一种咔唑类STAT抑制剂马来酸盐晶型II联合用药物组合物及其制备方法与流程

本发明属于医药化学领域，具体涉及具有肿瘤作用的化合物4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐的一种新晶型、其制备方法、包含所述晶型的组合物，以及所述晶型或包含所述晶型的组合物在药物制备中的用途。
背景技术：
：癌症是一大类恶性肿瘤的统称，其特点是无限制、无止境地增生。癌细胞使患者体内的营养物质被大量消耗，同时释放出多种毒素，使人体产生一系列症状，导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损，引起坏死出血合并感染，患者最终由于器官功能衰竭而死亡。信号传导与转录激活因子-3(signaltransducerandactivatoroftranscription-3，stat3)是一种可以被不同的细胞因子受体激活的相关蛋白，在细胞因子-受体相互作用的过程中充当载体，保持信号在细胞内传递的内在特异性，并通过诱导靶基因转录来表达生物刺激的效应作用，除了参与血管生成和免疫应答之外，还与细胞的增殖、生存、分化、抗凋亡等密切关联。stat3在多种肿瘤细胞(包括白血病、多发性骨髓瘤等血液肿瘤以及肺癌、乳腺癌、前列腺癌等多种实体肿瘤)中表达异常升高，与恶性肿瘤的发生、发展密切相关。通过抑制stat3活性有望使癌细胞出现凋亡从而达到治疗癌症的目的，最近研究发现，抑制stat3信号可以克服包括视网膜母细胞瘤、肺癌、白血病等多种肿瘤的化学耐药性，stat3已经成功研发为一个新的抗肿瘤靶标。因此，积极寻找新的stat3抑制剂对于癌症的治疗有着极为重要的意义。化合物4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐，具有下式结构：该化合物体外细胞活性检测发现其对前列腺癌细胞du-145具有良好的抑制活性，ic50值为9.0nm，对人乳腺癌细胞mda-mb-468也具有良好的抑制活性，ic50值为19.7nm，具有良好的应用前景。本领域知道，药物晶型的不同，会造成各种理化性质的差异，如溶解度、溶出速率、熔点、密度、硬度、光电学性质、蒸汽压力等。这些差异可反映在热力学稳定性上，如稳定型、亚稳定型和不稳定型；也可反映在物理化学稳定性上，如吸湿性、晶型转变、样品降解等。这些差异直接影响药物的处方制剂工艺、储存方法、体内药代动表现，进而影响到药物的安全性和有效性。因此，研究4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐的多晶型现象并选择出在临床治疗上有意义且稳定可控的晶型具有着十分重要的意义。技术实现要素：在对4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐的晶型研究中，本发明的发明人共发现了几十种晶型，实验表明，在得到的众多晶型中，其中ii晶型具有良好的物理化学稳定性、溶解度和生物利用度，适合制剂开发。针对上述发明目的，第一方面，本发明提供了一种紫杉醇和咔唑类stat抑制剂马来酸盐晶型ii联合用药物组合物，包含活性成分和药学上可接受的辅料，所述的活性成分由紫杉醇和式(i)所示的stat3抑制剂晶型ii组成，所述活性成分中紫杉醇和式(i)所示的stat3抑制剂晶型ii的质量比为(0.14-0.22)：1；其中，式(i)所示的stat3抑制剂的化学名为4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺甲磺酸盐，化学式为：本发明提供的4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐的ii晶型，使用cu-ka辐射，其x-射线粉末衍射在衍射角2θ为3.6±0.2°、5.7±0.2°、8.0±0.2°、9.2±0.2°、11.7±0.2°、14.8±0.2°、17.1±0.2°、18.5±0.2°、25.5±0.2°处显示特征峰。本领域知道，用x射线衍射测定化合物的结晶时，由于测定的仪器或测定的条件等的影响，对于所测得的峰会存在一定的测量误差，特别是x-射线衍射图的相对强度随试验条件的变化而变化。例如，2θ值的测定误差可为约±0.2°，相对强度的测定误差可为±20％。因此，在确定每种结晶结构时，应该将此误差考虑在内。可以理解为任何与本申请的ii晶型具有基本相同或相似的x-射线衍射图的晶型均属于本申请的范围之内。具体地，本发明提供的4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型，使用cu-ka辐射，其x-射线粉末衍射在衍射角2θ为3.6±0.2°、5.7±0.2°、7.1±0.2°、8.0±0.2°、9.2±0.2°、10.5±0.2°、11.7±0.2°、14.8±0.2°、15.7±0.2°、16.2±0.2°、17.1±0.2°、18.5±0.2°、22.4±0.2°、25.5±0.2°处显示特征峰。本发明提供的4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型具有如图1所述x-衍射图。