本发明属于水产养殖疾病治疗药物领域，具体地涉及一种南美白对虾防治细菌性疾病的组合物及使用方法。
背景技术：
南美白对虾，学名凡纳滨对虾，目前是世界上养殖产量最高的甲壳类养殖品种，它具有生长速度快、抗病能力强、出肉率高等特点，具有极高的养殖经济价值。南美白对虾于1988年引入我国后迅速遍及全国。自2001年以来，我国凡纳滨对虾的养殖面积及产量一直居于对虾养殖的首位。1990-2010年，世界南美白对虾养殖产量由10万吨增长到270万吨，年均增长达135％。但自2010年起，在南美白对虾养殖过程中，病害发生频繁，成活率低，甚至出现绝收现象，对养殖造成严重的经济损失。其中，对虾急性肝胰腺坏死病(ahpnd)，又称“偷死病”，是一种新发的主要病害。该病致死率高，据统计，2011年的对虾养殖主产区产量降低了约80％，2011-2013年间给我国对虾养殖业造成的损失不可估量，每年因ahpnd疾病减产导致利润降低10亿美元。在ahpnd病源研究方法，2013年lightnerdv等报道并确认ahpnd的致病原是ahpnd副溶血弧菌(vibrioparahaemolyticus)。自此，弧菌感染成为主流学说。何建国等研究表明ahpnd由副溶血弧菌、溶藻弧菌等综合细菌引起。据姜燕报道，自2012-2016年间多次前往多家患ahpnd南美白对虾养殖场进行流行病学和病原学研究，发现该病的病原具有多样性，共筛选出6株致病性细菌：副溶血弧菌(vibrioparahaemolyticus)、嗜水气单胞菌(aeromonashydrophila)、哈维氏弧菌(vibrioharveyi)、vibrio.sp.ex-25、麦氏弧菌(vibriometschnikovii)、溶藻弧菌(vibrioalginolyticus)。由于我国海岸线漫长、养殖环境复杂，该病的致病原具有多样性的特点。ahpnd以暴发性肝胰腺坏死为主要特征的传染病，患病对虾活力减弱、体色发红、壳软、空肠空胃、肝胰腺变为红褐色或者苍白、肿大、少数患病对虾的肝胰腺出现萎缩。ahpnd发病迅速，死亡率和排塘率高，4～5天死亡率可达90％以上。由于ahpnd病期短、致死率高，使用常规药物治疗效果不明显。目前还没有效果显著的治疗方法，主要以使用广谱性抗生素进行预防，控制养殖水环境中的弧菌数量，降低养殖对虾患病几率。另外，据报道一些中药可以显著提高南美白对虾机体免疫力，对ahpnd的防治具有效果，主要包括适当使用大蒜素、大黄、黄连和板蓝根等。据姜燕报道，适宜浓度的复合中草药地榆、诃子、黄连和乌梅的复方对南美白对虾的ahpnd病原菌有显著抑菌效果。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题在于提供一种防治南美白对虾“偷死病”的天然草药精油，包括几种精油分别提取后通过比例配方添加成为混合精油，以及几种不同原料，如来源不同的中草药混合，同步提取得到含有不同量的混合精油。该精油配方解决了中药在水产上不易吸收和使用不便的问题，具有显著的抑菌、杀菌效果，对虾体毒性小，操作简单，并建立了精油制作工艺、与粘合剂包埋的饲喂等一体化治疗配套技术和使用规范。
本发明是通过如下技术方案来实现的：
一种防治南美白对虾细菌性疾病的组合物，所述组合物中的成分及体积比为食用油：桉叶精油：牛至精油：百里香精油＝90：5：3：2。
优选的，混合精油通过以下原料按体积百分比配制而成：每100ml组合物中含有食用油90毫升、桉叶精油5毫升，牛至精油3毫升，百里香精油2毫升。
上述组合物的使用方法为，取200毫升水，放入0.9～1.2克瓜尔胶均匀混合，滴入上述组合物3～5毫升，同时均匀搅拌，拌入1千克饲料，搅拌均匀后晾晒20-60min，然后再投入养殖水体中。
上述方法能够使组合物黏附在饲料上，并在进入养殖水体后短时间内不会扩散，确保组合物的使用效果。
本发明与现有技术相比的有益效果：
本发明组合物为天然成分，预防和抑制疾病，降低病原体水平，减少水生生物的疾病发病率，提高宿主生物的对致病菌免疫能力。该技术通过将中药成分萃取为精油，然后做成复合配方解决了中药有效成分无法直接定量使用和使用不便的问题，如通常中药制剂需要浸泡、加热、熬制、过滤等程序；并建立了与粘合剂包埋的饲喂方式，该技术减少常规药物溶于水直接喷洒于饲料表面的由于药物弥散导致的药效减少问题，并且精油混合的复方抑菌效果均显著优于单方。同时复合配方可以提高饲料的适口性和诱食性，起到提高养殖生物的存活率和生长率的作用。
