非酒精性脂肪性肝病的治疗的制作方法

本发明涉及非酒精性脂肪肝病的治疗。更具体地，本发明涉及用磷酸二酯酶4抑制剂(在本说明书中有时缩写为pde4抑制剂)治疗非酒精性脂肪肝病。
背景技术：
：非酒精性脂肪肝病(本说明书中有时缩写为nafld)是一种日益普遍的疾病，与高热量摄入和葡萄糖代谢受损有关：60-75％的糖尿病患者有nafld，这些患者中大约10％的进展为非酒精性脂肪性肝炎(在本说明书中有时缩写为nash)。在被诊断患有nash的患者中，约20％将发展为肝硬化，并且这些患者中的40-60％将经过5-7年时发生肝功能衰竭。此外，大约10％将发展为肝细胞癌(hcc)，并且大约30％将最终死于其肝病的并发症。目前尚无批准的治疗方法。根据术语“非酒精性脂肪性肝病”(nafld)，总结了具有不同预后的病理性肝脏脂肪变性的不同形式和严重等级的谱系。该谱系一方面包括良性、非进行性形式的非酒精性脂肪肝(在本说明书中有时缩写为nafl)，另一方面包括非酒精性脂肪肝肝炎或脂肪性肝炎(nash)，其中与肝脏炎症有关，因此可以发展为肝纤维化和肝硬化。在诊断方面，nash通常首先被怀疑在患有肝脏检查升高的人中，该检查包括在常规血液检查组中。这些肝脏检查包括丙氨酸氨基转氨酶(alt)或天冬氨酸氨基转氨酶(ast)。当进一步评估显示没有明显的肝病原因(例如药物，病毒性肝炎或过量使用酒精)，并且当肝脏的x射线或其他成像研究显示存在脂肪时，怀疑患有nash。确诊nash和消除单纯性脂肪肝的诊断需要进行肝脏活组织检查。肝脏活组织检查利用针头插入皮肤以去除少量肝脏样本。当检查组织显示存在肝脏脂肪堆积以及肝脏炎症和肝细胞异常(包括气球样)时，被诊断为nash。如果组织显示脂肪沉积而没有其他病理学发现，则被诊断为单纯性脂肪肝或nafl。从组织检查中获得的重要信息是nash是否在肝脏中发展。出于诊断目的，病理学家将nafld分为nafl(主要是伴有或不伴有非特异性炎症的大囊泡脂肪变性)和nash。nash的组织学特征包括大囊泡脂肪变性，肝细胞气球样变性，散在(主要是小叶)炎症，凋亡小体和mallory-denk体。值得注意的是，虽然经常存在一定程度的纤维化，但诊断并不是必需的。与nafl相反，nash具有特定的肝损伤模式，即使存在其他肝脏疾病也可以被识别。在疾病的早期阶段，组织学变化具有明显的分布，腺泡区3中的最严重变化，其基于解剖学定位具有最差的氧合作用。由于固有的疾病复杂性和广泛的发现，设计了评分系统，以帮助病理学家评估nafld的严重程度。已经开发了一种对nafld特征进行评分的单独系统，称为nafld活动评分(在本说明书中有时缩写为nas)，作为测量治疗试验期间nafld变化的工具。该分数被定义为脂肪变性(0-3)，小叶炎症(0-3)和气球样(0-2)的得分的未加权总和，因此范围为0-8。不包括纤维化，因为它被认为是更不可逆的参数。nafld活动评分≥4被认为具有预测脂肪肝的最佳灵敏度和特异性，是纳入nash介入试验的推荐值。在使用nas的诊断中，nafld由nas最多为3来诊断，并且nash由nas至少为5来诊断。nas评分大于3且小于5(通常为4)通常被诊断为临界nash。nafld和nash正在工业化国家中成为常见的，临床上重要类型的慢性肝病类型。nafld和/或nash的管理在很大程度上是保守的，包括饮食和运动，减肥药物以及降脂药和几种抗氧化剂(如维生素，谷胱甘肽)的治疗。目前并不存在对这些潜在的严重障碍的已确立的治疗。因此，仍然很需要用于治疗nafld，特别是用于治疗nash的新型有效药物。发明概述在第一方面，本发明提供了在需要这种治疗的哺乳动物中治疗非酒精性脂肪肝病(nafld)的方法，包括给患有非酒精性脂肪肝病(nafld)的哺乳动物给予治疗有效量的磷酸二酯酶4抑制剂。在第二方面，本发明提供了一种治疗需要这种治疗的哺乳动物的非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，包括给予患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)的哺乳动物治疗有效量的磷酸二酯酶4抑制剂。在第三方面，本发明提供了伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪肝病(nafld)的方法，包括给患有2型糖尿病和非酒精性脂肪肝疾病的哺乳动物给予治疗有效量的磷酸二酯酶4抑制剂。在第四方面，本发明提供了一种伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，包括给予患有2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝炎(nash)的哺乳动物治疗有效量的磷酸二酯酶4抑制剂。磷酸二酯酶4抑制剂选自5-((2r，4ar，10br)-9-乙氧基-2-羟基-8-甲氧基-1,2,3,4,4a，10b-六氢-菲啶-6-基)1-甲基-1h-吡啶-2-酮(下文称为“化合物a”)及其药学上可接受的盐。在下面的附图和描述中阐述了本发明的一个或多个方面的细节及其实施方式。根据说明书、附图和权利要求，其他特征和优点将变得显而易见。附图的简单说明图1：化合物a对nash的小鼠模型(纯合ldlr-ko小鼠)中肝纤维化区域的预防作用。图2：化合物a对nash的小鼠模型(纯合ldlr-ko小鼠)中肝脏tg积累的预防作用。图3：化合物a对nash的小鼠模型(纯合子ldlr-ko小鼠)中血浆alt水平的影响。图4：化合物a对nash的小鼠模型(纯合ldlr-ko小鼠)中身体组成和食物摄入的影响。图5：化合物a对nash的小鼠模型(纯合ldlr-ko小鼠)中肝纤维化区域的治疗作用。图6：化合物a对nash的小鼠模型(纯合ldlr-ko小鼠)中肝脏tg积累的治疗作用。图7：用化合物a治疗28天对雄性dio小鼠中体重和总食物摄入的影响。图8：用化合物a治疗28天对雄性dio小鼠中脂肪量和瘦体重的影响。图9：口服治疗28天后化合物a对雌性db/db小鼠中hba1c水平的影响。图10：治疗29天后化合物a对ob/ob小鼠中胰岛素敏感性的影响。图11：在每日一次给予化合物a的56天之前和之后，高热量或标准饮食的雄性c57bl/6j小鼠的肝脏脂质沉积。图12：化合物a在人肝星状细胞中的抗纤维化活性。图13：化合物a对肝脏基因表达-timp-1的预防作用。图14：化合物a对肝脏基因表达-tnfα的预防作用。图15：化合物a在人thp-1细胞中的抗纤维化活性。图16：化合物a对lps攻击spraguedawley大鼠的血浆样品中tnfα浓度的影响。定义在本发明中，短语“治疗有效量”是指引起由研究人员、兽医、医生或其他临床医生所寻求的组织、系统、动物、个体或人类的生物或药物反应的活性化合物或药剂的量，包括以下一项或多项：改善疾病或抑制疾病及其进展；例如，改善/抑制正显示着疾病、病症或障碍的病理学或症状学的个体中的疾病、病症或障碍(即，阻止病理学和/或症状学的进一步发展或甚至逆转病理学和/或症状学)，例如，在nafld和/或nash的情况下，例如通过降低(a)体重，(b)体脂，(c)肝脏脂肪含量，(d)血清丙氨酸转氨酶(alt)或血清天冬氨酸转氨酶(ast)的水平，(e)肝脏纤维化中的一种或多种以及通过(f)改善胰岛素抵抗以及2型糖尿病。