一种用于控制马属动物排卵的制剂及控制排卵的方法与流程

本发明涉及动物繁殖领域，具体地涉及一种用于控制马属动物排卵的制剂及控制排卵的方法。

背景技术：

随着国民经济发展和人民生活水平的提高，马的饲养、调教、竞技与休闲娱乐等产业发展迅速，且市场潜力巨大，近几年其产值呈直线上升趋势，预计到2030年，中国马业总产值将达万亿规模。目前，中国马的存栏量在600万匹左右，但质量参差不齐，缺乏专门的速度、耐力性能优良、马术和休闲骑乘品种，无法满足当前市场需求。因此，特色良种马的繁育是当前亟待解决的问题之一。同时，近10年来，随着人们健康意识的提高，驴肉、驴奶、驴骨、驴胎盘和阿胶等的保健价值越来越被重视，驴产品的市场需求急剧上升，到2020年，驴产业预计将达到数千亿规模。目前，活驴需求量日益扩大，仅阿胶市场，目前每年需要驴皮400万张，而中国驴的总存栏量不足500万头，供不应求，不得不依赖国外进口，导致国际驴皮价格飞涨。在中东和非洲的主要养驴国出现了不法商贩偷猎和私屠滥宰农用驴，严重影响了当地农业生产和动物福利。多个国家已禁止驴皮出口，这对中国阿胶产业产生了很大影响。由此可见，中国对良种马、驴的扩繁技术需求非常迫切。由于马属动物性成熟晚、单胎且妊娠期较长(马，340天；驴，365天)，与其他家畜相比，繁殖力较低。在中国绝大多数地区，母马或母驴基本两年一胎或三年两胎。这直接影响马驴相关产业的发展。因此，如何提高母马和母驴的繁殖效率是当前急需解决的问题。

马属动物繁殖的最大问题是发情持续时间长(母马5-8天、母驴6-9天)，多数排卵发生在发情的第5-9天，但排卵时间很不规律，受多种因素影响，如天气、群体效应、日照时间、温度和营养环境等。这使得母马和母驴的最佳配种或输精时间难以确定，特别是冻精输精，导致情期受胎率低。在生产上，为了提高受胎率，只能采用多次输精或反复检查卵泡发育动态以较准确地预测排卵时间，但其人力和技术成本很高，并且受胎率与技术人员的主观判断有直接关系，严重制约了集约化养殖场的经济效益。

近年来，母马的排卵控制方法研究在马业发达国家进展较快，主要采用的方法为：当母马卵泡直径达到35mm以上时，肌肉注射人绒毛膜促性腺激素(hcg)、促性腺激素释放激素(gnrh)及其类似物，诱导排卵，其中hcg在马上最常使用。根据barbacini等人的研究报道，用2000iu的hcg处理卵泡直径达到35mm以上的母马，75％的处理马在第25-48小时内排卵，48小时的总体排卵率达90％(barbacinis,zavagliag,guldenp,marchiv,necchid.retrospectivestudyontheefficacyofhcginanequineartificialinseminationprogrammeusingfrozensemen.equineveterinaryeducation.2010,12:312-317.)。然而，hcg是外源糖蛋白质，反复注射会诱发母马产生抗hcg抗体，导致排卵效果逐渐降低，有的母马在注射后甚至没有排卵反应，所以一个配种季节的使用次数一般不超过两次。1975年，gnrh首次被报道成功用于诱导动物排卵，目前gnrh的类似物已广泛应用在牛、猪、羊和鱼等动物。但是，gnrh及其类似物在体内半衰期一般为几分钟左右，尽管有的类似物的半衰期可以延长至几十分钟，但在马属动物中的应用依然受到限制。由于马属动物发情期长且排卵时间不固定，需要多次重复注射，才能获得较好的排卵效果，但这在生产上增加了劳动力成本和动物应激反应，难以推广应用(camillof,pacinim,panzanid,vannozzii,rotaal,ariag.clinicaluseoftwicedailyinjectionsofbuserelinacetatetoinduceovulationinthemare.2004,vetrescommun28,169–172.)。因此，需要探索新的排卵控制方法。