本发明通过对于早期发病的养殖对虾进行养殖试验，其治愈率达到90％以上。因此，本发明突破了“偷死病”难以治愈的养殖瓶颈；推广应用后可有效降低发病率，无毒无害，避免在养殖过程中使用化学制剂、生物激素和抗生素等。
具体实施方式
实施例1
选用抑菌圈法和微量二倍稀释法从30种广谱抑菌中草药对患急性肝胰腺坏死病南美白对虾的肝胰腺中分离、纯化重要致病菌：弧菌类(vibrioparahaeolyticus、v.alginolyticus、v.harveyi、v.marinus、v.anguillarum)、气单胞菌类(aeromonashydrophila、a.formicans)和假单胞菌类(pseudomonasfluorescene、p.putida)，进行体外抑菌效果实验，结果显示，在抑菌圈大小、平均抑菌浓度和平均杀菌浓度值方面，桉树叶、牛至、百里香三味单方中草药的抑菌效果最好，并且三者最佳体积比为5：3：2。
利用桉树叶、牛至、百里香三味中药，采取水蒸馏法分别提取桉叶精油、牛至精油、百里香精油，并对提炼出的桉叶精油、牛至精油、百里香精油单方和复方采用抑菌圈法进行了对南美白对虾ahpnd副溶血弧菌(vibrioparahaemolyticus)的抑菌实验，研究结果证明，三种精油的复方均显著优于单方和两种精油的复方，三种精油的复方抑菌圈直径最大达到25.2mm(实验结果如表1所示)。
选取暂养10天后的来自一对南美白对虾亲虾的后代400尾(体表无伤，活力旺盛，平均体重为5.0g左右)，随机分成8组，50尾/组。对凡纳滨对虾的安全性、生长性能等进行研究。按单方或复方精油与食用大豆油按照1：10的体积比例混合均匀。然后均匀混合在饲料的表面，每公斤饲料，取200毫升无菌水放入0.8g瓜尔胶均匀混合，滴入上述精油配方4毫升，同时搅拌均匀。喷洒的饲料表面，用手均匀混合，使其黏合在饲料的表面。在空气中晾干30分钟，然后正常投入实验养殖虾桶。实验期间，每日08:00、20:00分别投喂药料一次，日投喂量占对虾体重的10％左右。根据对虾昼伏夜出的习性，每日08:00换水一次，根据对虾摄食情况和水体浑浊状态换水，日换水量为10％～20％。吸底工作在换水前进行。养殖用水为天然海水，水温为25～30℃，盐度30，溶解氧5～6mg/l，氨氮<0.5mg/l，亚硝酸盐氮<0.1mg/l。给药后连续观察，每天记录对虾体色、摄食、游动等生长状态。经过30天的养殖后，不同组凡纳滨对虾的生长、存活情况如表1所示(其中相对平均增重率为养殖30天后每组实验的每尾虾的平均体重减去每组实验开始时的每尾虾的平均体重，再除以每组实验开始时的每尾虾的平均体重)。确定该复方安全无毒，并可以提高南美白对虾的存活率和生长率的作用。
表1精油对凡纳滨对虾的抑菌性、安全性、生长性能测试结果
实施例2
一种防治南美白对虾白斑综合征病毒的组合物，包括桉叶精油，牛至精油和百里香精油，其体积百分比比例是食用大豆油：桉叶精油：牛至精油：百里香精油＝90：5：3：2。
本是实施例采用优选的技术方案，混合精油按每100ml：大豆油90毫升、桉叶精油5毫升，牛至精油3毫升，百里香精油2毫升。
上述组合物的使用方法为，取200毫升水，放入1.2克瓜尔胶均匀混合，滴入上述混合精油5毫升，同时均匀搅拌，拌入1千克饲料，搅拌均匀后晾晒50min，然后再投入养殖水体中。
上述方法能够使组合物黏附在饲料上，并在进入养殖水体后短时间内不会扩散，确保组合物的使用效果。
应用例
先后在30余家南美白对虾养殖企业进行了临床防治中试，临床应用显示：在疾病流行期间的预防效果良好，基本杜绝疾病的暴发；对于早期发病的养殖单元，其治愈率达到90％以上，对虾养殖成活率显著提高。其中，高位池单茬产量1000kg/亩以上，传统室外池塘单产500kg/亩以上，室内工厂化单茬产量10kg/m3以上。该套防治技术方法实用性强、临床防治效果好，突破了“偷死病”难以治愈的瓶颈；推广应用后可有效降低发病率、临床治愈率高。