用于治疗皮炎的包含色甘酸的组合物的制作方法

本发明涉及包含色甘酸或其衍生物的新组合物的皮肤病学用途。
背景技术：
：皮炎是皮肤的急性或慢性炎症反应，其可以通过不同的严重程度来标记。皮炎是一种与体质因素(例如较高的免疫敏感性和遗传改变)以及诱导或有助于保持和加剧症状的多种暴露因素有关的疾病。一般而言，在皮炎发作时，可观察到水肿性红斑，其后是具有丘疹和浆液性丘疹的红斑病变，随后形成囊泡、脓疱、糜烂、结痂和脱屑。在皮炎是急性的情况下，这些状态可以以自然的方式随时间恢复。但是，整个过程通常是复发性的。当皮炎变成慢性时，还可以观察到通常与瘙痒相关的皮肤增厚、苔藓化和色素沉着。皮炎通常分为不同类型，包括特应性皮炎、接触性皮炎、脂溢性皮炎、湿疹、牛皮癣等。目前对皮炎的常见治疗涉及识别和预防可能诱发或加剧炎症的因素，以及良好的皮肤护理，其几乎总是与使用适于治疗疾病症状的药物相结合。在所述药物中，通常使用类固醇类制剂。然而，尽管其具有已经证实的临床疗效，但基于类固醇的制剂(例如外用皮质类固醇制剂)会引起许多副作用，例如皮肤过度变薄、萎缩、由面部脂肪沉淀引起的所谓的“月亮脸”、皮肤变红、多毛症和妊娠纹等。此外，当患者长期使用类固醇时，其身体通常会对这些药物产生耐药性，甚至可能出现皮炎症状以更具攻击性的形式复发的情况。目前已知并使用不同类型的针对皮炎的非类固醇疗法。具体地，在现有技术中提出了使用色甘酸或其衍生物。色甘酸是一种肥大细胞稳定剂，通常以其钠盐(色甘酸钠)的形式出售。该药物最常见的用途是用于治疗哮喘和结膜炎。文献wo99/60997a1描述了包含色甘酸钠的制剂，包含两性表面活性剂和烷氧基化鲸蜡醇作为治疗特应性皮炎的基本成分。文献ep0084190a2描述了包含色甘酸或其盐以及亲水性大分子材料的组合物。该组合物可用于治疗皮肤伤口和产生分泌物的病变，例如伴随着皮炎一起形成的那些。文献ep1040826a1公开了色甘酸酯，其可用于治疗发生过敏过程的皮炎病例。尽管本领域中存在提出的用于治疗皮炎的基于色甘酸的不同制剂，但仍需要开发新的替代性皮肤病学组合物以丰富可用的治疗库。技术实现要素：本发明的作者目前已经发现了包含色甘酸或其衍生物的成分的组合，其适合于治疗皮炎。此外还发现，该组合的成分出乎意料地以协同方式起作用，从而提供针对皮炎的特别有效和/或安全的治疗。因此，本发明第一方面涉及一种组合(combination)，所述组合包括：a)式(i)的化合物，或其盐或溶剂化物；其中，每个r1独立地选自h，或者与r1键合的-o-c(o)-基团一起形成酯基或羧酸酐基；并且r2选自h，或者与r2键合的氧原子一起形成醚基、酯基、氨基甲酸酯基或碳酸酯基；b)秘鲁巴豆(crotonlechleri)树脂；和c)泛醇。本发明第二方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明第一方面的组合和药学上可接受的载体。本发明的另一方面涉及本发明第一方面的组合或本发明第二方面的组合物用于药物的用途，特别是用于治疗或预防皮炎的用途。本发明的另一目的是本发明第一方面的组合或本发明第二方面的组合物在制备药物中的用途，特别是在制备用于治疗或预防皮炎的药物中的用途。本发明的又一目的是治疗皮炎的方法，所述方法包括：a)提供需要治疗或预防皮炎的受试者；b)对所述受试者给药本发明第一方面的组合或本发明第二方面组合物。本发明的又一目的是本发明第一方面的组合或本发明第二方面的组合物在治疗皮肤以减轻皮炎所致影响中的美容(非治疗性)用途。附图说明图1示出了在实施例2描述的试验中致敏阶段和随后的治疗阶段期间耳厚度的变化。每项对应于一组小鼠，并且每项表示基于在所述组中收集的所有耳朵的耳厚度记录的平均耳厚度。图2示出了在实施例3描述的试验中致敏阶段和随后的治疗阶段期间耳厚度的变化。每项对应于一组小鼠，并且每项表示基于在所述组中收集的所有耳朵的耳厚度记录的平均耳厚度。图3示出了用本发明组合物治疗后小鼠耳组织中par2水平的变化。图4示出了用本发明组合物治疗后小鼠耳组织中trvp4水平的变化。图5示出了用本发明组合物治疗后小鼠耳组织中tnf-α水平的变化。具体实施方式本发明的一个目的是一种组合，所述组合包括：a)式(i)的化合物，或其盐或溶剂化物；其中，每个r1独立地或同时选自h，或者与r1键合的-o-c(o)-基团一起形成酯基或羧酸酐基；并且r2选自h，或者与r2键合的氧原子一起形成醚基、酯基、氨基甲酸酯基或碳酸酯基；b)crotonlechleri树脂；和c)泛醇。式(i)的化合物包含在本发明组合中的式(i)的化合物是色甘酸或其衍生物。色甘酸(iupac名称：5,5’-(2-羟基丙烷-1,3-二基)双(氧)双(4-氧代-4h-色烯-2-羧酸)是一种肥大细胞稳定剂，通常以其用于治疗哮喘和结膜炎而周知。该化合物的化学式如下：式(i)的化合物可以从商业来源获得，或者可以通过现有技术中描述的化学合成方法或其变体来制备，这属于本领域技术人员的公知常识。例如，式(i)的化合物可如专利申请ep1040826a1中的描述制备。在实施方式中，r1独立地或同时选自h，或者与r1键合的-o-c(o)-基团一起形成酯基；并且r2选自h，或者与r2键合的氧原子一起形成醚基或酯基。在实施方式中，在任一前述实施方式中，在式(i)的化合物或其盐或其溶剂化物中，所述醚基、酯基、羧酸酐基、氨基甲酸酯基和碳酸酯基如下所定义。在一个具体实施方式中，r1是h或x，其中x表示直链或支链烷基；x优选表示直链或支链c1-12烷基；x更优选表示直链或支链c1-6烷基。在优选的实施方式中，x是甲基；乙基；丙基或异丙基；或直链或支链丁基(例如支链丁基是叔丁基)。在特别优选的实施方式中，x是甲基或乙基，优选乙基。在另一实施方式中，r1是h或基团，其中，y是如前所定义的h或x。优选地，y是如前所定义的x。优选地，y为甲基。在实施方式中，r2是h或x，其中，x表示直链或支链烷基；x优选表示直链或支链c1-12烷基；x更优选表示直链或支链c1-6烷基。在优选的实施方式中，x是甲基；乙基；丙基或异丙基；或直链或支链丁基(例如支链丁基是叔丁基)。