本发明涉及一种亚砷酸对人肺腺癌细胞体外抑制的方法，具体地说是以一种亚砷酸对人肺腺癌细胞体外抑制的方法。
背景技术：
目前公知的中药砒霜（三氧化二砷，as２ｏ３）及砷制剂对肿瘤的治疗是近年来的研究热点，特别是对白血病的治疗已为人们所关注。砷作为抗肿瘤药物在我国已有百年历史，中药传统方剂青黄散、十味丸等治疗不同类型的白血病确有一定疗效，经鉴定其中有效成分为含砷中药。近年来的实验与临床研究发现，三氧化二砷对肺癌有良好的抗肿瘤作用，其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡、抑制其增殖、逆转耐药等有关，但其治疗肺癌的确切机理未完全阐明。
技术实现要素：
材料和方法
1、细胞株、药物与试剂lac细胞株由广州军区总医院分子肿瘤学研究所细胞室提供；亚砷酸注射液，批号：19990191，由哈尔滨伊达药业有限公司生产；胎牛血清（fsc）为中国医学科学院血液学研究所产品；rpmi1640培养基、乙二胺四乙酸（edta）、胰蛋白酶、二甲基亚砜（dmso）、四甲基偶氮唑盐（mtt）均为gibco公司产品；人p53定量酶联免疫吸附法（elisa）试剂盒购自上海森雄科技实业有限公司。
2、细胞培养将冻存的lac株按常规方法复苏，接种于rpmi1640培养液（含体积分数为10％fsc、100u/ml青霉素、100mg/ml链霉素）中，于37℃、体积分数为5%co2浓度及饱和湿度的恒温培养箱中培养，细胞呈单层贴壁生长，每2～３d传代1次；传代时用0.25g／ｌ的胰蛋白酶和0.2g／ｌｅｄｔａ消化2～３min，以培养液吹打制成细胞悬液，接种至50ml培养瓶，至细胞生长旺盛后，取对数生长期细胞用于实验。
3、细胞形态观察选用对数生长期细胞，用胰蛋白酶消化后，采用培养细胞计数法，用1640液稀释成2×105/ml浓度的细胞悬液接种至50ml培养瓶；置于37℃、体积分数为5％co2及饱和温度的恒温培养箱中培养24h后，实验组分别加入各种浓度（0.75、1.0、1.5、2.0mg/l）的亚砷酸，模型组则加入不含药的细胞培养液。置于co2培养箱中培养48h、72h后，将培养瓶置于倒置相差显微镜下进行细胞生长状态的观察。
4、mtt比色法检测lac肿瘤细胞的生长抑制率选用对数生长期细胞，用胰蛋白酶消化后，采用培养细胞计数法，用rpmi1640培养液稀释配成1×105个/ml的细胞悬液，接种于96孔培养板中，每孔接种100μl，在ｃｏ２培养箱中培养24h后，实验组加入不同浓度的亚砷酸（0.75、1.0、1.5、2.0mg/l）100μl，模型对照组则换含等体积溶剂的培养基，每组设16孔；每日更换新鲜培养液，以维持亚砷酸药液浓度不变；在ｃｏ２培养箱中培养24、48、72h后每孔加入20μlmtt无血清培养基，37℃继续培养4h后，每孔加入100μldmso，振荡混匀后，在酶标仪上检测492nm处各孔吸光度（ｄ）值，计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率：p抑制／%＝（1－ｄ实验组／ｄ模型组）×100％。人p53基因的检测选用对数生长期细胞，用胰蛋白酶消化后，采用培养细胞计数法，用1640培养液稀释成2×105/ml浓度的细胞悬液接种至50ml培养瓶中；在ｃｏ2培养箱中培养24h后，实验组分别加入各种浓度（0.75、1.0、1.5、2.0mg/l）的亚砷酸，模型对照组则加入不含药的细胞培养液；置ｃｏ２培养箱中培养48h后收集细胞，过滤后离心，吸取细胞培养上清液用于实验。按p53elisa试剂盒操作要求，依次加样、洗涤、孵育、洗涤，于酶标仪492nm波长处比色。测定样品的吸光度值。统计学方法数据采用spss100软件包处理。
结果：各浓度亚砷酸均能使lac细胞发生凋亡特征性形态改变，能显著性抑制lac株的增殖，且呈现一定的时间效应关系，并能显著性升高p53基因的含量（均ｐ＜0.0５或ｐ＜0.0１）。
发明目的：中药砒霜（三氧化二砷，as２ｏ３）及砷制剂对肿瘤的治疗是近年来的研究热点，特别是对白血病的治疗已为人们所关注。砷作为抗肿瘤药物在我国已有百年历史，中药传统方剂青黄散、十味丸等治疗不同类型的白血病确有一定疗效，经鉴定其中有效成分为含砷中药。近年来的实验与临床研究发现，三氧化二砷对肺癌有良好的抗肿瘤作用，其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡、抑制其增殖、逆转耐药等有关，但其治疗肺癌的确切机理未完全阐明。近年来临床上将亚砷酸（化学成分：三氧化二砷）用于治疗肺癌已取得一定的效果，故本发明试图通过体外培养人肺腺癌细胞株（lac）作为研究对象，观察亚砷酸对lac细胞形态及p53基因表达的影响，以了解亚砷酸用于治疗肿瘤的机理。
技术方案：以体外培养的人肺腺癌细胞株（lac）细胞为研究对象，选用对数生长期细胞，培养24h后，分别加入不同浓度的亚砷酸（0.75、1.0、1.5、2.0mg/l)，并设模型对照组；采用倒置相差显微镜观察细胞形态，四甲基偶氮唑盐（mtt）法检测lac细胞的生长抑制率；酶联免疫吸附（elisa）法检测p53基因的表达变化情况。
发明有益效果：亚砷酸抗肺癌的作用可能是通过上调p53基因的表达来诱导lac肿瘤细胞凋亡，从而抑制lac细胞的增殖，这可能也是中药砒霜能治疗肿瘤的机理之一。
最佳实施方式：运用药物治疗。