本发明涉及肾脏药物的技术领域，更具体地说，涉及一种氯硝柳胺乙醇胺盐及其药物组合物的应用。
背景技术：
肾脏病是威胁人类健康的一类重大慢性非传染性疾病，本病病因复杂，疾病治疗难度大，病情缠绵难愈，医疗费用巨大。蛋白尿、血肌酐进行性升高、肾小球硬化和肾小管损伤为其早期的主要临床特征。目前，临床上尚无有效的延缓肾脏疾病进展的药物。
氯硝柳胺是who推荐使用的灭螺药及驱虫药，氯硝柳胺乙醇胺盐(niclosamideethanolaminesalt，nen)为其衍生物，具有更好的水溶性，近年研究显示该类药物具有明显的抗肿瘤及降血糖作用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种氯硝柳胺乙醇胺盐及其药物组合物的应用，解决了现有技术中尚无有效的延缓肾脏疾病进展的药物的问题。
本发明解决技术问题所采用的技术方案是：氯硝柳胺乙醇胺盐及其药物组合物分别在制备用于治疗和预防肾脏疾病的药物中的应用。
氯硝柳胺乙醇胺盐及其药物组合物分别在制备用于对肾脏线粒体起到解偶联的药物中的应用。
氯硝柳胺乙醇胺盐及其药物组合物分别在制备用于降低肾脏的蛋白尿排泄率的药物中的应用。
氯硝柳胺乙醇胺盐及其药物组合物分别在制备用于减轻肾脏病理损伤的药物中的应用。
氯硝柳胺乙醇胺盐及其药物组合物分别在制备用于减低肾脏疾病血肌酐的水平、延缓肾衰竭的药物中的应用。
在本发明应用中，所述药物组合物是包括有效活性成分氯硝柳胺乙醇胺盐和药用辅料的口服给药制剂、注射给药制剂、粘膜给药制剂或经皮给药制剂。
在本发明的应用中，所述药物组合物是口服给药制剂，所述口服给药制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液；或者所述药物组合物是粘膜给药制剂，所述粘膜给药制剂是贴剂或凝胶剂；或者所述药物组合物是经皮给药制剂，所述经皮给药制剂是贴剂或凝胶剂。
实施本发明的氯硝柳胺乙醇胺盐及其药物组合物的应用，具有以下有益效果：本发明氯硝柳胺乙醇胺盐及其药物组合物可对肾组织线粒体起到解偶联作用，减少肾病小鼠的蛋白尿排泄，改善肾小球硬化和肾小管损伤，降低血清肌酐水平，因此氯硝柳胺乙醇胺盐及其药物组合物对肾脏疾病具有一定的保护作用，可以用于预防和治疗肾脏疾病。
附图说明
图1为寡霉素(oligomycin)不存在情况下nen对肾脏线粒体氧耗量的影响的曲线图；
图2为寡霉素存在情况下nen对肾脏线粒体氧耗量的影响的曲线图；
图3为nen对阿霉素肾病小鼠蛋白尿排泄的影响结果的对比图；
图4为nen对阿霉素肾病小鼠肾小球硬化的影响结果对比图；
图5为nen对阿霉素肾病小鼠肾小球硬化的染色切片照片对比图；
图6为nen对阿霉素肾病小鼠肾小管损伤的影响结果对比图；
图7为nen对阿霉素肾病小鼠肾小管损伤的的染色切片照片对比图；
图8为nen对阿霉素肾病小鼠血肌酐的影响结果对比图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的钙敏感受体相关肽类的药物组合物及其应用作进一步说明：
肾脏疾病主要由于肾脏损伤引起的尿蛋白排泄增加所致，蛋白尿亦可加重肾脏损害，导致肾小球硬化和肾小管损伤，进而引起肾小球滤过功能下降，血肌酐进行性升高，最终走向肾功能衰竭，本病病因复杂，发病机制尚不完全明确，治疗难度大。
本发明提供了以氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)以及含有氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)的药物组合物在制备用于治疗和预防肾脏疾病的药物中的应用。其中，氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)为casno1420-04-8编号的结构化合物，其结构式如下：
其中，药物组合物是包含有效活性成分氯硝柳胺乙醇胺盐和药用辅料的口服给药制剂、注射给药制剂、粘膜给药制剂或经皮给药制剂。如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、贴剂或凝胶剂等等。氯硝柳胺乙醇胺盐的上述剂型均为现有技术，同样这里不再进行详细赘述。
下面对氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)以及含有氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)的药物组合物的应用进行详细说明。
一、实验方法
1、动物模型：雄性balb/c小鼠(体重20-25g)购买于广东省医学实验动物中心，动物实验严格按照动物伦理相关准则和条例进行，饲养于北京大学深圳研究生院动物中心。实验动物受控在恒定室温23±1℃，12小时光照和12小时黑暗循环的条件下，同时自由摄食和饮水。18只小鼠随机分为正常对照组(即图示中control组，n＝6)，阿霉素肾病组(adriamycinnephropathy，an，n＝6)和阿霉素肾病+nen治疗组(an+nen，n＝6)。阿霉素肾病小鼠模型由一次性尾静脉注射10.4mg/kg阿霉素(sigma，美国)诱导而成，正常对照组予等量生理盐水一次性尾静脉注射。造模2周后开始进行干预，其中正常对照组和an组小鼠喂养常规食物，an+nen组喂养添加nen的食物，共计喂养4周。nen购买于湖北盛天恒创生物科技有限公司(中国)，以2g/kg标准比例混匀添加到小鼠的食物中。