在特别优选的实施方式中，x是甲基或乙基，优选乙基。在另一实施方式中，r2是h或基团，其中，y如前所定义。在另一实施方式中，r2是h或基团，其中，y如前所定义。在另一实施方式中，r2是h或基团，其中，每个y独立地或同时如前所定义。在另一实施方式中，r2是h或基团，其中，y如前所定义。在一个具体实施方式中，r1是h或x，优选为乙基，r2是在另一具体实施方式中，r1是h或x，其中，x如前所定义，且r2是h。在甚至更优选的实施方式中，r1和r2是h，即式(i)的化合物是色甘酸。在本发明的上下文中，式(i)的化合物(优选为色甘酸)的盐是药学上可接受的盐。药学上可接受的盐应理解为意指当以合适的方式特别是在人类和/或哺乳动物中施用或使用治疗时生理上耐受的任何盐。优选地，药学上可接受的盐是皮肤病学上可接受的盐，即它是适合施用于皮肤上的盐，其不显示出与毒性、不相容性、刺激性、过敏反应等有关的任何问题。优选地，所述盐是其中式(i)的化合物优选并且在适当时通过至少一个羧基和/或羟基的去质子化形成阴离子，并且抗衡阳离子是碱金属、碱土金属、或铵阳离子的盐。优选地，所述抗衡阳离子是碱金属。更优选地，所述抗衡阳离子是钠或钾。甚至更优选地，所述抗衡阳离子是钠。优选地，所述盐是其中一个或两个羧基和/或仲羟基处于去质子化状态，并且所述抗衡阳离子是碱金属、碱土金属或铵阳离子的色甘酸盐。优选地，所述抗衡阳离子是碱金属。更优选地，所述抗衡阳离子是钠或钾。甚至更优选地，所述抗衡阳离子是钠。更优选地，所述盐是其中羧基处于去质子化状态，并且所述抗衡阳离子是碱金属、碱土金属或铵阳离子的色甘酸盐。优选地，所述抗衡阳离子是碱金属。更优选地，所述抗衡阳离子是钠或钾。甚至更优选地，所述抗衡阳离子是钠。在特别优选的实施方式中，式(i)的化合物是色甘酸钠，其可以是色甘酸单钠或色甘酸二钠，即色甘酸盐中的一个或两个羧基分别处于去质子化状态，并且抗衡阳离子(每个去质子化的羧基的抗衡阳离子)是钠。优选地，式(i)的化合物是色甘酸二钠(dscg)。上述盐可以从商业来源获得，或者可以根据本发明领域内熟知的方法制备。例如，其中羧基的抗衡阳离子是碱金属或碱土金属的盐可以通过使色甘酸与碱金属或碱土金属的氢氧化物或醇盐在合适的溶剂中反应来制备。在本发明的上下文中，式(i)的化合物的溶剂化物是所述化合物通过非共价键与另一种分子(通常是极性溶剂)结合的任何形式，特别是包括水合物和醇化物的分子，例如甲醇化物，其中，式(i)的化合物优选为色甘酸，甚至更优选为色甘酸二钠。优选的溶剂化物是水合物。crotonlechleri树脂crotonlechleri是被称为“sangrededrago”(龙之血)的树的科学名称，其属于大戟科(euphorbiaceae)。树脂是从所述树中提取的，并且所述树脂中最有效的组分是原花青素和生物碱塔斯品。该树脂的其他组分包括木酚素、多不饱和脂肪酸、色素和类黄酮。c.lechleri树脂的性质和传统应用在k.jones的综述文章中描述，reviewofsangrededrago(crotonlechleri)-asouthamericantreesapinthetreatmentofdiarrhea,inflammation,insectbites,viralinfections,andwounds:traditionalusestoclinicalresearch,j.altern.complem.med.,2003,9(6),877-896.c.lechleri树脂可以在市场上买到，例如以cobiosa公司出售的名为龙之血的水醇(hydroglycolic)溶液(水和丙二醇)的形式买到，其中树脂含量为1wt％～5wt％。因此，在实施方式中，包含在本发明组合中的c.lechleri树脂是优选基于水和丙二醇的水醇溶液。优选地，该水醇溶液包含含量为1wt％～5wt％的树脂。泛醇泛醇是一种属于维生素b族的化合物，其在皮肤中转化为泛酸(维生素b5)，因此它也被称为维生素原b5。所述化合物在化妆品工业中是众所周知的，因为多年来它作为皮肤保湿剂被使用。泛醇是具有手性碳原子的化学化合物，因此它以两种对映体形式存在，其中只有d-泛醇(右泛醇)具有生物活性。然而，两种对映体都显示出保湿活性，并且d-泛醇以及包括d-泛醇和l-泛醇的外消旋混合物均可用于美容组合物中。在优选的实施方式中，在本发明的组合中，泛醇选自d-泛醇和外消旋混合物，并且优选使用d-泛醇。组合在实施方式中，以重量:重量表示，crotonlechleri树脂和泛醇的比例为1:500～1:2，优选为1:200～1:10，特别是1:100～1:20，特别优选的方式是1:50～1:30，特别是1:50～1:40，更特别是1:45～1:44。crotonlechleri树脂和泛醇的重量组合形成重量b。在优选的实施方式中，式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)，与重量b的重量比为2.5:2.045或更高(更高应理解为表示式(i)的化合物的重量增加或重量b减少)，为4.5:2.045或更高，或者为4.9:2.045或更高。更具体地，该比例为2.5:2.045～10:2.045、4.5:2.045～10:2.045，或者4.9:2.045～10:2.045。更具体地，该比例为2.5:2.045～5.5:2.045、4.5:2.045～5.5:2.045，或者4.9:2.045～5.5:2.045。更具体地，该比例为2.5:2.045～5.1:2.045、4.5:2.045～5.1:2.045，或者4.9:2.045～5.1:2.045。在优选的实施方式中，式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)，与泛醇的重量比为2.5:2.000或更高(更高应理解为表示式(i)的化合物的重量增加或泛醇的重量减少)，为4.5:2.000或更高，或4.9:2.000或更高。