驴的繁殖生理特点和马存在较大差异。国内外的研究都发现母驴基本四季排卵，不同季节仅存在排卵率的高低；而马从深秋到早春基本处于乏情状态。此外，驴的正常发情期比马长2-3天，其排卵时间更难把握，这也是导致母驴繁殖力比马更低的最主要原因。目前，国内外关于母驴排卵控制的研究很少，而用于母马的排卵控制方法又难以适用于母驴。因此，母驴排卵控制及定时配种技术对快速提高母驴繁殖力、推动驴产业发展具有重要意义。

技术实现要素：

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种用于控制马属动物排卵的制剂及控制排卵的方法。

本发明提供一种用于控制马属动物排卵的制剂，包含促性腺激素释放激素(gnrh)类似物和动物体内可降解的缓释载体。

本发明中，所述动物体内可降解的缓释载体包含聚(dl-丙交酯-co-乙交酯)、聚蔗糖、聚丙交酯、聚乙交酯、聚乙二醇、聚乙酸、聚乙醇酸、乙酸异丁酸蔗糖酯、聚酸酐、多聚赖氨酸、海藻酸盐中的一种或多种；

优选地，所述动物体内可降解的缓释载体选自聚(dl-丙交酯-co-乙交酯)、聚蔗糖、聚丙交酯、聚乙交酯、聚乙二醇、聚乙醇酸、乙酸异丁酸蔗糖酯、聚酸酐、多聚赖氨酸、海藻酸盐中的一种。

本发明中，所述促性腺激素释放激素类似物包括曲普瑞林、布舍瑞林、戈那瑞林、德舍瑞林、亮丙瑞林、戈舍瑞林、天然促性腺激素释放激素中的一种或多种；

优选地，所述促性腺激素释放激素选自曲普瑞林、布舍瑞林、戈那瑞林、德舍瑞林、天然促性腺激素释放激素中的一种。

本发明中，为实现有效的马属动物排卵控制，当选择不同的促性腺激素释放激素类似物时，所述制剂中促性腺激素释放激素类似物的含量不同：当所述促性腺激素释放激素选自曲普瑞林、布舍瑞林、戈那瑞林、德舍瑞林、天然促性腺激素释放激素中的一种时，所述促性腺激素释放激素类似物的质量百分含量如下：曲普瑞林0.005％～1.0％、布舍瑞林0.0002％～0.2％、戈那瑞林0.001％～0.08％、德舍瑞林0.01％～0.2％、亮丙瑞林0.001％～0.5％、戈舍瑞林0.0001～0.05％、天然促性腺激素释放激素0.005％～0.01％。

本发明中，所述促性腺激素释放激素类似物和所述动物体内可降解的缓释载体的质量百分含量比例为1：300～1：14000；

优选地，为实现更优的缓释效果，同时使得促性腺激素释放激素类似物高效发挥控制排卵的作用，所述促性腺激素释放激素类似物和所述动物体内可降解的缓释载体的质量百分含量比例为1：1400～1：14000。

本发明中，为实现更优的缓释效果，同时使得促性腺激素释放激素类似物高效发挥控制排卵的作用，所述动物体内可降解的缓释载体的质量百分含量为60％～85％；所述促性腺激素释放激素类似物的质量百分含量为0.005％～0.2％；

作为本发明的一种优选实施方式，当所述动物体内可降解的缓释载体为聚蔗糖，所述促性腺激素释放激素类似物为德舍瑞林时，所述德舍瑞林和聚蔗糖的质量百分含量比例为1：3500～1：7500；

其中，所述聚蔗糖的质量百分含量为70％～75％，所述德舍瑞林的质量百分含量为0.01％～0.2％。

本发明中，所述制剂以水、二甲基亚砜、乙醇、乳酸乙酯、乙酸乙酯、碳酸丙二酯中的一种或多种混合物作为溶剂。

所述制剂还包括辅助添加剂；所述辅助添加剂包括蔗糖、海藻糖中的一种或两种。

优选地，所述辅助添加剂为海藻糖；所述海藻糖的质量百分含量为0.01％～0.5％。

作为本发明的一种优选实施方式，所述控制马属动物排卵的制剂由如下组分组成：

进一步地，本发明还提供所述制剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)将促性腺激素释放激素类似物和辅助添加剂充分溶解于溶剂中，制得溶液a；

