本发明涉及中药提取物
技术领域：
，具体地说，涉及一种治疗抑郁症的中药提取物及其制备方法和应用。
背景技术：
：抑郁症是情感性精神障碍的主要类型，是一种以显著而持久的心境低落为主要临床特征的综合症，其主要表现为情绪低落、言语减少、精神运动迟缓、常自责、自罪甚至企图自杀等。目前治疗抑郁症的药物大多为化学药物，品种繁多，但是西药往往依赖性大，治疗副作用大、时间长，且容易出现戒断症状甚至出现系列反应，有的甚至需要终生服药，严重损伤肝肾功能，形成恶性循环，治疗时使用不当不仅不能治疗抑郁症，反可能加剧病情或转化为其他精神类疾病。抑郁症属中医的“郁症”范畴，在失眠、善忘、癫症、百合病、梅核气等论述中亦有记载。抑郁是情志不畅、气机郁滞所致的一类病症，思虑过度、损伤精气(血)为主要诱因。专利文献cn102198253a，公开日2011.09.28，公开了一种抗抑郁症的中药组合物及其制备方法和应用，所述的药物由下列重量百分比的原料药制成：萱草花40％-70％，郁金15％-40％，生白芍15％-40％。该发明的中药配方以中医理论和临床研究为指导，经层层筛选逐步精简而成，选用纯天然中药原料，全方配伍符合中药“君臣佐使”原则，经药效学实验验证，具有显著的平肝、解郁、镇静、安神的作用，疗效显著、副作用小，且资源易得、药味数少、价格低廉，制作简便，适于长期服用，是一种安全有效的治疗抑郁症和焦虑症的药物，具有广阔的应用前景。以上中药组合物为我科室经验方。为提高疗效、便于大规模生产，我科室对其制备方法和提取物进行进一步的研究和论证，以期获得疗效显著的提取物，及合适的提取方法，扩大本中药组合物在临床的应用，并达到节约成本的目的。从药材中提取稳定的有效成分，保证药品量效关系的均一性和稳定性，是中药制造现代化的重要内容之一，因此，中药提取是中药制造过程中极其关键的一环。提取过程中提取效率和提取物的成分会受到提取溶剂、提取时间、溶液ph等诸多因素的影响，因此有必要合理选用统计学方法，筛选出最佳工艺条件，以期提高提取效率，获得药效更加显著的提取物。这需要借助于发明人对中药及其药理的深入研究，并结合经验来摸索合适的提取条件。技术实现要素：本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种治疗抑郁症的中药提取物。本发明的再一的目的是，提供所述中药组合物的制备方法。本发明的另一的目的是，提供一种治疗抑郁症的中药制剂。本发明的第四个目的是，提供所述中药组合物的用途。为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：一种治疗抑郁症的中药提取物，所述的中药提取物的制备方法为：按重量百分比称取原料药：萱草花40％-70％，郁金15％-40％，生白芍15％-40％，加入10倍量水，浸润1h后，煎煮2h，过滤；滤渣加入10倍量水煎煮2h，过滤；滤渣再加入10倍量水煎煮2h，过滤；合并3次滤液，减压浓缩至密度比为1.05的浸膏，缓慢加入95％乙醇，边加边搅拌，至醇浓度为65％，冷藏静置16小时，取上清液，减压回收乙醇，70度真空干燥得干浸膏。优选地，所述的原料药的重量百分比为：萱草花50％-60％，郁金20％-30％，生白芍20％-30％。更优选地，所述的原料药的重量百分比为：萱草花55％，郁金23％，生白芍22％。为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：所述的中药提取物的制备方法，包括以下步骤：按重量百分比称取原料药：萱草花40％-70％，郁金15％-40％，生白芍15％-40％，加入10倍量水，浸润1h后，煎煮2h，过滤；滤渣加入10倍量水煎煮2h，过滤；滤渣再加入10倍量水煎煮2h，过滤；合并3次滤液，减压浓缩至密度比为1.05的浸膏，缓慢加入95％乙醇，边加边搅拌，至醇浓度为65％，冷藏静置16小时，取上清液，减压回收乙醇，70度真空干燥得干浸膏。优选地，所述的原料药的重量百分比为：萱草花50％-60％，郁金20％-30％，生白芍20％-30％。更优选地，所述的原料药的重量百分比为：萱草花55％，郁金23％，生白芍22％。为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：一种治疗抑郁症的中药制剂，所述的中药制剂含有如上所述的中药提取物，并包含药学上可接受的载体。所述的药学上可接受的载体选自赋形剂、润滑剂、崩解剂、填充剂和粘接剂。