本发明属于生物医药技术领域，具体涉及猫须草叶提取物(os)的应用。
背景技术：
猫须草(osrodendranthusspicatus(thunb.)c.y.wu)又名肾茶、猫须公，有“天下第一鲜”之称，富含黄酮类、酚类、萜类、木脂素类、色原烯类、烷基糖苷类、甾体皂苷类、蒽醌类、氨基酸、有机酸、维生素、矿物质等多种活性成分。yam等研究发现猫须草水和甲醇提取物能够较好地清除dpph自由基，抑制fe3+离子诱导的脂质过氧化，明显改善ccl4诱导的大鼠肝损伤。sriplang等发现猫须草水提取物能够显著降低糖尿病大鼠血浆中甘油三酯含量，并显著提高高密度脂蛋白胆固醇含量。刘旭航等用阳离子化牛血清白蛋白(c-bsa)建立大鼠慢性肾炎模型，发现猫须草还能够较好地降低c-bsa肾炎模型大鼠的尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平，改善大鼠的肾功能。另外，转化生长因子-β1(tgf-β1)可参与调节肾小球细胞外基质的分泌，导致肾小球结构和功能异常，促进肾小球硬化。林威远等研究发现猫须草对tgf-β1的表达有明显抑制作用，能够减少纤维连接蛋白以及胶原iv在肾小球细胞外基质的沉积，延缓肾小球硬化。龙贺明等发现猫须草总黄酮还具有抑制肾脏癌细胞生长的作用，这可能与通过细胞周期和细胞凋亡的调控，达到抑制癌细胞生长的效果有关。可见，猫须草在抗氧化、降血脂以及改善慢性肾炎等方面效果明显。
另外，目前研究发现高脂膳食造成脂质代谢异常，诱发高血脂，是导致慢性肾损伤的重要因素。肾脏氧化应激很可能也在其中发挥重要的作用。然而，猫须草对高脂饮食引发高血脂、氧化应激及肾脏损伤的调控效果，尚未报道。
技术实现要素：
发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种猫须草叶提取物在制备用于治疗肾损伤的药物中的应用，满足使用需求。
技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：
猫须草叶提取物在制备用于治疗肾损伤的药物中的应用。
所述的肾损伤为由高脂饮食产生的肾损伤。
所述的猫须草叶提取物由以下方法制备：
取猫须草叶500g，加入25l50％乙醇室温浸泡24h，边浸泡边搅拌，280w超声波处理30min；浸提液采用中速定量滤纸过滤，旋转蒸发浓缩后冷冻干燥，提取物于干燥器中保存。
所述的中速定量滤纸的孔径20～50μm。
有益效果：与现有技术相比，本发明的os对高脂饮食诱发的小鼠慢性肾脏损伤的具有调控作用，不同剂量的os可不同程度地降低高脂饮食诱导的小鼠肾脏损伤，以高剂量os(500mg/kg)作用最为明显，这与其能够较好地降低高脂饮食小鼠体内高血脂和氧化应激水平有很大关系。可见，猫须草叶提取物在制备用于治疗肾损伤的药物中将具有广泛的应用。
附图说明
图1是猫须草叶提取物对小鼠肾脏指数的影响(n＝6)图；
图2是猫须草对小鼠血清甘油三酯(tg)、低密度蛋白质胆固醇(ldl-c)、高密度蛋白质胆固醇(hdl-c)、总胆固醇(tc)含量的影响(n＝6)图；
图3是猫须草叶提取物对小鼠肾组织gsh-px(a)与sod(b)活性的影响(n＝6)结果图；
图4是猫须草叶提取物对小鼠肾组织匀浆h2o2(a)、no(b)及mda(c)含量的影响(n＝6)结果图；
图5是猫须草叶提取物对小鼠肾组织结构的影响(×400)结果图；图中，a：对照组；b：模型组；c：高剂量组；d：中剂量组；e：低剂量组。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。