(2)将动物体内可降解的缓释载体充分溶解于溶剂中，制得溶液b；

(3)将溶液a和b充分混匀。

本发明中，所述制剂配制完成后装入玻璃瓶中，密封，采用辐照灭菌；或两种溶液在混合前用孔径为0.22μm的疏水滤膜过滤灭菌，然后无菌混合装入玻璃瓶中，密封。

进一步地，本发明还提供一种控制马属动物排卵的方法，为在马属动物发情期注射所述的制剂。

具体地，所述控制马属动物排卵的方法包括如下任一步骤：

(1)在卵泡成熟后先进行自然配种，配种完成后注射所述制剂，或配种前注射所述制剂；

(2)在卵泡成熟后，注射所述制剂，8～12小时后，用鲜精或低温保存精液输精；

(3)在卵泡成熟后，注射所述制剂，30～34小时后，用冷冻精液输精；

所述卵泡成熟的判断标准为：当所述动物为马时，卵泡直径≥30～35mm；当所述动物为驴时，卵泡直径≥25～30mm。

优选地，所述卵泡成熟的判断标准为：当所述动物为马时，卵泡成熟为卵泡直径≥35mm；当所述动物为驴时，卵泡成熟为卵泡直径≥30mm。

本发明中，如果上述(1)和(2)中在48小时内未检测到排卵且卵泡发育正常，可以选择再注射所述制剂一次，然后再次配种或输精，直至检测到排卵；如果上述(3)中在12小时内未排卵且卵泡发育正常，可以选择再注射所述制剂一次，然后再次输精，直至检测到排卵。

本发明中，所述制剂的注射用量为0.1～10.0ml，优选为0.5～2.5ml。

本发明的有益效果在于：

(1)本发明通过将促性腺激素释放激素制备为缓释制剂，实现了促性腺激素释放激素的缓慢可控释放，有效延长了其在体内的半衰期；通过特定的缓释载体和促性腺激素释放激素的复配以及各组分含量配比的优化，使得排卵液能够长时间、高效稳定地发挥促进排卵的作用，实现马属动物的高效排卵控制(96％以上母马和母驴在48小时以内排卵，并且其中96％以上动物的排卵时间控制在8小时范围内)，进而提高了马属动物的自然配种和人工配种的妊娠率，有效提高了马属动物的繁殖效率。

(2)本发明提供的用于控制马属动物排卵的制剂，制备工艺简单，原料价格低廉，生产成本低；对动物本身及其产品不产生任何有害影响。

(3)采用本发明提供的控制排卵方法，通过准确控制排卵时间，确定最佳配种时间，能够显著提高配种或人工授精的受胎率：母马一次本交配种，受胎率达到81％；用鲜精一次人工授精后，受胎率达到70％以上；用冷冻精液输精的情期受胎率能达到60％以上；母驴一次鲜精输精，受胎率能达到50％以上；冷冻精液输精后的情期受胎率能达到40％以上。

(4)采用本发明提供的控制排卵方法，显著减少配种次数，提高了良种公畜精液的使用效率，降低母畜怀孕的配种成本，大大提高牧场经济效益。

附图说明

图1为实施例6中母驴的排卵时间分布。

图2为实施例9中注射排卵液后母驴生殖激素的变化规律。其中，a为雌激素(e2)的变化曲线图，b为类胰岛素样生长因子-1(igf-1)的变化曲线图，c为孕激素(p)的变化曲线图；g1、g2、g3分别为注射排卵液的3头驴，cn1、cn2、cn3分别为自然排卵的3头驴。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了达到说明目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换，但仍属于本专利的保护范围。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1控制动物排卵的排卵液的制备

1、含不同缓释载体的排卵液及其应用效果

(1)含有不同缓释载体的排卵液的制备

以下a～j分别提供本实施例含有不同缓释载体的排卵液：

a.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入乙醇充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚(dl-丙交酯-co-乙交酯)，加入乙醇充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以乙醇补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

b.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以无菌超纯水补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

c.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入乙醇充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚乙二醇，加入乙醇充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以乙醇补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

d.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入乙醇充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚丙交酯，加入乙醇充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以乙醇补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

e.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入乙醇充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚乙交酯，加入乙醇充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以乙醇补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

f.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入乙醇充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚乙醇酸，加入乙醇充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以乙醇补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

g.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入乙醇充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g乙酸异丁酸蔗糖酯，加入乙醇充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以乙醇补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。。

h.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入乙醇充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚酸酐，加入乙醇充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以乙醇补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

i.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入无菌超纯水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g多聚赖氨酸，加入水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以无菌超纯水补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

j.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入无菌超纯水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g海藻酸盐，加入无菌超纯水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀以无菌超纯水补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

