通冠胶囊在制备治疗高血压心力衰竭药物中的应用的制作方法

本发明涉及中医药领域，具体涉及通冠胶囊在制备治疗高血压心力衰竭药物中的应用。

背景技术

高血压若长期控制不佳可引起心脏结构和功能的改变，称之为高血压性心脏病，包括：早期左室舒张功能减退、左室肥厚，逐步发展出现心肌收缩功能减退最终导致心力衰竭，有研究显示70％的心力衰竭是由高血压所致。目前高血压引起的心衰机制尚没有完全明确，导致心衰发生发展的基本机制是心肌重构，高血压会导致心肌肥厚、心肌纤维化、有收缩能力的心肌减少(张鸥等.高血压性心力衰竭的预防与治疗[j].中国医刊,2012,47(7):6-9.)。在某些诱因作用下(如感染、情绪激动、精神紧张、饮酒等)，高血压患者易发生急性心力衰竭，若不积极治疗，病死率很高。而且，高血压心力衰竭相比心内膜感染或心律失常导致的心力衰竭更为常见，且症状严重，难以逆转，单用降压药或强心药大多无法满足对高血压心力衰竭的治疗。

高血压心力衰竭的发生是一个渐进的过程，一旦启动，即使没有新的心肌损害，临床处于稳定阶段，仍然可以自身不断进展。近年来心力衰竭的药物和外科治疗取得了长足进步，临床上已有较系统的治疗方案，但仍不能理想地降低发病率和死亡率，同时由于西药副作用的存在和相对较高的治疗费用，限制了其在心衰治疗中大规模的临床应用，难以完成长期的临床治疗。因此寻求临床疗效确切、安全毒副作用小的治疗方法和药物一直为各国临床医师所关注，这使人们转向中医药这一传统医学的治疗方法。

专利cn101647856a公开了一种治疗冠心病的药物，特别适用于冠心病介入术后患者的治疗，其活性成分由黄芪、丹参和水蛭组成，对于治疗冠心病稳定型心绞痛效果显著，而引起冠心病稳定型心绞痛最常见的原因，则是因为冠状动脉固定性狭窄基础上伴有心肌氧耗量增加，其病理基础为冠状动脉粥样硬化性狭窄。该专利所提供的治疗冠心病的药物则通过作用于血管平滑肌细胞、内皮细胞、血小板、凝血-纤溶系统、血脂、炎症因子等动脉粥样硬化和再狭窄的多个靶点，对冠心病介入术后患者进行有效治疗和整体调节，但目前还未见将该通冠胶囊用于治疗高血压心力衰竭的报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供通冠胶囊的一种新用途，即用于制备治疗高血压心力衰竭药物。

根据本发明的一个方面，提供了通冠胶囊的新用途，即通冠胶囊在制备治疗高血压心力衰竭药物中的应用，其中的通冠胶囊的主要活性成分由以下重量百分比的原料药组成：黄芪40～60％，丹参20～50％，水蛭5～25％。

在一些实施方式中，通冠胶囊中主要活性成分优选配比为黄芪45～55％，丹参25～35％，水蛭10～20％；最佳配比为：黄芪50％，丹参35％，水蛭15％。

在一些实施方式中，药物由通冠胶囊中的主要活性成分和药学上可接受的赋形剂组成，可制备成胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、片剂、滴丸剂或口服液，供患者服用。

本发明中治疗高血压心力衰竭的药物可根据具体制剂的规范要求采用相应的现有的制备方法，其中，值得推荐的方法如下：

方法1：

用于治疗高血压心力衰竭的药物的制备方法如下：

(1)按配比称取丹参和水蛭，洗净、烘干、粉碎，过120目筛，得丹参-水蛭粉；

(2)按配比称取黄芪，每次加10倍量水，煎煮三次，每次分别煮沸1h、45min和45min，趁热过60目滤布，合并三次滤液，浓缩至含水量≤8％，放冷至室温，缓慢加入体积比为60％的乙醇，冷藏静置24h～48h，过滤，浓缩至20℃时相对密度为1.10～1.20，回收乙醇，得黄芪浸膏；

