本发明涉及癌症医药技术领域，具体涉及一种生物介质稳定的双敏感型的癌症联合治疗系统及构建方法。
背景技术：
恶性肿瘤被认为是威胁人类健康的三大杀手之一，人类因恶性肿瘤而引起的死亡率居所有疾病死亡率的第二位，仅次于心脑血管疾病。化疗是临床上治疗肿瘤的主要手段,但因化疗药物随血液分布于全身，造成其缺乏选择性，对肿瘤细胞和正常的体细胞都具有杀伤效应，引起的毒副作用使患者不能耐受而使其应用受到严重限制。因此构建靶向肿瘤组织的药物传递系统是解决肿瘤化疗问题的有效途径。另外，在当前抗肿瘤研究的领域里，单一的治疗手段往往已经无法达到与满足治疗需求。而且传统的放、化疗治疗手段也对正常组织产生很大的毒性与伤害。因此，运用多种新颖的治疗手段（如光热疗法，光动力学疗法等），结合靶向性与敏感释放性能的药物载体，改变药物的给药方式，延缓机体耐药性的产生，并降低抗癌药物对正常组织的毒性，提高药物的稳定性和生物利用度的协同治疗方式，已经成为当前研究的一大热点。据报道同时装载两种或以上抗癌药物的载体系统相比于单独药物成分，多药载药系统的治疗效率可以得到显著提高。但是目前已开发的靶向给药系统仍存在稳定性差、生物相容性和生物可降解性不理想等问题，同时装载的抗癌药物之间如何有效的发挥协同作用，并充分在体内释放并发挥药效，以及降低副作用还有待进一步的研究。
技术实现要素：
针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的在于提供一种生物介质稳定的双敏感型的癌症联合治疗系统，具有良好的稳定性、生物相容性，同时负载的药物可以有序在体内充分释放发挥药效，起到协同治疗癌症的作用，提高肿瘤治疗效果。
本发明另一目的为提供该生物介质稳定的双敏感型的癌症联合治疗系统的构建方法。
本发明提供如下的技术方案：
一种生物介质稳定的双敏感型的癌症联合治疗系统，双敏感型癌症联合治疗系统以介孔硅为基体，在介孔硅上同时负载抗癌药物与细胞凋亡肽，并在介孔硅的最外层包覆牛血清蛋白。
作为本发明的一种改进，细胞凋亡肽通过还原敏感的双硫键连接到介孔硅的表面上。
作为本发明的一种改进，抗癌药物为盐酸阿霉素dox·hcl，并负载介孔硅的孔道内。
作为本发明的一种改进，介孔硅的粒径为50～100nm。
本发明的癌症联合治疗系统以介孔硅为基体，在介孔硅内部负载抗癌药物，在介孔硅的表面通过还原敏感的双硫键连接细胞凋亡肽。介孔硅纳米粒子的比表面积大、纳米粒子尺寸及介孔孔径均一可调、孔体积大、具有良好的生物相容性、能够有效负载诊疗制剂，使所得的癌症联合治疗系统具有较高的负载率和生物相容性。细胞凋亡肽kla是一种两亲α螺旋促凋亡肽，其氨基酸序列为(klaklak)2，它可以破坏线粒体膜和诱导依赖线粒体的细胞凋亡，而在细胞外保持相对无毒。细胞凋亡肽与介孔硅经双硫键连接，双硫键具有还原敏感性，在谷胱甘肽的作用下可以分解断裂。而癌细胞体内含较多的谷胱甘肽，因此当到达癌细胞时，在谷胱甘肽的作用下双硫键断裂使细胞凋亡肽脱落，并释放到癌细胞内破坏线粒体膜和并诱导癌细胞的凋亡，起到对癌细胞的靶向作用，而在未达到癌细胞时具有良好的化学稳定性，因此对体内正常细胞的副作用小。而负载在介孔硅内部的抗癌药物也因细胞凋亡肽的脱落而大量的释放，实现kla与抗癌药物的共传递，达到肿瘤的协同治疗。在介孔硅外包覆的牛血清蛋白可以增强癌症联合治疗系统的分散性和生物相容性，使癌症治疗系统具有较高的生物介质稳定性。通过介孔硅孔道内部负载抗癌药物、表面通过还原敏感的双硫键与细胞凋亡肽连接，并在介孔硅外侧包覆牛血清蛋白，从而使本发明的癌症联合治疗系统可以在癌细胞内部充分发挥药效，细胞凋亡肽和抗癌药物共传递协同抗癌，具有良好的生物稳定性，可在100%的血清溶液中保持稳定分散24h以上，可响应于还原环境及酶环境释放抗癌制剂。
上述癌症联合治疗系统的构建方法，包括以下步骤：