(2)不同排卵注射液的控制排卵效果分析

在内蒙地区，选择3-8岁德州杂交母驴共计300头，膘情中等以上、健康、繁殖力正常，随机分为10组，每组30头。饲养在带有户外运动场的圈舍，自由饮水，每天两次饲喂专用配合饲料。在2-8月份，每天上午8:00～10:00用b超探头隔直肠壁，检查卵泡发育和子宫内膜形态变化情况。在b超仪上，采用“十字交叉法”测量卵泡直径，即在纵向上测一最大值，然后垂直交叉，在横向上测一最大值，两值相加取均值，就是卵泡直径。当卵泡直径达到30mm以上时，当日上午10:00在各组母驴的臀部肌肉分别注射上述a～j制备的排卵注射液1.0ml。在注射后24小时和48小时用b超检查排卵情况，结果如表1所示，表1中各组数据均为在同一群体的不同发情周期注射排卵液后排卵检测结果的平均值，结果表明，采用聚蔗糖作为缓释载体的排卵控制效果最佳，96.0％的母驴在48h内排卵。(表1中的数据为a～j组各组排卵液在同一群体的不同发情周期注射多次，取平均值)

表1.不同缓释载体对母驴排卵控制效果的影响

注：同列数值上标a,b表示差异显著(p＜0.05)。

2、含不同gnrh类似物的排卵液及其应用效果

(1)含有不同gnrh类似物的排卵液的制备

以下a～e分别提供本实施例制备的含有不同gnrh类似物的排卵液：

a.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。。

b.称取布舍瑞林2.0g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.2％布舍瑞林排卵液。。

c.称取戈那瑞林0.4g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.04％戈那瑞林排卵液。

d.称取0.2g曲普瑞林和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.02％曲普瑞林排卵液。

e.称取0.1g天然gnrh和海藻糖2.0g，加入乙醇充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚蔗糖，加入乙醇充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以乙醇补足至1000g，即得0.01％天然gnrh排卵液。

(2)不同排卵注射液的控制排卵效果分析

排卵检测方法如上述1中的(2)所述。结果如表2所示，结果表明，德舍瑞林与聚蔗糖的复配时，对于母驴排卵控制的效果最佳。

表2.不同gnrh类似物对母驴排卵控制效果的影响

注：同列数值上标a,b表示差异显著(p＜0.05)。

3、缓释载体与促性腺激素释放激素以不同配比制备的排卵液及其应用效果

(1)含有不同配比缓释载体和促性腺激素释放激素的排卵液的制备

以下a～i分别提供本实施例含有不同配比缓释载体和促性腺激素释放激素的排卵液：

a.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取850g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

b.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取800g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

c.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取750g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

d.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

e.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取650g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

f.称取德舍瑞林0.1g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取600g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.01％德舍瑞林排卵液。

g.称取德舍瑞林0.05g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.005％德舍瑞林排卵液。

h.称取德舍瑞林0.2g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.02％德舍瑞林排卵液。

i.称取德舍瑞林0.5g和海藻糖2.0g，加入超纯无菌水充分溶解，得到促性腺激素释放激素溶液；称取700g聚蔗糖，加入超纯无菌水充分溶解，得到缓释载体溶液；将两种溶液混合均匀，以超纯无菌水补足至1000g，即得0.05％德舍瑞林排卵液。

(2)不同排卵注射液的控制排卵效果分析

排卵检测方法如上述1中的(2)所述。结果如表3所示，结果表明，缓释载体聚蔗糖的浓度对排卵控制效果具有一定的影响作用，其中，德舍瑞林在含75％(c)和70％(d)的聚蔗糖溶液中，排卵控制效果最好

