本发明涉及中药
技术领域：
，具体涉及一种中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
：腋臭俗称狐臭，又称臭汗证等，主要症状是由患者腋窝等褶皱部位散发难闻的气味，腋下分泌物之有特异臭味之病症。中医指出，腋臭是因湿热郁结与腠理汗孔所致，令俗气发汗冒出所致，属中医湿毒热毒范畴，或因遗传所获。影响患者的正常生活，严重者导致患者心理障碍。引发腋臭的因素有很多，包括内分泌因素、细菌因素、遗传因素等。因大汗腺受内分泌的影响，在青春期才开始分泌活跃，故大汗腺引起的臭汗症多在青春期出现，到老年可减轻或消失；环境温度过高、心情紧张会导致腋臭患者不正常出汗，发出令人不悦的味道。腋臭汗多容易导致各种细菌滋长，引起其它皮肤病。腋臭患者虽不痛不痒，但当臭味刺激外人时经常会由于心理压力导致精神上的难言之隐。到目前为止，用于治疗狐臭的方法有手术治疗、药物治疗等。手术治疗多采用选择性大汗腺剥除法，手术切口与皮肤自然褶皱一致，瘢痕不明显，其治疗原理是以破坏人体大汗腺，控制汗液分泌量，达到其治疗功效，此法会对患者带俩不便或不足，且存在一定的危险性和易复发性；药物治疗方面有液体、粉体、膏体等，由于其含有香精，只能掩盖臭味，暂时缓解症状，不能根除，导致腋臭反复发作，且不稳定、刺激性强，患者会因皮肤过敏溃烂而停止用药。因此，为适宜现代社会的快节奏、顺应性好的要求，提供一种安全、有效、无毒副作用的药物具有重要的现实意义，中药学作为中华民族的瑰宝，具有作用强、见效快、药效持久等特点，且没有依懒性、耐药性及毒副作用。因此选择一种中药制剂用于治疗腋臭具有十分重要的临床意义。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于提供一种中药组合物及其制备方法，使得所述中药组合物能够有效治疗狐臭，并具备较高的疗效；本发明的另外一个目的在于提供上述中药组合物在制备治疗狐臭的药物中的应用。为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种中药组合物，包括没食子酸、柠檬酸和芍药苷。作为优选，以重量份计，包括没食子酸0.5-4份、柠檬酸50-250份、芍药苷1-10份；更优选地，包括没食子酸0.8-2.5份、柠檬酸55-100份、芍药苷1.5-8份；进一步优选地，包括没食子酸0.9-1.5份、柠檬酸60-80份、芍药苷2-6份。在本发明具体实施方式中，所述中药组合物如下之一：(1)没食子酸3.75份、芍药苷10份、柠檬酸250份；(2)没食子酸1.5份、芍药苷4份、柠檬酸80份；(3)没食子酸2.3份、芍药苷5.5份、柠檬酸100份；(4)没食子酸3份、芍药苷8份、柠檬酸150份；在本发明中药组合物药物药理试验中，本发明中药组分混合物可导致哺乳小鼠乳腺局部致炎发生凝固型坏死，甚至出现严重大面积坏死，从而达到抑制腺体分泌，且有效率明显高于没食子酸、柠檬酸、芍药苷单独组分制备的注射液。同时，还能够对金黄色葡萄球菌、需氧棒状杆菌、干燥棒状杆菌、微球菌菌株显示出不同程度的抑制作用，提示本发明中药组合物能够治疗腋臭(狐臭)；在本发明中药组合物对大汗腺中气味结合蛋白和载脂蛋白d的影响试验中，与模型组相比较，本发明中药组合物各剂量组asob2、载脂蛋白d(apod)蛋白表达显著下调(p<0.05,p<0.01)；在临床试验中，本发明中药组合物的治愈率为76.47％，总有效率为94.11％，随访治愈病人半年，未见复发。