本发明涉及化工医药领域，特别涉及一种脂质体的制备方法。
背景技术：
玉屏风多糖由黄芪多糖、防风多糖和白术多糖等活性多糖组成。据相关研究表明，玉屏风多糖能促使人与动物胸腺、脾脏等免疫器官的生长发育，增强免疫细胞的活性，提高各种疫苗的接种效果以及延迟抗体的持续时间，因此，玉屏风多糖在免疫调节方面有着独特的优势。然而传统的玉屏风多糖制剂存在稳定性差、生物利用度低、易被降解及对细胞穿透力弱等缺点，其包封率普遍低于50％，且通过传统的给药方式进行给药的疗效并不好。现有技术中多通过对玉屏风多糖改性以提高其生物活性从而更好地发挥其药效，然而这些改性的效果并不理想，其工艺复杂，可控性差。因此如何提高玉屏风多糖的生物利用度、稳定性和治疗效果、降低使用剂量，对其玉屏风多糖新制剂的研发具有重大意义。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种玉屏风多糖脂质体的制备方法。
本发明所采取的技术方案是：一种玉屏风多糖脂质体的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)玉屏风多糖纯化：取玉屏风粗多糖溶于蒸馏水，后缓慢倒入树脂柱中，重复多次，再将洗脱剂缓慢倒入树脂柱，然后采用真空抽滤泵使洗脱液流入抽滤瓶中，收集抽滤瓶中的洗脱液，经浓缩、真空干燥，得纯化玉屏风多糖粉末；
2)脂质体配制：将大豆卵磷脂和胆固醇按原料质量比为7:1～9:1共同溶于氯仿溶液中，然后置于转速为60～75r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发处理，待形成一层薄膜后加入乙醚薄膜溶解，得脂质体膜液；
3)玉屏风多糖缓冲液配制：将步骤1)所得纯化玉屏风多糖粉末溶于浓度为4～5mg/ml的磷酸盐缓冲溶液中，得含有玉屏风多糖的磷酸盐缓冲溶液；
4)脂质体制备：将原料质量比为胆固醇的一半的步骤3)所得的含有玉屏风多糖的磷酸盐缓冲溶液加入到步骤2)所得脂质体膜液中，超声混匀处理75～95s，再置于转速为60～75r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发至乙醚全部挥发，置于4℃保存，得玉屏风多糖脂质体。
具体地，本发明中大豆卵磷脂和胆固醇的原料质量比对其最终玉屏风多糖脂质体悬液的包封率有着重要影响，大豆卵磷脂和胆固醇的原料质量比多大或多小均会使得其包封率下降。而本发明中的胆固醇和含有玉屏风多糖的磷酸盐缓冲溶液的原料质量比对其玉屏风多糖脂质体的形成效率有着重要影响，当所述磷酸盐缓冲溶液的添加量为胆固醇的一半时，可使脂质体快速形成。
作为上述方案的进一步改进，步骤1)所述纯化玉屏风多糖粉末的纯度≥80％，其有利于实现较高的生物利用率。
作为上述方案的进一步改进，步骤3)中所述磷酸盐缓冲溶液的ph为7.4，其有利于提高体系的稳定性。
作为上述方案的进一步改进，步骤1)中所述树脂柱中的树脂体积为树脂柱体积的2/3。
作为上述方案的进一步改进，步骤1)中所述洗脱液为质量百分比为50％的乙醇。
作为上述方案的进一步改进，步骤1)中所述真空干燥的时间为12h。
本发明采用如下方法对各项试样的包封率进行测定：
a、校准曲线的制备：以葡聚糖标准品和蒽酮-浓硫酸显色法建立玉屏风多糖校准曲线，并采用蒽酮-浓硫酸显色法测定样品中各项指标的吸光度。根据建立的校准曲线回归方程换算出所需各项指标的质量，从而计算出各测试样的包封率。
b、将制备好的玉屏风多糖脂质体悬液各取10ml分别放入冷冻超速离心机中进行离心(4℃，10000r/min)30min，吸出上清液，用pbs将其定容至50ml。将离心后的沉淀物(包封了玉屏风多糖脂质体)用pbs溶液洗涤干净，并稀释至20ml。用蒽酮-硫酸法测出上清液和沉淀物的吸光率并代入回归方程求得玉屏风多糖的含量，公式为：
包封率(％)＝包封在脂质体中药物含量/加入的药物总量×100％；
或包封率(％)＝加入的药物总量-上清液中药物总量/加入的药物总量×100％。
本发明的有益效果是：本发明采用逆向蒸发法制备玉屏风多糖脂质体，并通过对玉屏风多糖进行前期纯化处理和调整各原料配比及工艺参数，使所得玉屏风多糖脂质体悬液的包封率高达86％以上，且所制备得的玉屏风多糖脂质体具有优异的稳定性和细胞穿透性，从而对提高生物利用率和降低玉屏风多糖使用剂量具有重要的临床意义，进而有效推动玉屏风多糖新制剂的研发。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行具体描述，以便于所属技术领域的人员对本发明的理解。有必要在此特别指出的是，实施例只是用于对本发明做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术熟练人员，根据上述发明内容对本发明作出的非本质性的改进和调整，应仍属于本发明的保护范围。同时下述所提及的原料未详细说明的，均为市售产品；未详细提及的工艺步骤或制备方法为均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。
