技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种刺五加甙的纯化方法，特别是涉及一种从刺五加中提取刺五加甙的新方法。
背景技术：
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刺五加，灌木，高1-6米；分枝多，一、二年生的通常密生刺，稀仅节上生刺或无刺；刺直而细长，针状，下向，基部不膨大，脱落后遗留圆形刺痕，叶有小叶5，稀3；叶柄常疏生细刺，长3-10厘米；小叶片纸质，椭圆状倒卵形或长圆形，长5-13厘米，宽3-7厘米，先端渐尖，基部阔楔形，上面粗糙，深绿色，脉上有粗毛，下面淡绿色，脉上有短柔毛，边缘有锐利重锯齿，侧脉6-7对，两面明显，网脉不明显；小叶柄长0.5-2.5厘米，有棕色短柔毛，有时有细刺。
伞形花序单个顶生，或2-6个组成稀疏的圆锥花序，直径2-4厘米，有花多数；总花梗长5-7厘米，无毛；花梗长1-2厘米，无毛或基部略有毛；花紫黄色；萼无毛，边缘近全缘或有不明显的5小齿；花瓣5，卵形，长-2毫米；雄蕊5，长1.5-2毫米；子房5室，花柱全部合生成柱状。果实球形或卵球形，有5棱，黑色，直径7-8毫米，宿存花柱长1.5-1.8毫米。花期6-7月，果期8-10月。
刺五加，拉丁名称：radixacanthopanacissenticosl，英文名称：manyprickleacathopanaxroot，中文学名：刺五加、五加参，第二学名：acanthopanaxextract，别名：五加皮、刺拐棒(中国东北)，俗名：ciwujia，科属：五加科五加属，使用部位：根和根状茎，生于山坡林中及路旁灌丛中；药圃常有栽培。分布于华中、华东、华南和西南。根皮祛风湿、强筋骨，泡酒制五加皮酒(或制成五加皮散)。根皮含挥发油、鞣质、棕桐酸、亚麻仁油酸、维生素a，b1。具有益气健脾，补肾安神。用于脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦的功效。
刺五加甙具有明显抗疲劳，抗辐射，抗应激，耐缺氧，提高机体对温度变化的适应力，解毒作用；还能改善大脑皮质的兴奋、抑制过程，提高脑力劳动效能；还有抗心律失常、改善大脑供血量、调节血压，止咳、祛痰、抗炎、抗菌和抗病毒等作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种从刺五加中提取刺五加甙的新方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种从刺五加中提取刺五加甙的新方法，其步骤如下：
(1)将刺五加粉碎至40-80目，加入发酵液，用70％甲醇浸提，用超声波和微波双辅助，提取液减压浓缩，得刺五加初提液；
(2)将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为da201、d101、hpd300、ab-8、lx-100树脂中的一种；
(3)在常温常压下，以1bv/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3-5bv，洗掉刺五加水溶液中的色素、鞣质、无机盐类等水溶性杂质；
(4)再用70％-95％的乙醇溶液在1-3bv/h流速、洗脱体积为6-8bv下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(5)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为65％以上刺五加半成品粗粉；
(6)将所得刺五加粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95～85∶2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集刺五加各阶段洗脱液；
所述的步骤(1)中，发酵液组成为：酵母粉0.5％，kh2po40.2％，mgso40.1％；最适培养条件为：500ml摇瓶量140ml，接种量10％，转速200r/min，温度35℃，初始ph5.8。在此条件下发酵7-10天。
所述的步骤(1)中，70％甲醇浸提料液比1∶20-1∶30g/ml、30-40℃超声处理30min、微波功率200-400w、微波时间3-5min；
所述的步骤(6)中，聚酰胺树脂吸附色谱法动态吸附上样量1∶55-1∶75、上样浓度2.100mg/ml、吸附流速和解析流速均为1ml/min、吸附时间60min、75％乙醇作为洗脱剂；
本发明应用超声波微波双辅助纯化刺五加甙，对刺五加甙的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量90％以上的剌五加甙，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的聚酰胺树脂吸附色谱法，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附桑黄素，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施方式：
实施例1：一种从刺五加中提取刺五加甙的新方法，其步骤如下：
(1)将刺五加粉碎至40目，加入发酵液，用70％甲醇浸提，料液比1∶30g/ml，45℃超声处理30min和微波功率400w、微波时间3min双辅助。提取液减压浓缩，得刺五加初提液；
(2)将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为lx-100树脂；
(3)在常温常压下，以1bv/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3-5bv，洗掉刺五加水溶液中的色素、鞣质、无机盐类等水溶性杂质；
(4)再用70％、75％、80％、85％、90％、95％的乙醇溶液在1-3bv/h流速、洗脱体积为6-8bv下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(5)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为65.7％刺五加半成品粗粉；
(6)将所得刺五加粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过80目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇以95∶2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集刺五加各阶段洗脱液；用高效液相色谱法检测可得刺五加甙91.3％
实施案例2：一种从刺五加中提取刺五加甙的新方法，其步骤如下：
(1)将刺五加粉碎至60目，加入发酵液，用70％甲醇浸提，料液比1∶20g/ml，45℃超声处理30min和微波功率400w、微波时间5min双辅助。提取液减压浓缩，得刺五加初提液；
(2)将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为lx-100树脂；
(3)在常温常压下，以1bv/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3-5bv，洗掉刺五加水溶液中的色素、鞣质、无机盐类等水溶性杂质；
(4)再用70％、75％、80％、85％、90％、95％的乙醇溶液在1-3bv/h流速、洗脱体积为6-8bv下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(5)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为63.1％刺五加半成品粗粉；
(6)将所得刺五加粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇以90∶2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集刺五加各阶段洗脱液；用高效液相色谱法检测可得刺五加甙90.7％
实施案例3：一种从刺五加中提取刺五加甙的新方法，其步骤如下：
(1)将刺五加粉碎至80目，加入发酵液，用70％甲醇浸提，料液比1∶25g/ml，45℃超声处理30min和微波功率400w、微波时间5min双辅助。提取液减压浓缩，得刺五加初提液；
(2)将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为ab-8树脂；
(3)在常温常压下，以1bv/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3-5bv，洗掉刺五加水溶液中的色素、鞣质、无机盐类等水溶性杂质；
(4)再用70％、75％、80％、85％、90％、95％的乙醇溶液在1-3bv/h流速、洗脱体积为6-8bv下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测；
(5)收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到含量为64.3％刺五加半成品粗粉；
(6)将所得刺五加粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇以95∶2比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集刺五加各阶段洗脱液；用高效液相色谱法检测可得刺五加甙92.6％。