所述的中药制剂的剂型为口服液、胶囊剂、片剂、颗粒或丸剂。为实现上述第四个目的，本发明采取的技术方案是：所述的中药提取物在制备治疗抑郁症或焦虑症的药物中的应用。所述的药学上可接受的载体包括赋形剂，如淀粉、水等；润滑剂，如硬脂酸镁等；崩解剂，如微晶纤维素等；填充剂，如乳糖等；粘接剂，如预胶化淀粉、糊精等。本发明优点在于：本发明基于在先的中药组合物，为提高其临床疗效和促进大规模生产制造以便于临床推广，对该中药组合物的提取方法进一步摸索，基于发明人丰富的研究经验，确定了合适的提取步骤，并选择了合适的提取参数范围，通过实验筛选得到较优提取方法，并经动物实验证实本发明的提取方法相较于其他方法所得到的提取物疗效显著增强，取得了预料不到的技术效果。本发明对该中药组合物的临床应用和推广来说具备重要价值。具体实施方式下面对本发明提供的具体实施方式作详细说明。实施例1提取工艺研究(一)含量测定方法的建立含量测定照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂；以0.1％磷酸-水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为230nm和254nm。表1洗脱程序对照品溶液的制备：取芦丁、芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含0.1mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备：称取浸膏粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇20ml于25ml容量瓶中，超声30min后，放冷，加50％乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。测定芦丁、芍药苷的含量。(二)水提工艺的确定1.单因素实验1)浸润时间的考察按重量百分比称取萱草花55％、郁金23％、生白芍22％3味药材，共60g，浸润0.5h后，白芍、郁金未完全浸润；浸润1h后，药材基本全部浸润。故选择浸润1h后，再提取药材。2)提取时间的考察实验方法：共分为5组，每组按重量百分比称取萱草花55％、郁金23％、生白芍22％3味药材，共60g，浸润1h后，煎煮2次，每次煎煮时间见表2，第一次加8倍量水，第二次加8倍量水，过滤，合并滤液，减压浓缩蒸干，记录不同提取时间的浸膏得率，通过hplc测定芦丁和芍药苷的含量，结果见表2。表2提取时间的考察结果显示，随着提取时间增加，浸膏得率提高，芦丁和芍药苷的含量在提取1h和1.5h时含量最高，提取时间过长含量又下降了，综合考虑，我们拟选择提取时间为1h、1.5h、2h3个水平进行下一步水提工艺正交试验。2.正交试验从众多影响水提工艺的因素中选取提取次数、提取时间和加水量3个因素，根据所述的初步工艺条件筛选，选择3因素3水平的正交试验设计，以浸膏得率、芦丁和芍药苷含量为指标，筛选出最佳的工艺条件。实验方法：共分为9组，每组按重量百分比称取萱草花55％、郁金23％、生白芍22％3味药材，共60g，按表3的因素水平表设定工艺条件，合并滤液，减压浓缩蒸干，记录浸膏得率，并通过hplc测定芦丁和芍药苷的含量。表3水提工艺因素水平表表4水提工艺正交试验表1)以浸膏得率为指标对正交试验的结果进行分析，结果见表5。表5水提工艺正交试验分析(以浸膏得率为指标)结果显示，以浸膏得率为指标进行方差分析，因素c(提取次数)即提取次数有显著性差异，应选择c3。提取次数>加水倍数>提取时间，最佳工艺为a3b3c3。此外，为进一步考察提取工艺的合理性，选择芦丁和芍药苷为指标性成分，以其含量进行方差分析。2)以芦丁含量为指标对正交试验的结果进行分析，结果见表6。表6水提工艺正交试验分析(以芦丁含量为指标)结果显示，以芦丁含量为指标进行方差分析，a、b、c3个因素均无显著性差异。3)以芍药苷含量为指标对正交试验的结果进行分析，结果见表7。表7水提工艺正交试验分析(以芍药苷含量为指标)结果显示，以芍药苷含量为指标进行方差分析，a、b、c3个因素均无显著性差异。综合以上结果，将最佳水提工艺确定为：a3b3c3，即提取3次，每次2h，两次均加10倍量水。3.水提工艺验证验证实验:按重量百分比称取萱草花55％、郁金23％、生白芍22％3味药材，共60g，2份，加入10倍量水，浸润1h后，煎煮2h，过滤；滤渣加入10倍量水，煎煮2h，过滤；滤渣再加入10倍量水，煎煮2h，过滤，合并3次滤液，减压浓缩蒸干得浸膏。