实施例1
一种玉屏风多糖脂质体的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)玉屏风多糖纯化：取玉屏风粗多糖溶于蒸馏水，后缓慢倒入树脂柱中，其树脂柱中的树脂体积为树脂柱体积的2/3，重复多次，再将50％的乙醇缓慢倒入树脂柱，然后采用真空抽滤泵使洗脱液流入抽滤瓶中，收集抽滤瓶中的洗脱液，经浓缩、真空干燥12h，得纯度≥80％的纯化玉屏风多糖粉末；
2)脂质体配制：将大豆卵磷脂和胆固醇按原料质量比为7:1共同溶于氯仿溶液中，然后置于转速为75r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发处理，待形成一层薄膜后加入乙醚薄膜溶解，得脂质体膜液；
3)玉屏风多糖缓冲液配制：将步骤1)所得纯化玉屏风多糖粉末溶于浓度为5mg/ml的磷酸盐缓冲溶液(ph为7.4)中，得含有玉屏风多糖的磷酸盐缓冲溶液；
4)脂质体制备：将原料质量比为胆固醇的一半的步骤3)所得的含有玉屏风多糖的磷酸盐缓冲溶液加入到步骤2)所得脂质体膜液中，超声混匀处理75s，再置于转速为75r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发至乙醚全部挥发，置于4℃保存，得实施例1玉屏风多糖脂质体。
经测定，实施例1玉屏风多糖脂质体的包封率为87.95％。
实施例2
一种玉屏风多糖脂质体的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)玉屏风多糖纯化：取玉屏风粗多糖溶于蒸馏水，后缓慢倒入树脂柱中，其树脂柱中的树脂体积为树脂柱体积的2/3，重复多次，再将50％的乙醇缓慢倒入树脂柱，然后采用真空抽滤泵使洗脱液流入抽滤瓶中，收集抽滤瓶中的洗脱液，经浓缩、真空干燥12h，得纯度≥80％的纯化玉屏风多糖粉末；
2)脂质体配制：将大豆卵磷脂和胆固醇按原料质量比为9:1共同溶于氯仿溶液中，然后置于转速为60r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发处理，待形成一层薄膜后加入乙醚薄膜溶解，得脂质体膜液；
3)玉屏风多糖缓冲液配制：将步骤1)所得纯化玉屏风多糖粉末溶于浓度为4mg/ml的磷酸盐缓冲溶液(ph为7.4)中，得含有玉屏风多糖的磷酸盐缓冲溶液；
4)脂质体制备：将原料质量比为胆固醇的一半的步骤3)所得的含有玉屏风多糖的磷酸盐缓冲溶液加入到步骤2)所得脂质体膜液中，超声混匀处理95s，再置于转速为60r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发至乙醚全部挥发，置于4℃保存，得实施例2玉屏风多糖脂质体。
经测定，实施例2玉屏风多糖脂质体的包封率为86.82％。
实施例3
一种玉屏风多糖脂质体的制备方法，其包括如下工艺步骤：
1)玉屏风多糖纯化：取玉屏风粗多糖溶于蒸馏水，后缓慢倒入树脂柱中，其树脂柱中的树脂体积为树脂柱体积的2/3，重复多次，再将50％的乙醇缓慢倒入树脂柱，然后采用真空抽滤泵使洗脱液流入抽滤瓶中，收集抽滤瓶中的洗脱液，经浓缩、真空干燥12h，得纯度≥80％的纯化玉屏风多糖粉末；
2)脂质体配制：将大豆卵磷脂和胆固醇按原料质量比为8:1共同溶于氯仿溶液中，然后置于转速为70r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发处理，待形成一层薄膜后加入乙醚薄膜溶解，得脂质体膜液；
3)玉屏风多糖缓冲液配制：将步骤1)所得纯化玉屏风多糖粉末溶于浓度为4.5mg/ml的磷酸盐缓冲溶液(ph为7.4)中，得含有玉屏风多糖的磷酸盐缓冲溶液；
4)脂质体制备：将原料质量比为胆固醇的一半的步骤3)所得的含有玉屏风多糖的磷酸盐缓冲溶液加入到步骤2)所得脂质体膜液中，超声混匀处理85s，再置于转速为70r/min、温度为37℃的条件下进行减压旋转蒸发至乙醚全部挥发，置于4℃保存，得实施例3玉屏风多糖脂质体。
经测定，实施例3玉屏风多糖脂质体的包封率为88.38％。
上述实施例为本发明的优选实施例，凡与本发明类似的工艺及所作的等效变化，均应属于本发明的保护范畴。