第二方面，本发明提供本发明的4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型的制备方法，所述的方法包括如下步骤：步骤a:2-羟基苯乙酮乙酰化制得式(1)的化合物；步骤b：式(1)的化合物环合制得式(2)的化合物；步骤c：式(2)的化合物溴代制得式(3)的化合物；步骤d：式(3)的化合物氨基取代制得式(4)的化合物；步骤e：4-硝基苯甲酸甲酯与缩二脲环合制得式(5)的化合物；步骤f：式(5)的化合物氯代制得式(6)的化合物；步骤g：式(6)的化合物与式(4)的化合物反应制得式(7)的化合物；步骤h：式(7)的化合物与4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊环硼烷)-9-乙基-9h-咔唑反应制得式(8)的化合物；步骤i：式(8)的化合物还原氢化制得式(9)的化合物；步骤j：式(9)的化合物与烯丙酰氯反应制得式(i)的化合物；步骤k：式(i)的化合物与马来酸反应制得式(i)化合物马来酸盐，将所得马来酸盐加入甲醇或乙醇中，回流，0-5℃析晶，即得4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型，反应路线如下：步骤k中式(i)化合物与马来酸反应的溶剂选自醇、酮、乙酸乙酯或它们的混合物；优选地，式(i)化合物与马来酸反应的溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或它们的混合物；进一步优选地，式(i)化合物与马来酸反应的溶剂为甲醇或乙醇。步骤k中式(i)化合物与马来酸反应的摩尔比为约1:0.5-0.55；优选地，式(i)化合物与马来酸反应的摩尔比为约1:0.5。步骤f中所述的甲醇或乙醇的使用量为每克4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐使用甲醇或乙醇10-15ml；优选地，步骤f中所述的甲醇或乙醇的使用量为每克4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸使用甲醇或乙醇10ml。第三方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明的4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型、紫杉醇和药学上可接受的载体。将4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型、紫杉醇与药学上可接受的载体混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体。第三方面，本发明提供了一种咔唑类stat抑制剂马来酸盐晶型ii联合用药物组合物，包含活性成分和药学上可接受的辅料，其特征在于：所述的活性成分由紫杉醇、来那度胺、式(i)所示的stat3抑制剂晶型a组成，所述活性成分中紫杉醇和式(i)所示的stat3抑制剂晶型a的质量比为(0.09-0.21)：(0.08-0.12)：1。本发明的4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型具有良好的稳定性、溶解度和生物利用度，适合用于制成药物制剂。附图说明图1是4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型的x-射线衍射图。具体实施方式以下结合实施例更详细的解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的范围。实施例12-氨甲基-4h-色烯-4-酮盐酸盐的制备步骤12-乙酰氧基苯乙酮的制备将2-羟基苯乙酮(100mmol)、乙酰氯(250mmol)和碳酸钾(500mmol)加入反应瓶中，加入300ml丙酮，回流反应12h，反应结束后，减压蒸除溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得油状物，直接投下一步。步骤22-甲基-4h-色烯-4-酮的制备称取2-乙酰氧基苯乙酮(50mmol)于反应瓶中，加入100mldmso溶解，0-5℃下分批加入钠氢(150mmol)，加毕，升至室温搅拌3h，反应结束后，向反应液中加入水，稀盐酸调ph值到弱酸性，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得油状物，向所得油状物中加入100ml乙酸和5滴浓盐酸，回流反应约3h，反应结束，将反应液旋干，加入水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得标题化合物。es：m/z161[m+h]+。步骤32-溴甲基-4h-色烯-4-酮的制备将步骤2所得2-甲基-4h-色烯-4-酮(10mmol)、n-溴代琥珀酰亚胺(nbs，10mmol)和过氧化苯甲酰(bpo，0.95mmol)加入反应瓶中，加20ml四氯化碳溶解，回流反应12h，反应结束后，反应液加水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化，得标题化合物。es：m/z239[m+h]+。步骤42-氨甲基-4h-色烯-4-酮盐酸盐的制备将步骤3所得2-溴甲基-4h-色烯-4-酮(0.5mmol)加入反应瓶中，加入5mldmf溶解，加入2ml氨水，室温搅拌12h，反应结束后，反应液加入水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，加入乙酸乙酯5ml，搅拌溶解后加入饱和的乙酸乙酯氯化氢溶液至上清层无沉淀生成，过滤，干燥，得标题化合物。es：m/z239[m+h]+。实施例22,4-二氯-6-(4-硝基苯基)-1,3,5-三嗪的制备步骤14-硝基苯甲酸甲酯的制备称取4-硝基苯甲酸(250mmol)于反应瓶中，加入300ml甲醇溶解，滴加氯化亚砜(375mmol)，滴毕回流反应12h，反应结束后，减压旋干，加入饱和碳酸氢钠溶液调节ph至7-8，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物，直接投下一步。步骤26-(4-硝基苯基)-1,3,5-三嗪-2,4-(1h,3h)-二酮的制备称取缩二脲(100mmol)于反应瓶中，加入150ml乙二醇二甲醚溶解，0-5℃下分批加入氢化钠(83.4mmol)，加毕，50℃下搅拌反应1h，再加入4-硝基苯甲酸甲酯(83.4mmol)，加毕，升温至85℃反应20h，反应结束后，将反应液倒入水中，用浓盐酸调节ph至酸性，过滤，滤饼烘干，得标题化合物。