(3)将步骤(1)制得的丹参-水蛭粉与步骤(2)制得的黄芪浸膏充分混匀，烘干，粉碎，过120目筛，加入药学上可接受的赋形剂制成胶囊剂、颗粒剂、片剂或软胶囊剂。

方法2：

用于治疗高血压心力衰竭的药物的制备方法如下：

(1)按配比称取黄芪和丹参，每次加10倍量水，煎煮三次，每次分别煮沸1h、45min和45min，趁热过60目滤布，合并三次滤液，浓缩至含水量≤8％，放冷至室温，缓慢加入体积比为60％的乙醇，冷藏静置24h～48h，过滤，浓缩至20℃时相对密度为1.10～1.20，回收乙醇，得黄芪-丹参浸膏；

(2)按配比称取水蛭，洗净、烘干，粉碎，过120目筛，得水蛭粉；

(3)将步骤(1)制得的浸膏及步骤(2)制得的水蛭粉充分混匀，烘干，粉碎，过120目筛，加入药学上可接受的赋形剂造成胶囊剂、颗粒剂、片剂或软胶囊剂。

方法3：

用于治疗高血压心力衰竭的药物的制备方法如下：

(1)按配比称取丹参，加7倍的乙醇加热回流1.5h，过滤，药渣再加体积比为50％滤液的乙醇加热回流1h，过滤，合并滤液，浓缩至20℃时相对密度为1.10～1.20，回收乙醇，得丹参浸膏；

(2)按配比称取黄芪，加入丹参药渣中，每次加10倍量水，煎煮三次，每次分别煮沸1h、45min和45min，趁热过60目滤布，合并三次滤液，滤液减压浓缩至含水量≤8％，放冷至室温，缓慢加入体积比为60％的乙醇，冷藏静置24h～48h，过滤，浓缩至20℃相对密度为1.10～1.20，回收乙醇，得黄芪浸膏；

(3)按配比称取水蛭，洗净，烘干，粉碎，过120目筛，得水蛭粉；

(4)将步骤(1)和(2)制得的浸膏及步骤(3)制得的水蛭粉充分混匀，烘干，粉碎，过120目筛，加入药学上可接受的赋形剂造成胶囊剂、颗粒剂、片剂或软胶囊剂。

方法4：

用于治疗高血压心力衰竭的药物的制备方法如下：

(1)按配比称取黄芪和丹参，每次加10倍水，煎煮三次，每次分别煮沸1h、45min和45min，趁热过60目滤布，合并三次滤液，浓缩至含水量≤8％，放冷至室温，缓慢加入体积比为60％的乙醇，冷藏静置24h～48h，过滤，浓缩，回收乙醇，得黄芪-丹参浓缩液；

(2)按配比称取水蛭，加入10倍水，煎煮三次，每次煮沸1h、45min和45min，趁热过60目滤布，合并滤液，滤液减压浓缩，得水蛭浓缩液；

(3)将步骤(1)和步骤(2)制得的浓缩液混合均匀，加入药学上可接受的赋形剂制成口服液或滴丸剂。

通过动物实验和临床使用结果证明，本发明所称的通冠胶囊，在改善心室肥厚，增加心脏收缩功能，延缓心室重构，治疗和改善高血压心力衰竭方面具有良好的治疗和缓解效果，且其治疗效果优于美托洛尔；而且，本发明的通冠胶囊药味少、疗效确定可靠、药效成分明确、不良反应少，可显著改善患者预后及生存质量。