以下实施例中所使用的主要材料如下：
实验动物：采用84只15～20g雄性c57bl/6小鼠，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司(动物生产许可证号：scxk(沪)2017-0005)。
动物饲料：普通标准饲料(d12450b)、高脂饲料(d12492)均由researchdietinc.，newbrunswick，usa提供。
低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)、甘油三酯(tg)、总胆固醇(tc)、超氧化歧化酶(sod)、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)、丙二醛(mda)、过氧化氢(h2o2)、一氧化氮(no)试剂盒以及苏木素、伊红染液均购自于南京建成生物工程公司；戊二醛购自国药集团化学试剂有限公司。
实施例1
1、猫须草叶提取物(os)的提取方法：取猫须草叶500g，加入25l50％乙醇室温浸泡24h，边浸泡边搅拌，280w超声波处理30min。浸提液采用中速定量滤纸(孔径20～50μm)过滤，旋转蒸发浓缩后冷冻干燥，称取粉末重量，计算得率为9.89％，提取物于干燥器中保存。
2、小鼠分组及造模：将60只15～20g雄性c57bl/6小鼠，随机分成5组，分别为对照组、模型组、高剂量(hos)组、中剂量(mos)组和低剂量(los)组，每组12只。
将小鼠在洁净的饲养环境(光照/黑暗时间为12h/12h，温度控制为23±2℃)中适应性喂养1周，适应期内逐步将普通饲料换为试验用饲料。试验期为8周，试验期内，对照组小鼠采食普通标准饲料(d12450b)，其余组小鼠采食高脂饲料(d12492)。hos组、mos组与los组小鼠喂给os剂量分别为500mg/kg、100mg/kg、50mg/kg，对照组与模型组小鼠则喂给等量pbs(0.027％nah2po4、0.142％na2hpo4、0.8％nacl、0.02％kcl)。试验期内小鼠自由采食，供给足量的灭菌水。末次灌胃后禁食不禁水24h，摘眼球取血待测。小鼠取血后，颈部脱臼处死、解剖，快速取出肾脏，观察形态并称重，一部分肾脏组织置于4％戊二醛固定，用于he观察；余下组织置于液氮中快速冻存，-80℃保存待测。
3、小鼠肾脏指数：肾脏指数(％)＝肾脏重量(g)/体重(g)×100％。
4、小鼠血清中生化指标的测定：摘眼球取血，全血室温静置30min，待凝血后4℃条件下3000rpm离心10min，吸取血清，按试剂盒说明书步骤检测ldl-c、hdl-c、tc和tg含量。
5、小鼠肾组织匀浆中生化指标的测定：准确称取小鼠肾脏组织，按1∶9(m：v)的比例加入9倍体积的0.9％的生理盐水，制成10％的组织匀浆，在4℃条件下4000r/min离心10min，取上清液，按试剂盒说明书步骤测定gsh-px和sod活性以及h2o2、no与mda含量。
6、小鼠肾组织he染色：参照王向丽[12]报道方法，取约1cm3肾脏组织，4％戊二醛溶液中固定24h，常规石蜡包埋，制成5μm厚切片。随后，按照苏木素-伊红(he)顺序染色，随后用中性树胶封片。最后，在光学显微镜下观察肾组织结构。
7、数据处理
采用spss18.0统计软件进行数据分析，实验结果以x±s表示，且以p＜0.05表示显著差异性。
如图1所示，模型组小鼠肾脏指数显著高于对照组(p＜0.05)。与模型组相比，os高剂量组、中剂量组以及低剂量组小鼠的肾脏指数均显著下降(p＜0.05)。可以看出，os对减缓高脂饮食诱导的小鼠肾脏指数升高效果明显。
