本发明属于药物技术领域，具体涉及丹酚酸类成分在制备提高蛋白结合型尿毒素透析率及滤过率制剂中的应用。
背景技术：
终末期肾病患者的肾功能出现严重障碍，无法有效清除体内的代谢废物，导致超过90种尿毒素在患者体内蓄积。蓄积的尿毒素会诱发骨病、脑病、心血管疾病、贫血症、软组织钙化、免疫反应异常等并发症。降低患者体内的尿毒素水平可以显著改善肾病患者的治疗效果。尿毒素主要包括小分子尿毒素(分子量<500da)、蛋白结合型小分子尿毒素(分子量<500da)以及中分子尿毒素(分子量>500da)。现在临床常用的透析(包括血液透析和腹膜透析)以及血液滤过等体外肾脏替代治疗策略能有效清除小分子尿毒素，也能清除中分子尿毒素，却不能清除蛋白结合型小分子尿毒素。因为不管是血液透析和血液滤过中采用的人工合成半透膜还是腹膜透析中采用的病人自身腹膜，都只能让血液循环中游离型的尿毒素通过，而蛋白结合型尿毒素由于游离型存在比例很少，透析效率和滤过效率均很低下。
降低蛋白结合型尿毒素水平能显著提高临床透析效果及滤过效果，而清除蛋白结合型尿毒素是当前透析技术及滤过技术面临的最大挑战。
技术实现要素：
发明目的：本发明的目的是克服现有技术的不足，通过大量实验筛选，提供一种能提高蛋白结合型尿毒素透析效率及滤过效率的丹酚酸类成分以及含丹酚酸类成分的中药或中药复方，丹酚酸类成分能通过与蛋白结合型尿毒素竞争蛋白结合位点，增加蛋白结合型尿毒素的游离型比例，从而提高蛋白结合型尿毒素的透析效率及滤过效率，可以提高肾病患者的临床治愈效率。
技术方案：为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
丹酚酸类成分在制备提高蛋白结合型尿毒素透析率及滤过率制剂中的应用。
作为优选方案，以上所述的丹酚酸类成分在制备提高蛋白结合型尿毒素透析率及滤过率制剂中的应用，所述的丹酚酸类成分包括含丹参的药物制剂、含丹参和红花的药物制剂、不同配伍比例的丹参和红花药对。
作为优选方案，以上所述的丹酚酸类成分在制备提高蛋白结合型尿毒素透析率及滤过率制剂中的应用，所述的丹酚酸类成分包括丹红注射液、丹参滴丸。
作为优选方案，以上所述的丹酚酸类成分在制备提高蛋白结合型尿毒素透析率及滤过率制剂中的应用，所述的丹酚酸类成分包括紫草酸、丹酚酸a、丹参素、咖啡酸、丹酚酸b、丹酚酸c、丹酚酸d、丹酚酸e、原儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸等丹酚酸类成分。特别优选丹酚酸b、原儿茶醛和迷迭香酸。
作为优选方案，以上所述的丹酚酸类成分在制备提高蛋白结合型尿毒素透析率及滤过率制剂中的应用，蛋白结合型尿毒素包含硫酸吲哚酚、硫酸对甲酚、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸、2-甲氧基间苯二酚、3-脱氧葡糖醛酮、乙二醛、甲基乙二醛、对甲酸、苯酚、赖氨酸、果糖赖氨酸、马尿酸、对羟基马尿酸、犬尿氨酸、犬尿烯酸、高半胱氨酸、戊糖素、腐胺、精胺、亚精胺等蛋白结合型小分子尿毒素。特别优选硫酸吲哚酚和硫酸对甲酚。
丹酚酸类成分在制备提高血液透析、腹膜透析、血液滤过治疗过程中蛋白结合型尿毒素透析率及滤过率制剂中的应用。
有益效果：本发明与现有技术相比具有如下优点：
本发明通过大量实验筛选，实验结果发现，丹红注射液或丹酚酸类等成分均能显著提高蛋白结合型尿毒素的透析效率和滤过效率，能够显著提高血液透析、腹膜透析等临床常用的透析方法以及血液滤过等体外肾脏替代治疗效果。可开发为肾病透析的辅助药物制剂。
附图说明
图1为丹红注射液提高蛋白结合型硫酸吲哚酚和硫酸对甲酚透析效率的柱状图。
图2为丹酚酸类成分提高蛋白结合型硫酸吲哚酚和硫酸对甲酚透析效率的柱状图。
图3为丹红注射液提高蛋白结合型硫酸吲哚酚和硫酸对甲酚滤过效率的柱状图。
图4为丹酚酸类成分提高蛋白结合型硫酸吲哚酚和硫酸对甲酚滤过效率的柱状图。
具体实施方式
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1丹红注射液显著提高蛋白结合型尿毒素的透析效率
1.实验方法
1.1样品制备方法
标准样品的制备：精密称取硫酸吲哚酚(is)和硫酸对甲酚(pcs)标准品，用200μl超纯水溶解，配制is和pcs浓度均为50μg/ml的标准品溶液。