（1）制备介孔硅：以正硅酸四乙酯、三乙胺和十六烷基三甲基氯化铵ctac为原料制备ctac修饰的介孔硅ctac@msn；
（2）制备表面双硫化的介孔硅：室温下将ctac@msn与3-巯基丙基三甲氧基硅烷在甲醇中混合搅拌反应，离心洗涤后干燥，再抽洗掉ctac得到巯基修饰的介孔硅msn-sh，然后与s-(2-氨基乙硫基)-2-硫代吡啶盐酸盐在甲醇中混合反应，再离心、洗涤并干燥得到表面连接有双硫键的介孔硅msn-ss-nh2；
（3）制备炔基修饰的双硫化的介孔硅：室温将msn-ss-nh2分散到甲醇中，滴加溴代丙炔、三乙胺反应，使炔基替代氨基连接到双硫键上，得炔基修饰双硫键的介孔硅msn-ss-alkyne；
（4）负载细胞凋亡肽：室温将msn-ss-alkyne分散到甲醇中，依次加入端部有叠氮基团的细胞凋亡肽n3-kla、cuso4·5h2o、抗坏血酸钠，氮气氛围下反应，然后离心、洗涤得到连接接有细胞凋亡肽的介孔硅msn-ss-kla；
（5）负载抗癌药物：将msn-ss-kla分散到甲醇中，加入抗癌药物后剧烈搅拌过夜，待负载的抗癌药物为dox·hcl，然后透析得到负载抗癌药物的介孔硅dox@msn-ss-kla；
（6）牛血清蛋白包覆：将dox@msn-ss-kla分散到去离子水中，然后滴加牛血清蛋白bsa，室温搅拌过夜后离心、洗涤得到bsa包覆的介孔硅dox@msn-ss-kla/bsa。
作为本发明方法的一种改进，步骤（2）中制备巯基修饰的介孔硅msn-sh时ctac@msn、甲醇和3-巯基丙基三甲氧基硅烷质量比为1:100~150:3~5，反应时间24～36h。
作为本发明方法的一种改进，步骤（2）中制备氨基修饰的双硫化的介孔硅msn-ss-nh2时msn-sh、甲醇和s-（2-氨基乙硫基）-2-硫代吡啶盐酸盐的质量比为1:200~300:1~4，反应时间为24～36h。
作为本发明方法的一种改进，步骤（3）中msn-ss-nh2、甲醇、溴代丙炔和三乙胺的质量比为1:200~300:8.0:0.2~0.5，反应时间为24～36h。
作为本发明方法的一种改进，步骤（4）中所用的msn-ss-alkyne、甲醇、n3-kla、cuso4·5h2o和抗坏血酸钠的质量比为1:100~200:1~2:1:1.5~3，反应时间3天。
作为本发明方法的一种改进，步骤（6）中dox@msn-ss-kla、去离子水和bsa的质量比为1:1000~15000:1~5。
在癌症联合治疗系统的构建过程中，首先合成粒径50～100nm的介孔硅粒子，然后通过3-巯基丙基三甲氧基硅烷改性在介孔硅的表面引入巯基-sh，然后再与s-(2-氨基乙硫基)-2-硫代吡啶盐酸盐在甲醇中混合反应，介孔硅表面的巯基将s-（2-氨基乙硫基）-2-硫代吡啶盐酸盐的双硫键打断，和s-（2-氨基乙硫基）-2-硫代吡啶盐酸盐的一部分结合形成新的双硫键，s-（2-氨基乙硫基）-2-硫代吡啶盐酸盐中含吡啶环的一半结构脱去，使介孔硅的表面双硫化，连接氨基修饰的双硫键-ss-nh2，然后通过丙炔基取代氨基-nh2，在介孔硅的表面形成炔基修饰的双硫键-ss-alkyne，再与端部有叠氮基团的细胞凋亡肽进行反应，在抗坏血酸钠与cuso4•5h2o的作用下，炔基与叠氮基团发生点击化学反应，进行叠氮-炔基的husigen环加成反应，从而使细胞凋亡肽连接到双硫键上，然后再进行抗癌药物dox·hcl的负载，并在最后在介孔硅表面包覆牛血清蛋白，提高癌症联合治疗系统的稳定性和分散性。通过上述过程构建的癌症联合治疗系统具有较高的药物负载率、生物介质稳定性、以及还原敏感和酶敏感特性，而且对癌细胞的靶向作用强，对正常细胞的副作用小。
本发明的有益效果如下：