表8正交最佳水提工艺与原工艺比较结果验证工艺与正交工艺相吻合，确定水提工艺为：提取3次，每次2h，每次加水10倍量。(三)醇沉工艺的确定影响醇沉工艺的因素有很多，诸如初膏比重、醇沉浓度、静置时间等。醇沉工艺的初膏浓度我们认为控制在1.05～1.15，比重太低耗用乙醇量多，生产成本高、效率低，太高则有关成分损失严重；醇沉工艺的含醇量我们认为控制在60％～80％，在该浓度范围内可除去淀粉、树胶、粘液质、叶绿素等杂质；醇沉静置时间根据沉淀形成的难易略有不同，从16h(即静置过夜)至24h不等。1.正交试验我们采用正交试验筛选最佳醇沉工艺，以浸膏得率和芦丁和芍药苷含量为考查指标，选择三因素三水平的正交试验，正交设计见表9、10。表9醇沉工艺因素水平表表10醇沉工艺正交试验表1)以浸膏得率为指标对正交试验的结果进行分析，结果见表11。表11醇沉工艺正交试验结果(以浸膏得率为指标)结果显示，以浸膏得率为指标进行方差分析，仅b因素有显著性差异，按浸膏得率高的组合选择工艺参数，应选择b1(a1或a2或a3)(c1或c2或c3)，即提取浓缩至密度比为1.05，醇沉浓度为60％～70％，静置时间为16～24h。2)以芦丁含量为指标对正交试验的结果进行分析，结果见表12。表12醇沉工艺正交试验结果(以芦丁含量为指标)结果显示，以芦丁含量为指标进行方差分析，b因素有显著性差异，a、c因素有差异，按芦丁含量高的组合选择工艺参数，应选择b1a2c1，即提取浓缩至密度比为1.05，醇沉浓度为65％，静置时间为16h。3)以芍药苷含量为指标对正交试验的结果进行分析，结果见表13。表13醇沉工艺正交试验结果(以芍药苷含量为指标)结果显示，以芍药苷含量为指标进行方差分析，b因素有显著性差异，a、c因素有差异，按芍药苷含量高的组合选择工艺参数，应选择b1a2c1，即提取浓缩至密度比为1.05，醇沉浓度为65％，静置时间为16h。综合以上结果，将最佳醇沉工艺确定为：醇沉浓度为65％，初膏密度为1.05，静置时间为16h。2.验证试验及与原工艺比较验证试验：按重量百分比称取萱草花55％、郁金23％、生白芍22％3味药材，共60g，2份，加入10倍量水，浸润1h后，煎煮2h，过滤；滤渣加入10倍量水，煎煮2h，过滤；滤渣再加入10倍量水，煎煮2h，过滤，合并3次滤液，减压浓缩至稠浸膏(密度比为1.05)，缓慢加入95％乙醇354ml，边加边搅拌，冷藏静置16h，过滤，减压回收乙醇，70度真空干燥得干浸膏。表14正交最佳醇沉工艺与原工艺比较结果验证试验结果优于正交试验中的最好工艺，因此，将生产工艺确定为：按处方量称取药材，加入10倍量水，浸润1h后，煎煮2h，过滤；滤渣加入10倍量水煎煮2h，过滤；滤渣再加入10倍量水煎煮2h，过滤；合并3次滤液，减压浓缩至密度比为1.05的浸膏，缓慢加入2.8倍体积的95％乙醇，边加边搅拌，至醇浓度为65％，冷藏静置16小时，取上清液，减压回收乙醇，70度真空干燥得干浸膏。取6克清膏加入糊精16克(清膏与糊精的比例为3:8)，混匀，制粒，烘干，制成颗粒，即得。规格为15-20克。实施例2不同提取物的药效试验根据市科委子课题任务要求，本实验根据中药组合物(解郁ii号)不同提取工艺，分为空白对照组、水提法组、水提醇沉法一组、水提醇沉法二组、水提醇沉法三组、50％醇提组、盐酸氟西汀组等组，采取小鼠强迫游泳实验进行研究，统计对照比较实验结果。一、药物的制备1中药组方和制备方法：解郁ii号样品由上海医药工业研究院中药研究室提供，分别为水提200g生药、水提醇沉200g生药一、水提醇沉200g生药二、水提醇沉200g生药三、50％醇提200g生药提取物。各提取物制备方法如下：水提200g生药：按以下重量份称取药材，萱草花55份，郁金23份，生白芍22份。加入10倍量水，浸润1h后，煎煮2h，过滤；滤渣加入10倍量水煎煮2h，过滤；滤渣再加入10倍量水煎煮2h，过滤；合并3次滤液，减压浓缩至密度比为1.05的浸膏。水提醇沉200g生药一：按以下重量份称取药材，萱草花55份，郁金23份，生白芍22份。加入10倍量水，文火煎煮，煮沸1小时后稍冷却过滤，再加6倍量水进行第二次煎煮，再冷却过滤，合并二次滤液并浓缩至470ml，用梯度递增方法逐步加入2193ml85％乙醇使之含醇量达70％，冷藏静置24小时，过滤浓缩至115ml，回收乙醇备用，真空干燥得干浸膏。