基于上述优异的试验结果，本发明提出了所述中药组合物在制备治疗狐臭的药物中的应用。依据该应用，本发明还提供了一种中药制剂，其包括所述中药组合物和药用辅料。所述中药组合物可采用药剂学中常规的制剂方法制备成注射剂、凝胶剂、膏剂、洗剂、喷剂等具体的外用或注射中药制剂。在制备这些剂型时可根据实际需要加入药学可接受的辅料，包括但不限于填充剂、乳化剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、防腐剂和基质等。此外，本发明还提供了所述中药组合物的制备方法，即将没食子酸、柠檬酸和芍药苷混合，获得所述中药组合物。由以上技术方案可知，本发明以没食子酸、柠檬酸和芍药苷为活性成分组成一种中药组合物，其可以清热除臭、消炎杀菌、除湿消肿且无不良反应及毒副作用，药理实验表明对治疗狐臭有极好的缓解及治疗效果，能够应用于狐臭临床治疗及推广。具体实施方式本发明公开了一种中药组合物及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述中药组合物及其制备方法和应用经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文所述的中药组合物及其制备方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。以下就本发明所提供的一种中药组合物及其制备方法和应用做进一步说明。实施例1：本发明所述中药组合物及其注射剂(没食子酸3.75份、芍药苷10份、柠檬酸250份)使用方法：病人取仰卧位，两臂上举，腋部皮肤经常规消毒后将注射剂注入局部真皮线层下。注射时，按腋毛分布由一侧逐渐向各部分呈扇形放散注射，药液不可过度集中。注射后将局部轻轻按压约1分钟，以促进药液扩散，考虑到个人差异性较大，主要取决于病人腋毛分布范围，腋臭程度等因素。一般每侧约15-20ml，每天1-2次。a.在温度为20～25℃、相对湿度为45％～65％的洁净室内，称取没食子酸3.75g、芍药苷10g、柠檬酸250g；b.将上述三个中药原料加入配液装置中；c.调整配液装置内的温度为40～50℃，加入注射水至配液装置内药液的总重量为100kg，保持配液装置内气压、温度稳定；d.搅拌3～10分钟，调整配液装置内的温度为15～25℃，过滤；e.将d所得产物无菌灌封装成10ml/支的注射液，100度检漏、负压60kpa湿热灭菌20分钟，检验、包装，即得。实施例2：本发明所述中药组合物及其凝胶剂(没食子酸1.5份、芍药苷4份、柠檬酸80份)使用方法：冲凉后取适量凝胶涂在腋下摩擦一分钟左右，5分钟后在用清水清洗至没有任何味道，每天3次。a.称取没食子酸1.5g、芍药苷4g、柠檬酸80g，得中药组合物，备用；b.称取卡波姆10g，加入800g水中，搅拌均匀至充分溶胀；c.向b中依次加入甘油100g、尼泊金酯1.0g及中药组合物，搅拌均匀；d.向c中加入适量三乙醇胺调节ph至4.5～6.0，加适量水补足重量至1000g，继续搅拌均匀，灌装，即得。实施例3：本发明所述中药组合物及其膏剂(没食子酸2.3份、芍药苷5.5份、柠檬酸100份)使用方法：冲凉后取适量药膏涂在腋下摩擦一分钟左右，5分钟后在用清水清洗.即没有任何味道。而且还可以持续10至15天没有味道。坚持使用完一个疗程既可达到根治的效果。a.称取没食子酸2.3g、芍药苷5.5g、柠檬酸100g，得中药组合物，备用；b.称取硬脂酸，羊毛脂、甘油适量，将其放入烧杯中，在水浴中加热使油相中温度控制在80℃左右，并不断搅拌，使混溶，得中间体i；c.