本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种包覆维生素d和维生素k的纳米囊泡制剂及其应用；尤其是涉及包覆维生素d和维生素k的纳米囊泡制剂以及该纳米囊泡制剂制备用于治疗骨关节炎的药物的用途。
背景技术
骨关节炎是最为常见的关节炎，最常见于膝关节。其可导致疼痛和残疾，严重影响人们的工作能力和生活质量。据世界卫生组织估计，全球范围内60岁以上人群症状性骨关节炎的患病率男性为9.6％，女性为18％。2010年全球约有膝骨关节炎患者2.51亿人，占总人口的3.6％。由于人类平均寿命的增加及肥胖人群的增多，骨关节炎的发病率仍将进一步增加。骨关节炎经济负担巨大，其费用约占美国、英国、法国、加拿大、澳大利亚等发达国家国民生产总值的1-2.5％。然而目前尚未有可以改善骨关节炎病情的治疗方法和药物。
维生素d和维生素k联合使用时可显著发挥骨关节炎保护作用。众所周知，维生素d与钙的吸收有密切的关系。维生素d的最主要的作用是维持血液中钙的动态平衡。维生素d在体内转化为活性维生素d后能与钙离子络合，从而增加钙的吸收，提高血液中钙的浓度。而维生素k则能活化一种称为骨钙蛋白的维生素k依赖蛋白。骨钙蛋白能将钙结合进骨基质中，同时防止钙沉积在动脉血管壁。维生素d和k的协同作用就是维生素d能促进消化道中的钙吸收进入血液循环，而维生素k则可以有效地将钙定向导入并固定在骨骼中而不是沉淀于血管壁上。
维生素d和维生素k联合使用时可显著发挥骨关节炎保护作用。众所周知，维生素d与钙的吸收有密切的关系。维生素d的最主要的作用是维持血液中钙的动态平衡。维生素d在体内转化为活性维生素d后能与钙离子络合，从而增加钙的吸收，提高血液中钙的浓度。而维生素k则能活化一种称为骨钙蛋白的维生素k依赖蛋白。骨钙蛋白能将钙结合进骨基质中，同时防止钙沉积在动脉血管壁。维生素d和k的协同作用就是维生素d能促进消化道中的钙吸收进入血液循环，而维生素k则可以有效地将钙定向导入并固定在骨骼中而不是沉淀于血管壁上。
维生素d和维生素k的复方制剂主要是制成普通胶囊和片剂，然而由于维生素d和维生素k均为脂溶性，其难以进入血液循环，故生物利用度较低。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明提供一种包覆维生素d和维生素k的纳米囊泡制剂及其应用，通过采用囊泡包裹技术将维生素d和维生素k包覆制备纳米囊泡制剂，可实现将维生素d和维生素k直接输送到血液中，相较于传统口服制剂可至少提高几十倍药效。
为解决上述问题，一方面，本发明在于提供一种包覆维生素d和维生素k的纳米囊泡制剂，以质量份数计，包括维生素d1～3份、维生素k3～7份、囊泡辅料30～100份。
进一步地，所述维生素d包括维生素d2和维生素d3。优选维生素d3。
进一步地，所述维生素k可以是维生素k1和维生素k2中的甲萘醌-4、甲萘醌-7、甲萘醌-8、甲萘醌-9和甲萘醌-10，优选甲萘醌-7。
进一步优选地，所述纳米囊泡制剂中，维生素d和维生素k的组合可以是：维生素d3和甲萘醌-7组合物，其是由2份的维生素d3和5份的甲萘醌-7组成；维生素d2和甲萘醌-7组合物，其是由3份的维生素d3和5份的甲萘醌-7组成；维生素d3和甲萘醌-4组合物，其是由1份的维生素d3和4份的甲萘醌-4组成。
进一步地，所述囊泡辅料包括卵磷脂类脂质体，所述卵磷脂类脂质体从植物或动物中提取出来。
进一步优选地，所述植物主要是大豆、棉籽、花生和向日葵等；所述动物主要是指蛋黄和各种脑组织等。优选卵磷脂类脂质体从大豆和蛋黄卵磷脂中提取。