更具体地，该比例为2.5:2.000～10:2.000、4.5:2.000～10:2.000，或者4.9:2.000～10:2.000。更具体地，该比例为2.5:2.000～5.5:2.000、4.5:2.000～5.5:2.000，或者4.9:2.000～5.5:2.000。更具体地，该比例为2.5:2.000～5.1:2.000、4.5:2.000～5.1:2.000，或者4.9:2.000～5.1:2.000。在优选的实施方式中，式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)，与crotonlechleri树脂的重量比为2.5:0.045或更高(更高应理解为表示式(i)的化合物的重量增加或crotonlechleri树脂的重量减少)，为4.5:0.045或更高，或4.9:0.045或更高。更具体地，该比例为2.5:0.045～10:0.045、4.5:0.045～10:0.045，或者4.9:0.045～10:0.045。更具体地，该比例为2.5:0.045～5.5:0.045、4.5:0.045～5.5:0.045，或者4.9:0.045～5.5:0.045。更具体地，该比例为2.5:0.045～5.1:0.045、4.5:0.045～5.1:0.045，或者4.9:0.045～5.1:0.045。在一个具体实施方式中，本发明的组合基本上由以下组成：a)至少一种式(i)的化合物(或其盐或溶剂化物)，优选为色甘酸(或其盐或溶剂化物)，优选为色甘酸二钠(或其溶剂化物)；b)crotonlechleri树脂；c)泛醇。根据该实施方式，该组合不能包含作为抗皮炎的活性成分的其他成分。在一个具体实施方式中，本发明的组合由以下组成：a)至少一种式(i)的化合物(或其盐或溶剂化物)，优选为色甘酸(或其盐或溶剂化物)，优选为色甘酸二钠(或其溶剂化物)；b)crotonlechleri树脂；c)泛醇。本发明的组合可包含其他成分。在一个具体实施方式中，本发明的组合包括芦荟凝胶。芦荟凝胶是从独尾草(asphodelaceae)科的多汁植物库拉索芦荟(aloebarbadensis)获得的。所述植物的叶子由三层构成：外部革质保护层；在外部革质保护层下的纤维层；和凝胶果心，在该凝胶果心中储存其水储备并且该凝胶果心用于制备皮肤病学产品和美容产品。从植物中提取的芦荟凝胶具有约0.5wt％的固含量，其被称为凝胶1:1，可在市场上买到。它也可以以一些水已被提取出来的浓缩凝胶的形式买到。例如，芦荟凝胶浓缩物2:1的固含量约为1wt％；芦荟凝胶浓缩物10:1的固含量约为5wt％；芦荟凝胶浓缩物40:1的固含量约为20wt％。也可买到喷雾干燥的产品100:1和200:1，当将1份所述产品和99份水或1份所述产品和199份水分别混合在一起时，可以重新形成原始凝胶。在本发明的上下文中，优选使用芦荟凝胶浓缩物10:1，使得1份所述凝胶与9份水的组合来产生植物的原始凝胶。在另一具体实施方式中，本发明的组合包括玫瑰果油。玫瑰果是一种属于蔷薇科的植物，包括三种：麝香玫瑰(rosamoschata)、狗蔷薇(rosacanina)和锈红蔷薇(rosarubiginosa)。它是一种灌木，枝条薄而柔韧，有许多荆棘，并且高度可达2米以上。如今，它可以在地球的许多地方找到，特别是在气候温和的地区。油从其果实含有的种子中提取出来。在实施方式中，本发明涉及如前所定义的组合，所述组合还包含：a)芦荟凝胶和/或玫瑰果油。在一个具体实施方式中，本发明的组合基本上由以下组成：a)至少一种式(i)的化合物(或其盐或溶剂化物)，优选为色甘酸(或其盐或溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)；b)crotonlechleri树脂；c)泛醇；和d)芦荟凝胶和/或玫瑰果油。根据该实施方式，该组合不能包含作为抗皮炎的活性成分的其他成分。在一个具体实施方式中，本发明的组合由以下组成：a)至少一种式(i)的化合物(或其盐或溶剂化物)，优选为色甘酸(或其盐或溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)；b)crotonlechleri树脂；c)泛醇；和d)芦荟凝胶和/或玫瑰果油。在优选的实施方式中，式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)，与芦荟凝胶(优选为浓缩物10:1)的重量比为2.5:3.000或更高(更高应理解为表示式(i)的化合物的重量增加或芦荟凝胶的重量减少)，为4.5:3.000或更高，或4.9:3.000或更高。更具体地，该比例为2.5:3.000～10:3.000、4.5:3.000～10:3.000，或者4.9:3.000～10:3.000。更具体地，该比例为2.5:3.000～5.5:3.000、4.5:3.000～5.5:3.000，或者4.9:3.000～5.5:3.000。更具体地，该比例为2.5:3.000～5.1:3.000、4.5:3.000～5.1:3.000，或者4.9:3.000～5.1:3.000。在优选的实施方式中，式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)，与玫瑰果油的重量比为2.5:0.500或更高(更高应理解为表示式(i)的化合物的重量增加或玫瑰果油的重量减少)，为4.5:0.500或更高，或4.9:0.500或更高。更具体地，该比例为2.5:0.500～10:0.500、4.5:0.500～10:0.500，或者4.9:0.500～10:0.500。更具体地，该比例为2.5:0.500～5.5:0.500、4.5:0.500～5.5:0.500，或者4.9:0.500～5.5:0.500。更具体地，该比例为2.5:0.500～5.1:0.500、4.5:0.500～5.1:0.500，或者4.9:0.500～5.1:0.500。