es：m/z235[m+h]+。步骤32,4-二氯-6-(4-硝基苯基)-1,3,5-三嗪的制备将6-(4-硝基苯基)-1,3,5-三嗪-2,4-(1h,3h)-二酮(200mmol)加入反应瓶中，加入200ml三氯氧磷，五氯化磷(800mmol)，105℃反应12h，反应结束后，将反应液倒入水中，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物。es：m/z275[m+h]+。实施例34-氯-6-(4-硝基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺的制备称取实施例2所得物2,4-二氯-6-(4-硝基苯基)-1,3,5-三嗪(50mmol)于反应瓶中，加入100ml四氢呋喃溶解，加入实施例1所得物2-氨甲基-4h-色烯-4-酮盐酸盐2-(三氟甲基)-吡啶-4-胺(55mmol)，碳酸钠(100mmol)，回流反应72h，过滤，柱层析纯化得标题化合物。es：m/z416[m+h]+。实施例44-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊环硼烷)-9-乙基-9h-咔唑的制备步骤14-氯-9-乙基-9h-咔唑的制备称取4-氯咔唑(5.46mmol)于反应瓶中，加入20mlthf溶解，冷却至-10℃，加入nah(14mmol)，加毕，搅拌30分钟后，加溴乙烷(6mmol)，加毕，室温反应3h，反应结束，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩，经制备色谱纯化得4-氯-9-乙基-9h-咔唑。es：m/z230[m+h]+。步骤24-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊环硼烷)-9-乙基-9h-咔唑的制备称取步骤1所得物4-氯-9-乙基-9h-咔唑(1mmol)、联硼酸频哪醇酯(1.1mmol)、醋酸钾(2mmol)和1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(pd(dppf)cl2，2mmol)于反应瓶中，加入5ml1,4-二氧六环，氮气保护条件下100℃反应24h，反应结束后，加入水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，合并有机相，干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化得到标题化合物。实施例54-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺的制备步骤14-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-硝基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺的制备在30ml微波反应瓶中，依次加入实施例3所得混合物4-氯-6-(4-硝基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺(10mmol)、实施例4所得物4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊环硼烷)-9-乙基-9h-咔唑(10mmol)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(0.1mmol)、x-phos(0.4mmol)、碳酸铯(100mmol)和1,4-二氧六环/h2o(60ml/10ml)，溶解，氩气置换，105℃微波反应90min，浓缩，柱层析纯化得标题化合物。es：m/z575[m+h]+。步骤24-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺的制备称取步骤1所得物4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-硝基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺(1mmol)、10％pd-c(10mg)于反应瓶中，加入15ml甲醇，在1个标准大气压下，h2还原1h，停止反应，过滤，浓缩标题化合物，直接用于下一步。es：m/z545[m+h]+。步骤34-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺的制备称取步骤2所得物4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺(0.1mmol)、二异丙基乙胺(0.3mmol)于反应瓶中，加入15ml无水二氯甲烷溶解，缓慢滴入溶解有烯丙基酰氯(0.12mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液，10min反应完全，浓缩，柱层析纯化得标题化合物。1hnmr(600mhz,cdcl3)(δ,ppm):10.12(s,1h),8.12(m,1h),7.80～7.82(m,2h),7.78～7.79(m,1h),7.67～7.69(m,2h),7.50～7.52(m,2h),7.43～7.45(m,2h),7.31～7.32(m,2h),7.07～7.09(m,2h),6.97～6.99(m,1h),6.68～6.70(m,1h),6.02～6.04(m,1h),5.56(s,1h),5.50～5.52(m,1h),4.88(s,1h),4.46～4.51(m,3h),3.06～3.08(m,2h),2.81～2.84(m,2h),2.01～2.03(brs,2h),1.91～1.93(brs,1h),1.30～1.31(t,3h).es：m/z599[m+h]+。