进一步优选地，所述卵磷脂类脂质体的主要组分包括磷脂乙酰胆碱(pc)、磷脂酰乙醇胺(pe)和磷脂酰肌醇(pi)，其中pc的百分含量为40～95％。优选地，pc的百分含量为80％，进一步优选为90％。优选的pc，其为两亲化合物，在有机溶剂中的溶解度很高，但在水中的溶解度很低。pc容易吸水潮解，但在大量水存在时在高速搅拌或超声波的作用下却能够分散在水中形成双分子层囊泡。
另一方面，本发明提供一种包覆维生素d和维生素k的纳米囊泡制剂的制备方法，具体过程如下：将囊泡辅料、维生素d和维生素k溶于溶剂后经分散均匀得到囊泡溶液；
其中，所述溶剂包括非水性溶剂和极性可水性溶剂，
1)当所述溶剂为非水溶性溶剂时，溶解后除去溶剂得到有机物干膜，再加水溶液经分散均匀得到囊泡溶液；
2)当所述溶剂为极性可水溶溶剂时，溶解后加入水溶液经分散均匀得到囊泡溶液。
进一步地，所述水溶液为离子缓冲液，例如醋酸-醋酸钠缓冲溶液、磷酸-磷酸钠缓冲溶液等。优选地，所述离子缓冲液加入后，反应体系的ph控制在5～8之间。优选地，在加入水溶液时，采用缓慢滴加的方式，滴加过程中搅拌的速度为800～1500rpm，滴加完成后继续搅拌30～60min。加入离子缓冲液，可抑制卵磷脂类脂质体的水解，也可控制和维持囊泡环境的ph值。
更进一步地，1)中，分散均匀前，通入高纯氮气使反应体系处于氮气气氛中。
更进一步地，2)中，加入水溶液前，通入高纯氮气使反应体系处于氮气气氛中。
更进一步地，所述分散均匀处理的时间为5～30min。
进一步地，所述溶剂包括有机溶剂，例如醇类、醚类、烷烃类、酯类和卤代烷类溶剂；所述非水性溶剂包括醚类、烷烃类、酯类或卤代烷类溶剂；所述极性可水溶溶剂包括醇类、醚类或水。醇类可以是短链的甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和特丁醇；醚类可以是水溶性的和水不溶的，如乙醚、丙醚、四氢呋喃和二氧六环等；烷烃类可以是己烷、环己烷、庚烷和辛烷等；酯类可以是甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯和乙酸特丁酯等。溶剂的存在，可快速的溶解维生素d和维生素k，也为了能够充分与卵磷脂类脂质体混合。
进一步地，所述分散均匀可以使用但不限于以下设备：高速搅拌器、超声波分散器、囊泡挤出机或高压均质器。使用这些设备，可快速有有效的实现分散均匀。
进一步地，所述囊泡溶液再经喷雾或冷冻干燥得到固体粉末。
更进一步地，所述冷冻干燥的过程如下：将所述囊泡溶液加热去除溶剂后，补加水溶液至原体积后，冷冻干燥得到固体粉末。
更进一步地，所述囊泡溶液中可添加抗氧化剂。所述抗氧化剂包括但不限于，维生素e、维生素c、维生素e钠盐、维生素c钠盐、维生素e钾盐、维生素c钾盐、姜黄素等。所述抗氧化剂用量可以是卵磷脂类脂质体中pc的质量的1％～20％，优选为5～15％。抗氧化剂的存在，可提高囊泡溶液的存储稳定性，降低氧或其他自由基的影响。
另一方面，本发明提供一种药物组合物，其包括本发明制备的囊泡制剂制剂和药学上可接受的载体。
另一方面，本发明提供一种包覆维生素d和维生素k的囊泡制剂在制备治疗、防护或预防骨关节炎的药物中的用途。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明制备的囊泡溶液所使用的原料卵磷脂类脂质体都可以从纯天然的产物中提取出来，已大量生产，且价格低廉；双亲分子的卵磷脂类脂质体例如卵磷脂分散在水中可以自组装成双分子层囊泡，其结构与人体细胞的细胞膜十分相似，颗粒大小可从几十纳米至几百纳米。将维生素d和维生素k分散在囊泡溶液中，则基本上以分子形式存在，可实现囊泡将其直接输送到血液中的效果，进而大大提高药效。