2、肾脏线粒体功能测定：提取正常雄性balb/c小鼠肾脏线粒体后，使用氧电极(hansatechinstrument，英国)分别在不含寡霉素和含寡霉素条件下检测线粒体的氧耗量。线粒体浓度为1mg/ml，各底物浓度：谷氨酸盐/苹果酸盐(glutamate/malate),2.5mm/2.5mm；二磷酸腺苷(adp)，200μm；oligomycin,5μg/ml；nen,10μm。
3、分别在造模前、造模后4周和6周，使用小鼠代谢笼(tecniplast，意大利)留取各组小鼠的24h尿液，使用bradford蛋白测定试剂盒(bio-rad，美国)检测各组小鼠24h尿总蛋白定量。
4、组织准备：造模6周后，也即是nen干预4周后，处死各组小鼠后，留取血清样本，取出肾脏，沿纵切面切取一定量肾脏组织用10％福尔马林固定，之后进行脱水石蜡包埋，剩余的肾脏组织立即在液氮中冷冻并储存在-80℃用于后续实验研究。血清肌酐使用全自动生化分析仪(roche，瑞士)测定。
5、肾小球硬化指数评估方法：每组随机选取4个样本，pas染色切片下，每张切片在40×物镜下随机拍摄肾脏皮质区域20-30个肾小球，肾小球硬化主要表现为系膜基质扩张、毛细血管闭塞、透明变性和球囊粘连。如果肾小球基本正常(或病变＜5％)则积0分，若病变累积肾小球5～25％区域则积1分，25～50％积2分，50～75％积3分，75～100％则积4分，然后计算每张切片的平均值。
6、肾小管损伤指数评估方法：每组随机选取4个样本，pas染色切片下，每张切片在20×物镜下随机拍摄肾脏皮质部10-20个肾小管区域，肾小管损伤主要表现为小管管型、萎缩、扩张和炎症细胞浸润。如果肾小管基本正常(或病变＜5％)则积0分，若病变累积肾小管5～25％区域则积1分，25～50％积2分，50～100％则积3分，然后计算每张切片的平均值。
7、统计分析
计量资料使用平均值±标准差表示。两组样本间的统计差异采用独立样本t检验进行分析，多组样本之间的比较使用单因素方差分析，统计分析采用spss16.0统计软件处理。p<0.05时视为在统计学上差异具有显著性。
二、结果
1、氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)对balb/c小鼠肾脏线粒体(mitochondria)具有明显的解偶联作用。
如图1所示，nen可在寡霉素(oligomycin)不存在情况增加肾脏线粒体氧耗量；如图2所示，nen可在寡霉素存在情况下增加肾脏线粒体氧耗量。线粒体浓度为1mg/ml。各底物浓度：谷氨酸盐/苹果酸盐(glutamate/malate),2.5mm/2.5mm；二磷酸腺苷(adp)，200μm；oligomycin,5μg/ml；nen,10μm。
2、氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)可明显减少阿霉素肾病小鼠蛋白尿的排泄。
如图3所示，为nen对阿霉素肾病小鼠蛋白尿排泄的影响结果(n＝6)。与正常组比较，*p<0.05，***p<0.001；与an组比较，#p<0.05，##p<0.01。
阿霉素造模起始时(0周时)，control组，an组和an+nen组之间尿蛋白排泄率无明显差异。造模后4周(也即是nen治疗2周)，与control组相比较，an组尿蛋白明显增加，经nen治疗2周后，an+nen组尿蛋白较an组明显下降。造模后6周(也即是nen治疗4周)，an组尿蛋白较之前4周时有所下降，但仍显著高于control组，nen治疗4周后an+nen组尿蛋白仍显著低于an组。
3、氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)可明显减轻阿霉素肾病小鼠肾小球硬化。
如图4和5所示，为nen对阿霉素肾病小鼠肾小球硬化的影响结果(n＝4)。与正常组比较，***p<0.001；与an组比较，#p<0.05。造模6周后(nen治疗4周)，an组小鼠肾小球硬化指数显著增加，与an组相比，an+nen组肾小球硬化指数明显降低。
4、氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)可明显减轻阿霉素肾病小鼠肾小管损伤。
如图6和7所示，为nen对阿霉素肾病小鼠肾小管损伤的影响结果(n＝4)。与正常组比较，***p<0.001；与an组比较，##p<0.01。造模6周后(nen治疗4周)，an组小鼠肾小管损伤指数显著增加，与an组相比，an+nen组肾小管损伤指数明显降低。
5、氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)可明显降低阿霉素肾病小鼠血肌酐水平。
如图8所示，为nen对阿霉素肾病小鼠血肌酐的影响结果(n＝6)。与正常组比较，**p<0.01；与an组比较，#p<0.05。造模6周后(nen治疗4周)，an组小鼠血清肌酐明显增加，与an组相比，an+nen组血清肌酐明显降低。
上述实验结果表明，现有技术中的氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)作为一种驱虫药及抗肿瘤药物，可对肾脏线粒体起到解偶联作用，减少肾脏疾病的蛋白尿排泄，改善肾小球硬化和肾小管损伤，降低血肌酐水平，进而延缓肾脏疾病进展至肾衰竭进程。因此，含有氯硝柳胺乙醇胺盐(nen)的药物组合物同样可对肾脏线粒体起到解偶联作用，减少肾脏疾病的蛋白尿排泄，改善肾小球硬化和肾小管损伤，降低血肌酐水平，进而延缓肾脏疾病进展至肾衰竭进程。
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进或变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围之内。