本发明涉及一种肉苁蓉、肉苁蓉提取物和肉苁蓉总苷提取物在心脏神经官能症中的应用。
背景技术：
心脏神经官能症(cardiacneurosis)又称功能性心脏不适、神经血循环衰弱症或奋力综合征(effortsyndrome)、心血管神经官能症，国外称为神经性循环系统功能障碍或神经性循环无力症或高敏症等，是神经官能症的一种特殊类型，也是一种极为常见的心血管疾病，以心血管系统功能失常为主要表现，可兼有神经官能症的其他表现。其症状多种多样，常见有心悸、心前区疼痛、胸闷、气短、呼吸困难、头晕、失眠、多梦等。大多发生于青壮年，20岁～40岁者最多，也可见于高中级白领、空巢患病中老年人、心梗中风后患者、甚至是某些青少年，多见于女性，尤其是更年期妇女。本病体检无明显器质性病变特征，由于焦虑、紧张、情绪激动、精神创伤等因素的作用，中枢神经功能的兴奋和抑制过程发生障碍，受植物神经调节的心血管系统也随着发生紊乱，引起了一系列交感神经张力过高的症状。此外，过度劳累，体力活动过少，循环系统缺乏适当锻炼，以致稍有活动或少许劳累即不能适应，因而产生过度的心血管反应而致本病。
肉苁蓉是一种寄生在沙漠树木梭梭根部的寄生植物，从梭梭寄主中吸取养分及水份。素有“沙漠人参”之美誉，具有极高的药用价值，是中国传统的名贵中药材。肉苁蓉在历史上就被西域各国作为上贡朝廷的珍品，也是历代补肾壮阳类处方中使用频度最高的补益药物之一。具有补肾阳，益精血，润肠通便作用。由于中药提取物具有多成分、多靶点及副作用小等优势，因此，在心脏神经官能症的治疗上，除了注意消除紧张、烦恼、忧虑等情志影响因素，避免过度劳累和其他不良因素的影响，保证充足的睡眠之外，给予一种行之有效治疗心脏神经官能症的中药或其提取物，有利于改善心脏神经官能症患者的症状，进而提高临床治疗的有效率。肉苁蓉总苷是肉苁蓉的主要活性成分，据报道具有改善记忆功能，治疗伴有神经精神症状的轻到中度痴呆，抗脂质过氧化等活性，我们在此基础上对肉苁蓉总苷及肉苁蓉开展了治疗心脏神经官能症的相关研究，发现效果显著。
技术实现要素：
本发明旨在提供肉苁蓉、肉苁蓉的提取物及其总苷在在制备治疗心脏神经官能症药物中的应用。
一种肉苁蓉、肉苁蓉提取物和肉苁蓉总苷提取物在制备治疗心脏神经官能症药物中的应用。
所述肉苁蓉总苷提取物中肉苁蓉总苷含量不少于50％。
进一步优选地，所述肉苁蓉总苷提取物中肉苁蓉总苷含量不少于70％。
所述药物还包括药学上可接受的载体。
所述药物的剂型包括注射剂、片剂、栓剂、软膏剂、凝胶剂、丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂和合剂。
所述肉苁蓉指肉苁蓉药材，是列当科植物肉苁蓉、管花肉苁蓉、荒漠肉苁蓉等植物的干燥带鳞叶的肉质茎。其中，肉苁蓉可以直接研磨成粉、提取物、或者其它加工形态的方式使用。
所述肉苁蓉的提取物为常规提取方法提取获得，不限于水提、醇提、超临界萃取等获取全成分的提取方法，该提取物含有肉苁蓉总苷。
所述肉苁蓉总苷提取物是肉苁蓉提取物以苯乙醇苷类为主要成分富集纯化的产物,为市售或采用常规提取纯化方法获得，也可采用以下方法获得：
取肉苁蓉药材，断碎，加水浸泡0.5-1.5小时后煎煮2-4次，提取液滤过，50℃浓缩至相对密度1.05-1.25，加乙醇至含醇量达40-80％，放冷静置不少于12小时，上清液50℃下回收乙醇至相对密度1.05-1.25的清膏，取清膏加水溶解，徐徐注入已处理好的的大孔树脂ab-8柱内，其中，树脂与药材的比例为0.5-2:0.5-2；先用水洗脱，收集水洗脱液备用，再用30-50％乙醇洗脱，收集30-50％乙醇洗脱液备用；
将所述水洗脱液再注入大孔树脂ab-8柱中，用水洗脱，弃去水洗脱液；再用30-50％乙醇洗脱，收集30-50％乙醇洗脱液备用；合并两次30-50％乙醇洗脱液，浓缩，即得,经该方法获得的提取物中肉苁蓉总苷含量不少于50％。
进一步优选地，所述肉苁蓉总苷提取物的制备方法包括如下步骤：
取肉苁蓉，断碎，加水浸泡1小时后煎煮3次，第一次2小时，第二、第三次各1小时，提取液滤过，50℃浓缩至相对密度1.10-1.20，加乙醇至含醇量达60％，放冷静置不少于12小时，上清液50℃回收乙醇至相对密度1.10-1.20的清膏，取清膏加水溶解，徐徐注入已处理好的的大孔树脂ab-8柱内，其中树脂与药材的比例为1:1，先用水洗脱，收集水洗脱液备用；再用40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液备用；
