活血丹叶片提取物在抑制痤疮丙酸杆菌中的应用的制作方法

本发明涉及中药材的应用，具体涉及一种活血丹叶片提取物在抑制痤疮丙酸杆菌中的应用。

背景技术：

活血丹(glechomalongituba(nakai)kupr.)，别名连钱草、金钱草等，为唇形科(labiatae)活血丹属(glechomalinn.)，多年生匍匐草本植物，常生长在海拔50-2000米范围内的林缘、疏林下、草地中、溪边等阴湿处，除青海、甘肃、新疆及西藏外，全国各地均有分布；俄罗斯、朝鲜也有。《中华人民共和国药典》将活血丹干燥地上部分收载为连钱草，具有清热解毒、利尿排石、散瘀消肿的功效，用于治疗热淋、石淋、湿热黄疸、疮痈肿痛、跌扑损伤等。

痤疮是一种常见的慢性炎症性皮肤病，在青少年中发病率达70％～87％(俗称青春痘)。研究表明，痤疮的发生与痤疮丙酸杆菌密切相关。痤疮丙酸杆菌属于专性厌氧或微需氧的菌种，同时丙酸杆菌属革兰阳性类白喉杆菌，是皮肤上的优势菌群。痤疮丙酸杆菌不仅会分解皮脂中的甘油三酯，产生大量的游离脂肪酸刺激毛囊及其周边组织发生炎症，还会诱导单核细胞及角质形成细胞分泌细胞因子，引起或加剧痤疮炎症。现代研究认为，痤疮丙酸杆菌的生长主要依靠皮脂中的三酰甘油作为营养元素，通过获取其甘油的部分作为自身能量的来源，而去酯化的脂肪酸残留于皮脂中并且含量与细菌的数量成正比。去酯化的游离脂肪酸可明显刺激毛囊皮脂腺开口处上皮的增生和角化过度，另外由痤疮丙酸杆菌本身产生的一些低分子多肽可驱化体内的中性粒细胞，后者产生的水解酶也可使毛囊壁损伤破裂，因而造成上述各种毛囊的内容物溢入到真皮内而引起毛囊周围程度不等的深部炎症并促进皮脂腺过多分泌，使皮脂排泄不畅。由此可以看出，能够抑制或杀死痤疮丙酸杆菌的药物可达到一定的祛痘效果。

技术实现要素：

本发明的目的在于开发中药材活血丹的功能，提供一种活血丹叶片提取物在抑制痤疮丙酸杆菌中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

本发明通过痤疮丙酸杆菌抑菌试验发现活血丹叶片提取物对痤疮丙酸杆菌的生长有明显的抑制作用，因此活血丹叶片提取物可用于抑制痤疮丙酸杆菌，可用于制备抑制痤疮丙酸杆菌的抑菌剂，可用于制备治疗痤疮或祛痘的药物。

一种抑制痤疮丙酸杆菌的抑菌剂，包含活血丹叶片提取物。

一种治疗痤疮或祛痘的药物，包含活血丹叶片提取物。

本发明还发现了活血丹叶片提取物具有降解细菌遗传物质——质粒dna的作用，表明其具有降解质粒dna的应用。

上述活血丹叶片提取物可以是活血丹叶片研磨得到的汁液，可以是活血丹叶片加水研磨后得到的液体。

本发明具有如下有益效果：本发明发现了活血丹新的应用，为抑制痤疮丙酸杆菌、治疗痤疮、祛痘提供了新的材料。

附图说明

图1是不同物质对质粒dna降解的结果图。图中，m为marker，a-e分别对应第一至第五组。

具体实施方式

以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1

(1)活血丹新鲜叶片提取物的制备

称取鲜重约8g活血丹叶片放入事先经冰浴过的低温研钵中进行研磨，为尽可能释放细胞内含物，事先往研钵中加入2g石英砂，研磨充分直至产生汁液后用纱布过滤出汁液，并置于4℃中保存，用于痤疮丙酸杆菌抑菌试验。

称取鲜重3g活血丹叶片并加入30ml的水后在研钵中研磨成浓度为0.1g/ml的水提液，置于4℃中保存，用于质粒dna裂解试验。

(2)活血丹新鲜叶片煮沸处理

称取鲜重约10g活血丹叶片放入500ml水中煮沸30分钟，收集液体，置于4℃中保存，做痤疮丙酸杆菌抑菌试验。

实施例2

将活化后的痤疮丙酸杆菌(中国典型培养物保藏中心)稀释到10^-4cfu/ml后从中取0.2ml均匀涂抹在装有bhi固体培养基的平皿中，总共接种10个平皿。

第一组：用10ml一次性无菌注射器取鲜重约8g活血丹叶片的研磨汁液经过millex-gp一次性针头滤器过滤3滴汁液到4个含有痤疮丙酸杆菌的bhi固体培养基平皿中且在其一半的面积中将3滴汁液涂抹均匀。

第二组：用相同的方法取鲜重约10g活血丹叶片经过煮沸后的液体到6个平皿中，涂抹汁液的面积都为平皿面积的一半。

在37℃无氧环境下培养两天后记录每个平皿中涂有活血丹叶片汁液的痤疮丙酸杆菌的单菌落个数和未涂的单菌落个数，计算分析活血丹叶片提取物对痤疮丙酸杆菌是否有抑菌作用，结果见表1、2。

表1第一组活血丹新鲜叶片提取物对痤疮丙酸杆菌单菌落个数的影响

从表1中可以看出活血丹新鲜叶片提取物对痤疮丙酸杆菌的生长具有显著的抑制作用。

表2第二组煮沸后的活血丹新鲜叶片提取物对痤疮丙酸杆菌单菌落个数的影响

从表2中可以看出活血丹新鲜叶片经过煮沸后对痤疮丙酸杆菌的生长仍然具有显著的抑制作用。

实施例3

(1)大肠杆菌感受态细胞的转化、培养与质粒提取

取100μl大肠杆菌(dh5α)感受态细胞并加入10μlpuc19质粒，冰水浴30min后在42℃水浴90s，冰水浴2min，添加含氨苄青霉素的lb液体培养基750μl，在37℃下振荡复苏2h，10000/rpm离心1min，弃上清液，留100μl左右垂悬细胞并均匀涂抹在含氨苄青霉素的lb固体培养基上，在37℃下倒置过夜，挑取单菌落在含氨苄青霉素的lb液体培养基的试管中振荡培养12h，采用e.z.n.a.plasmidminikiti试剂盒按照说明书的方法对已成功转入puc19质粒的大肠杆菌进行质粒提取。

(2)活血丹新鲜叶片提取物作用质粒dna的电泳检测

设置五组不同物质处理质粒dna：

第一组(水处理)：5μlpuc19质粒dna，10μl水；

第二组(酶切处理)：1μlxbai，1μlecori，5μlpuc19质粒dna，5μlcutsmartbuffer，3μl水；

第三组(活血丹新鲜叶片提取物处理)：5μl0.1g/ml活血丹新鲜叶片水提液，5μlpuc19质粒dna，5μl水；

第四组(艾叶精油处理)：5μl艾叶精油，5μlpuc19质粒dna，5μl水；

第五组(艾叶精油和活血丹新鲜叶片提取物处理)：2.5μl艾叶精油，2.5μl0.1g/ml活血丹新鲜叶片水提液，5μlpuc19质粒dna，5μl水。

将上述五组混合物置37℃培养箱过夜，第二天进行琼脂糖凝胶电泳检测，结果见图1。从图中可以看出第三和第五组没有dna条带，其余组均有dna条带，表明活血丹新鲜叶片提取物能破坏质粒dna使其降解。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。