5-溴-2-（α-羟基戊基）苯甲酸钠盐在治疗心肌肥厚和心力衰竭中的药物用途的制作方法

本发明属于生物医药领域，涉及5-溴-2-(α-羟基戊基)苯甲酸钠盐(bzp)在治疗压力负荷诱导的心肌肥厚和心力衰竭中的药物用途。

背景技术：

心肌肥厚是心肌细胞对机械负荷、神经体液刺激等多种病理刺激的一种适应性反应。在早期，因心室壁增厚、心肌收缩功能改善而被视为代偿性过程，但在持久病理性应激情况下，伴随间质纤维化、收缩功能失调、心腔扩大，最终将导致失代偿性心力衰竭甚至猝死。截至目前，心肌肥厚被认为是不良心血管事件发生的独立危险因素。预防并及时治疗心肌肥厚受到了科研工作者的广泛关注和重视。然而，心肌肥厚发生机制复杂，至今仍未完全阐明，治疗药物局限于抗交感神经系统、抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统(raas)药物。

中国发明专利201410313214.4首次公开了5-溴-2-(α-羟基戊基)苯甲酸钠盐(bzp)的不同晶型及其制备方法，为发明人前期的研究成果。其说明书中公开了5-溴-2-(a-羟基戊基)苯甲酸钠盐可明显减轻大鼠脑动脉阻塞引起的脑组织损伤，减轻脑梗死体积，减少脑水肿体积，但并未涉及bzp在治疗压力负荷诱导的心肌肥厚和心力衰竭中的应用。

技术实现要素：

本发明提供了bzp用于治疗压力负荷诱导的心肌肥厚和心力衰竭中的药物用途。

为实现本发明目的，本发明以主动脉缩窄术后压力负荷诱导的心肌肥厚模型小鼠进行试验，研究bzp对c57bl/6小鼠压力负荷诱导的心肌肥厚和心力衰竭的保护作用，发现bzp口服能降低小鼠主动脉缩窄术后的心重体重比、心重胫骨长比，缩小肥大心肌细胞的横截面积、减轻心肌组织纤维化水平，减少肥大相关基因表达，改善压力负荷诱导的心功能损伤，减轻心肌肥厚、降低心肌重构的发生，同时延缓心衰的进程。

bzp可以作为治疗心肌肥厚和心力衰竭药物有效成分，尤其是压力负荷诱导的心肌肥厚和心力衰竭药物有效成分，可以制成片剂、颗粒等口服制剂或注射针剂，优选给药方式为口服、给药量20mg/kg/次或40mg/kg/次，每日一次。

本发明创新点在于：以主动脉缩窄术后压力负荷诱导的心肌肥厚模型小鼠进行试验，发现5-溴-2-(α-羟基戊基)苯甲酸钠盐(bzp)可明显改善心功能损伤，减轻心肌肥厚、降低心肌重构的发生，同时延缓心衰的进程，有望开发成治疗心血管一类新药。

附图说明

图1为c57bl/6小鼠压力负荷诱导的心肌肥厚和心力衰竭超声分析图例；

图2为c57小鼠主动脉缩窄(tac)术后4周及10周时口服bzp后心重体重比、心重胫骨长比，肺重体重比柱状图；

图3为c57小鼠主动脉缩窄(tac)术后4周及10周时口服bzp后心肌组织he染色、wga染色及masson染色代表性图片；

图4为c57小鼠主动脉缩窄(tac)术后4周及10周时口服bzp后心肌细胞横截面积、心肌组织纤维化定量柱状图；

图5为c57小鼠主动脉缩窄(tac)术后4周及10周时口服bzp后对肥大相关基因anf、bnp、β-mhc的mrna影响的柱状图；

图6为代表性的c57小鼠心脏超声图例；

图7为bzp对c57小鼠行tac术后的重要心肌收缩功能指标ef(％)的保护作用柱状图；

图8为bzp对c57小鼠行tac术后的重要心肌收缩功能指标fs(％)的保护作用柱状图；

图9为bzp对c57小鼠行tac术后室间隔舒张末期厚度ivsd的保护作用柱状图；

图10为bzp对c57小鼠行tac术后左室舒张末期内径lvidd的保护作用柱状图；

图11为bzp对c57小鼠行tac术后左心室质量lvmass(corrected)的保护作用柱状图；

具体实施方式

下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例：bzp对c57bl/6小鼠压力负荷诱导的心肌肥厚和心力衰竭的保护作用实验材料和方法