如图2所示，与对照组相比，模型组小鼠血清中tg、ldl-c和tc含量均显著升高(p＜0.05)，而hdl-c含量呈显著下降趋势(p＜0.05)。这些结果说明高脂饮食导致小鼠体内血脂代谢紊乱，出现高血脂。
与模型组相比，os高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠血清中tg、ldl-c和tc含量均有不同程度降低。各组作用大小比较：低剂量组<中剂量组<高剂量组。以os高剂量组小鼠血清中tg、ldl-c和tc含量降低最为明显，呈显著性差异(p＜0.05)。其中，tg、ldl-c和tc含量降低幅度分别达到13.45％、29.68％和16.87％。中剂量组和低剂量组虽有降低趋势，但不显著(p＞0.05)。在各os修复组中，以高剂量组小鼠血清中hdl-c含量升高最为显著(p＜0.05)，其它两组升高不明显(p＞0.05)。可以看出，os能够降低高脂饮食诱导的小鼠体内高血脂水平，且有一定的剂量相关性，高剂量组作用最大。
如图3所示，模型组小鼠肾组织中gsh-px和sod活性相较于对照组分别降低了53.64％和33.23％(p＜0.05)。各os修复组小鼠肾组织中gsh-px和sod活性均显著高于模型组(p＜0.05)。高剂量组、中剂量组与低剂量组小鼠肾组织中gsh-px和sod活性分别为模型组的1.53倍和1.23倍，1.45倍和1.19倍，1.46倍与1.20倍。各os修复组作用大小无显著差异(p＞0.05)。可以看出，os对增强高脂饮食小鼠肾组织中gsh-px和sod抗氧化系统有明显效果。
图4显示，与对照组相比，模型组小鼠肾组织中h2o2、no与mda含量均显著升高(p＜0.05)，说明小鼠肾脏组织处于氧化应激状态。
与模型组相比，高剂量组、中剂量组以及低剂量组小鼠肾组织中h2o2含量均显著降低(p＜0.05)，降低幅度高达18.54％，各os修复组之间作用大小没显著差异(p＞0.05)。相较于模型组，高剂量组小鼠肾脏中no含量降低了32.23％(p＜0.05)，中剂量组和低剂量组no含量变化不显著(p＞0.05)。高剂量组和中剂量组小鼠肾组织中mda含量相较于模型组均显著降低(p＜0.05)，分别降低了37.32％和12.39％。高剂量组作用程度显著高于中剂量组(p＜0.05)。低剂量组小鼠肾组织中mda含量相较于模型组变化不明显(p＞0.05)。可以看出，os对减少高脂饮食诱导小鼠肾脏氧化应激有明显效果，且呈现一定的剂量相关性，高剂量os调控效果最为明显。
在400倍镜下观察小鼠肾脏组织he染色切片可见，对照组中肾小囊包绕着肾小球，肾小体形态学表现正常，肾小管形态规则，结构清晰(图5a)；模型组肾脏组织切面苍白，部分肾小球肥大，细胞数增多，系膜细胞增生，系膜基质增宽，有的呈分叶状改变(竖箭头所示)。肾小球囊膜不规则，结构不完整，囊腔增大(横箭头所示)。肾小管结构不清晰并有明显空泡变性损伤，有的可见肾小管萎缩(星号所示)(图5b)；os高剂量组、中剂量组与低剂量组中，肾小球系膜细胞与系膜基质增生得到抑制，肾小囊膜与肾小管变性损伤不同程度改善(图5c-e)；高剂量组改善效果优于中剂量组和低剂量组。可以看出，os对高脂饮食诱导小鼠肾脏组织结构损伤有明显减缓作用，且高剂量os改善效果最为明显。
可见，os对高脂饮食诱发的小鼠慢性肾脏损伤的具有调控作用，不同剂量的os可不同程度地降低高脂饮食诱导的小鼠肾脏损伤。以高剂量os(500mg/kg)作用最为明显，这与其能够较好地降低高脂饮食小鼠体内高血脂和氧化应激水平有很大关系。