如本文所用，“哺乳动物”是指人，小鼠，大鼠，兔，狗，猫，牛，马，猪和猴，优选人。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指与碱形成的盐和与酸形成的盐。具体实施方式本发明提供了一种治疗非酒精性脂肪肝病(nafdl)的方法，该方法包括给予患有非酒精性脂肪肝病(nafdl)的患者治疗有效量的磷酸二酯酶4抑制剂。本发明还提供了一种治疗非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，包括给予患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)的患者治疗有效量的磷酸二酯酶4抑制剂。此外，本发明提供了伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪肝病(nafld)的方法，包括给予患有2型糖尿病和非酒精性脂肪肝病(nafld)的哺乳动物治疗有效量的磷酸二酯酶4抑制剂。同样，本发明提供了一种伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，包括给予患有2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝炎(nash)的哺乳动物治疗有效量的磷酸二酯酶4抑制剂。磷酸二酯酶4抑制剂选自5-((2r，4ar，10br)-9-乙氧基-2-羟基-8-甲氧基-1,2,3,4,4a，10b-六氢-菲啶-6-基)1-甲基-1h-吡啶-2-酮及其药学上可接受的盐。在整个说明书和权利要求中很多场合下，化学名称为5-((2r，4ar，10br)-9-乙氧基-2-羟基-8-甲氧基-1,2,3,4,4a，10b-六氢-菲啶-6-基)-1-甲基-1h-吡啶-2-酮为了易于阅读由表述“化合物a”代替。化合物a公开在美国专利8,324,391中，其全部内容在此引入作为参考。化合物a的药学上可接受的盐的实例公开在美国专利8,754,218中，该专利也通过引用整体并入本文。可提及的化合物a的药学上可接受的盐的实例是化合物a的盐酸盐，富马酸盐，l-酒石酸盐，乙二酸盐，乙酸盐，氢溴酸盐和甲苯磺酸盐。化合物a优选以其游离形式使用，而不是以其药学上可接受的盐的形式。化合物a可以合成，例如，如美国专利8,324,391中所公开的。化合物a是非常有效和选择性的pde4抑制剂。此外，化合物a具有非常有利的药代动力学特征。在几个体外和体内(动物)实验中，已发现化合物a对与非酒精性脂肪肝病(nafld)和/或非酒精性脂肪性肝炎(nash)的治疗相关的参数显示出强烈的改善作用。例如，体重减轻、体脂肪量减少、血清丙氨酸转氨酶(alt)降低、肝脏脂肪含量降低，肝脏纤维化减少和胰岛素抵抗改善。化合物a与意用于治疗nafld/nash的其他开发候选物的不同之处在于它通过抗炎、抗纤维化和抗脂肪变性作用模式发挥作用。据信，与其他(第二代？)pde4抑制剂相比，化合物a具有优异的安全性/耐受性。此外，据信在体外和动物实验中观察到的所有这些效果将转化为人的临床环境中相应的效果。事实上，化合物a确实在1期临床研究中显示出非常有利的安全性和药代动力学特征[单次上升剂量(剂量0.05至0.85mg)和多次上升剂量(剂量0.05至0.8mg，持续7天；剂量0.35和0.8mg持续最多14天)]；在这些临床试验中，未观察到pde4抑制剂特异性不良事件，例如比如腹泻和恶心。在第一方面，本发明涉及治疗非酒精性脂肪肝病(nafld)的方法，包括给予有需要的哺乳动物(患者)治疗有效量的磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。在第二方面，本发明涉及治疗非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，包括给予有需要的哺乳动物(患者)治疗有效量的磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。在第三方面，本发明涉及伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪肝病(nafld)的方法，包括给予患有2型糖尿病和非酒精性脂肪肝病的哺乳动物(患者)治疗有效量的磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。在第四方面，本发明涉及伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，包括给予患有2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝炎(nash)的哺乳动物(患者)治疗有效量的磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。在本发明的一个优选实施方式中，磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂是化合物a。本发明提供一种治疗非酒精性脂肪肝病(nafld)或非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，包括给予需要治疗的哺乳动物(患者)化合物a或其药学上可接受的盐；化合物a或其药学上可接受的盐可以通过各种给予途径给予。给予可以是例如肺部、口服、肠胃外或透皮。优选的给予途径是口服。优选的剂型是口服剂型。合适的口服剂型包括但不限于片剂，胶囊，粉末，丸剂，溶液，悬浮液，乳液，糊剂和颗粒剂。最优选的口服剂型是片剂。剂量信息化合物a或其药学上可接受的盐可以每日一次，每日两次或一天三次给予。化合物a可以以包含0.1mg至6mg(优选0.8至3.25mg的任何量)的任何量的化合物a的口服剂型给予，例如但不限于0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3,3.25,3.5,3.75,4,4.25,4.5,4.75,5,5.25,5.5,5.75或6mg,其中优选0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3和3.25mg。如上所述，包含0.1至6mg(优选0.8至3.25mg的任何量)的化合物a的口服剂型可以每日一次，每日两次或一天三次给予，其中优选给予每日两次和三次，特别优选每日两次给予。相应量的化合物a的药学上可接受的盐可以由普通技术人员根据相应盐的选择容易地计算。在本发明第一方面的一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量每日一次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1mg和6mg的日剂量给予。