取适量蒸馏水与烧杯中，加热，水温控制在80℃，加入中药组合物，搅拌使其完全溶解，温度控制在75～80℃，得中间体ii；d.将ii逐渐加入加入到i中，此过程不断搅拌，控制温度在75～80℃，加入完毕之后继续保温搅拌1小时。取出放冷，灌装，即得。实施例4：本发明所述中药组合物及其喷剂(没食子酸3份、芍药苷8份、柠檬酸150份)使用方法：冲凉后取喷剂喷雾4-5次，10分钟后再用清水清洗至没有任何味道，每天3次。a.称取没食子酸3g、芍药苷8g、柠檬酸150g，粉碎，过120目筛网，得中药组合物，备用；b.称取一定量的乙醇和蒸馏水，配置成浓度为60％的酒精溶液；c.将a中备好的无聊缓缓倒入b酒精溶液中进行溶解，边搅拌边加入，直至溶解完全，常温下放置48小时以上；d.利用灌装机将药剂灌入预先制作号的喷雾小瓶中，将瓶口密封好，包装，即得。实施例5：药理实验腋臭(狐臭)产生的基础条件主要是汗腺分泌过度，由革兰阳性菌特别是葡萄球菌分解大汗腺的分泌物，产生短链脂肪酸而产生特殊的臭味。因此，完成药理学实验的关键是首先了解本发明的中药组分混合物能否使大汗腺萎缩或坏死、以及抑菌效果。一、致小鼠大汗腺萎缩或坏死模型实验1、材料与方法1.1材料动物：昆明小鼠系分娩后第三天的哺乳期的雌性鼠，体重30-35g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。受试物：中药组合物按照实施例1制成注射液。①没食子酸注射液：称取没食子酸3.75g，按照实施例1步骤bcde方法制备注射液，标为没食子酸组(a组)；②柠檬酸注射液：称取柠檬酸250g，按照实施例1步骤bcde方法制备注射液，标为柠檬酸组(b组)；③芍药苷注射液：称取芍药苷10g，按照实施例1步骤bcde方法制备注射液，标为芍药苷组(c组)；1.2方法研究证实小鼠的乳腺实动物发育变异了的大汗腺，同样由上皮性胚芽发育而成的，乳腺相当与患腋臭个体大汗腺的过度分泌状态。因此利用哺乳小鼠乳腺代替大汗腺对本发明的中药组分混合物进行药效研究，同时克服了动物大汗腺分散不集中的缺陷。具体方法：取分娩后第三天的哺乳期雌性小鼠105只随机分成7组，即生理盐水组、没食子酸组(a组)、柠檬酸组(b组)、芍药苷组(c组)、本发明中药组合物高、中、低剂量(剂量分别为每只动物0.3、0.2、0.1ml),注射部位均为右侧倒数第二个乳腺，小鼠直立位面对注射者9-12点处，距乳头45-5mm。常规消毒后，用4号半针头做扇形浸润注射，注射后用无菌棉球轻柔1分钟。然后将动物放回单独笼内与其仔鼠一起同笼实验常规饲养，12天后断颈处死母鼠，切除已注射的乳腺并进行常规固定，切片，染色，然后显微镜下检查。2、结果表1不同受试物对乳腺的坏死的影响情况对照组乳腺组织小叶完整，腺泡上皮排列规整，腺腔扩张呈圆形，有的呈束状，矮柱状上皮突入腔内呈钉状突或呈乳头状，有的腺泡腔内可见粉染得分泌物贮留，腺泡间有薄层纤维分隔乳腺组织小叶完整腺胞腔可见粉染得分泌物贮留，注射后乳腺腺胞无大改变。中药组合物的治愈率明显高于a、b、c单独组分所制备的注射液。中药组分混合物的高、中、低剂量组大部分均可见乳腺皮下及腺泡区充血、水肿、单核，组织细胞，淋巴细胞和中性粒细胞或出血，伴有小片或较大片腺泡凝固型坏死，胞浆红染，核消失，但腺体轮廓尚保持。中、高剂量个别坏死严重，核消失，呈无结构的颗粒样，组织轮廓已消失。综上所述，本发明中药组合物可导致哺乳小鼠乳腺局部致炎发生凝固型坏死，甚至出现严重大面积坏死，从而达到抑制腺体分泌，且有效率明显高于没食子酸、柠檬酸、芍药苷单独组分制备的注射液。