本发明属于药物领域，具体涉及一种预防和治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的药物组合物及其制备方法和用途。
背景技术：
肝脏是物质代谢的重要器官，具有分泌、排泄、合成、生物转化及免疫等多种生理功能。当肠黏膜屏障被破坏、外源性毒素入侵时，肝生物转化作用减弱，肝脏受损严重。很多因素都可以引起肝脏损伤，包括外伤导致的肝损伤、化学性肝损伤，主要是由于平时用药及酒精等因素造成的肝脏损伤以及病毒性肝炎所导致的肝损伤等。肝损伤发病率高，是一种难以治愈的疾病。严重的肝损伤导致肝纤维化，末期肝硬化甚至肝癌的病理过程不仅包括病毒的直接作用，而且免疫失调也起关键作用。
扶正养肝合剂由当归、五昧子、枸杞、虫草菌丝四昧药材组成，当归昧甘、辛，性温；入肝、心、脾经。有补血调经、活血止痛、润肠通便之功。研究表明当归对d-氨基半乳糖所致的急性肝损伤有显著作用，表现在对肝细胞膜、肝线粒体、肝细胞核等的损害及肝糖原的降低，都有非常好的保护效果。五昧子昧酸、甘、性温，归肺、心、肾经，具有益气生津，补肾养心，收敛固涩之功效。实验证明，五昧子对四氯化碳等引起的动物血清谷丙转氨酶升高有抑制作用。五昧子是强效免疫调节剂，可刺激体液免疫和细胞免疫系统，增强机体的免疫功能，提高肝脏的抗病能力，有效抑制肝细胞病变。枸杞性平、昧甘，具有滋补肝肾，益精明目的功效。虫草菌丝冬虫夏草气微腥，昧微苦，性甘、平，归肺、肾经，具有补肾益肺、止血化痰的功效，改善肝脏功能，减轻肝脏的炎性细胞浸润和肝细胞变性坏死，具有抗肝纤维化的作用。cn106309729a报道了扶正养肝合剂具有调节慢性肝炎免疫的功能，具有抗炎、保护肝细胞、补虚的作用，可用于治疗慢性肝炎，应用于免疫功能异常并发呼吸道、消化道或其他组织器官感染者。
扶正养肝合剂对于免疫性肝损伤、药物性肝损伤的治疗作用并未见报道，并且扶正养肝合剂中虫草菌丝用量较高，导致了药物的成本较高，本发明致力于对扶正养肝合剂进行调整优化，提供一种成本低廉的预防或治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的药物组合物。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种预防或治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的药物组合物及其制备方法和用途。
一方面，本发明提供一种预防和治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的药物组合物，其特征在于：由当归30-50份、五昧子25-45份、枸杞30-50份、芍药10-20份、茯苓10-20份、虫草菌丝0-5份制成。
优选的，所述药物组合物由当归35-40份、五昧子35-40份、枸杞35-45份、虫草菌丝0-3份制成。
更优选的，所述药物组合物当归40份、五昧子35份、枸杞40份、芍药15份、茯苓15份制成。
本发明预防或治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的药物组合物可通过口服施用，优选的，所述药物组合物的剂型选自汤剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂或散剂等。
优选的，所述药物组合物选自汤剂、胶囊剂或片剂。
更优选的，所述药物组合物选自胶囊剂或片剂，所述片剂优选的为薄膜包衣片剂。
本发明的再一个目的是提供一种预防或治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)备料：按照配方称取各原料药；
(2)酶解：将配方量的当归、五昧子、枸杞，辐照灭菌后添加1-3倍量的纯净水，浸泡0.5-1.5h后使用胶体磨打浆，得混合浆料，调整混合浆料ph至4-5，加热混合浆料至35-60℃，并保温，添加混合浆料量5-7％的混合酶，混合均匀进行酶解，酶解1-3h后灭酶处理，过滤得滤液，任选的滤液减压浓缩至25℃时相对密度为1.05-1.08的浸膏；