在本发明第一方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量每日两次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量0.1mg和6mg的剂量每日两次给予。在本发明第一方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量一天三次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量0.1mg至6mg的剂量一天三次给予。在本发明第一方面的另一个实施方式中，化合物a以0.8mg至3.25mg的剂量每日一次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.8mg至3.25mg的剂量每日一次给予。在本发明第一方面的另一个实施方式中，化合物a以0.8mg至3.25mg的剂量每日两次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量0.8mg至3.25mg的剂量每日两次给予。在本发明第一方面的另一个实施方式中，化合物a以0.8mg至3.25mg的剂量一天三次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量0.8mg至3.25mg的剂量一天三次给予。在本发明第一方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至2mg的剂量每日一次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1mg和2mg的剂量每日一次给予。在本发明第二方面的一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量每日一次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1mg和6mg的剂量每日一次给予。在本发明第二方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量每日两次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量0.1mg和6mg的剂量每日两次给予。在本发明第二方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量一天三次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量0.1mg至6mg的剂量一天三次给予。在本发明第二方面的另一个实施方式中，化合物a每日一次以口服剂型给予，所述口服剂型包含化合物a，其量为0.8mg至3.25mg，或者包含化合物a的药学上可接受的盐，其量相应于化合物a的量0.8mg至3.25mg。在本发明第二方面的另一个实施方式中，化合物a以0.8mg至3.25mg的剂量每日两次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量0.8mg至3.25mg的剂量每日两次给予。在本发明第二方面的另一个实施方式中，化合物a以0.8mg和3.25mg的剂量一天三次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量0.8mg至3.25mg的剂量一天三次给予。在本发明第二方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至2mg的剂量每日一次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1mg和2mg的剂量每日一次给予。在本发明第三方面的一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量每日一次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1mg和6mg的剂量每日一次给予。在本发明第三方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量每日两次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量0.1mg和6mg的剂量给予。在本发明第三方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量一天三次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量0.1mg至6mg的剂量一天三次给予。在本发明第三方面的另一个实施方式中，化合物a以0.8mg至3.25mg的剂量每日一次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.8mg至3.25mg的剂量每日一次给予。在本发明第三方面的另一个实施方式中，化合物a以0.8mg至3.25mg的剂量每日两次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量0.8mg至3.25mg的剂量每日两次给予。在本发明第三方面的另一个实施方式中，化合物a以0.8mg至3.25mg的剂量一天三次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量0.8mg至3.25mg的剂量一天三次给予。在本发明第三方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至2mg的剂量每日一次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1mg和2mg的剂量每日一次给予。在本发明第四方面的一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量每日一次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1mg和6mg的剂量每日一次给予。在本发明第四方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量每日两次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量0.1mg和6mg的剂量每日两次给予。在本发明第四方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至6mg的剂量一天三次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量0.1mg至6mg的剂量一天三次给予。在本发明第四方面的另一个实施方式中，化合物a以0.8mg至3.25mg的剂量每日一次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.8mg至3.25mg的剂量每日一次给予。