(1)实验材料

8周龄c57bl/6小鼠，体重19-22g，均为雄性，bzp(5-溴-2-(α-羟基戊基)苯甲酸钠盐)粉末，用双蒸水配置。

(2)实验分组

随机分为4组，分别为：假手术组(sham)；心肌肥厚模型组(tac)；bzp(5-溴-2-(α-羟基戊基)苯甲酸钠盐)高剂量组(40mg/kg)、bzp(5-溴-2-(α-羟基戊基)苯甲酸钠盐)低剂量组(20mg/kg)。

(3)长期给药方法

治疗组：tac模型建立后灌胃给予bzp(5-溴-2-(α-羟基戊基)苯甲酸钠盐)，剂量分别为20mg/kg，40mg/kg。给药体积为0.01ml/g。

对照组：tac模型建立后灌胃给予生理盐水，给药体积同上。

tac模型的制备：术前称重，使用质量百分含量1％的异氟烷对小鼠进行吸入麻醉，取仰卧位固定于鼠板。将蘸有异氟烷的棉球置于1.5mlep管中，并罩于小鼠鼻部，短暂加深麻醉后用质量百分含量75％酒精消毒颈部和胸部皮肤。从颈部喉软骨处向下将皮肤剪开约1cm长的切口，从中间拨开甲状腺，逐层分离颈前肌至暴露气管，打开呼吸机，将呼吸机容量积和频率调至正确位置，检测呼吸机管道是否通畅，关闭呼吸机。用镊子将小鼠舌头轻轻向外拉出，使喉-会咽部通畅，将插管插到喉部(并不完全插入)，一只手用眼科弯镊固定暴露的气管，一只手慢慢将插管送入气管，可从暴露的气管中将插管引导性插入气管，打开呼吸机。暴露主动脉弓部位，从胸骨正中间从下切口处向下剪至第二肋前端，左右逐层分离肌肉，至主动脉弓暴露，将7-0线从左右颈总动脉之间的主动脉弓下穿过，将全直角的27号针头一边与主动脉弓平行放置主动脉弓的一侧，将针头和主动脉弓一起结扎，结扎两下，将针头从结扎处轻轻拔出，剪线。作为假手术组，线穿过主动脉弓但不结扎。用6-0线逐层缝合肌肉，最后用5-0线连续缝合皮肤。

(4)无创超声评价心功能：分别于tac术前及术后2周、4周和10周，使用超声诊断仪和30mhz高频探头对小鼠的心功能进行测定，质量百分含量1％的异氟烷对小鼠进行吸入麻醉，剃除心前区毛发，小鼠仰卧位固定在加热板上，保持体温的恒定。涂适量超声耦合剂于心前区，用超声仪30mhz的探头在小鼠胸壁上开始采集胸骨旁长轴切面、取胸骨旁左室短轴，获得m型切面图像测量左室舒张期及收缩期前后壁厚度、左心室射血分数(ef％)等。对于不同的个体，超声诊断仪均设置相同的参数。m超每个测量指标均选取5个连续的心动周期后求出ef％,fs％等的平均值。如图1。

(5)分别于tac术后4周和10周处死各组相近数量的小鼠，取心脏、肺脏并称重，测量左侧胫骨长度。然后将上述小鼠部分心脏石蜡包埋，制成石蜡切片进行he、masson、wga染色观察心脏组织形态学变化；其余部分心脏提取rna检测肥大相关基因anf、bnp、β-mhc的mrna表达。