附图说明

图1为动物造模时大鼠生存情况图；

图2为四组大鼠超声心动图；

图3为四组大鼠左室射血分数(ef)测量结果，图中*表示与对照组比较p＜0.05，#表示与iso组比较p＜0.05；

图4为四组大鼠左室短轴缩短率(fs)测量结果，图中*表示与对照组比较p＜0.05，#表示与iso组比较p＜0.05；

图5为四组大鼠肺径比测量结果，图中**表示与对照组比较p＜0.01，##表示与iso组比较p＜0.01；

图6为四组大鼠心胫比测量结果，图中***表示与对照组比较p＜0.001，#表示与iso组比较p＜0.05；

图7为四组大鼠肺体比测量结果，图中*表示与对照组比较p＜0.01；

图8为四组大鼠心体比测量结果，图中***表示与对照组比较p＜0.001，##表示与iso组比较p＜0.01；

图9为四组大鼠心脏大体观以及心肌细胞he染色结果图；

图10为四组大鼠心肌细胞天狼星红染色结果图；

图11为四组大鼠给药一周后心肌细胞横切面积测量结果对比图，图中***表示与对照组比较p＜0.001，###表示与iso组比较p＜0.001；

图12为四组大鼠给药一周后心脏组织纤维化测量结果对比图，图中**表示与对照组比较p＜0.01，#表示与iso组比较p＜0.05，##表示与iso组比较p＜0.05；

图13为iso组、met组及tg组camkiiδ和mapks通路蛋白电泳图；

图14为erk磷酸化水平示意图，图中*表示与对照组比较p＜0.05；

图15为磷酸化p38与未活化p38比率结果图，图中*表示与对照组比较p＜0.05，#表示与iso组比较p＜0.05；

图16为磷酸化jnk与未活化jnk比率结果图，图中*表示与对照组比较p＜0.05，#表示与iso组比较p＜0.05；

图17为camkiiδ表达情况图，图中*表示与对照组比较p＜0.05，#表示与iso组比较p＜0.05；

图18为iso组、met组及tg组hdac4、mef2和gata4通路蛋白电泳图；

图19为hdac4表达情况图，图中**表示与对照组比较p＜0.01，#表示与对照组比较p＜0.05，##表示与iso组比较p＜0.01；

图20为mef2表达情况图，图中*表示与对照组比较p＜0.05，#表示与iso组比较p＜0.05。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步详细的说明。若无特殊说明，以下试验所用试剂均为市购。

实施例1

将通冠胶囊用于制备治疗高血压心力衰竭的药物，其制备方法如下：

(1)分别称取原料药黄芪、丹参、水蛭，三者重量百分比为：黄芪：丹参：水蛭＝50％：35％：15％；

(2)将丹参和水蛭洗净、烘干、粉碎，过120目筛，得丹参-水蛭粉；

(3)向黄芪中每次加10倍量水，煎煮三次，每次分别煮沸1h、45min和45min，趁热过60目滤布，合并三次滤液，浓缩至含水量≤8％，放冷至室温，缓慢加入体积比为60％的乙醇，冷藏静置24h～48h，过滤，浓缩至20℃时相对密度为1.10～1.20，回收乙醇，得黄芪浸膏；

(4)将步骤(2)制得的丹参-水蛭粉与步骤(3)制得的黄芪浸膏充分混匀，烘干，粉碎，过120目筛，加入药学上可接受的赋形剂制成胶囊剂。

实施例2

将通冠胶囊用于制备治疗高血压心力衰竭的药物，其制备方法如下：

(1)分别称取原料药黄芪、丹参、水蛭，三者重量百分比为：黄芪：丹参：水蛭＝60％：20％：20％；

(2)将黄芪和丹参混合后每次加10倍量水，煎煮三次，每次分别煮沸1h、45min和45min，趁热过60目滤布，合并三次滤液，浓缩至含水量≤8％，放冷至室温，缓慢加入体积比为60％的乙醇，冷藏静置24h～48h，过滤，浓缩至20℃时相对密度为1.10～1.20，回收乙醇，得黄芪-丹参浸膏；

(3)将水蛭洗净、烘干，粉碎，过120目筛，得水蛭粉；

(4)将步骤(3)制得的浸膏及步骤(4)制得的水蛭粉充分混匀，烘干，粉碎，过120目筛，加入药学上可接受的赋形剂造成颗粒剂。

实施例3

将通冠胶囊用于制备治疗高血压心力衰竭的药物，其制备方法如下：

(1)分别称取原料药黄芪、丹参、水蛭，三者重量百分比为：黄芪：丹参：水蛭＝40％：50％：10％；

(2)将丹参加7倍的乙醇加热回流1.5h，过滤，药渣再加体积比为50％滤液的乙醇加热回流1h，过滤，合并滤液，浓缩至20℃时相对密度为1.10～1.20，回收乙醇，得丹参浸膏；

