三棱中三棱素成分C的抗血瘀证应用的制作方法

本发明涉及医药技术领域，具体是涉及一种三棱素成分(三棱素c)的抗血瘀证应用。

背景技术：

三棱为黑三棱科植物黑三棱sparganiumstolonierumbuch.-ham.的干燥块茎，历届《中国药典》中均有收载，其味苦，行平，入肝、脾经，具有破血行气，消积止痛的作用。三棱可单用生品，醋制品，亦可配伍莪术、黄芪，增强疗效，临床主要用于治疗子宫内膜异位症，子宫肌瘤等妇科疾病，以及用于治疗肝病与心脑血管疾病等病症。

三棱的化学成分复杂，含有黄酮类、挥发油、苯丙素类、有机酸、生物碱、蒽醌类、甾体类和多肽等成分。现代药理研究已阐明部分化合物的活性及其与临床应用间的关系。但是部分具有体外活性的化合物是否具有药效作用，需要进一步研究。这对于指导临床用药和新药的开发具有重要的意义。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是克服现有三棱有效成分不够明确的缺陷和不足，首次证明了三棱素a、三棱素c具有抗血瘀的药效作用。本发明通过药理实验证明三棱素a、三棱素c能够显著降低血瘀模型小鼠血清中txb2，fib，pai-1，et-1水平，同时能够不同程度的改善小鼠胸腺指数、脾指数以及肝肮指数，具有显著的抗血瘀药效作用，可用于制备治疗血瘀证的药物，具有较高的临床应用价值和开发前景。

本发明的目的是提供一种三棱素成分三棱素c在制备抗血瘀证药物中的应用。

本发明另一目的是提供一种抗血瘀证药物。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明首次证明了三棱素a、三棱素c均具有显著的抗血瘀药效作用，具有降病症机体内皮素(endothelin1，et-1)、组织纤维酶原抑制剂-1(activeplasminogenactivatorinhibitor-1，pai-1)、血栓素b2(thromboxaneb2，txb2)、纤维蛋白原(fibrinogen，fib)水平，改善肝脏指数(hepaticindex，hi)、脾脏指数(spleenindex，si)，胸腺指数(thymusindex，ti)的作用，为抗血瘀天然药物开发提供有力的依据。

因此，以下应用均应在本发明的保护范围之内：

三棱素c在合成抗血瘀证药物中的应用。

三棱素c在制备能够改善血瘀证患者胸腺指数、脾指数以及肝肮脏指数的药物中的应用。

三棱素c在制备能够降低血瘀证患者血清中的txb2、fib、pai-1、et-1水平的药物中的应用。

所述三棱素成分为三棱素c，其结构式如下所示：

另外，含有三棱素c的抗血瘀证药物也应在本发明的保护范围之内。

优选地，所述抗血瘀证药物还包括三棱素a。

所述抗血瘀证药物还可含有药学上可接受的载体，制备成不同的剂型。

本发明具有以下有益效果：

本发明首次证明了三棱素a、三棱素c具有显著的抗血瘀药效作用，经过实验证明三棱素c具有降病症机体内皮素(endothelin1，et-1)、组织纤维酶原抑制剂-1(activeplasminogenactivatorinhibitor-1，pai-1)、血栓素b2(thromboxaneb2，tb2)、纤维蛋白原(fibrinogen，fib)水平，改善肝脏指数(hepaticindex，hi)、脾脏指数(spleenindex，si)，胸腺指数(thymusindex，ti)的作用，为抗血瘀天然药物开发提供了一种新的选择和有力的依据。

附图说明

图1为不同剂量的三棱素a对小鼠机体综合药效指标影响。

图2为不同剂量的三棱素b对小鼠机体综合药效指标影响。

图3为不同剂量的三棱素c对小鼠机体综合药效指标影响。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步说明本发明，但本实施例不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，本发明所用试剂和材料均为市购。

实施例1化合物活血化瘀功能实验

1、实验材料

(1)药物：实验自制三棱素a、三棱素b、三棱素c，纯度≥99％。

(2)动物：km小鼠，♀，体重25±5g，由广东省实验动物中心提供，许可证号：sck(粤)2013-0002。

(3)试剂

盐酸肾上腺素注射液(远大医药(中国)有限公司，批号：20170214)；拜阿司匹林肠溶片(拜耳医药保健有限公司，批号：bj32400)；羧甲基纤维素钠(cmc-na，国药集团化学试剂有限公司，批号：f20110915，分析纯)；氯化钠(天津市致远化学试剂有限公司，批号：20160312，分析纯)；小鼠血栓素b2(txb2)，内皮素1(et-1)，纤溶酶原激活物抑制因子1(pai-1)，纤维蛋白原(fib)酶联免疫检测试剂盒(天津安诺瑞康生物技术有限公司)；实验用水为纯水。