组合物本发明的另一目的是包含本发明的组合和药学上可接受的载体的药物组合物。药学上可接受的载体应理解为意指当以合适的方式特别是在人类和/或哺乳动物中施用或使用治疗时生理上耐受的载体，即，不显示出与毒性、不相容性、刺激性、过敏反应等有关的任何问题以及与本发明组合的成分的任何不相容性的载体。优选地，药物组合物是皮肤病学组合物，并且药学上可接受的载体是皮肤病学可接受的载体。皮肤病学组合物应理解为意指适合于治疗和/或预防皮肤病症的药物组合物，并且皮肤病学上可接受的载体应理解为意指适用于皮肤的并且在皮肤中不显示出与毒性、不相容性、刺激性、过敏反应等有关的任何问题的载体。在优选的实施方式中，本发明的组合物包括：4.7wt％～27wt％的本发明的组合；和95.3wt％～73wt％的药学上可接受的载体；其中，调整组分的百分比使得总量为100％。优选地，相对于组合物的总重量，本发明组合的重量为5wt％～20wt％，特别是7wt％～15wt％，特别是10wt％～11wt％，甚至更特别是10.5wt％～10.6wt％。在实施方式中，相对于组合物的总重量，式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)的重量为0.01wt％～30wt％，0.1wt％至30wt％，1wt％～30wt％。在另一实施方式中，其重量为0.01wt％～20wt％，0.1wt％～20wt％，1wt％～20wt％。在另一实施方式中，其重量为0.01wt％～10wt％，0.1wt％～10wt％，1wt％～10wt％。在优选的实施方式中，相对于组合物的总重量，式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)的重量为2.5wt％或更高、3wt％或更高、3.5wt％或更高、4％或更高，或4.5％或更高。在另一优选的实施方式中，相对于组合物的总重量，其重量为2.5wt％～10wt％、3wt％～10wt％、3.5wt％～10wt％、4wt％～10wt％或4.5wt％～10wt％。在另一更具体的实施方式中，其重量为2.5wt％～8wt％、3wt％～8wt％、3.5wt％～8wt％、4wt％～8wt％或4.5wt％～8wt％。在另一更具体的实施方式中，其重量为2.5wt％～7wt％、3wt％～7wt％、3.5wt％～7wt％、4wt％～7wt％或4.5wt％～7wt％。在另一更具体的实施方式中，其重量为2.5wt％～6wt％、3wt％～6wt％、3.5wt％～6wt％、4wt％～6wt％或4.5wt％～6wt％。在另一更具体的实施方式中，其重量为2.5wt％～5.5wt％、3wt％～5.5wt％、3.5wt％～5.5wt％、4wt％～5.5wt％或4.5wt％～5.5wt％。在另一更具体的实施方式中，其重量为2.5wt％～5.1wt％、3wt％～5.1wt％、3.5wt％～5.1wt％、4wt％～5.1wt％或4.5wt％～5.1wt％。在另一更具体的实施方式中，其重量为2.5wt％～5wt％、3wt％～5wt％、3.5wt％～5wt％、4wt％～5wt％或4.5wt％～5wt％。在一甚至更具体的实施方式中，其重量为4.5wt％～5.5wt％。在又一更具体的实施方式中，其重量为4.9wt％～5.1wt％。如前所述，crotonlechleri树脂的重量加上泛醇(优选d-泛醇)的重量是重量b。在实施方式中，相对于组合物的总重量，重量b为0.2wt％～12wt％，优选为1wt％～9wt％，更优选为1wt％～3wt％，甚至更优选为1.5wt％～2.5wt％，还更优选为2.0wt％～2.1wt％。对于这些重量中的每一种，以重量:重量表示，crotonlechleri树脂和泛醇(优选d-泛醇)的重量比为1:500～1:2，优选为1:200～1:10，特别是1:100～1:20，特别优选的方式是1:50～1:30，特别是1:50～1:40，更特别是1:45～1:44。在另一实施方式中，相对于组合物的总重量，芦荟凝胶(优选芦荟凝胶浓缩物10:1)的重量为2wt％～4wt％，优选为2.5wt％～3.5wt％，特别是2.9wt％～3.1wt％，或者其重量为3.0wt％。在另一实施方式中，相对于组合物的总重量，玫瑰果油的重量范围为0.01wt％～1wt％，优选为0.1wt％～1wt％，特别是0.3wt％和0.8wt％，特别是0.4wt％～0.6wt％，更特别是0.45wt％～5.5wt％，以尤其特别的方式为0.49wt％～0.51wt％，或者其重量为0.50wt％。优选地，将本发明组合的成分溶解、乳化、分散或悬浮在药学上可接受的载体中。所述载体选自水、非水性水混溶性载体(例如乙醇、异丙醇)以及非水性非水混溶性载体(例如石蜡油)。优选地，本发明的组合物包括水作为药学上可接受的载体。在其他实施方式中，本发明的组合物还包含至少一种额外的皮肤病学或化妆品活性成分。在一个具体实施方式中，相对于组合物的总重量，所有额外的皮肤病学和化妆品活性成分的重量为5wt％～40wt％。更特别地，本发明的组合物包括：4.7wt％～27wt％的本发明的组合；和5wt％～40wt％的额外的皮肤病学和化妆品活性成分(即，额外的活性皮肤病学和化妆品成分的总重量)；和33wt％～90.3wt％的药学上可接受的载体；其中，调整组分的百分比使得总量为100％。在更具体的实施方式中，本发明组合的重量如前所限定。在更具体的实施方式中，相对于组合物的总重量，额外的活性皮肤病学和化妆品成分的重量为10wt％～35wt％，特别是15wt％～30wt％，特别是20wt％～25wt％。在实施方式中，额外的皮肤病学活性成分是类固醇，更优选皮质类固醇。在更具体的实施方式中，皮质类固醇选自泼尼松龙(prednisolone)、氢化可的松丁酸酯、地塞米松戊酸酯、倍他米松二丙酸酯、丙酸氯倍他索和丁酸氯倍他松。在另一实施方式中，所述额外的皮肤病学活性成分是抗组胺剂。在更具体的实施方式中，抗组胺剂选自盐酸苯海拉明、美喹他嗪、盐酸异丙嗪和马来酸氯苯那敏。