(3)任选的粉碎：将虫草菌丝粉碎过10-30目筛，得虫草菌丝粉，备用；
(4)混合：在步骤(2)所得滤液或浸膏中任选的添加步骤(3)所得虫草菌丝粉，并添加药学上可接受的辅料后制备成相应剂型，即得预防或治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的药物组合物。
优选的，步骤(2)中添加2倍量的纯净水，浸泡1h后使用胶体磨打浆，得混合浆料，调整混合浆料ph至4.5，加热混合浆料至45℃，并保温，添加混合浆料量6％的混合酶，混合均匀进行酶解，酶解2h后灭酶处理，所述任选的步骤(3)中粉碎过20目筛。
优选的，所述混合物为纤维素酶与果胶酶的混合物，更优选的，所述纤维素酶与果胶酶的重量比为3-5∶2-4，最优选的，所述纤维素酶与果胶酶的重量比为5∶3。
优选的，所述剂型选自汤剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或散剂。
优选的，所述药学上接受的辅料选自：矫昧剂、稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂或助流剂、薄膜包衣剂、明胶胶囊壳等。
优选的，所述矫昧剂选自：阿斯巴甜、甜菊苷、甘草甜素、糖精钠；所述稀释剂选自淀粉、糊精、微晶纤维素等；所述粘合剂选自：淀粉浆、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚维酮等；所述崩解剂选自羧甲基淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠等；所述润滑剂或助流剂选自：硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶等。
本发明的再一个目的是提供当归、五昧子、枸杞、芍药、茯苓与虫草菌丝在制备预防或治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的药物组合物中的用途，所述当归、五昧子、枸杞、芍药、茯苓与虫草菌丝的用量为当归30-50份、五昧子25-45份、枸杞30-50份、芍药10-20份、茯苓10-20份与虫草菌丝0-5份。
优选的，所述当归、五昧子、枸杞、芍药、茯苓与虫草菌丝的用量为当归35-40份、五昧子35-40份、枸杞35-45份、芍药12-18份、茯苓12-18份、虫草菌丝0-3份。
更优选的，所述当归、五昧子、枸杞、芍药、茯苓与虫草菌丝的用量为当归40份、五昧子35份、枸杞40份、芍药15份、茯苓15份。
优选的，所述药物组合物的剂型选自汤剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂等。
优选的所述药物组合物选自汤剂、胶囊剂或片剂。
更优选的所述药物组合物选自胶囊剂或片剂，所述片剂优选的薄膜包衣片剂。
本发明有益效果
本发明对扶正养肝合剂的处方组成及制备方法进行调整优化，获得一种虫草菌丝用量少，免疫性肝损伤、药物性肝损伤治疗效果更优的药物组合物，降低了治疗成本，可广泛应用于免疫性肝损伤、药物性肝损伤的预防和治疗。
具体实施方式
在下文中更详细地描述了本发明以有助于对本发明的理解。
实施例1：一种预防和治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的汤剂
当归40份、五昧子35份、枸杞40份、芍药15份、茯苓15份，按照以下方法制备：
(1)备料：按照配方称取各原料药；
(2)酶解：将配方量的当归、五昧子、枸杞、芍药、茯苓辐照灭菌后添加2倍量的纯净水，浸泡1h后使用胶体磨打浆，得混合浆料，调整混合浆料ph至4，加热混合浆料至45℃，并保温，添加混合浆料量6％的混合酶，混合均匀进行酶解，酶解2h后灭酶处理，过滤得滤液；
(3)混合：在步骤(2)所得滤液中添加矫昧剂甜菊苷后，制得本发明预防和治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的的汤剂。
实施例2：一种预防和治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的颗粒剂