本发明的癌症联合治疗系统，首先以纳米级的介孔硅作为药物载体，具有较高的药物负载效率，其次通过还原敏感的双硫键连接细胞凋亡肽，对癌细胞的靶向作用强，对正常细胞的副作用低，同时癌细胞中的谷胱甘肽使还原敏感的双硫键断裂，从而在癌细胞内释放大量的细胞凋亡肽，而包覆在介孔硅的孔道内部的抗癌药物也大量释放，细胞凋亡肽与抗癌药物共同作用，大大提高治疗效果。最后通过牛血清蛋白包覆后具有良好的稳定性、分散性和生物相容性，可在100%的血清溶液中保持稳定分散24h以上，并且可响应于还原环境及酶环境，从而释放抗癌制剂。
附图说明
图1为实施例1所得的msn、msn-sh、msn-ss-alkyne与msn-ss-kla的傅里叶变换红外光谱图。
图2为实施例1所得dox@msn-ss-kla/bsa在不同胰蛋白酶含量下的dox的释放曲线。
图3为实施例1所得dox@msn-ss-kla/bsa在不同dtt含量时kla的释放曲线。
图4为实施例1的dox@msn-ss-kla/bsa与hela细胞共培养48h的细胞毒性图。
图5为实施例1的dox@msn-ss-kla/bsa在0%血清溶液中的粒径分布图。
图6为实施例1的dox@msn-ss-kla/bsa在100%血清溶液中的粒径分布图。
图1中：a1为msn，b1为msn-sh，c1为msn-ss-alkyne，d1为msn-ss-kla。
具体实施方式
下面就本发明的具体实施方式作进一步说明。
如无特别说明，本发明中所采用的原料均可从市场上购得或是本领域常用的，如无特别说明，下述实施例中的方法均为本领域的常规方法。
实施例1
一种生物介质稳定的双敏感型的癌症联合治疗系统，以50nm的介孔硅为基体，在介孔硅上同时负载抗癌药物与细胞凋亡肽，并在介孔硅的最外层包覆牛血清蛋白，其中，细胞凋亡肽通过还原敏感的双硫键连接到介孔硅的表面上，抗癌药物为盐酸阿霉素dox·hcl，并负载在介孔硅的孔道内。
上述癌症联合治疗系统的构建方法，包括以下步骤：
（1）制备介孔硅：将8.0gctac与0.24g三乙胺溶于80ml去离子水中，剧烈搅拌并加热至95℃，冷凝回流1h后，将6.0ml正硅酸四乙酯缓慢滴加至上述溶液中剧烈搅拌下进行1h，然后10000r/min离心10min得到白色固体物，再用去离子水和甲醇清洗数次，真空干燥后得到带有表面活性剂ctac的介孔硅纳米颗粒ctac@msn；
（2）制备表面双硫化的介孔硅：将1.2gctac@msn超声分散到150ml甲醇中，超声分散，加入4ml3-巯基丙基三甲氧基硅烷并剧烈搅拌，室温反应24h，然后10000r/min离心10min得到白色胶状固体物，再用去离子水和甲醇清洗数次，真空干燥后得到含有表面活性剂的巯基化的介孔硅纳米颗粒ctac@msn-sh；然后将ctac@msn-sh分散到甲醇中，加入浓盐酸并剧烈搅拌在60℃回流48~60h，经过离心、清洗后即抽取表面活性剂ctac，得到巯基修饰的介孔硅msn-sh；将800mg的msn-sh分散到200ml甲醇中，再加入800mg的s-(2-氨基乙硫基)-2-硫代吡啶盐酸盐，剧烈搅拌室温反应24h，然后以8000r/min离心10min，用去离子水和甲醇清洗数次，真空干燥后得到msn-ss-nh2；
（3）制备炔基修饰的双硫化的介孔硅：将600mgmsn-ss-nh2超声分散到160ml的甲醇中，加入6ml溴代丙炔与6滴三乙胺，剧烈搅拌下室温反应24h，8000r/min离心10min，用去离子水和无水甲醇清洗数次，真空干燥，得到炔基修饰双硫键的介孔硅msn-ss-alkyne；
（4）负载细胞凋亡肽：将100mg的msn-ss-alkyne溶于在12.5ml甲醇，超声分散，然后分别依次加入100mg的端部有叠氮基团的n3-kla、100mg的cuso4·5h2o和158.5mg的抗坏血酸钠，在氮气氛围保护下室温反应3天，然后6000r/min离心5min，用去离子水和甲醇清洗数次，得到负载细胞凋亡肽的msn-ss-kla；
