本发明涉及茶皂苷的应用，特别涉及一种茶皂苷硒配合物、茶皂苷硒纳米颗粒及其制备方法和应用。
背景技术
在人体的代谢过程中，由于电荷的转移，不断地有化合物分子中的共价键发生均裂，使外层轨道具有不配对电子，从而产生自由基，如羟自由基(·oh)和超氧阴离子自由基(o2-·)。机体内产生的自由基具有强氧化性，过量的自由基严重损害机体的组织和细胞，进而引起慢性疾病和衰老。天然产物中多含丰富的皂苷、黄酮、多糖等成分，具有清除体外自由基的功效，但大部分成分机体吸收差、不稳定，体内活性效果不佳。
茶皂苷是茶籽中一种主要的五环三萜化合物，由糖体、配体和有机酸组成。茶皂苷具有较强的抗氧化性，能够较好的清除活性氧自由基，因此具有抗衰老作用。但茶皂苷的分子量较大，不易吸收，且体内易降解，稳定性较差。
硒是一种人体必需的微量元素，是人体中谷胱甘肽过氧化物酶和硒-p蛋白的重要组成部分，在体内起着平衡氧化还原势态的作用，因此硒具有一定的抗氧化和抗衰老作用。相比于无机硒，有机硒具有更高的生物利用度和生物活性、更低的生物毒性等特点，但是天然的有机硒化合物非常少。
技术实现要素：
为了克服现有技术的上述缺点与不足，本发明的目的之一在于提供一种茶皂苷硒配合物，能够有效地降低无机硒的生物毒性，发挥茶皂苷和硒的协同作用，提高抗氧化和自由基清除能力。
本发明的目的之二在于提供包含上述茶皂苷硒配合物的茶皂苷硒纳米颗粒，水溶性好，易吸收，生物利用度高。
本发明的目的之三在于提供上述茶皂苷硒纳米颗粒的制备方法，制备工艺简单，反应条件温和，便于工业化生产。
本发明的目的之四在于提供上述茶皂苷硒纳米颗粒的应用。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种茶皂苷硒配合物，具有如下结构：
式中，n＝3～50。
一种包含权利要求1所述的茶皂苷硒配合物的茶皂苷硒纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
(1)茶皂苷加入其质量15～30倍水溶解，再加入葡萄糖淀粉酶，35～55℃保温4～12h；静置分层，收集沉淀物；
(2)沉淀物用乙醇水溶液溶解，加入沉淀物质量2～5％的二氧化硒乙醇溶液和5～20％的聚乙二醇，60～70℃反应6～8h；
(3)减压浓缩蒸出乙醇，过0.22～0.45μm的滤膜，冷冻干燥，得到茶皂苷硒纳米颗粒。
步骤(1)所述葡萄糖淀粉酶的加入量为每100克茶皂苷加入500～5000u的葡萄糖淀粉酶。
步骤(2)所述乙醇水溶液的体积分数为70～85％，加入量为与沉淀物的液固比为(10～20)ml/g。
步骤(2)所述聚乙二醇的分子量为400～6500da。
所述的二氧化硒乙醇溶液中的质量分数为10～20％。
步骤(3)所述减压浓缩的条件为0.01～0.1mpa，温度50～70℃，时间1～3h。
所述的茶皂苷硒纳米颗粒的制备方法制备得到的茶皂苷硒纳米颗粒。
所述的茶皂苷硒纳米颗粒的应用，用于制备清除体内自由基的抗衰老药物。
所述抗衰老药物剂型为口服或注射用药剂型。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
(1)本发明通过生物酶法水解茶皂苷，得到去除了糖基的小分子量皂苷，使其生物活性进一步增强。
(2)本发明的茶皂苷有机硒，能够有效地降低无机硒的生物毒性，发挥茶皂苷和硒的协同作用，提高抗氧化和自由基清除能力。
(3)本发明的茶皂苷有机硒纳米颗粒水溶性好，易吸收，生物利用度高。
(4)本发明的制备工艺简单，反应条件温和，便于工业化生产。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
(1)取1kg茶皂苷加入15kg水溶解，再加入活性单位5000u的葡萄糖淀粉酶，35℃保温12h；静置分层，收集沉淀；
(2)取沉淀物100g用1l体积分数70％的乙醇水溶液溶解，加入2g质量分数为20％的二氧化硒乙醇溶液和5g聚乙二醇(1200da，n≈9)，60℃反应8h；
(3)在0.1mpa，温度70℃下减压浓缩1h蒸出乙醇，过0.22μm的滤膜，冷冻干燥，得到茶皂苷硒纳米颗粒105g。
实施例2
(1)取1kg茶皂苷加入30kg水溶解，再加入活性单位50000u的葡萄糖淀粉酶，55℃保温4h；静置分层，收集沉淀；
(2)取沉淀物100g用2l体积分数85％的乙醇水溶液溶解，加入5g质量分数为10％的二氧化硒乙醇溶液和20g聚乙二醇(650da，n≈5)，60℃反应6h；
(3)在0.01mpa，温度50℃下减压浓缩3h蒸出乙醇，过0.45μm的滤膜，冷冻干燥，得到茶皂苷硒纳米颗粒119g。
实施例3
(1)取1kg茶皂苷加入20kg水溶解，再加入活性单位10000u的葡萄糖淀粉酶，45℃保温6h；静置分层，收集沉淀；