在另一实施方式中，所述额外的皮肤病学活性成分是抗过敏剂。在更具体的实施方式中，抗过敏剂选自曲尼司特、富马酸酮替芬、奥沙米特、盐酸氮卓斯汀。在另一实施方式中，所述额外的皮肤病学活性成分是抗菌剂，优选为用于治疗痤疮的抗菌剂。在更具体的实施方式中，抗菌剂是克林霉素磷酸酯或四环素。在实施方式中，所述化妆品成分至少选自：保湿剂、乳化剂、润肤剂、硅酮、螯合剂、防腐剂和ph调节剂。保湿剂是滋润和软化皮肤的物质。在本发明的上下文中，保湿剂可以选自甘油、丙二醇、二醇、聚乙二醇及其混合物。在实施方式中，相对于组合物的总重量，保湿剂含量为5wt～10wt％。由于界面张力的改变，乳化剂有利于形成非混溶性液体的均匀混合物。在本发明的上下文中，乳化剂可以选自聚山梨醇酯、脱水山梨糖醇酯、脂肪醇、乙氧基化脂肪醇、脂肪酸及其混合物，例如蜂蜡。在实施方式中，相对于组合物的总重量，乳化剂含量为5wt～10wt％。润肤剂有助于优化组合物的感官和皮肤病学特性。在本发明的上下文中，润肤剂可以选自烷烃；酯(例如甘油酯、丙二醇酯、烷基酯)；醚；二醇；及其混合物。在实施方式中，相对于组合物的总重量，润肤剂总含量为8wt～12wt％。在本发明的制剂中，也使用硅酮，并且虽然所述硅酮可以被视为一种润肤剂，但在本发明的上下文中，硅酮与润肤剂独立使用。在本发明的上下文中，硅酮可以选自聚(二烷基硅氧烷)、聚(二芳基硅氧烷)和聚(烷基芳基硅氧烷)，例如聚二甲基硅氧烷、六甲基环三硅氧烷、苯基二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、六甲基环三硅氧烷、聚二甲基硅氧烷或聚(甲基苯基硅氧烷)。相对于组合物的总重量，硅酮的总含量为1wt～3wt％。螯合剂络合并中和可能影响组合物的稳定性和/或外观的金属离子。螯合剂可以是单原子螯合配体和多齿螯合配体。在本发明的上下文中，螯合剂可选自乙二胺四乙酸(edta)、次氮基三乙酸(nta)、羟乙基乙二胺三乙酸(heedta)、二乙烯三胺五乙酸(dtpa)、二乙醇甘氨酸(deg)、乙醇二甘氨酸(edg)、柠檬酸、磷酸、酒石酸，或其盐，以及它们的混合物。相对于组合物的总重量，螯合剂的总含量为0.01wt～1wt％。防腐剂阻止或最小化由于存在不同类型的微生物引起的制剂组分的劣化。在本发明的上下文中，防腐剂可以选自苯氧基乙醇、托酚酮、氯苯甘醚、乙基己基甘油、异噻唑烷酮(isothiazolidone)、二唑烷基脲、咪唑烷基脲和对羟基苯甲酸酯以及它们的混合物。相对于组合物的总重量，防腐剂的总含量为0.5wt～1.5wt％。ph调节剂将组合物的ph设定和/或保持在所需值。在本发明的上下文中，ph调节剂可以选自柠檬酸、乙酸、磷酸、丙酸、乳酸、碳酸、铵/氨、氢氧化钠及其混合物。相对于组合物的总重量，ph调节剂的总含量为0.01wt～1wt％。本发明的组合物含有水和亲脂相，并且它们通常以乳液或分散体的形式提供，例如水包油(o/w)或油包水(w/o)型，多重乳液(w/o/w)或pit型乳液(如西班牙专利es2169908t3中所述)，或作为微乳液。它们也可以以悬浮液的形式存在。优选地，它们是乳液形式。甚至更优选地，它们是水包油(o/w)型乳液的形式。本发明的组合物以各种剂型提供，优选以皮肤病学剂型存在，甚至更优选以用于局部施用的皮肤病学形式提供，甚至更优选以用于局部施用于皮肤上的皮肤病学形式提供。例如，组合物以霜剂、药膏、软膏、香膏、乳液、润肤露(milk)、凝胶、泡沫、明胶等形式提供。当组合物制备成具有低粘度时，它们也可以通过喷雾施用，即在这些情况下，组合物可以以喷雾形式提供，例如作为喷雾剂或气溶胶。在优选的实施方式中，组合物是喷雾乳液。该组合物还可以并入海绵、胶带、贴剂、敷料或绷带中。在具体实施方式中，组合物以贴剂的形式提供，优选以透皮贴剂的形式提供。优选地，本发明的组合物是霜剂、乳液、润肤露或喷雾乳液的形式。甚至更优选地，组合物是霜剂、乳液或润肤露的形式。甚至更优选地，组合物是霜剂的形式。制备方法本发明的组合物可以按照化妆品/制药工业中用于制备乳液、润肤露、霜剂和喷雾乳液的常规方法制备。例如,乳液的制备描述于remington：thescienceandpracticeofpharmacy,20thedition,lippincottwilliams&wilkins,philadelphia,2000[isbn:0-683-306472]中。制备本发明组合物的方法可以例如如下所述。在装有搅拌设备的反应器中，称重亲水性组分，如水、甘油或泛醇，并在70℃～85℃，优选75℃～80℃的温度下熔化。在另一容器中，称重亲脂性组分和乳化剂，并在70℃～85℃，优选75℃～80℃的温度下加热。然后，在适当搅拌下由亲脂性物质和亲水性组分制备乳液。最后，将所得乳液冷却至35℃～45℃，优选40℃(+/-2℃)的温度。在进行乳液方法的同时，在不同容器中将水在35℃～45℃，优选40℃(+/-2℃)的温度下加热，然后缓慢加入式(i)的化合物，优选色甘酸或其盐，甚至更优选色甘酸二钠，直至其完全溶解，同时保持35℃～45℃，优选40℃(+/-2℃)的温度。随后在搅拌和温度保持在35℃～45℃，优选40℃(+/-2℃)下将式(i)的化合物的溶液加入至同时制备的乳液中。使混合物均质化，并保持35℃～45℃，优选40℃(+/-2℃)的温度。随后，将crotonlechleri树脂加入均质化的混合物中。在使用芦荟凝胶和/或玫瑰果油的情况下，将以下物质逐一加入冷却的混合物中，并且优选按以下顺序加入：i)crotonlechleri树脂；ii)芦荟凝胶；iii)玫瑰果油。在这两种情况下，还添加了可能对高温敏感的任何其他成分。随后，在所有情况下，均质化所得混合物以获得本发明的组合物。在该添加和均质化阶段期间，仍保持35℃～45℃，优选40℃(+/-2℃)的温度。最后，检查粘度和ph是否是所需的。如果不是，可以通过本发明领域内常用的技术来改变粘度。另一方面，必要时，组合物的ph也可以通过本发明领域内常用的技术来调节，例如通过加入柠檬酸、盐酸或氢氧化钠来调节。