提示本发明中药组合物能够治疗腋臭。此外，按照实施例2-4配方制备成注射液进行上述试验，结果显示，各配方均可100％达到哺乳小鼠乳腺坏死情形。二、体外抑菌作用1、材料与方法1.1材料细菌金黄色葡萄球菌标准株；类棒状杆菌标准株；干燥棒状杆菌；丙酸杆菌标准株；微球菌标准株。细菌培养基营养琼脂培养基，批号120423，营养肉汤培养基，批号120626，北京三药科技开发公司生产，由中国药品生物制品检定所监制。受试物：中药组合物按照实施例1制成注射液。1.2方法1.2.1受试物配制受试药物溶于dmso(二甲基亚砜)配成10％的药物母液1.2.2细菌培养试验前一天将各菌接种于肉汤培养基中增菌培养16h过夜后，取96孔细胞培养板若干块，先加肉汤培养基100ul/孔。于各板第一行加药样100ul/孔，混匀，第一行吸取100ul/孔下移至第二行，同样混匀下移，如此反复，直至第五个稀释度，混匀，弃去100ul/孔。第一行浓度为500mg/ml，第二行为250mg/ml，第三、四、五行浓度分别为125、62.5和31.3mg/ml。将增菌过的各菌比浊至麦氏1号管(3亿菌/ml)，再行稀释100倍，吸取各菌10ul加入各行，每菌各加三列。做青霉素对照，细菌及培养基对照。向各板中补加肉汤100ul/孔。将各板置于37℃培养24h后，镜下观察结果细菌生长状态。1.2.3最低抑制浓度(mic)的测定：细菌(葡萄球菌和类棒状杆菌等革兰阳性菌为研究对象)37℃培养24h。以能够完全抑制细菌生长的最低浓度为化合物对该菌株的最低抑制浓度(mic)，所有mic数值均为3次重复实验的平均值。2、结果2.1中药组分混合物对体外不同革兰氏阳性菌抑制作用表2中药组合物的抑菌试验结果注：“+”表示有菌生长，“-”表示无菌生长。“(-)”表示将无菌生长者转种琼脂平板，培养24小时后，发现有菌生长。表3中药组合物的抑菌试验结果(mg生药/ml)菌种金黄色葡萄球菌需氧棒状杆菌干燥棒状杆菌微球菌mic68.359.862.575.92.2对不同革兰阳性菌的mic通过上述抑菌实验表明，中药组合物对金黄色葡萄球菌、需氧棒状杆菌、干燥棒状杆菌、微球菌菌株显示出不同程度的抑制作用。此外，按照实施例2-4配方制备成注射液进行上述试验，结果显示，各配方组对金黄色葡萄球菌、需氧棒状杆菌、干燥棒状杆菌、微球菌菌株显示出不同程度的抑制作用。实施例6：对大汗腺中气味结合蛋白和载脂蛋白d的影响1、方法1.1临床样本收集1.1.1腋臭患者标本收集腋臭患者腋下组织标本25例，其中13例为男性患者，12例为女性患者。年龄20～40之间。术中取患者左右两侧腋下新鲜皮肤组织约6cm×0.3cm×0.3cm(深及脂肪层)，对组织标本进行多点取材。1.1.2正常患者标本收集进行腋下隆乳的女性患者标本5例。术中取患者左右两侧腋下新鲜皮肤组织约6cm×0.3cm×0.3cm(深及脂肪层)，对组织标本进行多点取材。1.2细胞培养取自患者和志愿者的腋窝处皮肤经d-hanks液冲洗后，剔除脂肪组织。用眼科手术剪将皮肤剪成1mm3的小组织块。然后用ii型胶原酶孵箱中消化1天。1天后，镜下获取汗腺组织，移入新的培养瓶中培养，加入少许培养基，待汗腺组织块贴壁后继续加入2ml培养基继续培养。每2～3天换液一次。通常汗腺上皮中混有成纤维细胞，而后者与汗腺上皮相比，贴壁较差。为了纯化汗腺上皮细胞，通过胰酶分步消化的方法获取汗腺上皮细胞。胰酶消化后，首先脱落的是成纤维细胞，吸弃后，继续消化依然贴壁的汗腺上皮，则能获取较为纯的汗腺上皮细胞。