在本发明第四方面的另一个实施方式中，化合物a以0.8mg至3.25mg的剂量每日两次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量0.8mg至3.25mg的剂量每日两次给予。在本发明第四方面的另一个实施方式中，化合物a以0.8mg至3.25mg的剂量一天三次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量0.8mg至3.25mg的剂量一天三次给予。在本发明第四方面的另一个实施方式中，化合物a以0.1mg至2mg的剂量每日一次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1mg和2mg的剂量每日一次给予。在第五方面，本发明涉及非酒精性脂肪性肝炎(nash)的治疗，包括给予有需要的患者治疗有效量的化合物a或其药学上可接受的盐，所述患者尽管有如下的一种或多种被控制，但不充分：-降低超重，-加入均衡饮食，-足够的身体活动，-避免酒精和-用抗氧化剂(例如维生素e)。在本发明第一，第二，第三，第四或第五方面的优选实施方式中，磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂是化合物a。在本发明第一，第二，第三，第四或第五方面的另一个优选实施方式中，化合物a或化合物a的药学上可接受的盐以口服剂型给予。药物制剂和剂型当用作药物时，化合物a或其药学上可接受的盐(在本说明书中有时统称为“本发明化合物”)可以以药物组合物的形式给予。这些药物组合物可以以药学领域熟知的方式制备，并且可以通过各种途径给予。给予可以是肺部(例如，通过吸入或吹入粉末或气溶胶，包括通过雾化器)，气管内，鼻内，表皮和透皮，口服或肠胃外给予。肠胃外给予包括静脉内，皮下，腹膜内或肌内注射，或输注。肠胃外给予可以是单次推注剂量的形式，或者例如可以通过连续灌注泵。优选的给予途径是口服。用于局部给予的药物组合物和制剂可包括：透皮贴剂；传统药物载体；水性，粉末或油性基质；增稠剂；和/或类似物，其可能是必要的或期望的。本发明还包括含有作为活性成分的本发明化合物与一种或多种药学上可接受的载体(carrier)组合的药物组合物。可以使用本领域已知的药学上可接受的载体。在制备本发明的药物组合物时，活性成分通常与赋形剂混合，用赋形剂稀释或以例如胶囊，小药囊，纸或其它容器的形式包封在这种载体中。当赋形剂用作稀释剂时，它可以是固体，半固体或液体材料，其充当活性成分的载体(vehicle)，媒介物(carrier)或介质。因此，药物组合物可以是片剂，丸剂，粉末，锭剂，小袋，扁囊剂，酏剂，悬浮液，乳液，溶液，糖浆，气溶胶(作为固体或液体介质)的形式，软的和硬的明胶胶囊，栓剂，无菌注射溶液和无菌包装粉末。药物组合物可以配制成单位剂型，每个剂量含有一定量的如上所述的活性成分。术语“单位剂型”是指适合作为人受试者和其他哺乳动物的单位剂量的物理上离散的单位，每个单位含有与合适的药物赋形剂一起的、计算产生所需的治疗效果的预定量的活性成分。本发明化合物通常以治疗有效量给予。然而，应该理解，实际给予的化合物的量通常由医生根据相关情况确定，包括待治疗的病症，所选择的给予途径，给予的实际化合物，年龄，体重，个体患者的反应，患者症状的严重程度等。临床前研究1)化合物a在nash小鼠模型中的预防作用在nash的啮齿动物模型中检查化合物a对诸如a)肝纤维化形成，b)肝甘油三酯形成和c)血浆alt降低等参数的预防作用。纯合的低密度脂蛋白受体敲除(ldlr-ko)小鼠用食物或改良的胆碱缺乏的l-氨基酸定义的(mcdaa)饮食(a08111307，researchdiets，usa)喂养。在食物或mcdaa饮食下1周后，给小鼠口服给予化合物a(1,3和10mg/5ml/kg，qd，n＝10；在0.5w/v％甲基纤维素悬浮液中的悬浮液)7周。用化合物a(1,3和10mg/5ml/kg，qd，n＝10)治疗导致肝纤维化区域的剂量依赖性减少(图1)。肝脏甘油三酯(tg)含量(图2)和血浆alt水平(图3)也显著降低。体重略有下降，但未观察到食物摄入量的变化。肝脏重量和附睾白色脂肪组织(代表体脂肪量的替代物)呈剂量依赖性降低(图4)。另外，评价了化合物a对肝脏基因表达的预防作用。从肝脏中提取总rna后，使用高容量cdna逆转录试剂盒(high-capacitycdnareversetranscriptionkit)(abi4368813)扩增cdna，并使用taqmanpcr测量靶基因mrna。通过gapdh标准化靶基因表达水平。用化合物a治疗导致肝纤维化相关的组织抑制剂金属蛋白酶-1(timp-1)基因表达(图13)和肝炎性tnfα基因表达的剂量依赖性减少(图14)。这些数据一起表明化合物a通过其在肝脏中的抗炎和抗纤维化作用来预防nash进展。2)化合物a在nash小鼠模型中的治疗效果为了评价化合物a的治疗潜力，在肝纤维化形成后另外检查化合物a的作用。用食物或mcdaa饮食(a08111307，researchdiets，usa)喂养纯合ldlr-ko小鼠。在食物或mcdaa饮食下6周后，给小鼠口服给予化合物a(4和8mg/5ml/kg，qd，n＝12；在0.5w/v％甲基纤维素溶液中的悬浮液)10周。在开始化合物a治疗的第6周时，肝纤维化形成和肝甘油三酯积累，(图5和6)。用化合物a治疗导致肝纤维化区域减少(图5)；肝脏tg含量也从初始值显著降低(图6)。这些数据表明化合物a对现有纤维化和脂肪变性的治疗潜力。3)在饮食诱导的肥胖(dio)小鼠中化合物a-4周治疗对体重、脂肪和瘦体重的影响型号说明雄性c57bl/6j小鼠获自cleajapan，inc。给小鼠喂食5周龄至54周龄的高脂饮食d12451(researchdiets，inc)和随意饮水。实验方案将所有小鼠单独圈养在动物笼中，并在适应期2周后用于研究。动物组(n＝7)用载体(vehicle)(0.5w/v％甲基纤维素，p.o.)或化合物a(1mg/kg或3mg/kg，p.o.在0.5w/v％甲基纤维素溶液中的悬浮液)在晚上每日一次处理，从50周龄开始，持续4周。每周测量体重2或3次。关于身体组成，测量脂肪量(fastmass)和瘦体重。测量通过echo-mri-900(alokajapan)测量身体组成(脂肪量和瘦体重)。统计分析所有数据表示为平均值±s.d。为了评价化合物a的作用，当组间差异分别为均质或非均质时，用单尾williams检验或shirley-williams检验分析载体(p.o.)和化合物a处理组之间的统计学意义。在单尾williams检验或shirley-williams检验中，p值小于0.025被认为具有统计学意义。使用下式计算从预处理(第0天)的体重变化：[(bw-第0天的bw)/第0天的bw]×100。结果化合物a(1和3mg/kg)在dio小鼠中进行四周治疗，剂量依赖性地并显著地降低体重(1mg/kg；-4.9±3.5％，3mg/kg；-17.2±4.0％)对载体(p.o.)