一旦检查了这些，并在必要时进行调整，组合物就可以进行包装。用途本发明的组合或包含根据本发明组合的组合物可用作用于治疗或预防皮炎的药物组合物，优选用作用于治疗或预防皮炎的皮肤病学组合物。进一步观察到，本发明的组合能够调节与皮炎相关的不同分子标志物。特别观察到，本发明的组合诱导神经保护性二十二烷酸(docosanoid)、神经保护素d1及其异构体的合成；它们减少了瘙痒标志物par2(蛋白酶激活受体2)和trpv1和trpv4(瞬时受体电位香草酸1和瞬时受体电位香草酸4)的产生；并且它们减少炎症标志物cox-2(环加氧酶-2)和tnf-α(肿瘤坏死因子α)的产生。具体地，当式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)与重量b的重量比优选为2.5:2.045或更高，更优选为4.5:2.045或更高时；或者，相对于组合物的总重量，当式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)的重量优选为2.5％或更高，优选为4.5％或更高时，可以观察到这些生物分子效应或者特别显著。因此，在优选的实施方式中，本发明涉及通过调节par2，更具体地通过降低par2的表达/水平来用于治疗或预防皮炎的本发明的组合。par2标志物和皮炎之间的相关性在现有技术中被广泛记载，例如记载于zhu等人，intimmunopharmacol,2015,28:507-512；zhu等人，intimmunopharmacol,2009,9:1332-1336；或carvalho等人，expdermatol,2010,19:117-122中。从这种意义上讲，在实施方式中，本发明的组合可用于治疗或预防与皮炎相关的瘙痒和/或炎症，并且在更具体的实施方式中，本发明的组合可通过调节，更具体地说，降低par2的表达/水平来用于治疗或预防与皮炎相关的瘙痒和/或炎症。类似地，在另一优选的实施方式中，本发明涉及通过调节trpv4，更具体地通过降低trpv4的表达/水平来用于治疗或预防皮炎的本发明的组合。trpv4标志物和皮炎之间的相关性在现有技术中被广泛记载，例如记载于white等人，physiolrev,2016,96:911-973；或poole等人，jbiolchem,2013,22,288:5790-5802。从这种意义上讲，在更具体的实施方式中，本发明的组合可通过调节，更具体地说，降低trpv4的表达/水平来用于治疗或预防与皮炎相关的瘙痒和/或炎症。在更具体的实施方式中，本发明的组合可通过调节，更具体地说，降低par2和trpv4的表达/水平来用于治疗或预防与皮炎相关的瘙痒和/或炎症。类似地，在另一优选的实施方式中，本发明涉及通过调节tnf-α，更具体地通过降低tnf-α的表达/水平来用于治疗或预防皮炎的本发明的组合。tnf-α标志物和皮炎之间的相关性在现有技术中被广泛记载，例如记载于dinarello,chest,2000,aug118(2):503-8；或者记载于danso等人，jinvestdermatol,2014,jul134(7):1941-50。从这种意义上讲，在更具体的实施方式中，本发明的组合可通过调节，更具体地说，降低tnf-α的表达/水平来用于治疗或预防与皮炎相关的炎症。在实施方式中，与皮炎相关的瘙痒或炎症分别是患有皮炎的受试者所患的瘙痒或炎症(治疗)，或者分别是随着皮炎的发作受试者将会遭受的瘙痒或炎症(预防)。此外，如前所述，已发现该组合的成分出乎意料地以协同的方式起作用。具体地，已经观察到式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)，与组合的其余成分协同作用，特别是与crotonlechleri树脂和泛醇协同作用。在这方面，由于协同效应，可以需要较低剂量的式(i)的化合物或crotonlechleri树脂和泛醇(与单一疗法中使用的量的总和相比)以获得相同的功效或者获得甚至比各自单一疗法的功效总和更好的功效，并且可以减少或甚至预防可能在单一疗法中观察到的可能的毒副作用。作为替代方案，如果式(i)的化合物的剂量以及crotonlechleri树脂和泛醇的剂量与它们在单一疗法中提供的剂量相同，可以预期上述组合的功效增加，该功效大于单一疗法的功效总和。因此，在实施方式中，本发明的组合或本发明的组合物是协同的组合或组合物。类似地，本发明涉及式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)，用于治疗皮炎，其包括以组合方式给药，优选以协同组合方式给药治疗有效量的式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)与治疗有效量的crotonlechleri树脂和泛醇。类似地，本发明涉及式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸(或其盐或其溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)，用于治疗皮炎，其包括以组合方式给药，优选以协同组合方式给药治疗有效量的式(i)的化合物(或其盐或其溶剂化物)与治疗有效量的crotonlechleri树脂和泛醇，以及额外的治疗有效量的芦荟凝胶和/或玫瑰果油。在优选的实施方式中，本发明的组合物以局部的方式施用，优选在皮肤上施用。局部施用可以在受影响的区域或者在未受影响的区域(预防)上进行。在本发明的上下文中，术语皮炎通常包括皮肤的任何炎症反应。在更具体的实施方式中，皮炎是指以下皮炎或与以下皮炎有关：特应性皮炎、接触性皮炎、脂溢性皮炎、疱疹性皮炎、瘀滞性皮炎、神经性皮炎、创伤性皮炎、口周皮炎、剥脱性皮炎、热性皮炎(冻伤性皮炎或灼伤性皮炎)、x-射线辐射性皮炎、湿疹、牛皮癣、血管炎引起的皮炎、贝氏(behcet’s)综合征、天疱疮、荨麻疹、色素性荨麻疹、坏疽性脓皮病、溃疡、烧伤、昆虫蛰伤/咬伤、疱疹感染、多发性硬化症(系统性硬皮病)、硬斑病(区域性或局部性硬皮病)，或真皮结节性纤维化。