(3)将黄芪加入丹参药渣中，每次加10倍量水，煎煮三次，每次分别煮沸1h、45min和45min，趁热过60目滤布，合并三次滤液，滤液减压浓缩至含水量≤8％，放冷至室温，缓慢加入体积比为60％的乙醇，冷藏静置24h～48h，过滤，浓缩至20℃相对密度为1.10～1.20，回收乙醇，得黄芪浸膏；

(4)将水蛭洗净、烘干、粉碎，过120目筛，得水蛭粉；

(5)将步骤(2)和(3)制得的浸膏及步骤(4)制得的水蛭粉充分混匀，烘干，粉碎，过120目筛，加入药学上可接受的赋形剂制造成片剂。

实施例4

将通冠胶囊用于制备治疗高血压心力衰竭的药物，其制备方法如下：

(1)分别称取原料药黄芪、丹参、水蛭，三者重量百分比为：黄芪：丹参：水蛭＝55％：40％：5％；

(2)将黄芪和丹参混合后每次加10倍水，煎煮三次，每次分别煮沸1h、45min和45min，趁热过60目滤布，合并三次滤液，浓缩至含水量≤8％，放冷至室温，缓慢加入体积比为60％的乙醇，冷藏静置24h～48h，过滤，浓缩，回收乙醇，得黄芪-丹参浓缩液；

(3)向水蛭加入10倍水，煎煮三次，每次煮沸1h、45min和45min，趁热过60目滤布，合并滤液，滤液减压浓缩，得水蛭浓缩液；

(4)将步骤(2)和步骤(3)制得的浓缩液混合均匀，加入药学上可接受的赋形剂制成口服液或滴丸剂。

以下通过动物实验来说明通冠胶囊在治疗高血压心力衰竭方面的效果，其中通冠胶囊按照实施例1所示的制备方法制得。

一、动物造模

spf级sd雄性大鼠90只，体重230-280g，随机分为对照组10只，模型组30只，阳性(美托洛尔)对照药组25只和通冠胶囊组25只。给予对应药物干预，记录大鼠生存情况，其中：

对照组(con)：每天一次生理盐水腹腔注射，蒸馏水灌胃，连续一周；

模型组(iso)：每天一次异丙肾上腺素10mg/kg皮下注射，蒸馏水灌胃，连续一周；

阳性对照药组(met)：每天一次异丙肾上腺素10mg/kg腹腔注射，美托洛尔30mg/kg灌胃，连续一周；

通冠胶囊组(tg)：每天两次异丙肾上腺素10mg/kg腹腔注射，通冠胶囊0.5g/kg灌胃，连续一周。

在动物造模过程中，小鼠生存情况如图1所示，由图中可以看出，con组生存率100％，iso组生存率53.66％，met组生存率75％，tg组生存率78.05％。iso组生存率较对照组明显降低(p＜0.001)，tg组生存率较iso组明显改善(p＜0.05)，met组生存率有改善趋势，但与iso组比无统计学意义。

二、各组大鼠心功能参数比较

1、试验方法

给药一周后，采用超高分辨率小动物超声成像系统(vevo2100，visualsonies)，用三溴乙醇、叔戊醇、阿托品麻醉后，将大鼠麻醉后放置于37℃的恒温垫上，通过导电膏将鼠四肢末端与4个电极相连接并用胶布固定。用剃毛刀和脱毛膏去除大鼠胸毛，在大鼠胸前区涂抹超声偶合剂，运用rmv707b型高频超声探头对大鼠进行超声心动图检查，探头置于其左胸，在取得满意的胸骨旁左心室长轴二维图像后在乳头肌水平，将切面移至左心室短轴切面，使乳头肌位于四点钟方向，通过m型超声记录心室壁运动，分析心脏结构功能，并计算左室射血分数(ejectionfraction，ef)以及左室短轴缩短率(fractionalshortening，fs)。