处理组(+3.8％±2.4％)。在4周的研究期间，化合物a显示出持久的体重降低效果(图7)。当用载体(p.o.)-处理的体重变化校正时，化合物a(1mg/kg)显示体重减少-8.7±3.5％。用化合物a(1和3mg/kg)的治疗剂量依赖性并且显著地降低脂肪量(图8a)而不影响瘦体重(图8b)，表明化合物a的体重降低效果源自脂肪量的特定减少。4.化合物a-在db/db小鼠中4周治疗对hba1c的影响型号说明雌性db/db小鼠在5-6周龄时从taconic(lilleskensved，denmark)购买并保持在标准条件下(5只动物/笼；12小时光暗循环；室温为22±2℃；相对湿度为60±15％)。所有小鼠都可以自由获取水和标准食物(provimikliba，kaiseraugst，瑞士)。到达后四天，根据体重和糖化血红蛋白1c(hba1c)的水平随机化动物。在7周龄时，通过用载体(4％甲基纤维素)或化合物a(在4％甲基纤维素水溶液中组成)口服管饲法，每日用1,3和10mg/kgs.i.d.的剂量(与游离碱有关的剂量)处理动物。所需剂量以10ml/kg体重的体积给予。每个剂量组由10只动物组成。在治疗期结束时，分离血浆样品以测定hba1c水平。所有实验程序均根据德国动物保护法进行。hba1c使用血红蛋白a1c测试(siemens，badnauheim，germany)从尾尖血液(治疗前测定hba1c)以及从眼眶后静脉丛收集的血液(治疗4周后测定hba1c)分析hba1c。统计分析：值表示为平均值±sem。使用单方anova然后使用dunnet校正(graphpadprism)进行事后分析来确定统计学差异。显著的定义：n.s.＝不显著(p>0.05)*,**,***＝p<0.05,<0.01,<0.001结果：在所有测试剂量下，用化合物a治疗剂量依赖性地显著且强烈地降低hba1c水平。在剂量为1,3和10mg/kg化合物a时，hba1c水平从9.06％(对照)降至7.27(p<0.05)，7.06(p<0.01)和6.16％(p<0.001)(图9)。用化合物a口服治疗28天后雌性db/db小鼠中的hba1c水平(n＝10；与游离碱相关的剂量)。5.化合物a处理29天后对ob/ob小鼠的胰岛素敏感性的影响型号说明雄性5周龄ob/ob小鼠(b6.cg-lepob/j，基因型：lepob/lebob)和年龄匹配的雄性瘦小鼠(b6.cg-lepob/j，基因型：lepob/+或leb+/+)购自charlesriverlaboratories，japaninc.给所有小鼠喂食正常食物(ce-2，cleajapan)并允许自由获取自来水。将动物饲养在控制温度(23±1℃)，湿度(55±10％)和光照(从07:00到19:00)的房间中。所有实验均由takedapharmaceuticalcompanyltd(日本)的shonan研究中心的机构动物护理和使用委员会批准。实验方案/测量将所有小鼠单独圈养在动物笼中，并在适应期2周后在7周龄用于研究。从尾静脉收集血样。肝素和2％-edta用于抑制血液凝固。通过离心获得血浆。使用自动分析仪7180(日立，日本)测量血浆葡萄糖水平。每日一次口服给予载体(0.5w/v％甲基纤维素，10ml/kg)和化合物a(3和10mg/kg悬浮在0.5％甲基纤维素溶液中)。给予28天后，进行胰岛素耐量试验(itt)。将小鼠禁食6小时，然后腹膜内给予胰岛素(novolinr，novonordisk)，剂量为0.5单位/5ml/kg。在胰岛素给予之前和之后15,30,60和120分钟从尾静脉收集血样。使用上述方法测量血浆葡萄糖(pg)水平和itt。为了评估胰岛素敏感性，使用胰岛素给予后60分钟的血浆葡萄糖水平，血浆葡萄糖水平的auc0-120分钟和胰岛素给予后60分钟的血浆葡萄糖水平的变化(从零时间值)。血浆葡萄糖水平的auc0-120分钟使用下式计算。[{(0分钟pg)+(15分钟pg)}x15+{(15分钟pg)+(30分钟pg)}x15+{(30分钟pg)+(60分钟pg)}x30+{(60分钟pg)+(20分钟pg)}x60]/2。统计分析数据表示为平均值和标准偏差(对于ob/ob小鼠n＝8，对于瘦小鼠n＝5)。通过单尾williams检验或shirley-williams检验评估化合物a的剂量反应趋势。在单尾williams检验或shirleywilliams检验中，小于0.025的p值被认为是统计学上显著的。为了评估吡格列酮的作用，用student'st-检验或aspin-welsh检验分析载体和吡格列酮治疗组之间的统计学差异。在student'st-检验和aspin-welsh检验中，p值小于0.05被认为具有统计学意义。结果为了评估胰岛素敏感性，在治疗29天后进行itt。与瘦小鼠相比，载体处理的ob/ob小鼠中胰岛素(0.5单位/kg，腹膜内)刺激的血浆葡萄糖(pg)减少受损(图10)，表明ob/ob小鼠存在胰岛素抗性。与载体组相比，用10mg/kg/天的化合物a治疗在60分钟时显著增强了胰岛素刺激的pg减少(图10a)。此外，化合物a(3和10mg/kg/天)剂量依赖性地降低pg水平的auc，在10mg/kg/天具有统计学意义(图10b)。此外，与载体组相比，化合物a(3和10mg/kg/天)处理组与零时间值相比在60分钟时血浆葡萄糖水平的下降显著更大(图10c)。这些结果表明化合物a改善了ob/ob小鼠的胰岛素敏感性。6.化合物a-对饮食诱导的肥胖(dio)小鼠的肝脏脂质沉积/肝脏重量的影响-8周治疗型号说明通过喂食高热量饮食(60％kcal％脂肪；no.2127；provimi-kliba，瑞士)，在雄性c57bl/6j小鼠(德国charlesriver；6周龄，体重19-20g，开始研究)中诱导肥胖为期7周。将动物单独饲养在ii型长的makrolon笼中，可自由获取食物和自来水。当与饮食开始时的体重相比，体重增加超过50％时，根据体重(第-4天)将动物随机分组，然后用每日剂量的化合物a(0.3,1,3和10mg/kg/天，p.o；溶于4％(w/v)甲基纤维素水溶液中，得到所需剂量体积为10ml/kg体重；每组n＝10)治疗8周。治疗8周后，处死动物。取出肝脏，称重并在4％中性缓冲福尔马林中固定2天，包埋在石蜡中并用苏木精-伊红染色用于组织学评估。不对载玻片进行组织学读数，并通过光学显微镜评估肝脏脂质沉积。通过以下分级标准半定量评估肝脏脂质沉积的程度：1级(最小)：肝细胞内的小圆形细胞质液泡2级(轻度)：肝细胞内的小到中等圆形细胞质液泡3级(中度)：此外：圆形细胞质液泡，部分强迫细胞核到达细胞周围4级(标记)：此外：全叶受影响对于局病灶变化或多病灶变化，分别减去0.5或0.25。通过将所有等级/组的总和除以动物/组的数量来计算平均严重指数。结果肝脏重量喂食高热量饮食会略微增加过夜禁食的雄性c57bl/6j小鼠的肝脏重量。在标准和高热量饮食的动物中，肝脏称重分别为0.96g和1.04g(p>0.05)。化合物a剂量依赖性地减轻肝脏重量的增加，并且在3和10mg/kg时消除，分别导致0.96g，0.95g的水平。总之，与标准饮食相比，喂食高热量饮食导致肝脏重量略微增加8％。