在甚至更具体的实施方式中，皮炎是指特应性皮炎、接触性皮炎、脂溢性皮炎、疱疹样皮炎、瘀滞性皮炎、神经性皮炎、创伤性皮炎、湿疹或牛皮癣。在优选的实施方式中，皮炎是指特应性皮炎或接触性皮炎。甚至更优选地，皮炎是特应性皮炎。在实施方式中，皮炎是慢性的。在另一实施方式中，皮炎是急性的。在本发明的上下文中，皮炎的治疗被理解为在人和动物(兽用)中都可考虑。在具体实施方式中，患有皮炎的受试者是动物，例如猫、狗或马。在优选的实施方式中，患有皮炎的受试者是人。在本发明的上下文中，用于治疗或预防皮炎，或用于制备旨在治疗或预防皮炎的药用产品的本发明组合或组合物的量理解为治疗有效量。治疗有效量应理解为意指能够在给药或将要给药本发明的组合或组合物的患者生理中(即患者的皮肤状况)检测到的改善或预防的量。本发明组合或包含本发明组合的组合物的给药量将根据多种因素而变化。例如，其剂量将根据待治疗的特定皮炎而变化，特别是其剂量将根据受影响区域的严重性或程度而变化。医疗保健专家熟知考虑所涉及的不同因素以确定适合于给定患者的特定剂量。在具体的实施方式中，将包含根据本发明组合的组合物置于如下容器，例如包装中，该容器通过每次泵取递送预定量的组合物。优选地，该容器通过每次泵取递送1.0ml～0.1ml，更具体地0.7ml～0.2ml，甚至更具体地0.45ml～0.55ml。优选地，所包含的组合物是霜剂的形式。类似地，本发明组合或包含根据本发明组合的组合物的给药方案将根据所提及的不同因素而变化。医疗保健专家熟知确定适合给定患者的给药方案。在具体实施方式中，给药本发明的组合或包含本发明组合的组合物持续皮炎消失或使其不能发觉所需的时间。在更具体的实施方式中，给药持续一个月或两个月。在另一更具体的实施方式中，给药持续一周、两周或三周。在另一更具体的实施方式中，给药持续1～6天，优选4～6天，更优选5天。在具体实施方式中，本发明的组合或包含根据本发明组合的组合物每天给药一次、两次或三次；每两天一次、两次或三次；或一周一次、一周两次或一周三次。优选地，每天给药两次。在甚至更具体的实施方式中，在任何上述时期内(优选一个月或两个月)每天给药两次。在另一甚至更具体的实施方式中，在1-6天(优选5天)内每天给药三次。在整个治疗期间，给药方案不必相同，应理解可能存在不同的给药频率，例如开始时较高频率的给药和随后较低频率的给药。根据本发明，本发明组合的如下成分可以如上所述在相同的药物组合物中提供，或者同时或不同时在单独的组合物中提供以用于给药：a)式(i)的化合物(或其盐或溶剂化物)，优选为色甘酸(或其盐或溶剂化物)，优选色甘酸二钠(或其溶剂化物)；b)crotonlechleri树脂；c)泛醇。并且，在适当的情况下，d)芦荟凝胶；和/或玫瑰果油。如果所提及的成分在不同时间给药，则它们应该在足够接近的时间内一起给药，例如它们应当在同一天或在两天的时间内给药，以确保治疗功效，并且特别是，协同效应得到保持。当成分以单独的组合物给药时，制备这些组合物并且它们与上述的类型相同。另一方面，本发明的组合或包含根据本发明组合的组合物可以以美容的方式用于治疗皮炎或减少由皮炎所致的影响，例如它们可以用作皮肤再生剂、保湿剂或抗氧化剂。在实施方式中，一旦炎症消退(患者不再患有炎症)就进行美容用途，但其效果持续(例如，伤口)。美容用途包括在皮肤上施用美容有效量的本发明的组合物或组合。在本发明的上下文中，应理解在人和动物中均可考虑这些美容用途。在具体实施方式中，受试者是动物，例如猫、狗或马。在优选的实施方式中，受试者是人。实施例实施例1：制备5％色甘酸二钠(5％dscg)组合物所示百分比对应于最终所得组合物中每种成分的重量百分比。在装有预先灭菌的搅拌设备的反应器中，加入水(q.s.f.)、edta二钠(0.2％)、丙二醇(5％)、甘油(3％)和d-泛醇(2％)，它们都是在75℃～80℃下混合并加热。在另一单独的经调控的容器中，加入硬脂醇聚醚-2(3.5％)、硬脂醇(3.5％)、硬脂醇聚醚-21(3％)、鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯(5.7％)、石蜡油(3％)、蜂蜡(0.5％)、二甲聚硅氧烷(0.8％)、苯氧乙醇(0.67％)，硬脂氧基二甲聚硅氧烷(0.5％)、椰油甘油酯(0.5％)、肉豆蔻酸异丙酯(0.3％)、硬脂酸(0.2％)和乙基己基甘油(0.075％)，它们都是在75℃～80℃下混合并加热。然后，在适当的搅拌下由亲脂性物质和亲水性组分制备乳液。最后，将所得乳液冷却至40℃(+/-2℃)。在进行乳液方法的同时，在不同但同样经过调控的容器中，将水(10％)在40℃(+/-2℃)的温度下加热，然后缓慢加入色甘酸二钠(5％)以防止形成团块，直到完全溶解。形成凝胶。随后在搅拌下将色甘酸二钠水溶液加入到同时制备的乳液中。将混合物均质化。在该添加和均质化阶段，温度保持在40℃(+/-2℃)。随后，按所示的顺序一个接一个地将crotonlechleri树脂(0.045％)、丙二醇(1.48％)、芦荟凝胶(10:1浓缩物)(3％)、玫瑰果油(0.5％)和咪唑烷基脲(0.25％)加入均质化的混合物中。随后，均质化所得混合物以获得本发明的组合物。在该添加和均质化阶段，温度也保持在40℃(+/-2℃)。最后，通过加入naoh(0.5％)调节ph。实施例2：治疗皮炎的体内研究在皮炎的小鼠模型中测试了以下制剂：老鼠组别所施用的制剂c无dc无d5％dscgd2％dscgd无dscgd2％dscg(无cl/p)其中，c＝对照(无皮炎的小鼠)；dc＝皮炎对照(未接受治疗的致敏小鼠)；d＝皮炎(接受治疗的致敏小鼠)。5％dscg制剂是根据实施例1制备的组合物。2％dscg制剂是按照实施例1的制备方法制备的组合物，但其中加入相对于组合物总重量仅占2wt％的色甘酸二钠的量。无dscg制剂是按照实施例1的制备方法制备的对比组合物，但其中省去了加入色甘酸二钠的步骤，使得组合物不包含色甘酸二钠。