罗布麻叶多糖在制备降血糖和/或降血脂药物中的应用的制作方法

本发明涉及天然植物多糖技术领域，具体涉及罗布麻叶多糖在制备降血糖和/或降血脂药物中的应用。

背景技术：

罗布麻是一种半灌木状多年生草本宿根植物，能够在盐碱沙漠地等恶劣的自然条件下生长，具有耐寒、耐旱和耐盐碱的特点。罗布麻是一种名贵的中药，其根、茎、叶和花均可入药。目前，对罗布麻药用价值的研究主要集中在两个方面，即对罗布麻提取物化学成分种类和含量的研究，以及对其粗提物或某一成分的药理研究。目前来说，有关罗布麻叶的报道，主要集中在多酚类及糖苷类，尚缺乏对罗布麻叶多糖的结构分析和生物活性的研究。因此，对于罗布麻叶多糖化学成分、活性表现及作用机制的研究对罗布麻食品药品的开发和应用具有重要意义。

目前对罗布麻叶多糖的活性研究以抗氧化、降血压、抗抑郁的活性研究较多，关于罗布麻叶多糖还具有何种作用则未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供罗布麻叶多糖在制备降血糖和/或降血脂药物中的应用，拓展了罗布麻叶多糖的用途。

本发明提供了罗布麻叶多糖在制备降血糖和/或降血脂药物中的应用。

优选的，所述罗布麻叶多糖的制备方法包括以下步骤：

将罗布麻叶与提取液混合进行提取，得到提取物，所述提取液包括酸溶液或碱溶液；

除去所述提取物中的蛋白质，得到去蛋白质提取物；

将所述去蛋白质提取物与醇溶液混合后静置，将得到的上层清液干燥，得到罗布麻叶多糖。

优选的，所述酸溶液包括盐酸溶液、硫酸溶液或醋酸溶液。

优选的，所述酸溶液的浓度为0.05～0.1mol/l。

优选的，所述碱溶液包括氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液。

优选的，所述碱溶液的浓度为0.5～1mol/l。

优选的，所述罗布麻叶的质量与提取液的体积比为(1～3)g:(50～70)ml。

优选的，所述提取的时间为1.5～2.5h。

优选的，所述提取的温度为60～90℃。

优选的，所述去蛋白质提取物与醇溶液混合后，得到混合物，所述混合物中醇的浓度为70～90％。

本发明提供了罗布麻叶多糖在制备降血糖和/或降血脂药物中的应用。在本发明中，所述罗布麻叶多糖降血糖的机理为：葡萄糖苷酶是糖苷水解酶大家族中的一大类酶，主要功能为水解葡萄糖苷键，释放出葡萄糖作为产物。罗布麻多糖可以抑制α-葡萄糖苷酶的活性，进而减缓碳水化合物水解为葡萄糖，达到降低血糖的作用。

在本发明中，罗布麻叶多糖降血脂的机理为：甘油三酯是脂肪的主要成分(约占95％)，胰脂酶是消化饮食中甘油三酯的一个关键酶，它能把甘油三酯转变为游离脂肪酸和α-单油酸甘油酯这些更容易被肠道吸收的水解产物。由于罗布麻多糖可以有效抑制胰脂酶的活性，从而可以减少甘油三酯的水解，进而降低血脂含量。

本发明实施例的结果显示：本发明提供了罗布麻多糖在制备降血糖和/或降血脂药物中的应用，拓展了罗布麻叶多糖的用途。

附图说明

图1为本发明实施例1～8和对比例1～2提取罗布麻叶多糖的产率。

具体实施方式

本发明提供了罗布麻叶多糖在制备降血糖和/或降血脂药物中的应用。

本发明对所述罗布麻叶多糖的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可。在本发明中，所述罗布麻叶多糖的制备方法，优选包括以下步骤：