用化合物a以3和10mg/kg治疗完全消除了肝脏重量的增加。表：对肝脏重量的影响(第56天)肝脏重量(g)sem载体标准饮食0.960.04载体高热量饮食1.040.03化合物a(0.3mg/kgp.o.)1.080.03化合物a(1.0mg/kgp.o.)1.010.03化合物a(3.0mg/kgp.o.)0.960.01化合物a(10mg/kgp.o.)0.950.02肝脏脂质沉积在第56天，标准饮食(sd)的对照动物显示轻度肝脏脂质沉积(严重等级为2.2)，高热量饮食(hd)的对照动物显示最小至轻度肝脏脂质沉积(严重等级为1.5)。用化合物a治疗剂量依赖性地改善肝脏形态，导致严重等级分别为1.4,0.6,0.3和0.2(分别为0.3,1,3和10mg/kg剂量)。总之，用3和10mg/kg剂量的化合物a治疗几乎消除了肝脏脂质沉积(图11)。表：对肝脏脂质沉积的影响7.化合物a在人肝星状细胞中的抗纤维化活性通过tgf-β诱导的α平滑肌肌动蛋白(αsma)的基因表达评估对人星状细胞(hsc)活化的影响。将原代hsc(sciencell)悬浮于无血清stecm培养基(sciencell)中，并以2.5×103个细胞/100μl/孔接种在聚-d-赖氨酸涂敷的96孔板上。接种后6小时，用化合物a(0,0.0001,0.001,0.01,0.1和1μm)，tgf-β(0.2ng/ml)和毛喉素(1μm)处理hsc24小时。孵育24小时后，使用rneasy96试剂盒(qiagen74182)从细胞裂解物中提取总rna。使用高容量cdna逆转录试剂盒(abi4368813)扩增cdna，并使用taqmanpcr测量靶基因mrna。通过gapdh标准化靶基因表达水平。该实验重复5次。结果在毛喉素存在下，化合物a剂量依赖性地抑制hsc中tgf-β诱导的αsma基因表达。结果通过图12中的平均值±sd显示。8.化合物a的体外和体内的全身抗炎作用a)化合物a在thp-1细胞中的抗炎作用(体外)化合物a的抗炎作用通过在thp-1细胞(人单核细胞系)中lps诱导的tnfα的基因表达来评估。将thp-1细胞(atcc)悬浮于含有10％fbs和50ng/mlpma(2.5×105细胞/ml)的rpmi培养基中，并接种在96孔板上。接种后48小时，将培养基更换为无血清rpmi培养基。更换3小时后，将化合物a(0,0.0001,0.001,0.01,0.1和1μm)，lps(1ng/ml)和毛喉素(0.1μm)加入到thp-1细胞中。孵育5小时后，使用rneasy96试剂盒(qiagen74182)从细胞裂解物中提取总rna。使用高容量cdna逆转录试剂盒(abi4368813)扩增cdna，并使用taqmanpcr测量靶基因mrna。通过gapdh标准化靶基因表达水平。该实验重复5次。结果在毛喉素存在下，化合物a剂量依赖性地抑制thp-1细胞中lps诱导的tnf-α基因表达。结果通过图15中的平均值±sd显示。b)化合物a的抗炎作用(体内)-化合物a对脂多糖(lps)-攻击的spraquedawley(sd)大鼠中的系统性肿瘤坏死因子α(tnfα)释放的影响在lps攻击前1小时给予化合物a，剂量为0.1,0.3,1,3和10mg/kg(每剂量组n＝8只动物)。包括lps和载体处理的对照组n＝8动物。通过管饲法口服(p.o.)给予化合物a或载体(给予量：10ml/kg体重)。化合物或载体给予后1小时，静脉内(i.v.)以20μg/kg的剂量注射lps(给予体积：1ml/kg体重)。lps攻击后1小时，通过吸入异氟烷麻醉(5％；流速：2-3l/min)和随后的颈脱位处死动物。通过心脏穿刺获得肝素化血液。将血液离心(21,000×g，4℃，10分钟)，并将血浆样品在-20℃下冷冻直至通过elisa测定tnfα水平。结果与载体处理的对照相比，化合物a剂量依赖性地降低血浆中的平均tnfα。在所有测试剂量下，tnfα浓度的降低在统计学上是显著的。结果通过图16中的平均值±sd显示。(统计学：单方anova和dunnett′spost检验，对比载体对照*p<0.05，**p<0.01和***p<0.001)在8a)和8b)下提供的结果连同1)中提供的抑制肝炎性tnfα基因表达的结果清楚地证明了化合物a发挥全身抗炎作用以及在肝脏中的抗炎作用的能力。本发明的其他方面：a)磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂在制备药物组合物中的用途,所述的药物组合物用于治疗选自非酒精性脂肪肝病(nafld)和非酒精性脂肪性肝炎(nash)的疾病，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的其盐。b)根据a)的磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂的用途，其中所述疾病是非酒精性脂肪肝病(nafld)。c)根据a)的磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂的用途，其中所述疾病是非酒精性脂肪性肝炎(nash)。d)磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂在制备药物组合物中的用途，所述的药物组合物用于伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪肝病(nafld)，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。e)磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂在制备药物组合物中的用途，所述的药物组合物用于伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝炎(nash)，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。f)根据a)至e)中任一项的用途，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂是化合物a。g)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以0.1至6mg的剂量每日一次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1至6mg的剂量每日一次给予。h)根据f)的用途，其中化合物a以0.1至6mg的剂量每日一次给予。i)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以0.1至6mg的剂量每日两次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量0.1至6mg的剂量每日两次给予。j)根据f)的用途，其中化合物a以0.1至6mg的剂量每日两次给予。