表3.不同缓释载体与促性腺激素释放激素的含量配比对母驴排卵控制效果

的影响

注：同列数值上标a,b表示差异显著(p＜0.05)。

实施例2阿哈捷金(汗血)马的排卵控制及自然配种的效果

在内蒙呼和浩特市附近，选择3～10岁阿哈捷金母马32匹，膘情中等以上，健康，繁殖力正常。饲养在带有户外运动场的圈舍，自由饮水，两次饲喂青干草(羊草和苜蓿)。在4～6月份，每天上午8:00～10:00用公马试情，如果公马接近后站立不动，尾上举，阴户频繁开张，并有尿液排出，表示此母马可以配种。同时，用b超探头隔直肠壁检查卵泡和子宫水肿情况。在b超仪上，采用“十字交叉法”测量卵泡直径，即在纵向上测一最大值，然后垂直交叉，在横向上测一最大值，两值相加取均值，就是卵泡直径。当卵泡直径达到35mm以上，且子宫内膜水肿明显时，与选择公马配种。配种成功后，臀部肌肉注射实施例1的3中的d组制备的排卵注射液(排卵液的组分如下：德舍瑞林0.01％、海藻糖0.2％，聚蔗糖70％，以水为溶剂，各组分含量为质量百分含量)1.0ml。间隔24小时后，检查排卵情况。如果在48小时内排卵，14天后用带直肠探头的兽用b型超声波进行妊娠检查。如果在48小时内未排卵且卵泡发育正常，需要再配种一次，按上述同样的方法再注射排卵液一次，直至检测到排卵。排卵控制和受胎结果如表4所示，结果显示，注射排卵注射液后，24小时仅有25％的试验马排卵，48小时检测时，32匹试验马均排卵，排卵率为100％。14天后可检测到26匹均已妊娠，受胎率为81.3％。

表4.阿哈捷金母马排卵控制及配种后受胎率结果

实施例3蒙古马的排卵控制及采用冷冻精液配种的效果

在辽宁的沈阳市附近，选择3～8岁蒙古马的母马35匹，膘情中等以上，健康，繁殖力正常。在带有户外运动场的圈舍饲养，自由饮水，两次饲喂青干草(羊草和苜蓿)。在6～8月份，每天上午8:00～10:00用b超直肠检查马群卵泡发育情况。在b超仪上，采用“十字交叉法”测量卵泡直径，即在纵向上测一最大值，然后垂直交叉，在横向上测一最大值，两值相加后取平均值，就是卵泡直径。当卵泡直径达到35mm以上且子宫内膜水肿明显时，臀部肌肉注射实施例1的3中的d组制备的排卵注射液(排卵液的组分如下：德舍瑞林0.01％、海藻糖0.2％，聚蔗糖70％，以水为溶剂，各组分含量为质量百分含量)1.0ml。30小时后进行b超检查并淘汰已经排卵的母马。从液氮罐中取出冷冻精液4支(0.5ml塑料细管，37℃水浴15秒解冻)，在大卵泡侧子宫角输精2.0ml(有效精子数约1.4亿)。间隔8小时后，再用相同剂量冷冻精液输精一次。14天后，采用b超检查妊娠状态。排卵控制和受胎结果如表5所示，结果显示，注射排卵注射液后，30小时前仅有8.6％的试验马排卵。85.7％的试验马在32-48小时之间排卵。14天后可检测到17匹均已妊娠，受胎率为56.7％。

表5.蒙古马排卵控制及冷冻精液配种后的受胎率

实施例4不同的注射时间对母驴排卵控制效果的影响

在内蒙和山东地区，选择3-8岁德州驴和本地杂交母驴共计213头，膘情中等以上、健康、繁殖力正常。饲养在带有户外运动场的圈舍，自由饮水，每天两次饲喂专用配合饲料。在2-8月份，每天上午8:00～10:00用b超探头隔直肠壁，检查卵泡发育和子宫内膜形态变化情况。在b超仪上，采用“十字交叉法”测量卵泡直径，即在纵向上测一最大值，然后垂直交叉，在横向上测一最大值，两值相加取均值，就是卵泡直径。根据注射排卵液时卵泡直径的大小，将驴群分为三组：25～30mm，31～35mm，35～40mm。每组分对照和实验群，检查当日上午10:00，在对照组母驴臀部肌肉注射不含gnrh类似物的空白注射液1.0ml，实验组注射实施例1的3中的d组制备的排卵注射液(排卵液的组分如下：德舍瑞林0.01％、海藻糖0.2％，聚蔗糖70％，以水为溶剂，各组分含量为质量百分含量)1.0ml。在注射后24小时和48小时用b超检查排卵情况。排卵控制结果如表6所示。结果显示，卵泡直径为25-30mm卵泡直径的母驴注射排卵液后，24小时对照组和实验组均没有排卵，48小时对照组仍没有排卵，而实验组有72.2％的母驴排卵；31-35mm卵泡直径的母驴注射排卵液后，24小时对照组没有排卵，实验组有5.4％的母驴排卵，48小时对照组仍没有排卵，而实验组有96.0％的母驴排卵；36-40mm卵泡直径的母驴注射排卵液后，24小时对照组11.1％的母驴排卵，实验组有25.9％的母驴排卵，48小时对照组有50.0％的母驴排卵，而实验组有100.0％的母驴排卵。结果表明，注射排卵液能够明显促进母驴排卵；当母驴卵泡直径达到30mm以上时注射排卵液，其排卵促进效果较好，这种情况下，注射排卵液后48小时96％以上的母驴均检测到排卵。