将罗布麻叶与提取液混合进行提取，得到提取物，所述提取液包括酸溶液或碱溶液；

除去所述提取物中的蛋白质，得到去蛋白质提取物；

将所述去蛋白质提取物与醇溶液混合后静置，将得到的上层清液干燥，得到罗布麻叶多糖。

本发明将罗布麻叶与提取液混合进行提取，得到提取物，所述提取液包括酸溶液或碱溶液。

在本发明中，所述罗布麻叶的质量与提取液的体积比优选为(1～3)g:(50～70)ml，更优选为2g:60ml。在本发明中，所述罗布麻叶优选为罗布麻叶粉，粒径优选为过40目筛，即≤0.425mm。

在本发明中，所述酸溶液优选包括盐酸溶液、硫酸溶液或醋酸溶液，所述酸溶液的浓度优选为0.05～0.1mol/l。

在本发明中，所述碱溶液优选包括氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，所述碱溶液的浓度优选为0.5～1mol/l。

在本发明中，所述提取的时间优选为1.5～2.5h，更优选为2h；所述提取的温度优选为60～90℃，更优选为70～80℃。

本发明除去所述提取物中的蛋白质，得到去蛋白质提取物。本发明对所述除去蛋白质的方法没有特殊限定，采用常规除去蛋白质的方法即可。

本发明将所述去蛋白质提取物与醇溶液混合后静置，将得到的上层清液干燥，得到罗布麻叶多糖。

在本发明中，所述醇溶液优选包括乙醇溶液、甲醇溶液或丙醇溶液。

在本发明中，所述去蛋白质提取物与醇溶液混合后，得到混合物，所述混合物中醇的浓度优选为70～90％，更优选为80％。

在本发明中，所述静置优选为所述混合物不再发生分层为止。

本发明对所述干燥的方法没有特殊限定，优选采用冷冻干燥。本发明对所述冷冻干燥的条件没有特殊限定，采用常规冷冻干燥的条件即可。

本发明对所述药物的剂型没有特殊限定，采用常规制备多糖药物的剂型即可，在本发明中，所述药物中罗布麻叶多糖的含量优选为20～50％(wt)。

下面结合具体实施例对本发明所述的罗布麻叶多糖在制备降血糖和/或降血脂药物中的应用做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。

实施例1

取罗布麻叶粉2.0g，加入60ml浓度为0.05mol/l的盐酸溶液，在60℃下，利用水浴锅反应器提取2h，将得到的提取液在4000rpm下离心5min，将得到的上清液再抽滤，中和ph值为7后进行脱蛋白处理，采用sevag试剂法进行2次脱蛋白后，与95％乙醇溶液混合，混合后乙醇的浓度为80％，进行醇沉过夜，不再发生分层后，将上层清液冷冻干燥，得到罗布麻叶多糖，罗布麻叶多糖的产率为5.55％，见图1。

实施例2

取罗布麻叶粉2.0g，加入60ml浓度为0.1mol/l的盐酸溶液，在60℃下，利用水浴锅反应器提取2h，将得到的提取液在4000rpm下离心5min，将得到的上清液再抽滤，中和ph值为7后进行脱蛋白处理，采用sevag试剂法进行2次脱蛋白后，与95％乙醇溶液混合，混合后乙醇的浓度为80％，进行醇沉过夜，不再发生分层后，将上层清液冷冻干燥，得到罗布麻叶多糖，罗布麻叶多糖的产率为6.78％，见图1。

实施例3

取罗布麻叶粉2.0g，加入60ml浓度为0.5mol/l的氢氧化钠溶液，在60℃下，利用水浴锅反应器提取2h，将得到的提取液在4000rpm下离心5min，将得到的上清液再抽滤，中和ph值为7后进行脱蛋白处理，采用sevag试剂法进行2次脱蛋白后，与95％乙醇溶液混合，混合后乙醇的浓度为80％，进行醇沉过夜，不再发生分层后，将上层清液冷冻干燥，得到罗布麻叶多糖，罗布麻叶多糖的产率为13.58％，见图1。