当归40份、五昧子35份、枸杞40份、芍药15份、茯苓15份，按照以下方法制备：
(1)备料：按照配方称取各原料药；
(2)酶解：将配方量的当归、五昧子、枸杞、芍药、茯苓辐照灭菌后添加2倍量的纯净水，浸泡1h后使用胶体磨打浆，得混合浆料，调整混合浆料ph至4，加热混合浆料至45℃，并保温，添加混合浆料量6％的混合酶，混合均匀进行酶解，酶解2h后灭酶处理，过滤得滤液，滤液减压浓缩至25℃时相对密度为1.05-1.08的浸膏；
(3)混合：在步骤(2)所得浸膏中添加适量甘草甜素、糊精、羧甲基纤维素钠后制粒，添加适量硬脂酸镁后制得本发明预防和治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的的颗粒剂。
实施例3：一种预防和治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的胶囊剂
当归30份、五昧子25份、枸杞30份、芍药10份、茯苓10份、虫草菌丝5份，按照以下方法制备：
(1)备料：按照配方称取各原料药；
(2)酶解：将配方量的当归、五昧子、枸杞、芍药、茯苓，辐照灭菌后添加2倍量的纯净水，浸泡1h后使用胶体磨打浆，得混合浆料，调整混合浆料ph至4.5，加热混合浆料至45℃，并保温，添加混合浆料量6％的混合酶，混合均匀进行酶解，酶解2h后灭酶处理，过滤得滤液，任选的滤液减压浓缩至25℃时相对密度为1.05-1.08的浸膏；
(3)粉碎：将虫草菌丝粉碎过20目筛，得虫草菌丝粉，备用；
(4)混合：在步骤(2)所得浸膏中添加步骤(3)所得虫草菌丝粉，并添加适量甘草甜素、糊精、羧甲基纤维素钠后制粒，添加适量硬脂酸镁后灌装于明胶胶囊壳后即得本发明预防和治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的胶囊剂。
实施例4：一种预防和治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的薄膜包衣片剂
当归40份、五昧子35份、枸杞40份、芍药20份、茯苓20份，按照以下方法制备：
(1)备料：按照配方称取各原料药；
(2)酶解：将配方量的当归、五昧子、枸杞、芍药、茯苓，辐照灭菌后添加2倍量的纯净水，浸泡1h后使用胶体磨打浆，得混合浆料，调整混合浆料ph至4.5，加热混合浆料至45℃，并保温，添加混合浆料量6％的混合酶，混合均匀进行酶解，酶解2h后灭酶处理，过滤得滤液，任选的滤液减压浓缩至25℃时相对密度为1.05-1.08的浸膏；
(3)混合：在步骤(2)所得浸膏中添加添加适量甘草甜素、糊精、羧甲基纤维素钠、交联聚维酮后制粒，添加适量硬脂酸镁后压片，得素片，对所述素片进行薄膜包衣后得本发明预防和治疗免疫性肝损伤、药物性肝损伤的薄膜包衣片剂。
对比例1：当归20g、五昧子15g、枸杞子15g、发酵冬虫夏草菌粉30g，按照以下方法制备：
(1)按比例称取药材当归、五昧子、枸杞子、发酵冬虫夏草菌粉；
(2)按照药材总重量加6倍水，浸泡1小时，煎煮3次，每次1.5小时，合并煎煮液，滤过，浓缩至25℃时相对密度为1.05-1.08的浸膏即得。
对比例2：当归20份、五昧子50份、枸杞50份、芍药20份、茯苓20份，按照以下方法制备：
(1)备料：按照配方称取各原料药；
(2)酶解：将配方量的当归、五昧子、枸杞、芍药、茯苓辐照灭菌后添加2倍量的纯净水，浸泡1h后使用胶体磨打浆，得混合浆料，调整混合浆料ph至4，加热混合浆料至45℃，并保温，添加混合浆料量6％的混合酶，混合均匀进行酶解，酶解2h后灭酶处理，过滤得滤液，滤液减压浓缩至25℃时相对密度为1.05-1.08的浸膏，即得。
对比例3：当归50份、五昧子45份、枸杞50份、芍药10份、茯苓10份，按照对比例2所述方法制得浸膏。
对比例4：当归40份、五昧子35份、枸杞40份、芍药15份、茯苓15份，按照以下方法制备：
(1)备料：按照配方称取各原料药；