其中，端部有叠氮基团的细胞凋亡肽n3-kla的一种制备方法如下：称取0.7g的2-氯-三苯甲基氯树脂，加入到10ml的dmf中搅拌15min，随后溶胀30min，然后将树脂转移到多肽合成管中抽滤移除dmf，然后加入fmoc-d-lys(boc)-oh的dmf溶液（即：1.01gfmoc-lys(boc)-oh，8mldmf，2.5mldiea）室温缩合反应2h，然后用6~8mldmf洗涤3次，并用dmf:meoh:diea=6:3:1的混合液封闭未反应的活性氯基团，再用6~8mldmf洗涤3次，用20ml的哌啶/dmf（1/4）溶液洗涤2次、每次20min脱除肽链末端氨基上的fmoc保护基团，然后用dmf洗涤3次。此后在连接氨基酸残基延长肽链时，均采用4当量fmoc保护的氨基酸即fmoc-d-leu-oh为0.766g，fmoc-d-ala-oh为0.6708g，并用4当量hbtu即0.822g及6当量diea即1.5ml溶解于8mldmf中活化羧基，然后加入到上述连接有肽链并已脱除fmoc保护的树脂中，进行缩合反应，反应时间为4h。反应完毕，用10mg/ml的茚三酮的甲醇溶液验证氨基是否缩合完全，若溶液发紫或发红表示缩合不完全，需重复缩合步骤，若溶液未变色，表示此步缩合反应完成，继续脱除fmoc保护基，按氨基酸序列延长肽链。待所有氨基酸合成结束后，继续脱除fmoc保护基，然后加入0.657g叠氮乙酸，2.466ghbtu，2mldiea，12mldmf反应4h，待颜色通过后，依次用dmf、dcm、甲醇洗涤树脂，次数分别为3次，3次，4次，之后用含有95wt%tfa、2.5wt%tis与2.5wt%水的切落剂进行切落，1g树脂对应15ml切落剂，将多肽从树脂上切落，同时切落侧基保护基，切落时间为2h，在切落1h的时候停止搅拌，静置可以看到分层的现象，上层为黑色黏状物，下层为淡黄色液体。将切落后的多肽溶液通过旋蒸浓缩，然后用冰乙醚沉淀，反复洗涤沉淀3次，过滤收集，真空干燥，然后通过冷冻干燥的方法除去小分子杂质，得到最终产品n3-kla；
（5）负载抗癌药物：将50mg的msn-ss-kla超声分散在50ml无水甲醇中，加入8mg的盐酸阿霉素dox·hcl，剧烈搅拌过夜，透析2天后得到dox@msn-ss-kla；
（6）牛血清蛋白包覆：将10mg的dox@msn-ss-kla超声分散到10ml的去离子水中，然后滴加10ml的1mg/ml的牛血清蛋白溶液bsa，室温搅拌过夜，经过离心，洗涤得到牛血清蛋白包覆的介孔硅dox@msn-ss-kla/bsa。
实施例2
一种生物介质稳定的双敏感型的癌症联合治疗系统，以75nm的介孔硅为基体，在介孔硅上同时负载抗癌药物与细胞凋亡肽，并在介孔硅的最外层包覆牛血清蛋白，其中，细胞凋亡肽通过还原敏感的双硫键连接到介孔硅的表面上，抗癌药物为盐酸阿霉素dox·hcl，并负载在介孔硅的孔道内。
其构建方法与实施例1的不同之处在于：
步骤（2）中，制备ctac@msn-sh时，将ctac@msn分散到190ml的甲醇中、所用3-巯基丙基三甲氧基硅烷的体积为3.6ml，反应时间30h；制备msn-ss-nh2时，将msn-sh分散到200ml的甲醇中，所用s-(2-氨基乙硫基)-2-硫代吡啶盐酸盐2g，反应时间30h；
步骤（3）中，制备msn-ss-alkyne时，将msn-ss-nh2超声分散到120ml的甲醇中，滴加三乙胺8滴，反应30h；
步骤（4）中，将msn-ss-alkyne分散到18ml的甲醇中，加入的n3-kla的质量为150mg，加入的抗坏血酸钠的质量为200mg；
步骤（5）中将75mg的msn-ss-kla超声分散到55ml的无水甲醇中，加入10mg的盐酸阿霉素dox·hcl，透析3天；