实施例4

取罗布麻叶粉2.0g，加入60ml浓度为1mol/l的氢氧化钠溶液，在60℃下，利用水浴锅反应器提取2h，将得到的提取液在4000rpm下离心5min，将得到的上清液再抽滤，中和ph值为7后进行脱蛋白处理，采用sevag试剂法进行2次脱蛋白后，与95％乙醇溶液混合，混合后乙醇的浓度为80％，进行醇沉过夜，不再发生分层后，将上层清液冷冻干燥，得到罗布麻叶多糖，罗布麻叶多糖的产率为14.65％，见图1。

实施例5

取罗布麻叶粉2.0g，加入60ml浓度为0.05mol/l的盐酸溶液，在90℃下，利用水浴锅反应器提取2h，将得到的提取液在4000rpm下离心5min，将得到的上清液再抽滤，中和ph值为7后进行脱蛋白处理，采用sevag试剂法进行2次脱蛋白后，与95％乙醇溶液混合，混合后乙醇的浓度为80％，进行醇沉过夜，不再发生分层后，将上层清液冷冻干燥，得到罗布麻叶多糖，罗布麻叶多糖的产率为8.38％，见图1。

实施例6

取罗布麻叶粉2.0g，加入60ml浓度为0.1mol/l的盐酸溶液，在90℃下，利用水浴锅反应器提取2h，将得到的提取液在4000rpm下离心5min，将得到的上清液再抽滤，中和ph值为7后进行脱蛋白处理，采用sevag试剂法进行2次脱蛋白后，与95％乙醇溶液混合，混合后乙醇的浓度为80％，进行醇沉过夜，不再发生分层后，将上层清液冷冻干燥，得到罗布麻叶多糖，罗布麻叶多糖的产率为9.55％，见图1。

实施例7

取罗布麻叶粉2.0g，加入60ml浓度为0.5mol/l的氢氧化钠溶液，在90℃下，利用水浴锅反应器提取2h，将得到的提取液在4000rpm下离心5min，将得到的上清液再抽滤，中和ph值为7后进行脱蛋白处理，采用sevag试剂法进行2次脱蛋白后，与95％乙醇溶液混合，混合后乙醇的浓度为80％，进行醇沉过夜，不再发生分层后，将上层清液冷冻干燥，得到罗布麻叶多糖，罗布麻叶多糖的产率为21.32％，见图1。

实施例8

取罗布麻叶粉2.0g，加入60ml浓度为1mol/l的氢氧化钠溶液，在90℃下，利用水浴锅反应器提取2h，将得到的提取液在4000rpm下离心5min，将得到的上清液再抽滤，中和ph值为7后进行脱蛋白处理，采用sevag试剂法进行2次脱蛋白后，与95％乙醇溶液混合，混合后乙醇的浓度为80％，进行醇沉过夜，不再发生分层后，将上层清液冷冻干燥，得到罗布麻叶多糖，罗布麻叶多糖的产率为18.02％，见图1。

对比例1

取罗布麻叶粉2.0g，加入60ml水，在90℃下，利用水浴锅反应器提取2h，将得到的提取液在4000rpm下离心5min，将得到的上清液再抽滤，中和ph值为7后进行脱蛋白处理，采用sevag试剂法进行2次脱蛋白后，与95％乙醇溶液混合，混合后乙醇的浓度为80％，进行醇沉过夜，不再发生分层后，将上层清液冷冻干燥，得到罗布麻叶多糖，罗布麻叶多糖的产率为5.00％，见图1。

对比例2

取罗布麻叶粉2.0g，加入60ml水，在60℃下，利用水浴锅反应器提取2h，将得到的提取液在4000rpm下离心5min，将得到的上清液再抽滤，中和ph值为7后进行脱蛋白处理，采用sevag试剂法进行2次脱蛋白后，与95％乙醇溶液混合，混合后乙醇的浓度为80％，进行醇沉过夜，不再发生分层后，将上层清液冷冻干燥，得到罗布麻叶多糖，罗布麻叶多糖的产率为3.75％，见图1。