高血压心力衰竭会造成心脏左室收缩功能的下降，而ef和fs是判断左室收缩能力的首选指标，因此可用于评价心力衰竭的严重程度。

2、试验结果

各组大鼠超声心动图如图2所示，ef及fs测量结果如图3和图4所示，由图可知，iso组ef值较con组明显降低(p＜0.05)，tg组ef较iso组明显改善(p＜0.05)，met组较iso组有升高趋势，但无统计学意义。

由实验结果可知，tg组治疗后能明显升高大鼠的ef和fs，能够有效改善心力衰竭。

三、心、肺、肝脏称重及胫骨长度测量

1、试验方法

大鼠称重，麻醉后，取出大鼠心、肺、肝脏，分离左心室并称重；取出左侧胫骨，用游标卡尺量取胫骨长度，计算心体比、心胫比、肺体比、肺径比等。

2、试验结果

各组大鼠肺径比、心胫比测量结果分别如图5和图6所示，iso组肺胫比及心胫比较con组明显升高(肺胫比p＜0.01，心胫比p＜0.001)，met及tg治疗后，肺胫比较iso组明显降低(p＜0.01)，心胫比较iso组明显降低(p＜0.05)。

各组大鼠肺体比、心体比测量结果分别如图7和图8所示，iso组肺体比较con组明显升高(肺体比p＜0.01)，met及tg治疗后，肺体比较iso组明显降低(p＜0.01)。iso组心体比较con组明显升高(心体比p＜0.001)，met及tg治疗后，心体比较iso组降低，但无统计学意义。

四、心肌肥大及纤维化评价

1、试验方法

心脏标本取出后，用4％多聚甲醛溶液固定24小时后，常规脱水、石蜡包埋。对心肌细胞进行he染色、天狼星红染色，以观察心肌细胞肥大及心肌细胞外基质蛋白的变化。

2、试验结果

如图9和图10所示，分别显示出不同组别在给药一周后心脏大体观、心肌细胞he染色、天狼星红染色图，由心肌细胞he染色切片可观察到：met组及tg组心肌细胞排列整齐、致密，形态完整；iso组及con组心肌细胞排列紊乱、松散，心肌细胞体积明显增大，形态不规整。

图11和图12分别为不同组别心肌细胞横切面积图以及纤维化比率图，结果表明：iso组心脏较con组明显增大，心肌细胞横切面积明显增大(p＜0.001)，met及tg治疗后心肌细胞肥大明显改善(p＜0.001)；天狼猩红染色显示iso引起心脏组织纤维化(p＜0.01)，met及tg干预可明显改善心脏纤维化(metp＜0.01，tgp＜0.01)。

五、westernblot检测心脏组织蛋白表达

1、试验方法

匀浆冰冻心室组织，以sds聚丙烯酰胺凝胶电泳、转膜(pvdf膜)、封闭、杂交、化学发光法显影，评价通路蛋白camkiiδ、hdac4、mef2、mapks和gata4表达。

2、试验结果

由图13～图17可以看出，iso引起通路蛋白mapks(erk，jnk和p38)磷酸化水平明显升高(p＜0.05)，met及tg治疗可抑制mapks磷酸化激活(p＜0.05)。iso引起camkiiδ表达增高，met及tg治疗可降低iso引起的camkiiδ上调(p＜0.05)。

由图18～20可以看出，iso引起转录抑制因子hdac4由胞核转至胞浆，胞浆hdac4表达上调(p＜0.01)，met及tg治疗均可明显降低胞浆hdac4水平(metp＜0.01；tgp＜0.05)。iso引起转录因子mef2和gata4表达上调(p＜0.05)，met及tg可降低其表达(p＜0.05)。

因此，通过上述实验及数据结果的表征，说明通冠胶囊具有良好的改善高血压心力衰竭的效果。而且，本发明用于治疗高血压心力衰竭的药物药味少、疗效确定可靠、药效成分明确。

以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。