三七皂苷R1在制备预防或治疗肝损伤药物中的应用的制作方法

本发明涉及一种三七皂苷r1的新用途，即三七皂苷r1在制备预防或治疗对乙酰氨基酚所致肝毒性药物中的应用。(二)
背景技术：
：对乙酰氨基酚(acetaminophen，apap)是一种常用的非处方镇痛药和解热药，用于缓解患者的轻度症状。在美国、英国、澳大利亚及其它欧美国家，apap过量是药物性肝损伤和alf最常见的原因。对乙酰氨基酚(apap)是引起药物性肝损伤最常见的药物，在过量注射apap后的6～12h内丙氨酸氨基转移酶(alt)值会到达高峰，经常被用作药物性肝损伤的模型。apap作为解热镇痛的一类药物，服用过量或者长间的服用可使体内蓄积大量的apap，生成较多的毒性物质n-乙酰对苯醌亚胺(napqi)，为使其失去活性，大量的消耗体内的生长激素促分泌素(ghs)，使肝细胞得不到保护进而引发肝损伤，甚至出现肝衰。对于那些进展到肝衰竭的人来说，唯一有效的治疗方法就是肝移植。三七总皂苷是人参属中药三七的主要有效活性成分。三七皂苷r1(notoginsenosider1)，是一种从三七中分离出的主要成分和新型植物雌激素，具有抗炎，抗氧化和抗凋亡性质。之前的研究表明，三七皂苷r1能明显抑制多种炎症因子的产生，减轻内毒素小鼠心脏功能紊乱症状。但其对肝脏药物毒性的影响少有报导。(三)研究内容本发明目的是提供一种三七皂苷r1在制备预防或治疗对乙酰氨基酚所致肝损伤药物中的应用。本发明采用的技术方案是：本发明提供一种三七皂苷r1在制备预防或治疗肝损伤药物中的应用。进一步，所述肝损伤药物为对乙酰氨基酚所致肝损伤药物。本发明所述三七皂苷r1结构式如下：本发明中三七皂苷r1主要是恢复了机体内gsh含量，gsh是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸集合而成的三肽化合物，其主要在肝脏中合成，在肝脏的代谢中起着重要的作用。本发明的有益效果主要体现在：本发明三七皂苷r1将对乙酰氨基酚损伤后血浆中gsh含量明显增加，高剂量rda增加了65.56％，恢复了肝脏gsh代谢水平，显著降低由apap病模型引起的肝脏损伤。gsh在体内主要是通过其抗氧化能力使细胞免受各种有害物质的损伤，因此，当gsh被大量清除的时候就会对机体造成损伤。因此三七皂苷r1有效的恢复了对乙酰氨基酚药物所引起的肝脏损伤情况。(四)附图说明图1为本发明三七皂苷r1对小鼠血浆中谷丙转氨酶(alt)的影响。(柱状图中，不同的字符的条形图之间有显著性差异，p<0.05)。图2为本发明三七皂苷r1对小鼠血浆中谷草转氨酶(ast)的影响。(柱状图中，不同的字符的条形图之间有显著性差异，p<0.05)。图3为本发明三七皂苷r1对小鼠肝脏中gsh的影响。(柱状图中，不同的字符的条形图之间有显著性差异，p<0.05)。图4为本发明三七皂苷r1对小鼠肝脏中mda的影响。(柱状图中，不同的字符的条形图之间有显著性差异，p<0.05)。图5为本发明三七皂苷r1对小鼠肝脏中tnf-a的表达影响。(柱状图中，不同的字符的条形图之间有显著性差异，p<0.05)。图6为本发明三七皂苷r1对小鼠肝脏中il-1β的表达影响。(柱状图中，不同的字符的条形图之间有显著性差异，p<0.05)。图7为本发明三七皂苷r1对小鼠肝脏中il-6的表达影响。(柱状图中，不同的字符的条形图之间有显著性差异，p<0.05)。(五)具体实施方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：实施例11、材料：实验动物：c57bl/6雄性小鼠30只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，公司许可证编号：scxk(沪)2017-0005，饲养于浙江中医药大学实验动物中心，spf环境中。试剂：三七皂苷r1；alt，ast，还原型谷胱甘肽(gsh)测定试剂盒(南京建成)。rt-pcr引物：primerforwardprimerreverseprimertnf-aggaacacgtcgtgggataatgggcagactttggatgcttcttil-1βcactacaggctccgagatacacaggacaggtatagattcil-6ggcggatcggatgttgtgatggaccccagacaatcggttg2、药物制备2.1.三七皂苷r1灌胃液的剂量(生理盐水作为溶剂)：三七皂苷r1低剂量：终浓度100mg/kg小鼠体重，药物浓度为12.50mg/ml三七皂苷r1中剂量：终浓度150mg/kg小鼠体重，药物浓度为18.75mg/ml三七皂苷r1高剂量：终浓度200mg/kg小鼠体重，药物浓度为25.00mg/ml2.2.