(4)实验仪器

wp-up-wf-10沃特浦实验专用超纯水机(四川沃特尔水处理设备有限公司)；me204e万分之一分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；sqp十万分之一分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；yp502n型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；lby-n6k自动血液流变仪(北京普利生仪器有限公司)；sigma2-16kl低温离心机(sigma)；thermo微生物恒温培养箱(4121)；dw-86l626超低温保存箱；bio-radimark酶标仪；ims-20雪花制冰机。

2、动物分组：

小鼠按体重随机分组，分别分为空白组、模型组、阿司匹林阳性药对照组，三棱素a不同剂量组，给药剂量如表1。

表1不同剂量组的给药剂量

注：a代表三棱素a，b代表三棱素b，c代表三棱素c，括号内为给药剂量倍数。

3、模型制备：

采用皮下注射小鼠皮下给予盐酸肾上腺素注射液1ml·kg^-1，2h后将其放入0℃冰水中游泳3～5min，取出，再次皮下注射1ml·kg^-1盐酸肾上腺素注射液，间隔2h后，再次将其置于0℃冰水中游泳3～5min，取出，造成小鼠急性血瘀模型。

4、样品制备：

空白组和模型组小鼠灌胃0.5％cmc-na溶液，其余各给药组小鼠灌胃给予相应浓度的药物，剂量为0.1ml·10g^-1。各组小鼠灌胃7天，1次/天，第六天给药后2h后，对急性血瘀模型进行复制。第七天给药2h后，取血，于4℃，3000×g下离心10min，取上层澄清液于ep管中，储备于-80℃超低温冰箱中，待测。

5、样品检测

(1)样品检测：

待测液室温下复融，采用酶联免疫吸附法，按照试剂盒说明书上的检测步骤，严格操作，分别检测txb2、et-1、pai-1、fib的浓度；小鼠取血处死后，解剖，取出的肝脏，脾脏以及胸腺用生理盐水吸取表面血渍，用滤纸吸取表面水分，用分析天平称重，记录数据，计算小鼠脏器指数(表2)；注：小鼠脏器指数＝小鼠脏器重量(mg)/小鼠体重(g)。

对各项指标进行标化整合处理，见公式3-1；

v标化值＝(v给药组-v模型组)/(v正常组-v模型组)公式3-1

权重系数按照指标在近五年相关文献中出现的频率与专家给出意见，得出各指标的权重系数。

查阅了近五年来有关血瘀方面的文献149篇，其中47篇检测了et-1，28篇检测了pai-1，36篇检测了txb2，38篇检测了fib。根据各指标在文献中被检测出现的频率结合学科专家意见，即et-1和fib的权重系数为3，txb2和pai-1的权重系数为2，胸腺指数，脾脏指数和肝脏指数的权重系数为1。总活血化瘀效应值为各指标的标准化值乘以权重系数的乘积加和值，即总活血效应值，具体按照公式2进行计算。

各项指标按照公式1，及公式2进出标化和整合处理：

v标化值＝(v给药组-v模型组)/(v正常组-v模型组)公式1

vti、vhi、vsi分别为肝脏指数、胸腺指数、脾脏指数的标准化效应值；

vpai-1、vtxb2、vet-2、vfib分别为所检测各项血清指标的标准化效应值；

vtotal为综合效应值。

(2)结果评价：

结果显示，阿司匹林阳性药物和三棱素a、三棱素b、三棱素c均能显著降低由造模引起机体et-1、pai-1、fib、txb2水平的升高；同时能够改善小鼠的hi、ti、si，证明三棱素a、三棱素b、三棱素c均具有降血瘀的功效。与阿司匹林给药组相比，三棱素a改善血瘀模型血清中的txb2、fib浓度作用明显较强；三棱素b改善血瘀模型血清中的txb2、fib浓度作用明显较强，可降低造模引起的ti值增加作用优于asp给药组；三棱素c对改善模型血清指标pai-1量以及升高ti值的作用明显优于asp，对降低模型血清的et-1浓度，改善si的作用，两者改善程度几无差异。结果分别详见表2。

表2

注：与模型组比较^*p<0.05，^**p<0.01；与asp组比较p<0.05，p<0.01。

各给药组的综合效应值随剂量的增加而增强(表3，图1)。

表3

本发明研究显示，三棱素a、三棱素b、三棱素c均具有显著降低et-1、pai-1、fib、txb2水平，和改善hi、ti、si的作用，首次证明了三棱素a、三棱素b、三棱素c均具有抗血瘀的药效作用，为抗血瘀天然药物开发提供有力的依据。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。