整个过程中，细胞培养采用dmem+10％fbs。1.3细胞处理将上述培养的腋臭患者细胞，分为模型组、实施例1中药组合物注射液低剂量组、中剂量组、高剂量组，共4组，分别铺板于6孔板培养基中，培养48h后，按照细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(碧云天公司)说明书提取浆蛋白与核蛋白，用bca(bicinchoninicacid)法测定蛋白含量，样品-80冻存备用。1.4westernblotting法检测asob2、载脂蛋白d(apod)取等量蛋白进行12％sds-page电泳，蛋白电转移到pvdf膜后，5％bsa的封闭液4℃封闭过夜。tbst洗膜，小鼠抗人asob单克隆抗体抗体(稀释度1：1000)室温孵育1h。tbst洗膜后用辣根过氧化物酶标记的抗鼠igg5室温孵育。tbst洗膜后ecl发光试剂盒发光，暗室压片，显影，定影。β-actin作为内参对照。1.5统计学分析与数据处理所有数值均以表示，采用spss17.0统计软件对实验数据进行t检验和直线相关分析，p＜0.05表示差异有统计学意义。2、结果2.1中药组合物对大汗腺分泌物中气味结合蛋白、载脂蛋白d表达的影响表4中药组分混合物对大汗腺细胞中asob2、载脂蛋白d(apod)含量的影响组别数量asob2/β-actinapod/β-actin正常组30.46±0.030.33±0.02模型组31.86±0.21##1.56±0.18##低剂量31.37±0.23*1.21±0.20*中剂量30.91±0.17*0.89±0.13*高剂量30.68±0.03**0.56±0.05**注：与正常组比，#p<0.05，##p<0.01；与模型组比，*p<0.05，**p<0.01由表4实验结果表明，与正常组比较，模型组asob2、载脂蛋白d(apod)蛋白表达显著上调(p<0.01)；与模型组相比较，中药组分混合物各剂量组asob2、载脂蛋白d(apod)蛋白表达显著下调(p<0.05,p<0.01)。此外，按照实施例2-4配方制备成注射液进行上述试验，结果显示，各配方中各剂量组asob2、载脂蛋白d(apod)蛋白表达显著下调(p<0.05,p<0.01)。实施例7：临床试验1.病例选择选择确诊的腋臭患者34例临床观察，病人随机分成两组，治疗组17例，其中男性9例，女性8例，病程1年～5年。对照组17例，其中男性9例，女性8例，病程1-4年。两组病例的病程、症状轻重程度基本一致，无显著性差异，具有可比性。2.药物使用方法治疗组患者使用本发明实施例1中药组合物注射剂，具体方法：病人取仰卧位，两臂上举，腋部皮肤经常规消毒后将注射剂注入局部真皮线层下。注射时，按腋毛分布由一侧逐渐向各部分呈扇形放散注射，药液不可过度集中。注射后将局部轻轻按压约1分钟，以促进药液扩散，考虑到个人差异性较大，主要取决于病人腋毛分布范围，腋臭程度等因素。一般每侧约15-20ml即可达到治愈效果。3.疗效判定(1)治愈：腋窝异味、有臭味、出汗异常等症状消失；臭味消失，身体痊愈。(2)有效：上述症状有所缓解。(3)无效：病症无变化。4.结果表5中药组分混合物治疗腋臭临床结果组别治愈有效无效总有效率中药组分混合物133194.11％由表5可以看出，本发明中药组合物的治愈率为76.47％，总有效率为94.11％，随访治愈病人半年，未见复发。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12