步骤（6）中将dox@msn-ss-kla超声分散到100ml的去离子水中，滴加25ml的牛血清蛋白溶液。
实施例3
一种生物介质稳定的双敏感型的癌症联合治疗系统，以100nm的介孔硅为基体，在介孔硅上同时负载抗癌药物与细胞凋亡肽，并在介孔硅的最外层包覆牛血清蛋白，其中，细胞凋亡肽通过还原敏感的双硫键连接到介孔硅的表面上，抗癌药物为盐酸阿霉素dox·hcl，并负载在介孔硅的孔道内。
其构建方法与实施例1的不同之处在于：
步骤（2）中，制备ctac@msn-sh时，将ctac@msn分散到230ml的甲醇中、所用3-巯基丙基三甲氧基硅烷的体积为6ml，反应时间36h；制备msn-ss-nh2时，将msn-sh分散到250ml的甲醇中，所用s-(2-氨基乙硫基)-2-硫代吡啶盐酸盐3.2g，反应时间36h；
步骤（3）中，制备msn-ss-alkyne时，将msn-ss-nh2超声分散到180ml的甲醇中，滴加三乙胺10滴，反应36h；
步骤（4）中，将msn-ss-alkyne分散到25ml的甲醇中，加入的n3-kla的质量为200mg，加入的抗坏血酸钠的质量为300mg；
步骤（5）中将100mg的msn-ss-kla超声分散到60ml的无水甲醇中，加入12mg的盐酸阿霉素dox·hcl，透析5天；
步骤（6）中将dox@msn-ss-kla超声分散到150ml的去离子水中，滴加50ml的牛血清蛋白溶液。
性能测试
1、对实施例1所得的msn、msn-sh、msn-ss-alkyne与msn-ss-kla分别进行傅里叶变换红外测试，得到如图1所示的傅里叶变换红外光谱图，其中a1为msn，b1为msn-sh，c1为msn-ss-alkyne，d1为msn-ss-kla。从图中可以看出，msn-sh在2550cm-1处有一个-sh的峰，msn-ss-alkyne在2140cm-1处有一个炔基的峰。
2、体外释药实验
（1）酶敏感性
称取实施例1所得的dox@msn-ss-kla/bsa25mg超声分散到3ml去离子水，然后平均分成三组并分别装入分子截留量3500的透析袋中，再分别加入0μl、100μl和200μl的胰蛋白酶。然后将透析袋浸泡在10ml的0.1m的pbs缓冲液中，ph值为7.4，再置于摇床中37℃释药。按照设定的时间间隔更换透析液，通过荧光分光光度计rf-5301pc测定dox在波长592nm处的荧光强度计算其释放量，其中累积药物释放量%=（mt/m∞）×100%，其中mt是t时间内dox的释放量，m∞是介孔硅材料包裹的dox总量，结果如图2所示。
从图2可知，没有加胰蛋白酶的dox@msn-ss-kla/bsa释药速度明显低于其他两组，在实验范围内，胰蛋白酶浓度越大，dox@msn-ss-kla/bsa释药速度越快，90h后不同胰蛋白酶含量的dox释放量趋于稳定，其中，不添加胰蛋白酶时dox@msn-ss-kla/bsa的累计药物释放量为15.1%，添加100μl胰蛋白酶时dox@msn-ss-kla/bsa的累计药物释放量为22.0%，添加200μl胰蛋白酶时dox@msn-ss-kla/bsa的药物释放为51.1%，这主要是因为胰蛋白酶可以分解包覆在外层的bsa，促进dox的释放，这表明dox@msn-ss-kla/bsa具有良好的酶敏感性。
（2）还原敏感性