将所述水洗脱液再注入大孔树脂ab-8柱中，用水洗脱，弃去水洗脱液；再用40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液备用；合并两次40％乙醇洗脱液，浓缩至适量，即得,经该方法获得的提取物中肉苁蓉总苷含量不少于70％。
本发明提出了一种肉苁蓉、肉苁蓉提取物和肉苁蓉总苷提取物在制备治疗心脏神经官能症药物中的应用。本发明通过对肉苁蓉、肉苁蓉提取物和肉苁蓉总苷提取物，在小鼠模型中的抗焦虑、抗疲劳以及镇静作用进行研究，发现本发明的肉苁蓉、肉苁蓉提取物和肉苁蓉总苷提取物具有改善心脏神经官能症症状的作用，同时，临床实验也表明其能够安全有效地治疗心脏神经官能症。
具体实施方式
如前所述，本发明旨在提供一种肉苁蓉、肉苁蓉的提取物及其总苷在治疗心脏神经官能症中的应用。以下将结合实验例的内容进行具体描述。
特别需要指出的是，针对本发明所做出的类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
本发明如未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用原料药或辅料，以及所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：发明受试物对小鼠焦虑样行为的影响
1、实验材料
1.1药物及试剂
受试药物：市售肉苁蓉药材、肉苁蓉总苷提取物一(实施例5)、肉苁蓉总苷提取物二(实施例6)；
地西泮，天津力生制药股份有限公司。
1.2动物
icr小鼠，体重18～22g，雄性，spf级，由北京维通利华提供，许可证号：scxk(京)2016-0011。
1.3仪器
大小鼠高架十字迷宫视频实验系统，上海软隆科技发展有限公司。
2、实验方法
雄性icr小鼠50只，按体重随机分为5组，其中空白对照组10只(给予同体积纯化水)、阳性对照组(地西泮1mg/kg)10只、受试药物2组：肉苁蓉药材组(1.2g/kg)、肉苁蓉总苷提取物一组和肉苁蓉总苷提取物二组(0.13g/kg)，每组10只，灌胃体积为0.2ml/10g，连续给药7天，每天1次。
肉苁蓉药材组：(样品制备)取肉苁蓉药材，加水煎煮后即得；
肉苁蓉总苷组：(分别选择实施例5-6的提取物，加入纯化水配制成提取物溶液)
小鼠高架十字迷宫实验：小鼠于末次灌胃给药30min后进行高架十字迷宫实验，将小鼠头朝向开放臂放入高架十字迷宫的中央平台中，释放后即开始记录6min内小鼠在迷宫中的两个行为指标：(1)开放臂停留时间：进入任一开放臂的时间，以小鼠四足都进入到臂内为准，中途任一足退出则为该次进入活动完成；(2)进入开放臂次数：进入任一开放臂的次数，以小鼠四足都进入到臂内为准。其中，小鼠6min内基本无移动的，数据予以剔除。
采用spss18.0软件进行数据分析，实验结果以
3、实验结果：
与空白对照组比较，阳性对照药地西泮能明显增加小鼠在开放臂停留时间及进入开放臂的次数(p<0.01)；肉苁蓉、肉苁蓉总苷提取物一组和肉苁蓉总苷提取物二组与空白对照组比较，能提高开放臂停留时间，并增加进入开放臂的次数，其中肉苁蓉总苷提取物一组和肉苁蓉总苷提取物二组有统计学差异(p<0.01，p<0.05)。
表1发明受试物对小鼠迷宫实验的影响
与空白对照组比较，**p<0.01，*p<0.05
小鼠高架十字迷宫实验利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧形成矛盾冲突行为来模仿人的焦虑状态。动物在开放臂的停留时间及进入开放臂的次数作为实验评价指标，即开放臂停留时间、进入开放臂次数值越低表明动物越焦虑，值越高表明越不焦虑。因此，从表1数据可知肉苁蓉和肉苁蓉总苷提取物具有抗焦虑活性。
实施例2：发明受试物对小鼠抗疲劳作用的研究
1、实验材料
1.1药物及试剂
受试药物：市售肉苁蓉药材、肉苁蓉总苷提取物一(实施例5)、肉苁蓉总苷提取物二(实施例6)；