2％dscg(无cl/p)制剂是按照实施例1的制备方法制备的组合物，但其中省去了加入crotonlechleri树脂和泛醇的步骤，并且其中加入相对于组合物总重量仅占2wt％的色甘酸二钠。皮炎的动物模型按照以下致敏方案以在小鼠中诱导特应性皮炎。每2天将2,4-二硝基氟苯(dnfb)施用于balb/c株小鼠两个耳的外表面上。19天后，停止施用dnfb。在18天的敏化阶段观察到耳厚度从最初的0.20mm增加到约0.48mm(增加0.28mm或100％)。治疗一旦停止施用dnfb，就开始施用不同的制剂(霜剂)。使用两组小鼠作为对照：第一组“c”既未致敏也未用任何制剂治疗，第二组“cd”用作皮炎对照，其被致敏但未用制剂治疗。将所测试的制剂(5％dscg、2％dscg、无dscg、2％dscg(无cl/p))施用于相应组小鼠的耳朵上7天，并收集耳朵。所有组的小鼠由6只小鼠(12只耳朵)组成。结果正如预期的，在c组中未观察到耳厚度的显著变化(图1)。在dc组中，在停止施用dnfb后，耳厚度持续增加5天，达到0.68mm，在此之后厚度开始减小。在其他情况下，在停止施用dnfb后施用一种测试制剂，观察到两种不同的行为。在用2％dscg、无dscg和2％dscg(无cl/p)制剂治疗的组中，耳厚度停止增加并且3天内保持相对恒定，在接下来的3天中观察到耳厚度减小直到6天后耳厚度达到约0.30mm(减小了0.18mm或64％)。在用5％dscg制剂治疗的组中，观察到令人惊讶的协同效应，从施用制剂时耳厚度的减小，以及更快且更显著的减小，其厚度在6天后达到为0.27mm(减小了0.21mm或75％)。实施例3：治疗皮炎的体内研究ii皮炎的动物模型按照以下致敏方案以在小鼠中诱导特应性皮炎。将2,4-二硝基氟苯(dnfb)施用于balb/c株小鼠两个耳的外表面上。当耳厚度达到0.55mm时，停止施用dnfb。治疗一旦停止施用dnfb，就开始施用5％dscg和2％dscg的制剂(霜剂)。使用两组小鼠作为对照：第一组“c”既未致敏也未用任何制剂治疗，第二组“cd”用作皮炎对照，其被致敏但未用制剂治疗。将所测试的制剂(5％dscg、2％dscg)分别给药两组小鼠9天，并收集耳朵。所有组的小鼠由4只小鼠(8只耳朵)组成。结果正如预期的，在c组中未观察到耳厚度的明显变化(图2)。在用制剂治疗的组中，在用制剂治疗三天后，耳厚度快速减小，而在dc组中耳厚度保持在约0.57mm。治疗8天后，5％dscg组的耳厚度减小至0.25mm；在2％dscg组中，厚度减小至0.28mm；在dc组中，厚度减小至0.42mm。实施例4：治疗皮炎的体内研究iii按照类似于实施例2的方案，其中致敏阶段持续7天(第一周)并且在第二周期间施用组合物。再次观察到类似的结果，特别是观察到与5％dscg组合物对皮炎的协同活性有关的结果。对于不同的测试组合物观察到的结果以如下数值示出：组合物耳厚度的减小无dscg7mm2％dscg(无cl/p)4mm5％dscg20mm5％dscg制剂的理论加和活性为减小17mm(7mm可归因于crotonlechleri树脂和泛醇，10mm可归因于dscg[2.5×4mm])。然而，意外地观察到减小量更大，具体地为20mm，由此显示出当使用本发明的组合时发生的协同效应。实施例5：预防皮炎的体内研究按照实施例2的试验，但进行了一些修改。具体地，在施用2,4-二硝基氟苯(dnfb)的同时施用制剂。观察到与皮炎对照组相比，5％dscg和2％dscg制剂能够防止耳朵增厚。此外，再次观察到5％dscg制剂协同作用的效果。据观察，5％dscg制剂具有防止瘙痒和炎症的高能力。实施例6：par2、trpv4和tnf-α水平的研究将实施例4的试验后获得的耳朵组织在4℃下使用由蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(rochediagnostics，indianapolis，in)形成的ripa缓冲液(thermo-fisherscientific)进行碾磨均质化(玻璃在玻璃上)。将样品进行超声处理并以14000g离心10分钟。用bradford测定法(bio-rad，hercules，ca)测定蛋白质浓度。将上清液用于十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)，并在20℃下储存小球。用sds缓冲液稀释等量的煮沸蛋白质(每泳道20μg)，加载到预模制的bioradcriterion凝胶(4％～12％)中用于sds-page(biorad，hercules，ca)，并在125v下，在冰上进行电泳1.5小时。使用bioradcriteriontransblot系统在聚偏二氟乙烯(pvdf)膜中对蛋白质进行研究。按照制造商的说明在反式印迹涡旋系统(biorad)中进行印迹。通过考马斯蓝染色(pierce，rockford，il)评估凝胶的保留。用superblock封闭溶液(thermo-fisherscientific)在室温下封闭非特异性结合1小时。将膜在4℃下与ttbs中的par2的特异性一抗、trpv4的特异性一抗和tnf-α的特异性一抗孵育过夜。通过分别为55kda、98kda和17kda的hrp-缀合的二抗检测结合的一抗。按照制造商的说明用fujifilmlas-3000电子扫描仪观察蛋白质条带，并使用imagequanttl软件(gehealthcare)定量。将膜分离30分钟，再次用gapdh(38kda，单克隆小鼠igg)作为上样对照(emdmillipore)进行测试，并用抗小鼠igghrp(santacruz)检测。结果显示在图3(par2)、图4(trpv4)和图5(tnf-α)中。在源自用本发明组合治疗的耳朵的样品中观察到这三种标志物水平的明显降低，更特别是用5％dscg组合物，其通过par2水平降低三倍以上(从69％降至22％)，而dgsc仅增加2.5倍(从2％增加至5％)再次显示出协同效应。当前第1页12