(2)酶解：将配方量的当归、五昧子、枸杞、芍药、茯苓辐照灭菌后添加2倍量的纯净水，浸泡1h后使用胶体磨打浆，得混合浆料，调整混合浆料ph至4，加热混合浆料至45℃，并保温，添加混合浆料量3％的纤维素酶与果胶酶的混合酶(重量比5∶3)，混合均匀进行酶解，酶解2h后灭酶处理，过滤得滤液，滤液减压浓缩至25℃时相对密度为1.05-1.08的浸膏。
对比例5：当归40份、五昧子35份、枸杞40份、芍药15份、茯苓15份，按照对比例例4的下方法制备，区别在于添加混合浆料量10％的纤维素酶与果胶酶的混合酶(重量比5∶3)。
效果例1：本发明药物组合物对p.acnes-lps诱导小鼠免疫性肝损伤的保护作用
1.1实验药物
本发明实施例2步骤(2)所得浸膏；
对比例1-5所得浸膏；
所述实验药物均使用生理盐水配置为6g生药/ml；
脂多糖(lipopolysaccharide，lps)美国sigma；
丙酸杆菌(p.acnes菌株atcc6919)，接种在添加0.03％l-半胱氨酸(l-cysteine)和0.03％吐温80(tween80)的脑-心浸萃液态培养基培养液中，置于厌氧培养装置内37℃条件下培养48h。培养后回收菌液在4℃，10000g下离心15min，并以pbs清洗。清洗后的菌细胞重新以pbs分散，80℃加热30min灭活后冷冻干燥，并回收得p.acnes干粉用于本研究。
1.2实验动物
spf级balb/c小鼠雄性(7周龄，18-22g)，购自南方医科大学实验动物中心，许可证编号为scxk(粤)2016-0041。在清洁级层流架中饲养实验动物，饲养环境：相对湿度为75±10％，温度为23±2℃，照明时间12h/d(7：00-19：00开灯)。适应性饲养一周后进行实验。
1.3实验方法
1.3.1实验分组
动物实验：64只spf级雄性balb/c小鼠随机分为8组
正常组(normal)：空白组
模型组(model)：粉刺丙酸杆菌+脂多糖
本发明组：粉刺丙酸杆菌+脂多糖+本发明实施例2步骤(2)所得浸膏；
对比例1-5组：粉刺丙酸杆菌+脂多糖+对比例1-5浸膏。
1.3.2给药方案
balb/c小鼠尾静脉注射20mg/kg热灭活p.acnes生理盐水溶液，负荷5天后尾静脉注射1μg/mouselps-pbs溶液。小鼠每天一次连续21天灌胃，其中正常组与模型组灌胃生理盐水，本发明组和对比例1-5组灌胃相应药物，灌胃量均为0.4ml。在最后6天起给予p.acnes刺激5天，末次给药在lps注射30min前，对照组给予等容量水溶液。lps刺激5h后，小鼠称重后麻醉，眼眶取血，测定各组小鼠血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶。取小鼠肝脏组织，称重后使用4℃生理盐水制成10％组织匀浆，测定小鼠肝组织中gsh、mda、no含量，计算小鼠的肝重/体重比，实验结果见表1。
1.4实验结果
实验数据以mean±sd表示，采用microsoftexcel和spss13.0软件计算处理，利用anova和dunnett’s进行统计学检验，p＜0.05有统计学意义。
表1实验结果显示了相对于正常组小鼠，模型组小鼠的血清alt、ast均明显增高，肝重量明显增大，肝重/体重比明显增大，肝组织中mda、no含量明显增高，而gsh含量明显降低，表明p.acnes-lps导致了明显的肝组织损伤，急性免疫性肝损伤实验模型造模成功。
表1本发明药物组合物对p.acnes-lps诱导小鼠免疫性肝损伤的保护作用
与正常组比较：##p＜0.01；与模型组比较：*p＜0.05，**p＜0.01。
实验结果显示对比例1组的扶正养肝合剂显示了良好的纠正p.acnes-lps诱导的免疫性肝损伤小鼠血清alt、ast的升高、肝脏的增大，肝脏组织中mda、no含量的增加，gsh含量的降低的效果，该实验结果证明了扶正养肝合剂具有治疗免疫性肝损伤的作用。
相对于扶正养肝合剂，本发明药物组合物在降低虫草菌丝粉的用量，调整药物组成、药昧用量及药物制备方法的基础上，取得了更优的治疗免疫性肝损伤的效果，具体体现为，相对于对比例1组，灌胃本发明药物组合物的小鼠血清alt、ast降低幅度更大，肝重量降低程度更大，肝组织中mda、no含量降低幅度更大，gsh含量增高幅度更大，因此，以上实验结果均证明了本发明药物组合物相对于扶正养肝合剂具有更优的治疗免疫性肝损伤的效果。