洋参冲剂，金日制药有限公司；
尿素氮测试盒，南京建成生物工程研究所；
全血乳酸测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。
1.2动物
icr小鼠，体重18～22g，雄性，spf级，由北京维通利华提供，许可证号：scxk(京)2016-0011。
1.3仪器
morris水迷宫，西班牙panlab公司。
2、实验方法
雄性icr小鼠50只，按体重随机分为5组，其中空白对照组10只(给予同体积纯化水)、阳性对照组(洋参冲剂0.2g/kg)10只、受试药物2组：肉苁蓉药材组(1.2g/kg)和肉苁蓉总苷提取物一组和肉苁蓉总苷提取物二组(0.13g/kg)，每组10只，灌胃体积为0.2ml/10g，连续给药7天，每天1次。
小鼠负重游泳实验：小鼠于末次灌胃给药30min后，按小鼠体重5％尾部负重铅丝，将其放入水温25℃左右的游泳箱中使其游泳，记录小鼠入水游泳开始至力竭所用时间，即为运动力竭时间，力竭标准以小鼠头没入水中8s不能返回水面为度。血清尿素氮和全血乳酸的测定：力竭后的小鼠从水中捞起后迅速擦干身体，摘眼球取血，测定血清尿素氮和全血乳酸含量。
采用spss18.0软件进行数据分析，实验结果以
3、实验结果：
从表2可见，与空白对照组比较，洋参冲剂、肉苁蓉、肉苁蓉总苷提取物一组和肉苁蓉总苷提取物二组的力竭游泳时间显著长于空白值(p<0.01，p<0.05)，提示肉苁蓉及肉苁蓉总苷提取物可明显提高小鼠运动耐力。
表2发明受试物对小鼠负重游泳实验的力竭游泳时间的影响
与空白对照组比较，**p<0.01，*p<0.05.
从表3可见，洋参冲剂组、肉苁蓉组、肉苁蓉总苷提取物一组和肉苁蓉总苷提取物二组，小鼠血清尿素氮和全血乳酸含量均显著低于空白组(p<0.01，p<0.05)，表明肉苁蓉、肉苁蓉总苷提取物一和肉苁蓉总苷提取物二，能够抑制或减少疲劳小鼠血清尿素氮、全血乳酸的产生，提高小鼠的抗疲劳能力。
表3发明受试物对运动后血清尿素氮、全血乳酸含量的影响
与空白对照组比较，**p<0.01，*p<0.05.
疲劳最直接和客观的表现是运动耐力下降，而力竭游泳时间是反映运动耐力的重要指标。机体血清尿素氮含量随运动负荷的增加而增加，运动后血尿素氮清除越快，则疲劳消除得越快，抗疲劳的效果亦越明显。乳酸是机体在激烈运动初期通过葡萄糖的无氧糖酵解途径获能的代谢终产物，乳酸在肌肉和血液中的堆积是运动性疲劳产生的主要原因之一，乳酸的消除有利于疲劳的消退，提高小鼠的运动能力。因此，从表2、表3的数据可知肉苁蓉和肉苁蓉总苷提取物具有抗疲劳作用。
实施例3：发明受试物对小鼠镇静作用的实验研究
1、实验材料
1.1药物及试剂
受试药物：市售肉苁蓉药材、肉苁蓉总苷提取物一(实施例5)、肉苁蓉总苷提取物二(实施例6)；
地西泮，天津力生制药股份有限公司。
1.2动物
icr小鼠，体重18～22g，雌雄各半，spf级，由北京维通利华提供，许可证号：scxk(京)2016-0011。
1.3仪器
yls-1a多功能小鼠自主活动记录仪,济南益延科技发展有限公司；
秒表，东西仪(北京)科技有限公司。
2、实验方法
实验前首先要筛选出各组小鼠的自主活动次数无显著性差异，即选择5min内自主活动数在120次以上的正常小鼠50只，并将符合条件的小鼠按体重随机分为5组，其中空白对照组10只(给予同体积纯化水)、阳性对照组(地西泮1mg/kg)10只、受试药物2组：肉苁蓉药材组(1.2g/kg)、肉苁蓉总苷提取物一组和肉苁蓉总苷提取物二组(0.13g/kg)，每组10只，灌胃体积为0.2ml/10g，连续给药7天，每天1次。
对小鼠自主活动的影响：末次灌胃给药30min后，将小鼠依次放入记录仪中，适应环境5min后，记录5min内的自主活动次数。实验在安静、通风的环境中进行。
采用spss18.0软件进行数据分析，实验结果以
3、实验结果：
与空白对照组比较，阳性对照药地西泮能明显减少小鼠的自主活动能力(p<0.01)；肉苁蓉、肉苁蓉总苷提取物一组和肉苁蓉总苷提取物二组与空白对照组比较，小鼠5min内自主活动次数亦明显减少(p<0.01，p<0.05)。
表4发明受试物对小鼠自主活动的影响
与空白对照组比较，**p<0.01，*p<0.05.
