本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种金银花露的制备方法及应用。
背景技术：
金银花露记载于《中国药药典》2015年版一部page1086，由取金银花62.5g，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液约1000ml，取蒸馏液,调节ph值至约4.5，加矫味剂适量，滤过，制成1000ml，灌封，灭菌，或灭菌，灌封，即得。能清热解毒。用于小儿痱毒，暑热口渴等。
现有技术中，尚未有金银花露在提取制备方面采用超临界法的报道，而采用水蒸气蒸馏的方法，不能将某些高沸点，低挥发度的成分全部提取出来，而且长时间处于高温状态下，药物的挥发性成分容易逸散，某些易热解的物质或化学不稳定性成分也易被破坏，药材的有效成分损失巨大，严重影响了药物的疗效，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。因此，需要开发一种有效成分高、质量稳定可靠，适用于现代化生产的金银花露。
技术实现要素：
发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种有效成分高、质量稳定可靠，适用于现代化生产的金银花露的制备方法。本发明的另一个目的在于提供一种金银花露在制备抑制小鼠肾腺癌细胞rag细胞增殖药物中的应用。
技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
一种金银花露的制备方法，由其特征在于，由以下重量百分比的原料组成金银花62.5g制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：取金银花加入到co2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3－5%，萃取压力10－20mpa，萃取时间30-60min，温度45－55℃，co2流量3－5m1/g生药·min，得超临界萃取物，备用；取超临界萃取物,调节ph值至约4.5，加蔗糖3-5%，微孔滤膜滤过，制成1000ml，灌封，灭菌，即得。
上述一种金银花露的制备方法，其特征在于所述co2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%。
上述一种金银花露的制备方法，其特征在于所述co2超临界萃取的萃取萃取压力15mpa，萃取时间45min，萃取温度50℃，co2流量4m1/g生药·min。
上述一种金银花露的制备方法，其特征在于所述一种金银花露的制备方法，其特征金银花露0.45μm微孔滤膜滤过。
上述一种金银花露在制备抑制小鼠肾腺癌细胞rag细胞增殖药物中的应用。
现有技术中，金银花露一次60-120ml，一日2-3次，采用本发明制备成的金银花露一次30-60ml，一日服用2次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。
具体实施方式
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
取金银花加入到co2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3%，萃取压力10mpa，萃取时间30min，温度45℃，co2流量3m1/g生药·min，得超临界萃取物，备用；取超临界萃取物,调节ph值至约4.5，加蔗糖3-5%，微孔滤膜滤过，制成1000ml，灌封，灭菌，即得。
实施例2
取金银花加入到co2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15mpa，萃取时间45min，温度50℃，co2流量4m1/g生药·min，得超临界萃取物，备用；取超临界萃取物,调节ph值至约4.5，加蔗糖3-5%，微孔滤膜滤过，制成1000ml，灌封，灭菌，即得。
实施例3
取金银花加入到co2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20mpa，萃取时间60min，温度55℃，co2流量5m1/g生药·min，得超临界萃取物，备用；取超临界萃取物,调节ph值至约4.5，加蔗糖3-5%，微孔滤膜滤过，制成1000ml，灌封，灭菌，即得。
实施例4：金银花露抑制rag细胞增殖的实验研究资料
1实验材料
1.1实验用细胞株
小鼠肾腺癌细胞rag细胞增殖，上海酶联检测技术有限公司，dmem+10%fbs常规培养。
1.2实验药物
研究药物：本发明金银花露：按实施例3方法制备。
药液储液：称取100mg金银花露，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μldoff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
1.3实验试剂
dmem（卡迈舒（上海）生物科技有限公司批号：20161108）；胎牛血清fbs（广州蕊特生物科技有限公司批号：20161006）；nahco3（广州市昱浩贸易有限公司批号：20160705）；trypsin（上海雅心生物技术有限公司批号：20160701）；edta（广州崇骏化工有限公司批号：2015/10）；penicillingsodiumsalt（大连美仑生物技术有限公司批号：20150214）；streptomycinsulfate（上海浩然生物技术有限公司批号：20160820）；无水乙醇（南阳市恒鑫光电物资有限公司批号：160210145）；mtt(上海博谷生物科技有限公司批号：20151023);pbs（实验室自配）；
1.4实验器材
金相倒置显微镜（seepack型号：l-323）；可见-紫外光微孔板检测仪（德国eppendorf型号：platereaderaf2200）；co2培养箱（启前型号：qq-80a-ii）；超净台（东莞市利安达环境科技有限公司型号：lcjt-2a）；纯水仪（超康型号：ck）；精密移液器（bg-easypipet移液器s1000）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：bp211d）；全自动高压灭菌锅（上海博迅公司型号：yxq-ls-75sii）；台式电热鼓风干燥箱（苏州江东精密仪器有限公司型号：dhg-9123a）；液氮罐（四川山立低温设备有限公司型号：cmsh100）；低速离心机上海家舜玻璃仪器有限公司型号：tdl-40b）；0.2μm滤器（密理博:mpgp02001）；10cm培养皿(泰州市建军医疗用品厂)、96孔培养板（泰州市建军医疗用品厂）；细胞计数板；离心管、移液管、tips若干。
2实验方法
1）rag细胞用dmem+10%fbs于37℃、5%co2进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，pbs轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.04%edta，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。
2）将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中（37℃，5%co2）常规培养。
3）根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入金银花露溶液，继续培养24h。
4）24h后加入20μlmtt溶液（5mg/ml，即0.5%mtt），继续培养4h。
5）4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
6）同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、mtt、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。
7）结果以药物对细胞的抑制率表示：
细胞增值抑制率（%）=（对照孔od值-给药孔od值）/对照孔od值×100%。实验重复3次。
3统计处理
采用microsoftexcel2003软件中的相关分析和studentt检验，数据以mean±s.d.表示。
4实验结果
mtt法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对rag细胞增殖抑制有差异（p<0.05），剂量在10mg/ml时该差异具有显著性（p<0.01），当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（p<0.001）。
表1金银花露对rag细胞增殖抑制影响研究（x±sd）
注：与对照组比较，*p<0.01；**p<0.001
5实验结论
金银花露可以抑制rag细胞增殖，减少rag细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。