一种急性肝损伤诱导剂及其应用的制作方法

本发明属于动物模型的造模领域，具体涉及一种急性肝损伤重症化模型的造模方法。

背景技术：

重症化肝损伤是由多种病因所致的以短时间内大量肝细胞变性、坏死和炎细胞浸润等为特征的严重肝功能损伤的临床综合征，死亡率高。在我国常见病因有hbv(乙型肝炎病毒)感染、药物中毒等，且其发病机制尚不清楚。

实验动物急性肝损伤模型是研究各种肝脏疾病的发病机制与治疗药物筛选中必不可缺的一个工具。尽管近年来国内外在肝损伤模型方面取得了相应进展，制造实验性肝损伤动物模型方法甚多，主要包括两种：化学性肝损伤模型和免疫性肝损伤模型。化学性肝损仿模型主要是由四氯化碳(ccl4)、d-半乳糖胺(d-gal)、扑热息痛(apap)、醋氨酚(aap)、硫代乙底胶ca0、磷已硫氨酸(dl-e)、氯化镉(cdc12)、a-紫异硫酸酯(anit)、致黄素、乙醇等造模，免疫性肝损伤模型多采用刀豆蛋白a(con)、卡介苗、脂多糖(bcg+lps)造模。而肝脏损伤的复杂性以及肝功能损害的多样性使得同一模型不能从本质上全面性、客观反应肝损伤，上述肝损伤模型没有出现导致急性肝损伤重症化的实验动物模型，因此，动物肝损伤模型的建立有待进一步完善与改进。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种急性肝损伤诱导剂及其在创建重症化模型小鼠中的应用，条件要求低、方法简便、造模周期短、建模成功率高、重复性好。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种急性肝损伤诱导剂，所述急性肝损伤诱导剂为包括四氯化碳和橄榄油的混合溶液。

优选的，所述四氯化碳和橄榄油的体积比为1：(2.5～6)。

优选的，所述四氯化碳和橄榄油的体积比为1：(3～5)。

本发明提供了一种上述急性肝损伤诱导剂在制备急性肝损伤重症化模型小鼠中的应用。

优选的，所述急性肝损伤重症化模型小鼠的造模方法，包括以下步骤：向洁净小鼠腹腔注射急性肝损伤诱导剂，12～48h后得到急性肝损伤重症化模型小鼠。

优选的，所述洁净小鼠在注射前需禁饮禁食10～15h。

优选的，所述急性肝损伤诱导剂的注射量为(8～12)ml/kg。

优选的，所述急性肝损伤诱导剂的注射次数为1次。

本发明提供了一种急性肝损伤诱导剂及其在创建重症化模型小鼠中的应用。本发明方法在普通实验室即可实现，不需要高精密仪器以及特殊环境，实现的条件要求低；简单的试剂配制、腹腔注射及活动观察、病理切片检测即可得到模型，过程简洁、不繁琐；造模周期短，通常12～24小时即可得到模型；建模成功率高、重复性好。

附图说明

图1为本发明实施例中模型组重症肝损伤的苏木精-伊红染色(h&e染色)小鼠肝脏病理图；

图2为本发明实施例中模型组普通型肝损伤的苏木精-伊红染色(h&e染色)小鼠肝脏病理图；

图3为本发明实施例中正常组苏木精-伊红染色(h&e染色)小鼠肝脏病理图。

具体实施方式

本发明提供了一种急性肝损伤诱导剂，所述急性肝损伤诱导剂为包括四氯化碳和橄榄油的混合溶液。本发明所述四氯化碳和橄榄油的体积比优选为1：(2.5～6)，更优选为1：(3～5)，最优选为1:4。本发明对所述四氯化碳和橄榄油的来源并没有特殊限定，采用本领域的常规市售品种即可。本发明对所述急性肝损伤诱导剂的制备方法并没有特殊限定，优选按照所述四氯化碳和橄榄油的体积比混合即可。本发明按照所述制备方法制备所述急性肝损伤诱导剂后，优选进行滤菌操作，然后室温存放。本发明对所述滤菌操作并没有特殊限定，优选利用滤菌器滤菌，更优选为0.22μm滤菌器。

