显著优点在于，该有效成分安全，无毒副作用，对应激性胃溃疡的预防和治疗疗效显著。
附图说明
图1为大鼠各组的全胃图片；正常组为正常的大鼠胃部结构；模型组为大鼠经过束缚水浸应激建模后的胃溃疡全胃图片，由图可知建模成功，胃部出现多处出血点和胃溃疡创伤面；低剂量组，中剂量组，高剂量组为利用活性成分提取物给大鼠进行灌胃给药治疗，剂量分别为(50mɡ/kg、100mɡ/kg、200mɡ/kg)，发现随着给药剂量的增加，大鼠的胃溃疡病症逐渐好转，说明本发明专利的活性提取物有治疗和预防应激性胃溃疡的疗效。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明所保护范围不限于此。
实施例1
羊雏胃提取物的制备：
a、取新鲜羊雏胃，利用预冷的蒸馏水流水清洗，剥除脂肪及结缔组织，剪碎后在温度-80℃下冷冻12小时，冷冻干燥，粉碎机粉碎，加入石油醚机械搅拌，脱脂2次，即得脱脂羊雏胃粉，放在温度-24℃下冷冻保存；
b、将步骤a所得脱脂羊雏胃粉1g加入22倍体积的预冷过的磷酸盐缓冲液(0.1mol/l，ph＝7.0)溶解，在超声功率260瓦下，超声18分钟，得到羊雏胃提取液；
c、将步骤b所得提取液用1mol/l的盐酸溶液调节ph值为3.3，温度-4℃下活化12小时；
d、将步骤c活化后的提取液用1mol/l的氢氧化钠溶液调节ph值为5.6，用纱布过滤，在8000转/分下，离心8分钟，弃渣，上清液透析脱盐后，在8000转/分下，离心8分钟去除沉淀，上清液进行冷冻干燥，即得羊雏胃有效成分提取物，冷冻保存；
该提取物外观呈白色粉末状，味腥，有引湿性，微溶于水。其蛋白水解活力为4951.3u/mg，提取率为14.33g/100g脱脂羊雏胃粉。
实施例2
由实施例1得到的羊雏胃提取物对束缚水浸应激性大鼠胃溃疡的保护作用：
分组与给药：将雄性大鼠随机分为6组，每组8只，即空白组、束缚水浸胃溃疡模型组、西咪替丁阳性对照组(1.0ɡ/kg)和羊雏胃提取物低50mɡ/kg、中100mɡ/kg、高200mɡ/kg三个剂量组，适应性喂养1周后，进入实验；灌胃给药，1ml/100g，每天1次，连续5天，对照组给予等容量生理盐水；
第5日给药后将大鼠禁食，不禁水24小时，将大鼠放入束缚笼，垂直浸于温度18-20℃水浴槽中，水面浸至剑突水平，浸泡6h后取出，处死动物，开腹结扎幽门和贲门部位，摘取全胃，沿胃大弯剪开，用生理盐水洗去胃内容物，用滤纸吸干多余的水分，平展于玻璃板上，检测记录溃疡情况，取脑组织，放入液氮速冻，置于温度-80℃冰箱，保存待测神经递质含量。
实施例3
胃溃疡指数测定：
采用盲法测量胃黏膜损伤长度以及溃疡面积，根据以下指标计算溃疡指数，胃损伤评定方法：无损伤0分；损伤长度≤1mm(包括斑点糜烂)计为1分；1mm＜损伤≤2mm计为2分；2mm＜损伤≤3mm计为3分；3mm＜损伤≤4mm计为4分；损伤＞4mm计为5分，计分相加为溃疡指数。溃疡抑制率＝(模型组溃疡指数-治疗组溃疡指数)/模型组溃疡指数×100％；结果见表1：
表1.羊雏胃提取物对应激性胃溃疡模型大鼠溃疡指数的影响
注：与模型组比较，*p＜0.05和**p＜0.01。
由表1可知，与模型组相比，阳性对照组和高、中剂量组对水浸束缚大鼠胃黏膜均有明显的治疗保护作用，均具有统计学意义，表现为溃疡点减少和溃疡程度减轻，且随着剂量加大药效增强，因此可以说明，羊雏胃提取物中剂量组(100mg/kg)、高剂量组(200mg/kg)能够有效的减少应激性胃溃疡的发生和发展。
实施例4
采用高效液相-荧光检测法测定脑组织中神经递质含量：