表6.排卵注射液对处于不同卵泡发育阶段的母驴的排卵控制效果的影响

注：同列数值上标a,b表示差异显著(p＜0.05)，上标a,b表示差异极显著(p＜0.01)。

实施例5排卵注射液的注射剂量对母驴排卵控制效果的影响

在内蒙和山东地区，选择3～8岁德州驴和本地杂交母驴共计142头，膘情中等以上，健康，繁殖力正常。饲养在带有户外运动场的圈舍，自由饮水，每天两次饲喂专用配合饲料。在2～8月份，每天上午8:00～10:00用b超探头隔直肠壁，检查卵泡发育和子宫内膜形态变化情况。在b超仪上，采用“十字交叉法”测量卵泡直径，即在纵向上测一最大值，然后垂直交叉，在横向上测一最大值，两值相加取均值，即卵泡直径。选择卵泡直径在30mm以上的母驴，分为三组。每组臀部肌肉分别注射本发明实施例1的3中的d组制备的排卵液(排卵液的组分如下：德舍瑞林0.01％、海藻糖0.2％，聚蔗糖70％，以水为溶剂，各组分含量为质量百分含量)2.0ml、1.6ml和0.8ml三种不同剂量。在注射后24小时和48小时，用b超检查排卵情况，排卵效果如表7所示。结果表明，排卵液注射剂量为1.6ml时，对排卵的促进效果较好，注射后48小时全部母驴均可以检测到排卵。

表7.不同注射剂量对母驴排卵效果的影响

注：同列数值上标a,b表示差异显著(p＜0.05)。

实施例6母驴排卵时间的控制

在内蒙和山东地区，选择3～8岁德州驴和本地杂交母驴共计268头，膘情中等以上，健康，繁殖力正常。饲养在带有户外运动场的圈舍，自由饮水，每天两次饲喂专用配合饲料。在3-8月份，每天上午8:00～10:00用b超探头隔直肠壁，检查卵泡发育和子宫内膜形态变化情况。在b超仪上，采用“十字交叉法”测量卵泡直径，即在纵向上测一最大值，然后垂直交叉，在横向上测一最大值，两值相加取均值，就是卵泡直径。选择卵泡直径在30mm以上的母驴，臀部肌肉注射实施例1的3中的d组制备的排卵液(排卵液的组分如下：德舍瑞林0.01％、海藻糖0.2％，聚蔗糖70％，以水为溶剂，各组分含量为质量百分含量)0.8ml，在注射后24小时，32小时和48小时，用b超检查排卵情况，排卵控制效果如表8所示。结果表明，在注射排卵液后48小时，94.8％的母驴可以检测到排卵。

表8.注射本发明排卵液后母驴排卵时间的分布

进一步地，为掌握排卵液注射后母驴在32小时到48小时之间的排卵分布情况，选择3～8岁德州母驴30头，饲养管理如实施例4所述。当马驴卵泡直径达到30mm以上时，注射本发明排卵液0.8ml。在注射后32小时(18:00)，每隔两小时，用b超检查一次排卵情况，直到注射后48小时为止。排卵分布如图1所示，34小时到42小时的排卵率占96.67％，排卵高峰出现在注射后38小时(24:00)。