对乙酰氨基酚溶液的制备：精密称定对乙酰氨基酚0.5g，将其溶于20ml生理盐水中，水浴至完全溶解后过滤，取滤液即为对乙酰氨基酚(apap)溶液。每只小鼠灌胃apap，以每只老鼠25g计算，其apap实际灌胃体积＝(小鼠实际体重/25g)×0.5ml，灌胃剂量为500mg/kg。3、方法：c57bl/6小鼠于spf级别动物实验室进行适应喂养后，对8周龄的c57bl/6小鼠随机分为5组，每组6只，分别为对照组(control)，apap组(apap)，apap+三七皂苷r1低剂量组，apap+三七皂苷r1中剂量组，apap+三七皂苷r1高剂量组。apap+三七皂苷r1低剂量组，apap+三七皂苷r1中剂量组，apap+三七皂苷r1高剂量组按2.1的剂量于每日上午进行灌胃0.2ml药物，对照组和apap组使用相同剂量的生理盐水灌胃，连续灌胃3天，每天一次，在第三天灌胃2h后，对照组灌胃生理盐水，apap组及药物组(apap+三七皂苷r1低剂量组，apap+三七皂苷r1中剂量组，apap+三七皂苷r1高剂量组)进行apap灌胃(500mg/kg体重)，6h后将小鼠用10％水合氯醛腹腔注射进行麻醉，腹下腔静脉取血测定谷丙转氨酶(alt)，谷草转氨酶(ast)，取肝脏检测gsh，mda及相关基因表达。4、实验结果：图1本发明三七皂苷r1对小鼠血浆中谷丙转氨酶(alt)的影响。结果表明，三七皂苷r1可以显著降低apap所引起的alt升高。谷丙转氨酶主要存在于肝细胞浆内，细胞内浓度高于血清中1000-3000倍，只要有1％的肝细胞被破坏，就可以使血清酶增高一倍。因此，谷丙转氨酶被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。alt降低即意味着肝损伤降低。图2本发明三七皂苷r1对小鼠血浆中谷草转氨酶(ast)的影响。结果表明，三七皂苷r1可以显著降低apap所引起的ast升高。正常时血清中的ast含量较低，但相应细胞受损时，细胞膜通透性增加，胞浆内的ast释放入血，故其血清浓度升高。图3本发明三七皂苷r1对小鼠肝脏中gsh的影响。结果表明，与正常组相比,模型组肝匀浆gsh含量显著降低,三七皂苷r1可以显著恢复肝脏内gsh的含量，gsh是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸集合而成的三肽化合物，其主要在肝脏中合成，在肝脏的代谢中起着重要的作用。gsh在体内主要是通过其抗氧化能力使细胞免受各种有害物质的损伤，因此，当gsh被大量清除的时候就会对机体造成损伤。且三七皂苷r1优选剂量为200mg/kg。图4本发明三七皂苷r1对小鼠肝脏中mda的影响。结果表明，与正常组相比，模型组肝匀浆mda含量显著升高，表明机体内氧化与抗氧化系统已经失衡，机体抗氧化和清除自由基的能力显著降低，并且肝细胞受到严重损害,而药物组能有效的降低mda的含量，且三七皂苷r1优选剂量为200mg/kg。图5为本发明三七皂苷r1对小鼠肝脏中tnf-a的表达影响。结果表明，与正常组相比，模型组肝组织中肿瘤坏死因子(tnf-a)的表达显著升高，而三七皂苷r1处理后的小鼠，能显著降低tnf-a的表达水平。机体正常水平的tnf-a可以调节免疫应答，抗感染等，但是在大量表达的时候则会破坏机体的免疫平衡，与其他炎症因子一起产生多种病理损伤。三七皂苷r1能显著降低由apap引起的tnf-a表达升高，且三七皂苷r1优选剂量为200mg/kg。图6为本发明三七皂苷r1对小鼠肝脏中il-1β的表达影响。结果表明，与正常组相比，模型组肝组织中白介素1β(il-1β)的表达显著升高，而三七皂苷r1处理后的小鼠，能显著降低il-1β的表达水平。il-1β为一种致炎细胞因子，广泛参与了人体组织破坏等多种病理损伤过程，与其他炎症因子一起产生多种病理损伤。三七皂苷r1能显著降低由apap引起的il-1β表达升高，且三七皂苷r1优选剂量为200mg/kg。图7为本发明三七皂苷r1对小鼠肝脏中il-6的表达影响。结果表明，与正常组相比，模型组肝组织中白介素6(il-6)的表达显著升高，而三七皂苷r1处理后的小鼠，能显著降低il-6的表达水平。il-6是由巨噬细胞、t细胞、b细胞等多种细胞产生的一种细胞因子，与许多疾病的发生和发展。il-6作为机体免疫调节网络中的关键因子，有广泛的生物学活性。il-6随肝功能的损伤呈进行性升高。血清il-6升高，重肝脏炎症反应，进肝细胞坏死。三七皂苷r1能显著降低由apap引起的il-6表达升高，且三七皂苷r1优选剂量为200mg/kg。5、优点和效果：三七皂苷r1能有效的保护由对乙酰氨基酚所致肝毒性，能够预防或治疗对乙酰氨基酚的一种药物。当前第1页12