样品处理：(1)取大鼠脑组织，用冰冷生理盐水冲洗，用滤纸吸干称重；(2)将称重的脑组织，玻璃匀浆机中，上下转动数次，充分研磨使组织匀将化；(3)将匀将脑组织液转入离心管中。加适量高氯酸溶液(0.4mol/l)，涡流多次混匀，置冷冻离心机内以10000r/min，离心10min；(4)将离心后的上清液再次同样条件再次离心，(5)取上清液用0.4mol/l高氯酸定容1ml，涡流混匀，得样品溶液；
色谱条件：色谱柱：c18柱(250nm×4.6mm，5μm)，流动相为体积比91:9的甲醇:水，其中水相中每升含醋酸钠0.1mol、乙二胺四乙酸二钠0.1mol、醋酸1.45ml，流速1ml/min，发射波长：330nm，激发波长290nm，柱温：温度35℃，进样量：10μl；
对照品溶液的制备：分别精取5-羟色胺酸、盐酸去甲肾上腺素、盐酸多巴胺、5-羟吲哚乙酸对照品3.0mg、5.9mg、3.6mg、5.1mg，用盐酸0.1mol/l溶解分别定容至10ml，从中再分别取0.2、0.6、0.6、0.1ml，用盐酸0.1mol/l稀释到2000倍，摇匀，即得4种单胺类神经递质混合对照品溶液；
线性关系考察：精密吸取混合对照品溶液5、10、15、20、25、30μl进样，按上述色谱条件测定，以每种对照品的进样量(ng)为横坐标(x)，吸收峰峰面积为纵坐标(y)，做线性回归，求得回归方程和线性范围；见表2
表2线性关系考察
方法的精密度：进行低进样量(1μl)、中进样量(20μl)与高进样量(40μl)精密度考察；各对照品紧密度结果见表3：
表3精密度考察
重复性考察：取一定量的样品溶液，按上述方法重复进样测定5次，5-羟色胺酸(5-ht)、去甲肾上腺素(ne)、多巴胺(da)、5-羟吲哚乙酸(5-hiaa)四种递质的精密度值分别为3.18％、4.14％、5.24％和3.48％，重复性良好；
样品含量测定：按上述方法，各组大鼠脑组织中，5-羟色胺酸(5-ht)、去甲肾上腺素(ne)、多巴胺(da)、5-羟吲哚乙酸(5-hiaa)四种递质的含量，见表4：
表4各组动物脑组织单胺类神经递质含量
注：与空白组比较，#p<0.05and##p<0.01，与模型组比较，*p<0.05and**p<0.01。
实验结果：
束缚水浸应激模型可造成机体的情绪和行为变化，应激主要通过丘脑、丘脑下部、网状结构、边缘系统、特别是大脑皮质的认知、评价引起各种情绪及内脏、躯体反应。当机体处于应激刺激(束缚水浸)时，神经内分泌系统、中枢神经系统等直接或间接地影响多种激素、递质、细胞因子、神经肽等物质的表达、释放和分布，最终导致应激性胃溃疡。中枢内含有多种神经递质，单胺类神经递质与内分泌密切相关；当机体处于应激状态时，脑组织中(大脑皮质中枢)中5-羟色胺酸(5-ht)、去甲肾上腺素(ne)、多巴胺(da)、5-羟吲哚乙酸(5-hiaa)水平增高，通过中枢功能引起胃溃疡的形成，在刺激因素作用下，5-羟色胺酸(5-ht)从颗粒细胞内释放，5-羟色胺酸(5-ht)通过刺激胃肠道平滑肌5-ht2受体或肠壁内神经节细胞5-ht4受体，引起胃肠道平滑肌收缩，使胃肠道张力增加，肠蠕动加快；中枢ne系统在急性应激状态时活化，引起胃粘膜血管的收缩及缺血等，导致溃疡坏死。盐酸多巴胺(l-da)不仅是一种中枢神经递质，同时也是重要的胃肠道神经递质，将参与胃肠道运动，胃酸分泌粘膜流血等。
本发明应激溃疡模型组动物脑组织中5-羟色胺酸(5-ht)、去甲肾上腺素(ne)、多巴胺(da)、5-羟吲哚乙酸(5-hiaa)水平均增高，主要原因是应激状态导致上述神经递质的释放有关。此结果与相关研究基本一致；提取物干预组中上述递质水平有所下降，这是该提取物含有胃蛋白酶、凝乳酶等多种蛋白质，能够增强蛋白质的吸收，使机体营养摄入充足，调节神经递质的失衡。应急状态下，上述检测神经递质水平降低时，能够抑制溃疡的发展或暂缓形成。