实施例7采用冷藏精液定时人工授精后母驴的受胎效果

在内蒙和山东地区，选择3～8岁德州驴和本地杂交母驴共计189头，膘情中等以上、健康、繁殖力正常。饲养在带有户外运动场的圈舍，自由饮水，每天两次饲喂专用配合饲料。在3～8月份，每天上午8:00～10:00用b超直肠检查马群卵泡发育情况。在b超仪上，采用“十字交叉法”测量卵泡直径，即在纵向上测一最大值，然后垂直交叉，在横向上测一最大值，两值相加后取平均值，就是卵泡直径。当卵泡直径达到30mm以上时，且子宫内膜水肿明显时，臀部肌肉注射的实施例1的3中的d组制备的排卵液(排卵液的组分如下：德舍瑞林0.01％、海藻糖0.2％，聚蔗糖70％，以水为溶剂，各组分含量为质量百分含量)1.0ml。8～10小时后，用10ml冷藏(4℃)精液(含有效精子6亿)，进行子宫体输精。间隔48小时后，检查排卵情况。如果在48小时内排卵，14天后，用带直肠探头的兽用b型超声波进行妊娠检查。如果在48小时内未排卵且卵泡发育正常，按上述同样的程序再注射实施例1制备的排卵注射液并且输精一次。排卵和受胎结果见表9。结果表明，注射排卵液后48小时有95.8％的母驴排卵，14天后有51.3％的母驴妊娠。

表9.母驴用冷藏精液定时人工授精后的受胎率

实施例8采用冷冻精液定时人工授精后母驴的受胎效果

在内蒙地区，选择3～8岁德州驴和本地杂交母驴共计96头，膘情中等以上，健康，繁殖力正常。饲养在带有户外运动场的圈舍，自由饮水，每天两次饲喂专用配合饲料。在6～8月份，每天上午8:00～10:00用b超直肠检查马群卵泡发育情况。在b超仪上，采用“十字交叉法”测量卵泡直径，即在纵向上测一最大值，然后垂直交叉，在横向上测一最大值，两值相加后取平均值，就是卵泡直径。当卵泡直径达到30mm以上时，且子宫内膜水肿明显时，臀部肌肉注射实施例1的3中的d组制备的排卵液(排卵液的组分如下：德舍瑞林0.01％、海藻糖0.2％，聚蔗糖70％，以水为溶剂，各组分含量为质量百分含量)1.0ml，分成三组：a组采用10支冻精一次输精；b组采用两次输精，每次5支冻精；c组采用两次输精，每次3支冻精。30～34小时后，用1.5～5ml冷冻精液(含有效精子1.0～5.0亿)大卵泡侧子宫角输精。b、c两组间隔8小时后，再用相同剂量冷冻精液输精一次，14天后用b超进行妊娠检查。如果在24小时内未排卵且卵泡发育正常，按同样程序再注射本发明的排卵液和输精一次。受胎结果见表10。结果表明，采用一次输精和两次不同剂量输精的a、b、c三组的母驴受胎率分别为42.42％、35.48％和34.38％，一次输精的效果略好。

表10.母驴用冷冻精液定时人工授精后的受胎率

注：同列数值上标a,b表示差异显著(p＜0.05)。

实施例9排卵液控制排卵的驴与自然排卵的驴的激素水平变化对比

选择卵泡直径为30-35mm的母驴6头，其中3头注射实施例1的3中的d组制备的排卵液(排卵液的组分如下：德舍瑞林0.01％、海藻糖0.2％，聚蔗糖70％，以水为溶剂，各组分含量为质量百分含量)1.0ml(此3头驴分别记为g1,g2,g3)，另外3头注射生理盐水(此3头驴分别记为cn1,cn2,cn3)。注射时记为0小时，之后每隔8小时采血一次，直到用b超检查发现这头驴发生排卵为止。血样采集后离心取血清，在-20℃保存，将血清进行激素检测。结果如图2所示，结果表明e2和igf-1在排卵前降低，而孕激素水平在排卵前逐渐升高，注射排卵液可加速这一变化过程，促进卵泡成熟和排卵，而且排卵液在长达40多个小时的排卵整个过程中的作用十分稳定。

综上所述，本发明通过将促性腺激素释放激素制备为缓释制剂，实现了促性腺激素释放激素的缓慢可控释放，有效延长了其在体内的半衰期；通过特定的缓释载体和促性腺激素释放激素的复配以及各组分含量配比的优化，使得排卵液能够长时间、高效稳定地发挥促进排卵的作用，实现马属动物的高效排卵控制(高达96％以上的马属动物可以在48h内排卵)，进而提高了马属动物的自然配种和人工配种的妊娠率，有效提高了马属动物的繁殖效率。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。