通过将维生素d和维生素k包覆在磷脂囊泡里面，极大地增进抗关节炎的临床疗效；另外，本囊泡制剂所使用的原料几乎无毒副作用，可为抗骨关节炎的治疗提供新的方向。为骨关节炎研究提供了新的方法，为治疗、预防骨关节炎提供一种创新性手段。
本发明的制备方法简单、高效，可适合工业化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
以下实施例中如无特殊说明，所使用原料均来源于市售，所采用方法均为本领域技术人员公知的常规操作方法。
实施例：
实施例1
在250毫升烧瓶中，将卵磷脂类脂质体(含1克pc)、7.5毫克维生素k和3毫克维生素d溶于5毫升氯仿中，旋转蒸发去溶剂，加入ph＝6的醋酸-醋酸钠缓冲液99毫升，通高纯氮气20分钟，用频率为20khz功率为300w超声波乳化仪超声处理10分钟，得到浅黄色的稳定的囊泡液。
实施例2
在250毫升烧瓶中，将卵磷脂类脂质体(含1克pc)、50毫克维生素e、7.5毫克维生素k和3毫克维生素d溶于5毫升氯仿中，旋转蒸发去溶剂，加入ph＝6的醋酸-醋酸钠缓冲液99毫升，通高纯氮气20分钟，用频率为20khz功率为300w超声波乳化仪超声处理10分钟，得到浅黄色的稳定的囊泡液。
实施例3
在250毫升烧瓶中，将卵磷脂类脂质体(含1克pc)、50毫克维生素e、7.5毫克维生素k和3毫克维生素d溶于5毫升氯仿中，旋转蒸发去溶剂，加入ph＝8的三羟甲基氨基甲烷缓冲液99毫升，通高纯氮气20分钟，用频率为20khz功率为300w超声波乳化仪超声处理10分钟，得到浅黄色的稳定的囊泡液。
实施例4
在250毫升烧瓶中，将卵磷脂类脂质体(含1克pc)、7.5毫克维生素k和3毫克维生素d溶于5毫升氯仿中，旋转蒸发去溶剂，加入含50毫克维生素c的ph＝6的醋酸-醋酸钠缓冲液99毫升，通高纯氮气20分钟，用频率为20khz功率为300w超声波乳化仪超声处理10分钟，得到浅黄色的稳定的囊泡液。
实施例5
将卵磷脂类脂质体(含1克pc)、7.5毫克维生素k和3毫克维生素d溶解在30克95％的乙醇溶液中。在氮气下，将上述溶液慢慢加入装有ph＝6的醋酸-醋酸钠缓冲液70克的250毫升烧瓶中，滴加过程中的搅拌速度为1000rpm，滴加完后，继续搅拌半小时，然后用频率为20khz功率为300w超声波乳化仪超声处理10分钟，得到浅黄色的稳定的囊泡液。
实施例6
将卵磷脂类脂质体(含1克pc)、50毫克维生素e、7.5毫克维生素k和3毫克维生素d溶解在30克95％的乙醇溶液中。在氮气下，将上述溶液慢慢加入装有ph＝6的醋酸-醋酸钠缓冲液70克的250毫升烧瓶中，滴加过程中的搅拌速度为1000rpm，滴加完后，继续搅拌半小时，然后用频率为20khz功率为300w超声波乳化仪超声处理10分钟，得到浅黄色的稳定的囊泡液。
实施例7
将卵磷脂类脂质体(含1克pc)、7.5毫克维生素k和3毫克维生素d溶解在30克95％的乙醇溶液中。在氮气下，将上述溶液慢慢加入装有70克含50毫克维生素c的ph＝6的醋酸-醋酸钠缓冲液的250毫升烧瓶中，滴加过程中的搅拌速度为1000rpm，滴加完后，继续搅拌半小时，然后用频率为20khz功率为300w超声波乳化仪超声处理10分钟，得到浅黄色的稳定的囊泡液。
实施例8
将实施例1～7任一所得到的囊泡溶液喷雾干燥，得到黄色粉末。
实施例9
将实施例5～7任一所得到的囊泡溶液，加热到80℃，将乙醇共沸蒸馏去除，然后补加缓冲溶液到100克。将所得无醇的囊泡溶液在-55℃冷冻干燥24小时，得到黄色粉末。
实施例10
将本发明实施例1～9任一制备的囊泡制剂用以治疗骨关节炎，可大幅提高维生素d和维生素k的生物利用度，提高药物疗效。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。