水提醇沉200g生药二：按以下重量份称取药材，萱草花55份，郁金23份，生白芍22份。加入10倍量水，浸润2h后，煎煮2h，过滤；滤渣加入10倍量水煎煮2h，过滤；滤渣再加入10倍量水煎煮2h，过滤；滤渣再加入10倍量水煎煮2h，过滤；合并4次滤液，减压浓缩至密度比为1.05的浸膏，缓慢加入95％乙醇，边加边搅拌，至醇浓度为65％，冷藏静置16小时，取上清液，减压回收乙醇，70度真空干燥得干浸膏。水提醇沉200g生药三：按以下重量份称取药材，萱草花55份，郁金23份，生白芍22份。加入10倍量水，浸润1h后，煎煮2h，过滤；滤渣加入10倍量水煎煮2h，过滤；滤渣再加入10倍量水煎煮2h，过滤；合并3次滤液，减压浓缩至密度比为1.05的浸膏，缓慢加入95％乙醇，边加边搅拌，至醇浓度为65％，冷藏静置16小时，取上清液，70度减压回收乙醇，真空干燥得干浸膏。50％醇提200g生药：按以下重量份称取药材，萱草花55份，郁金23份，生白芍22份。加入50％乙醇浸润2h后，回流提取2h，共提取3次，过滤，合并3次滤液，减压回收乙醇，真空干燥得干浸膏。2西药或成药配制方法：盐酸氟西汀：取礼来苏州制药有限公司生产的盐酸氟西汀胶囊(每粒含20mg)2粒。加入40ml生理盐水溶解，待溶解完全并定容至40ml。即1mg/ml。二、实验动物昆明种，雄性小鼠，20.5-24.5g，spf级，由上海杰思捷实验动物有限公司提供。三、实验设组1空白对照组：按0.4ml蒸馏水/20g小鼠。2水提法组：60g生药/kg小鼠。3水提醇沉法一组：60g生药/kg小鼠。4水提醇沉法二组：60g生药/kg小鼠。5水提醇沉法三组：60g生药/kg小鼠。650％醇提组：60g生药/kg小鼠。7西药对照组：按0.4ml盐酸氟西汀/20g小鼠。四、实验方法1空白对照组：每日定时15:00按0.4ml蒸馏水/20g小鼠灌胃1次，连续灌胃7d，第8天灌胃后60min进行强迫游泳实验。2水提法组：60g生药/kg小鼠，每日定时15:00给小鼠灌胃1次，连续给药7d，第8天灌胃后60min进行测定。3水提醇沉法一组：60g生药/kg小鼠，每日定时15:00给小鼠灌胃1次，连续给药7d，第8天灌胃后60min进行测定。4水提醇沉法二组：60g生药/kg小鼠，每日定时15:00给小鼠灌胃1次，连续给药7d，第8天灌胃后60min进行测定。5水提醇沉法三组：60g生药/kg小鼠，每日定时15:00给小鼠灌胃1次，连续给药7d，第8天灌胃后60min进行测定。650％醇提组：60g生药/kg小鼠，每日定时15:00给小鼠灌胃1次，连续给药7d，第8天灌胃后60min进行测定。7西药对照组：每日定时按0.4ml盐酸氟西汀/20g给小鼠灌胃1次，连续给药7d，第8天14:30-15:30给小鼠灌胃后60min进行测定。适应性饲养：小鼠进入实验室适应性饲养3天后，随机分组，开始灌胃给药；预游训练：小鼠于测试前一天，用强迫游泳法对小鼠进行预游训练；强迫游泳法检测：第8天分批给药60分钟后进行实验，5只/批，7min/批灌胃时间。实验使用圆柱形容器，水温23℃-25℃，液面高度25cm。实验时，将小鼠置于容器中进行强迫游泳，共观察7min，其中，适应2min，记录后5min内小鼠累计不动时间(即小鼠除了为避免没入水中而向上的运动外而无其它行为的时间)。五、实验结果采用spss18.0统计软件lsd法做方差分析统计比较试验药物各时间段的活动差异。实验结果见表15。表15各组小鼠5min累计不动时间组别动物数5min累计不动时间(s)空白对照组11141.5±17.8#水提法组11128.1±21.1#水提醇沉法一组1288.4±15.3*#水提醇沉法二组1080.7±14.4*#水提醇沉法三组1058.3±17.1*醇提法组1293.0±15.9*#西药1276.5±15.2*#注：与空白对照组比较，*p＜0.05；与水提醇沉法三组比较，#p＜0.05。结果提示：各药物组与空白对照组比较，除了水提法组，其他各组统计差异显著(p<0.05)；与水提醇沉法三组比较，各组统计差异均显著(p<0.05)。以上结果说明，本发明的中药提取方法步骤设计合理，实验参数选择恰当，能够有效提取出多种和大量有效成分，能够显著减少强迫游泳的5min累计不动时间，效果显著优于其他提取方法，取得了预料不到的技术效果。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。当前第1页12