将实施例1～8制备得到罗布麻叶多糖和对比例1～2制备得到的罗布麻叶多糖采用常规方法检验降血糖活性和降血脂活性，降血糖活性的阳性对照为阿卡波糖，降血脂活性的阳性对照为奥利司，结果见表1。

检验降血糖活性的方法：

α-葡萄糖苷酶溶液(3.92u/ml)和对硝基苯基-α-d-吡喃葡萄糖苷溶液(pnpg：6mm)通过100mm磷酸盐缓冲液(ph6.9)制备。将100μl样品溶液(10mg/ml的罗布麻叶多糖在3％dmso中)与10μlα-葡糖苷酶混合并在37℃温育10分钟。然后加入200μlpnpg并再孵育20分钟。加入1mlna2co3终止反应并用4ml蒸馏水进一步稀释。在400nm测量吸光度。使用不含样品(用3％dmso代替)的溶液作为对照，并使用阿卡波糖作为阳性对照。按照下式计算α-葡萄糖苷酶的抑制百分比：

α-葡萄糖苷酶抑制率(％)＝[1-(a样品-背景/a空白-a背景)]×100

a空白为不含样品的对照溶液(用3％dmso代替)的吸光度，a背景为不含α-葡萄糖苷酶的背景溶液(用nacl溶液代替)的吸光度，a样品代表测试样品的吸光度。

检验降血脂活性的方法：

使用4-methylumbelliferyloleate(4-muoleate)作为底物测量胰脂肪酶活性。将0.25ml罗布麻叶多糖(10mg/ml罗布麻叶多糖溶于3％dmso中)加入0.5ml0.1mm4-mu溶液(ph8.0，由13mmtris-hcl，150mmnacl和1.3mmcacl2组成的缓冲液中)，然后加入0.25ml脂肪酶溶液(1mg/ml，由上述缓冲液配置)以开始酶反应。在25℃孵育30分钟后，加入1ml0.1m柠檬酸钠(ph4.2)以终止反应。用f-4600荧光分光光度计(hitachi，ltd.，日本)在320nm的激发波长和460nm的发射波长下测量由脂肪酶释放的4-methylumbelliferone的含量。

按照下式计算胰脂酶的抑制百分比：

胰脂酶抑制率(％)＝[1-(a样品-a背景/a空白-a背景)]×100

a空白为不含样品的对照溶液(用3％dmso代替)的吸光度，a背景为不含胰脂酶的背景溶液(用相应缓冲液代替)的吸光度，a样品代表测试样品的吸光度。

表1降血糖和降血脂活性结果

根据表1可以得出，本发明制备的罗布麻叶多糖具有明显抑制α–葡萄糖苷酶的活性。其中碱溶液提取的多糖的抑酶活性高于传统热水提取法，与阳性药阿卡波糖相比，都明显好于阿卡波糖。

本发明制备的罗布麻叶多糖具有明显抑制胰脂酶的活性，其中碱溶液提取的多糖的抑酶活性高于热水提取法，但与阳性药奥利司他相比，有一定的差距。

将实施例1～8制备得到罗布麻叶多糖和对比例1～2制备得到的罗布麻叶多糖采用常规方法检测多糖的组分和含量，结果见表2。

表2罗布麻叶多糖检测结果

根据表2可以得出，采用氢氧化钠溶液能够提出更多的木糖。

根据以上实施例可以得出，罗布麻叶多糖具有抑制α–葡萄糖苷酶和胰脂酶的活性的作用，因此罗布麻叶多糖作为食疗或药物中的功能因子在糖尿病以及高血脂的预防和治疗中具有很大潜力。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。