避光条件下，称取实施例1所得的msn-ss-kla50mg分散在ph值为7.4的pbs缓冲液20ml中，再称取2.5mg异硫氰酸荧光素溶于5ml去离子水中，并缓慢滴加到上述msn-ss-kla的pbs缓冲液中，室温条件下搅拌反应4h，然后离心、洗涤、干燥得到异硫氰酸荧光素修饰的msn-ss-kla复合物msn-ss-kla/fitc。取msn-ss-kla/fitc25mg超声分散到3ml去离子水，平均分成三组并分别装入分子截留量3500的透析袋中，分别加入二硫苏糖醇dtt浓度为0mm、0.5mm与5mm的水溶液5ml，将透析袋浸泡在10ml的0.1m的pbs缓冲液中，ph值为7.4，然后置于摇床中37℃释药。按设定时间间隔更换透析液，通过荧光分光光度计rf-5301pc测定fitc在波长为516nm处的荧光强度，由于fitc与kla具有共价键作用，测定的fitc的浓度即为kla的浓度，进而计算kla的释放量，累积药物释放量%=（mt/m∞）×100%，其中mt是t时间内kla的释放量，m∞是介孔硅材料包裹的kla总量，结果如图3所示。
从图3可知，在实验范围内，msn-ss-kla/fitc随着dtt浓度增加，同一时间kla释放的量也增加。这主要是因为dtt具有还原作用，可以使还原敏感的双硫键断裂，加快kla的释放，亦即表明dox@msn-ss-kla/bsa具有较强的还原敏感性，而癌细胞内的谷胱甘肽与dtt具有相近的还原作用，并且其浓度远高于正常的体细胞，因此在癌细胞的还原环境内会促进kla的释放，而在人体正常组织内的释放量并不大，对人体的副作用小。
3、体外细胞毒性实验
将hela细胞分别以6×103个/孔的密度接种于96孔细胞培养板中，每孔加入100μl含有10%fbs和1%链-青霉素的dmem培养基，然后将其放在含5%co2的培养箱中于37℃下培养24h。然后分别在每孔中加入设定浓度梯度的不同介孔硅材料（msn/bsa、msn-ss-kla/nsa、dox@msn-ss-kla/bsa以及负载dtt的dox@msn-ss-kla/bsa，即dox@msn-ss-kla/bsawithdtt）、纯的kla和盐酸阿霉素freedox，在上述培养基中继续培养48h。培养结束后，移除孔中所有的溶液，加入200μl新鲜培养基和20μlmtt溶液，在培养箱中继续培养4h。小心移除孔中的溶液，并补入100μldmso溶解生成的紫色晶体，摇晃混匀后，在酶标仪dg5033a上记录每个孔在490nm处的吸光度，计算细胞的相对存活率，结果见图4。
细胞的相对存活率由公式算出：
细胞相对存活率%=（od490(sample)/od490(control)）×100；
其中，od490(control)是未加入介孔硅材料时测定的吸光值，od490(sample)是加入介孔硅材料后测得的吸光值。od值的测定基于4个独立平行样取平均值，结果表示为平均值±标准偏差。
从图4可知，msn/bsa基本没有细胞毒性，msn-ss-kla/bsa只有较小的细胞毒性，结合图2可知，48h时在没有加胰蛋白酶时的释药量为10%左右，即dox@msn-ss-kla/bsa中dox浓度为2μg/ml时，其实际释放的浓度为0.2μg/ml，对比0.2μg/ml的freedox以及相对应浓度的msn-ss-kla/bsa的细胞存活率：freedox的细胞存活率为68.2%，msn-ss-kla/bsa的细胞存活率为77.1%，dox@msn-ss-kla/bsa的细胞存活率为9.0%。以上结果说明dox@msn-ss-kla/bsa有较好的毒性，证明dox/kla的协调作用，大大提高了治疗效果。
4、分散稳定性
将实施例1所得的dox@msn-ss-kla/bsa分别超声分散在去离子水中和质量浓度100%的血清溶液中，分散浓度为2mg/ml，然后各取3ml置于试样瓶内，将试样放置在37℃恒温箱内，每隔一定的时间进行dls粒径测试，结果见图5与图6。从两图的对比可知，dox@msn-ss-kla/bsa在100%血清溶液中可保持稳定分散24h以上，分散稳定性好。
需要说明的是，依据本发明的构建方法所得dox@msn-ss-kla/bsa，包括实施例2和实施例3且不限于上述实施例，具有与实施例1相近的上述各项性能。