(6)统计学分析：数据以均数±标准差表示，并以两两比较t检验以及one-wayanova进行统计学分析，p<0.05认为差异有统计学意义。

实验结果：

(1)bzp口服可降低c57小鼠主动脉缩窄(tac)术后4周及10周时心重体重比、心重胫骨长比

主动脉缩窄(tac)术后4周及10周时，bzp口服20mg/kg，40mg/kg给药组与tac模型组相比，心重体重比、心重胫骨长比明显降低，肺重体重比变化不明显(图2，*：与假手术组(sham)相应时间比较p<0.05；#：与模型组(tac)相应时间比较p<0.05)。

(2)bzp口服可缩小c57小鼠主动脉缩窄(tac)术后4周及10周时肥大心肌细胞的横截面积、减轻心肌组织纤维化水平

主动脉缩窄(tac)术后4周及10周时，bzp口服20mg/kg，40mg/kg给药组与tac模型组相比，肥大心肌细胞的横截面积显著缩小、心肌组织纤维化水平明显减轻(图3，*：与假手术组(sham)相应时间比较p<0.05；#：与模型组(tac)相应时间比较p<0.05)。

(3)bzp口服可减少c57小鼠主动脉缩窄(tac)术后4周及10周时肥大相关基因表达

主动脉缩窄(tac)术后4周及10周时，bzp口服20mg/kg，40mg/kg给药组与tac模型组相比，肥大相关基因anf、bnp、β-mhc的mrna表达明显减少(图4，*：与假手术组(sham)相应时间比较p<0.05；#：与模型组(tac)相应时间比较p<0.05)。

(4)bzp口服可改善c57小鼠主动脉缩窄(tac)术后压力负荷诱导的心功能损伤，延缓心衰的发生

采用在体主动脉缩窄构建压力负荷诱导的心肌肥厚模型(tac)，分别于术前及术后2，4，10周小动物超声仪记录小鼠的心脏收缩功能，结果显示bzp口服20mg/kg/day和40mg/kg/day，连续给药10周，与模型组(tac组)相比，可明显改善主动脉缩窄(tac)术后的心脏收缩功能，包括：射血分数(ef％)，收缩百分数(fs％)，延缓心衰的发生(*：与假手术组(sham)相应时间比较p<0.05；#：与模型组(tac)相应时间比较p<0.05)。

(5)bzp口服可减轻c57小鼠主动脉缩窄(tac)术后心肌肥厚、降低心肌重构的发生

采用在体主动脉缩窄构建压力负荷诱导的心肌肥厚模型(tac)，分别于术前及术后2，4，10周小动物超声仪记录小鼠心肌肥厚及重构的相关指标，结果显示bzp口服20mg/kg/day和40mg/kg/day，连续给药10周，与模型组(tac组)相比，可明显减少室间隔舒张末期厚度(ivsd)的增加、减少左室舒张末期内径(lvidd)的扩大、减少左心室质量(lvmass(corrected))的增加，降低心肌重构的发生，延缓心衰的进程。(*：与假手术组(sham)相应时间比较p<0.05；#：与模型组(tac)相应时间比较p<0.05)。

实验结论:

bzp口服给药可降低小鼠主动脉缩窄术后的心重体重比、心重胫骨长比，缩小肥大心肌细胞的横截面积、减轻心肌组织纤维化水平，减少肥大相关基因表达，改善压力负荷诱导的心功能损伤，减轻心肌肥厚、降低心肌重构的发生，同时延缓心衰的进程。该发现为寻求治疗心肌肥厚和心力衰竭的新药物提供了方向。

以上所述仅是本发明的较佳实施方式，故凡依本发明专利申请范围所述的构造、特征及原理等所做的各种修改或改动，均作为等价形式同样落于本申请所附的权利要求书所限定的范围之内。