本发明提供了一种上述急性肝损伤诱导剂在制备急性肝损伤重症化模型小鼠中的应用。本发明所述急性肝损伤重症化模型小鼠的造模方法，包括以下步骤：向洁净小鼠腹腔注射急性肝损伤诱导剂，12～48h后得到急性肝损伤重症化模型小鼠；所述急性肝损伤诱导剂为包括四氯化碳和橄榄油的混合溶液。

本发明所述洁净小鼠的性别优选相同。本发明所述洁净小鼠的体重优选为25±2g。本发明对所述洁净小鼠的来源及品种并没有特殊限定，优选为昆明小鼠。本发明所述洁净小鼠在注射前优选需禁饮禁食10～15h，更优选11～12.5h，最优选12h。

本发明对所述腹腔注射的方式并没有特殊限定，利用本领域的常规注射方式即可。本发明所述腹腔注射的注射量优选为(8～12)ml/kg，更优选为(9～11)ml/kg，最优选为10ml/kg。本发明所述腹腔注射的次数优选为1次。

下面结合实施例对本发明提供的急性肝损伤重症化模型小鼠的造模方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

1)按体积比为1:4抽取四氯化碳与橄榄油配制成总体积为5ml混合溶液，分别用0.22微米滤菌器滤菌，室温存放备用；

2)选取体重25±2g清洁同性别昆明小鼠，8只一组随机分配作为模型组；

3)模型组腹腔注射四氯化碳橄榄油混合溶液，注射用量为10ml/kg，给药前禁饮禁食12小时，给药次数为1次；

4)注射药物12～48h后据小鼠的活动反应；经摘除眼球放尽血液后颈椎脱臼法处死上述小鼠取新鲜肝脏组织块约100mg用福尔马林液固定，进一步制成病理切片，行苏木精-伊红染色(h&e染色)检查。

结合活动反应和病理结果将模型组其分为普通肝损伤组及重型肝损伤组；从小鼠活动反应可见注射四氯化碳橄榄油混合溶液表现活动、反应迟钝，出现肝性脑病，甚至死亡；重症化肝损伤如图1所示：可见重症化肝损害的病理表现肝小叶结构分界不清楚，甚至无肝小叶结构，肝细胞亚大片坏死，部分肝细胞大片坏死；普通损伤如图2所示：肝小叶结构尚清楚，肝细胞水肿、脂肪变性，有点状或小片状肝细胞坏死，部分肝细胞亚大片坏死。

对比例

除注射药物为按体积比为1:4抽取生理盐水与橄榄油配制成总体积为5ml混合溶液外，其余操作均与实施例1相同。

注射药物12～48h后据小鼠的活动：小鼠活动、反应正常，呼吸平稳，无死亡；经摘除眼球放尽血液后颈椎脱臼法处死上述小鼠取新鲜肝脏组织块约100mg用福尔马林液固定，进一步制成病理切片，行苏木精-伊红染色(h&e染色)检查，结果如图3所示：肝小叶完整，未见肝细胞变性或坏死。

本发明提供了一种小鼠急性肝损伤重症化模型的造模方法，造模成功率高，并且条件要求低、方法简便、造模周期短、重复性好，有明显肝损伤改变，足以供给肝脏实验的需求，为研究肝损伤的机制提供了靶向工具，尤其适用于研究差异性肝损伤的发病机制，同时也为抗肝损伤药物筛选提供了良好的工具，可用于药效观察。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：

技术总结
本发明提供了一种急性肝损伤诱导剂及其在创建重症化模型小鼠中的应用，属于动物模型的造模领域。本发明所述所述急性肝损伤诱导剂为包括四氯化碳和橄榄油的混合溶液。本发明所述应用为：向洁净小鼠腹腔注射急性肝损伤诱导剂，12～48h后得到急性肝损伤重症化模型小鼠。本发明所述造模方法，造模成功率高，并且条件要求低、方法简便、造模周期短、重复性好，有明显肝损伤改变，足以供给肝脏实验的需求，为研究肝损伤的机制提供了靶向工具，尤其适用于研究差异性肝损伤的发病机制，同时也为抗肝损伤药物筛选提供了良好的工具，可用于药效观察。

技术研发人员：何毅怀;王君;黄文鸽;沈访;汪杰;田仁冬
受保护的技术使用者：遵义医学院附属医院
技术研发日：2018.07.23
技术公布日：2018.11.30