k)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以0.1至6mg的剂量一天三次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量0.1至6mg的剂量一天三次给予。l)根据f)的用途，其中化合物a以0.1至6mg的剂量一天三次给予。m)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2,75,3,3.25,3.5,3.75,4,4.25,4.5,4.75,5,5.25,5.5,5.75和6mg的剂量每日一次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2,75,3,3.25,3.5,3.75,4,4.25,4.5,4.75,5,5.25,5.5,5.75和6mg的剂量每日一次给予。n)根据f)的用途，其中化合物a以选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5，1.75,2,2.25,2.5,2.75,3,3.25,3.5,3.75,4,4.25,4.5,4.75,5,5.25,5.5,5.75和6mg的剂量每日一次给予。o)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9，1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3,3.25,3.5,3.75,4,4.25,4.5,4.75,5,5.25,5.5,5.75和6mg的剂量每日两次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1，1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3,3.25,3.5,3.75,4,4.25,4.5,4.75,5,5.25,5.5,5.75和6mg的剂量每日两次给予。p)根据f)的用途，其中化合物a以选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5，1.75,2,2.25,2.5,2.75,3，3.25,3.5,3.75,4,4.25,4.5,4.75,5,5.25,5.5,5.75和6mg的剂量每日两次给予。q)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8，0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3,3.25,3.5,3.75,4,4.25,4.5,4.75,5,5.25,5.5,5.75和6mg的剂量一天三次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1，1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3,3.25,3.5,3.75,4,4.25,4.5,4.75,5,5.25,5.5,5.75和6mg的剂量一天三次给予。r)根据f)的用途，其中化合物a以选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25，1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3,3.25,3.5,3.75,4,4.25,4.5,4.75,5,5.25,5.5,5.75和6mg的剂量一天三次给予。s)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以0.8至3.25mg的剂量每日一次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.8至3.25mg的剂量每日一次给予。t)根据f)的用途，其中化合物a以0.8至3.25mg的剂量每日一次给予。u)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以0.8至3.25mg的剂量每日两次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量0.8至3.25mg的剂量每日两次给予。v)根据f)的用途，其中化合物a以0.8至3.25mg的剂量每日两次给予。w)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以0.8至3.25mg的剂量一天三次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量0.8至3.25mg的剂量一天三次给予。x)根据f)的用途，其中化合物a以0.8至3.25mg的剂量一天三次给予。y)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以选自0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3和3.25mg的剂量每日一次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量选自0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3和3.25mg的剂量每日一次给予。z)根据f)的用途，其中化合物a以选自0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3和3.25mg的剂量每日一次给予。aa)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以选自0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3和3.25mg的剂量每日两次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日两次剂量选自0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3和3.25mg的剂量每日两次给予。bb)根据f)的用途，其中化合物a以选自0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3和3.25mg的剂量每日两次给予。cc)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以选自0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75，3和3.25mg的剂量一天三次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a一天三次剂量选自0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25，2.5,2.75,3和3.25mg的剂量一天三次给予。