(2)取沉淀物100g用1.5l体积分数75％的乙醇水溶液溶解，加入3g质量分数为15％的二氧化硒乙醇溶液和10g聚乙二醇(2000da，n≈15)，65℃回流反应7h；
(3)在0.05mpa，温度60℃下减压浓缩2h蒸出乙醇，过0.35μm的滤膜，冷冻干燥，得到茶皂苷硒纳米颗粒108g。
实施例4
(1)取1kg茶皂苷加入16kg水溶解，再加入活性单位8000u的葡萄糖淀粉酶，40℃保温10h；静置分层，收集沉淀；
(2)取沉淀物100g用1.4l体积分数80％的乙醇水溶液溶解，加入4g质量分数为16％的二氧化硒乙醇溶液和12g聚乙二醇(400da，n≈3)，65℃反应7h；
(3)在0.06mpa，温度65℃下减压浓缩1.5h蒸出乙醇，过0.4μm的滤膜，冷冻干燥，得到茶皂苷硒纳米颗粒110g。
实施例5
(1)取1kg茶皂苷加入25kg水溶解，再加入活性单位40000u的葡萄糖淀粉酶，40℃保温8h；静置分层，收集沉淀；
(2)取沉淀物100g用1.8l体积分数75％的乙醇水溶液溶解，加入3g质量分数为14％的二氧化硒乙醇溶液和8g聚乙二醇(4000da，n≈30)，67℃反应7.5h；
(3)在0.02mpa，温度55℃下减压浓缩2.5h蒸出乙醇，过0.3μm的滤膜，冷冻干燥，得到茶皂苷硒纳米颗粒107g。
实施例6
(1)取1kg茶皂苷加入18kg水溶解，再加入活性单位20000u的葡萄糖淀粉酶，45℃保温7h；静置分层，收集沉淀；
(2)取沉淀物100g用1.6l体积分数77％的乙醇水溶液溶解，加入3.5g质量分数为16％的二氧化硒乙醇溶液和14g聚乙二醇(6500da，n≈50)，70℃反应6.5h；
(3)在0.03mpa，温度65℃下减压浓缩2h蒸出乙醇，过0.22μm的滤膜，冷冻干燥，得到茶皂苷硒纳米颗粒113g。
实施例7
取实施例1～6的茶皂苷硒纳米颗粒10g，与淀粉、乳糖、结晶纤维素按7:2:1混合物30g、1％硬脂酸镁混合均匀，经压片机制成片剂。
实施例8
取实施例1～6制得的茶皂苷硒纳米颗粒10g，加入药用淀粉30g，混合均匀，湿法制粒，用乙醇调节，制得颗粒松散过20目筛，晾干。干燥后填充胶囊，即得油茶皂苷元衍生物的胶囊剂。
测试1
实施例1～6制得的茶皂苷硒纳米颗粒的粒径及结构表征
方法：实施例1～6制得的茶皂苷硒纳米颗粒经水分散后，用马尔文纳米粒度仪测定其粒径；用dmso为溶剂配成1mg/ml的样液，采用紫外分光光度仪扫描；制备kbr薄片，进行红外光谱扫描；对各组成元素进行分析。
结果：实施例1～6制得的茶皂苷硒纳米颗粒平均粒径分别为152nm、213nm、168nm、154nm、175nm、183nm。紫外扫描显示，茶皂苷的特征峰发生红移；红外光谱显示，配位物的醛基峰(1721cm-1)消失，并在723cm-1新增一个宽峰，该峰为硒与氧成键的伸缩振动峰，说明se4+与油茶皂苷的醛基发生了配位反应。元素分析结果表明，茶皂苷和硒原子及聚乙二醇的配比为2:1:2，具有如下结构：
式中，n＝3～50。
测试2
取实施例1～6的茶皂苷硒纳米颗粒10g，用多乙氧基醚1000ml溶解后，灌入小瓶，制成注射针剂。
本发明的茶皂苷硒纳米颗粒具有显著抗衰老作用，通过以下实验得以证实：
茶皂苷硒纳米颗粒的对衰老小鼠的抗氧化作用实验：
方法：取110只小鼠，体重(20±2)g，随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(ve)、实施例1茶皂苷硒纳米颗粒高低剂量组、实施例2～6茶皂苷硒纳米颗粒组、油茶皂苷组，每组10只。各实验组灌胃相应药物，给药同时，模型组和药物组小鼠每天颈背部皮下注射5％d-半乳糖0.5ml(160mg/kg)，对照组注射等量生理盐水，造模6周后，眼眶取血，脱颈椎致死后，分离肝脏和脑组织，按测试剂盒操作方法测定和计算血清和组织sod活力和mda含量。
结果：d-半乳糖所致衰老模型小鼠血清、肝脏及脑组织中mda含量明显升高，自由基相关清除酶sod的活性下降。实施例1～6茶皂苷硒纳米颗粒能明显降低衰老小鼠血清、肝脏及脑组织中脂质过氧化物的代谢终产物mda，而sod的活性升高，明显优于茶皂苷组，且有剂量依赖性。茶皂苷硒纳米颗粒的上述作用，表明其增强了机体的抗氧化功能，具有抗衰老作用。结果见表1和表2。
表1茶皂苷硒纳米颗粒对衰老小鼠血清、肝脏和脑中mda含量的影响(
表2茶皂苷硒纳米颗粒对衰老小鼠血清、肝脏和脑中sod活性的影响(
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受所述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。