行为是机体的重要功能表现之一,动物的行为是在神经、内分泌系统和运动器官的共同协调作用下形成的。小鼠自主活动能力评价是考察实验动物在新异环境中自主行为、探究行为与紧张度等的一种方法，自主活动次数越少，表明可以改善动物的行为、情绪变化，缓解紧张程度，有镇静作用。因此，从表4数据可知肉苁蓉和肉苁蓉总苷提取物具有镇静作用。
实施例4：发明受试物的临床实验
1、一般资料
发明人于2015年3月-2017年12月间共收集180例心脏神经管能症的门诊患者，年龄18-56岁，病程0.5-5年。心脏神经官能症的症状：心胸满闷、隐隐作痛、心烦易怒、心悸不安、少寐、多梦、健忘、倦怠乏力等。随机分为：受试药物组：肉苁蓉组30例、肉苁蓉总苷组30例，另空白组30例。各组年龄、病情等资料无显著性差异，具有可比性。
2、实验方法
治疗组分别口服肉苁蓉20g/天(汤剂)，肉苁蓉总苷1.8g/天(根据实施例6提取物制得的胶囊剂)，分早晚两次服用。疗程一个月。空白组口服安慰剂，分早晚两次服用，疗程一个月。
3、疗效标准与治疗结果
3.1疗效标准
痊愈：临床症状全部消失，心电图检查正常，全身无阳性体征可查。
好转：临床症状如胸闷、胸痛等减轻，病情得到较好控制，实验室检查结果正常或者改善。
无效：临床症状略有减轻，精神紧张或过劳后症状复发或加重。
3.2治疗统计结果
心脏神经官能症患者经过肉苁蓉和肉苁蓉总苷一个疗程治疗后总有效率分别为68.3％、84.0％,对照组总有效率为13.3％，受试药物组与对照组总有效率比较差异明显。通过治疗显示，对病人无任何副作用，三大常规化验及肝肾功能检测未发现异常。具体见表5。
表5受试物的疗效比较
结论：由此可见，肉苁蓉、肉苁蓉的提取物及其总苷能够安全有效地治疗心脏神经官能症。
实施例5
取肉苁蓉药材，断碎，加水浸泡1.5小时后煎煮3次，提取液滤过，50℃浓缩至相对密度1.05-1.15，加乙醇至含醇量达70％，放冷静置不少于12小时，上清液50℃下回收乙醇至相对密度1.05-1.15的清膏，取清膏加水溶解，徐徐注入已处理好的的大孔树脂ab-8柱内，其中，树脂与药材的比例为1：2；先用水洗脱，收集水洗脱液备用，再用30％乙醇洗脱，收集30％乙醇洗脱液备用；
将所述水洗脱液再注入大孔树脂ab-8柱中，用水洗脱，弃去水洗脱液；再用30％乙醇洗脱，收集30％乙醇洗脱液备用；合并两次30％乙醇洗脱液，浓缩，即得，根据标准ybz07472005-2010z检测，经该方法获得的提取物中肉苁蓉总苷含量为50.2％。
实施例6
取肉苁蓉，断碎，加水浸泡1小时后煎煮3次，第一次2小时，第二、第三次各1小时，提取液滤过，50℃浓缩至相对密度1.10-1.20，加乙醇至含醇量达60％，放冷静置不少于12小时，上清液50℃回收乙醇至相对密度1.10-1.20的清膏，取清膏加水溶解，徐徐注入已处理好的的大孔树脂ab-8柱内，其中树脂与药材的比例为1:1，先用水洗脱，收集水洗脱液备用；再用40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液备用；
将所述水洗脱液再注入大孔树脂ab-8柱中，用水洗脱，弃去水洗脱液；再用40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液备用；合并两次40％乙醇洗脱液，浓缩至适量，即得，经该方法获得的提取物中肉苁蓉总苷含量为71.2％。
肉苁蓉提取物胶囊剂的制备方法：将上述获得的肉苁蓉提取物干燥粉碎后装入胶囊中，即得。