对照样品的制备：取大鼠血浆样品165μl，加is水溶液10μl和pcs水溶液5μl，涡旋30s充分混匀后室温下静置30min，加入超纯水20μl，涡旋30s充分混匀。透析液总体积为200μl，其中is和pcs的浓度均为50μg/ml。
丹红注射液样品制备：取大鼠血浆样品165μl，加is水溶液10μl和pcs水溶液5μl，涡旋30s充分混匀后室温下静置30min，加入不同浓度的丹红注射液(丹红注射液原液、丹红注射液稀释2倍、丹红注射液稀释4倍)各20μl，涡旋30s充分混匀。丹红注射液可以选用济南步长制药有限公司生产的由丹参750g和红花250g制成。
1.2体外微透析方法
微透析系统(配备有分子截留量为15,000da的透析膜；cma,stockholm,sweden)用pbs缓冲液冲洗管路15min，对照样品平衡100min后，每20min收集一次透析液，共收集4次。丹红注射液样品的透析液收集方法与对照样品一致。收集的透析液采用hplc-pda方法定量分析is和pcs的含量。
1.3数据分析方法
采用nonparametricmann-whitneytest分析组间差异性，p<0.05为显著性差异，p<0.01为极显著性差异。is/pcs透析效率(％)＝透析液中is/pcs的仪器响应/标准样品中is/pcs的仪器响应×100％。
is/pcs透析效率提高比例(％)＝(丹红注射液样品的透析效率-对照样品的透析效率)/对照样品的透析效率×100％。
2.实验结果
丹红注射液能显著提高is的透析效率，并且丹红注射液的浓度越高，对is透析的促进作用越强(如图1中a，p<0.01)。低浓度丹红注射液(即丹红注射液稀释40倍)能将is的透析效率提高77.52％，中浓度(即丹红注射液稀释20倍)和高浓度丹红注射液(即丹红注射液稀释10倍)分别能将is的透析效率提高93.79％和99.13％。取得了非常好的技术效果。
丹红注射液对pcs透析显示出同样显著的浓度依赖性促进作用(图1中b，p<0.01)。低浓度丹红注射液(即丹红注射液稀释40倍)能将pcs的透析效率提高78.30％，中浓度(即丹红注射液稀释20倍)和高浓度丹红注射液(即丹红注射液稀释10倍)分别能将pcs的透析效率提高86.33％和142.00％。取得了非常好的技术效果。
实施例2丹酚酸类成分显著提高蛋白结合型尿毒素的透析效率
1.实验方法
1.1样品制备方法
对照样品的制备：取大鼠血浆样品180μl，加is水溶液10μl和pcs水溶液5μl，涡旋30s充分混匀后室温下静置30min，加入超纯水5μl。透析液总体积为200μl，其中is和pcs的浓度均为50μg/ml。
丹酚酸样品制备：取大鼠血浆样品180μl，加is水溶液10μl和pcs水溶液5μl，涡旋30s充分混匀后室温下静置30min，分别加入高浓度(50μg/ml)、中浓度(10μg/ml)、低浓度(5μg/ml)的紫草酸、丹酚酸a、丹参素、咖啡酸、丹酚酸b、丹酚酸c、丹酚酸d、丹酚酸e、原儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸水溶液各5μl(咖啡酸、原儿茶醛和迷迭香酸不溶于纯水，用20％的乙腈水溶液溶解)，涡旋30s充分混匀。透析液总体积为200μl。
1.2体外微透析方法同实施例1中的1.2项；数据分析方法同实施例1中的1.3项。
2.实验结果
酚酸类成分：紫草酸、丹酚酸a、丹参素、咖啡酸、丹酚酸b、丹酚酸c、丹酚酸d、丹酚酸e、原儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸均能显著提高is和pcs的透析效率，其中丹酚酸b和原儿茶醛对is透析的促进作用最强，高浓度丹酚酸b和原儿茶醛(50μg/ml)能将is的透析效率分别提高70.90％和66.50％(图2中a，p<0.01)。而对pcs透析产生促进作用最强的是原儿茶醛和迷迭香酸，高浓度原儿茶醛和迷迭香酸(50μg/ml)能将pcs的透析效率分别提高77.88％和62.87％(图2b，p<0.01)。取得了非常好的技术效果。
实施例3丹红注射液显著提高蛋白结合型尿毒素的滤过效率
1.实验方法
1.1样品制备方法
标准样品的制备：精密称取is和pcs标准品，用200μl超纯水溶解，配制is和pcs浓度均为50μg/ml的标准品溶液。