对比例2-3组的药物组合物虽然也取得了降低急性免疫性肝损伤小鼠血清alt、ast含量，降低肝组织中mda、no含量，升高肝组织中gsh含量的效果，但其效果均明显弱于对比例1组的扶正养肝合剂，更是明显弱于本发明药物组合物，对比例2-3组药物组合物与本发明药物组合物的区别仅在于当归、五昧子、枸杞、芍药、茯苓用量的调整，对比例2-3的实验结果显示本发明药物组合物治疗免疫性肝损伤的效果与各药昧的用量密切相关。
对比例4-5为发明人筛选酶解用酶的种类与用量及其混合酶配比的例举，对比例4-5的实验结果显示了酶解酶的用量对于药物组合物药效的发挥也至关重要，酶解酶用量过少会导致活性成分的提取不充分，从而降低药物组合物的治疗效果，但酶解酶的用量过大也会导致活性成分的破坏，从而也会导致药物组合物治疗效果的降低。本发明中酶解酶的组成、配比及用量是发明人通过大量筛选实验最终确定的最优选择。
效果例2：本发明药物组合物对对乙酰氨基酚(apap)诱导小鼠药物性肝损伤的保护作用
2.1实验药物
本发明实施例2步骤(2)所得浸膏；
对比例1所得浸膏；
所述实验药物均使用生理盐水配置为6g生药/ml；
对乙酰氨基酚：上海美克林生化科技有限公司。
2.2实验动物
spf级balb/c小鼠雄性(7周龄，18-22g)，购自南方医科大学实验动物中心，许可证编号为scxk(粤)2016-0041。在清洁级层流架中饲养实验动物，饲养环境：相对湿度为75±10％，温度为23±2℃，照明时间12h/d(7：00-19：00开灯)。适应性饲养一周后进行实验。
2.3实验方法
2.3.1实验分组
动物实验：32只spf级雄性balb/c小鼠随机分为4组
正常组(normal)：空白组；
模型组(model)：apap组；
本发明组：apap+本发明实施例2步骤(2)所得浸膏；
对比例1组：apap+对比例1浸膏.
2.3.2给药方案
小鼠每天灌胃一次，连续灌胃21天，其中正常组与模型组灌胃生理盐水，本发明组和对比例1组灌胃相应药物，灌胃量均为0.4ml。灌胃最后一天，所有小鼠禁食不禁水，末次灌胃16h后，除空白组以外，所有小鼠均一次性腹腔注射apap(600mg/kg)进行造模，空白组小鼠腹腔注射等量生理盐水，造模6h后，处理动物，具体包括小鼠称重后麻醉，眼眶取血，测定各组小鼠血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶。取小鼠肝脏组织，称重后使用4℃生理盐水制成10％组织匀浆，测定小鼠肝组织中gsh、mda、no含量，计算小鼠的肝重/体重比，实验结果见表2。
2.4实验结果
实验数据以mean±sd表示，采用microsoftexcel和spss13.0软件计算处理，利用anova和dunnett’s进行统计学检验，p＜0.05有统计学意义。
表2本发明药物组合物对apap诱导小鼠药物性肝损伤的保护作用
与正常组比较：##p＜0.01；与模型组比较：＊p＜0.05，＊＊p＜0.01。
表2实验结果显示了相对于正常组小鼠，模型组小鼠的血清alt、ast均明显增高，肝重量明显增大，肝重/体重比明显增大，肝组织中mda、no含量明显增高，而gsh含量明显降低，表明apap导致了明显的肝组织损伤，药物性肝损伤实验模型造模成功。
对比例1组的扶正养肝合剂具有良好的纠正apap诱导的药物性肝损伤小鼠血清alt、ast的升高、肝脏的增大，肝脏组织中mda、no含量的增加，gsh含量的降低，该实验结果证明了扶正养肝合剂具有治疗药物性肝损伤的作用。
相对于对比例1的扶正养肝合剂，本发明实施例2药物组合物在不使用虫草菌丝粉的基础上，通过调整药物组成、药昧用量及药物制备方法，取得了更优的治疗药物性肝损伤的效果，具体体现为，相对于对比例1组，灌胃本发明药物组合物的小鼠血清alt、ast降低幅度更大，肝重量降低程度更大，肝组织中mda、no含量降低幅度更大，gsh含量增高幅度更大，因此，以上实验结果均证明了本发明药物组合物相对于扶正养肝合剂具有更优的治疗药物性肝损伤的效果。
以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。