dd)根据f)的用途，其中化合物a以选自0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75,2,2.25,2.5,2.75,3和3.25mg的剂量一天三次给予。ee)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以0.1至2mg的剂量每日一次给予，或者化合物a的药学上可接受的盐以相应于化合物a每日一次剂量0.1mg至2mg的剂量每日一次给予。ff)根据f)的用途，其中化合物a以0.1mg至2mg的剂量每日一次给予。gg)根据a)至e)中任一项的用途，其中化合物a以选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9，1,1.25,1.5,1.75和2mg的剂量每日一次给予，化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6，0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75和2mg的剂量每日一次给予。hh)根据f)的用途，其中化合物a以每日剂量选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75和2mg每日一次给予。ii)包含磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂的药物组合物，其用于治疗选自非酒精性脂肪肝病(nafld)和非酒精性脂肪性肝炎(nash)的疾病，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。jj)根据ii)的药物组合物，其中所述疾病是非酒精性脂肪肝病(nafld)。kk)根据ii)的药物组合物，其中所述疾病是非酒精性脂肪性肝炎(nash)。ll)包含磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂的药物组合物，其用于伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪肝病(nafld)，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。mm)包含磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂的药物组合物，其用于伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝炎(nash)，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。nn)根据ii)至mm)中任一项的药物组合物，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂是化合物a。oo)根据ii)至mm)中任一项的药物组合物，其中化合物a以0.1mg至2mg的剂量每日一次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1mg至2mg的剂量每日一次给予。pp)根据nn)的药物组合物，其中化合物a以0.1mg至2mg的剂量每日一次给予。qq)根据ii)至mm)中任一项的药物组合物，其中化合物a以选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9的剂量每日一次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6，0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75和2mg的剂量每日一次给予。rr)根据nn)的药物组合物，其中化合物a以选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75和2mg的剂量每日一次给予。ss)在有需要的哺乳动物中治疗非酒精性脂肪肝病(nafld)的方法，其包括给患有非酒精性脂肪肝病(nafld)的哺乳动物给予治疗有效量的磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。tt)在有需要的哺乳动物中治疗非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，其包括给患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)的哺乳动物给予治疗有效量的磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。uu)在有需要的哺乳动物中伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪肝病(nafld)的方法，其包括给予患有2型糖尿病和非酒精性脂肪肝病的哺乳动物(nafld)治疗有效量的磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。vv)在有需要的哺乳动物中伴随治疗2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，其包括给予患有2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝炎的哺乳动物(nash)治疗有效量的磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂选自化合物a及其药学上可接受的盐。ww)根据ss)至vv)中任一项的方法，其中磷酸二酯酶4(pde4)抑制剂是化合物a。xx)根据ss)至vv)中任一项的方法，其中化合物a以0.1mg至2mg的剂量每日一次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量0.1mg至2mg的剂量每日一次给予。yy)根据ww)的方法，其中化合物a以0.1mg至2mg的剂量每日一次给予。zz)根据ss)至vv)中任一项的方法，其中化合物a以选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75和2mg的剂量每日一次给予，或化合物a的药学上可接受的盐以对应于化合物a每日一次剂量选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75和2mg的剂量每日一次给予。aaa)根据ww)的方法，其中化合物a以选自0.1,0.2,0.25,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.75,0.8,0.9,1,1.25,1.5,1.75和2mg的剂量每日一次给予。当前第1页12