对照样品的制备：取人混合血浆样品165μl，加is水溶液10μl和pcs水溶液5μl，涡旋30s充分混匀后室温下静置30min，加入超纯水20μl，涡旋30s充分混匀。透析液总体积为200μl，其中is和pcs的浓度均为50μg/ml。
丹红注射液样品制备：取人混合血浆样品165μl，加is水溶液10μl和pcs水溶液5μl，涡旋30s充分混匀后室温下静置30min，加入不同浓度的丹红注射液(丹红注射液原液、丹红注射液稀释2倍、丹红注射液稀释4倍)各20μl，涡旋30s充分混匀。
1.2体外血液滤过方法
血液滤过装置(amiconultra-0.5centrifugalfilterdevices；millipore,darmstadt,germany)用milli-q水浸泡30min，离心(1,4000×g，10s)将水甩干。加入200μl对照样品或者丹红注射液样品(n＝3)，离心(1,4000×g，10min)后收集滤过液，采用hplc-pda方法定量分析滤过液中is和pcs的含量。
1.3数据分析方法
采用nonparametricmann-whitneytest分析组间差异性，p<0.05为显著性差异，p<0.01为极显著性差异。is/pcs滤过效率(％)＝滤过液中is/pcs的仪器响应/标准样品中is/pcs的仪器响应×100％。is/pcs滤过效率提高比例(％)＝(丹红注射液样品的滤过效率-对照样品的滤过效率)/对照样品的滤过效率×100％。
2.实验结果
丹红注射液能显著提高is的滤过效率，并且丹红注射液的浓度越高，对is滤过的促进作用越强(图3中a，p<0.01)。低浓度丹红注射液(即丹红注射液稀释40倍)能将is的滤过效率提高80.92％，中浓度(即丹红注射液稀释20倍)和高浓度丹红注射液(即丹红注射液稀释10倍)分别能将is的滤过效率提高92.10％和124.92％。
丹红注射液对pcs滤过显示出同样显著的浓度依赖性促进作用(图3中b)。低浓度丹红注射液(即丹红注射液稀释40倍)能将pcs的滤过效率提高25.05％，中浓度(即丹红注射液稀释20倍)和高浓度丹红注射液(即丹红注射液稀释10倍)分别能将is的透析效率提高28.23％和104.14％(p<0.01)。
实施例4丹酚酸类成分显著提高蛋白结合型尿毒素的滤过效率
1.实验方法
1.1样品制备方法
对照样品的制备：取人混合血浆样品180μl，加is水溶液10μl和pcs水溶液5μl，涡旋30s充分混匀后室温下静置30min，加入超纯水5μl。透析液总体积为200μl，其中is和pcs的浓度均为50μg/ml。
丹酚酸样品制备：取人混合血浆样品180μl，加is水溶液10μl和pcs水溶液5μl，涡旋30s充分混匀后室温下静置30min，分别加入高浓度(50μg/ml)、中浓度(10μg/ml)、低浓度(5μg/ml)的紫草酸、丹酚酸a、丹参素、咖啡酸、丹酚酸b、丹酚酸c、丹酚酸d、丹酚酸e、原儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸水溶液各20μl(咖啡酸、原儿茶醛和迷迭香酸不溶于纯水，用20％的乙腈水溶液溶解)，涡旋30s充分混匀。透析液总体积为200μl，其中各丹酚酸类成分的高、中、低浓度分别为50、10和5μg/ml。
1.2体外血液滤过方法同实施例3中的1.2项与数据分析方法同实施例3中的1.3项。
2.实验结果
原儿茶醛和迷迭香酸均能显著提高is的滤过效率，并且呈浓度依赖性(图4中a)。低浓度原儿茶醛(5μg/ml)对is滤过无显著影响，中浓度(10μg/ml)和高浓度原儿茶醛(50μg/ml)能将is的滤过效率分别提高3.15％和18.38％(p<0.01)。而迷迭香酸在高浓度下才能显示出对is滤过的促进作用，高浓度迷迭香酸(50μg/ml)能将is的滤过效率提高12.14％(p<0.01)。
并且原儿茶醛和迷迭香酸在高浓度水平下，能显著提高pcs的滤过效率，高浓度原儿茶醛和迷迭香酸(50μg/ml)能将pcs的滤过效率分别提高27.03％(p<0.01)和16.44％(p<0.05)。
本发明以上实验结果表明，丹红注射液和酚酸类等成分能显著提高蛋白结合型尿毒素的临床透析效果及滤过效果，提高蛋白结合型尿毒素的清除效率，降低肾病患者体内尿毒素水平，可以提高肾病患者的生活质量，具有重要的应用前景。