实施例6：4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐的制备称取实施例5化合物(1mmol)于反应瓶中，加甲醇20ml，室温下搅拌溶解后，加入马来酸(0.5mmol)，加毕，回流0.5h，冷却至室温，减压蒸除溶剂，室温下真空干燥获得标题化合物。实施例7：4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐的制备称取实施例5化合物(1mmol)于反应瓶中，加丙酮20ml，室温下搅拌溶解后，加入马来酸(0.55mmol)，加毕，回流0.5h，冷却至室温，减压蒸除溶剂，室温下真空干燥获得标题化合物。实施例8：4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐的制备称取实施例5化合物(1mmol)于反应瓶中，加乙醇20ml，室温下搅拌溶解后，加入马来酸(0.5mmol)，加毕，回流0.5h，冷却至室温，减压蒸除溶剂，室温下真空干燥获得标题化合物。实施例9：4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型的制备称取10.0g4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐于反应瓶中，加入100ml甲醇，回流30min，自然冷却至室温，0-5℃析晶过夜，得到4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型。实施例10：4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型的制备称取10.0g4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐于反应瓶中，加入150ml乙醇，回流30min，自然冷却至室温，0-5℃析晶过夜，得到4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型。实施例11：4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型的制备称取10.0g4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐于反应瓶中，加入100ml乙醇，回流30min，自然冷却至室温，0-5℃析晶过夜，得到4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型。以上实施例9-11制备的4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型，经测量具有基本相同的x射线衍射图谱，见图1。实施例12：生物活性测定化合物准备：将pod810全自动微孔板预处理系统将本发明实施例6制备的化合物加入孔板中，化合物起始浓度为100um，每个化合物做双复孔，2倍稀释10个点。细胞的培养：分别将前列腺癌细胞du-145、人乳腺癌细胞mda-mb-468用含15％胎牛血清(fbs)的rpmi-1640培养基，在37度培养箱内培养，取对数生长期细胞用于实验。mtt细胞存活性实验：分别将前列腺癌细胞du-145、人乳腺癌细胞mda-mb-468接种于96孔板中(5-10×104cells/well)，用实施例6的化合物处理48h，每孔中加入20μl3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(mtt)孵化4h，然后加入每孔中100μldmso，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪od490nm处测量各孔的吸光值，使用graphpadprism处理得到对应曲线和ic50值，结果见表1。表1实验结果表明，4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐对具有持续激活的stat3活性的mda-mb-468细胞、du-145细胞具有良好的抑制作用。实施例13：水溶性评价按2015年药典四部水溶性实验，实验结果见表2.表2化合物水溶性实施例9化合物40.28mg/ml实施例14：4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型的稳定性测试称取3份4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型1.0g，分别平铺于培养皿中，1份开口置于光照照度为4500lx±500lx条件下放置30天，1份开口置于室温85％相对湿度(rh)条件下放置30天，1份开口置于室温95％相对湿度(rh)条件下放置30天，于第0、10、30天取样，考查最大单杂、总杂质、晶型和外观的变化，实验结果见表3。表3上述实验结果均表明，本发明的4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型具有良好的化学稳定性和物理稳定性。实施例15：4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型的长期稳定性测试称取2份4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型1.0g开口平铺于称量瓶中，分别敞口放置于25℃/60％相对湿度(rh)和40℃/75％相对湿度(rh)条件下，于0、3、6个月分别取样，考查最大单杂、总杂质、晶型和外观的变化，结果见表4，表4上述实验结果均表明，本发明的4-(9-乙基-9h-咔唑-4-基)-6-(4-烯丙酰氨基苯基)-n-(2-甲基-4h-色烯-4-酮基)-1,3,5-三嗪-2-胺马来酸盐ii晶型具有良好的长期稳定性。当前第1页12