本发明涉及医疗器械技术领域，具体而言，涉及一种天然生物修复膜、其制备方法和应用。
背景技术：
口腔溃疡是一种常见的发生于口腔黏膜的溃疡性损伤病症。局部创伤、精神紧张、食物、药物、营养不良、激素水平改变及维生素或微量元素缺乏等多种因素均可导致口腔溃疡。口腔溃疡发作时疼痛剧烈，局部灼痛明显，严重者还会影响饮食、说话，对日常生活造成极大不便，还可引发慢性咽炎、头痛发热、淋巴结肿大等全身症状。
现有的口腔溃疡治疗多以药物为主，主要包括抗生素类(如抗生素漱口水、抗生素药膜)、激素类(如地塞米松口腔溃疡贴膜)、中药类(如二黄口疡清)和生物材料类(如海藻酸类口腔溃疡贴)等，其中，抗生素类和激素类临床使用受到严格控制且多次使用有药物耐受风险，天然生物材料类口腔溃疡修复材料兼具湿性愈创性和修复诱导型，使用更为安全有效，因此开发口腔溃疡用天然生物修复膜具有良好的临床应用前景，但部分口腔溃疡用修复膜以纤维素类或海藻酸类材料为基材，但由于基材本身的抗菌消炎性欠佳，因此多数修复膜类产品仍含有药物组份，属于药械结合产品。
技术实现要素：
本发明旨在提供一种天然生物修复膜、其制备方法和应用，以提高用于口腔溃疡的药物的安全性。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种天然生物修复膜。该天然生物修复膜原料由水溶性壳聚糖、海藻酸盐、鱼胶原蛋白活性肽和辅料组成。
进一步地，水溶性壳聚糖与海藻酸盐的质量比为1:1～10:1，鱼胶原蛋白活性肽质量为水溶性壳聚糖质量的0.01％～10.0％。
进一步地，水溶性壳聚糖的分子量≥150kda，脱乙酰度60～98％，取代度≥0.8；海藻酸盐的分子量≥100kda，m/g≥1.0；鱼胶原蛋白活性肽的分子量≤3000da。
进一步地，水溶性壳聚糖选自由羧甲基壳聚糖/甲壳素、羟丙基壳聚糖/甲壳素、羟乙基壳聚糖/甲壳素、羟丁基壳聚糖/甲壳素、壳聚糖季铵盐、壳聚糖乳酸盐、壳聚糖谷氨酸盐和壳聚糖硫酸酯组成的组中的一种或多种。
进一步地，海藻酸盐选自由海藻酸钠、海藻酸钾和海藻酸铵组成的组中的一种或多种。
进一步地，鱼胶原蛋白活性肽来源于海洋鱼类或淡水鱼类的鱼皮、鱼鳞或鱼骨。
进一步地，水溶性壳聚糖的分子量大于等于200kda小于等于500kda，脱乙酰度75～95％，取代度≥0.85；海藻酸盐的分子量大于等于100kda小于等于500kda，m/g≥1.2；鱼胶原蛋白活性肽的分子量≤3000da。
进一步地，水溶性壳聚糖与海藻酸盐的质量比为3:2～5:1。
进一步地，天然生物修复膜应用于口腔溃疡。
根据本发明的另一个方面，提供一种上述任一种天然生物修复膜的制备方法。该制备方法包括以下步骤：一种口腔溃疡用天然生物修复膜，其制备包括如下步骤：s1，将水溶性壳聚糖和鱼胶原蛋白活性肽用含0.5％氯化钙的生理盐水溶解，配制成溶液a；s2，将海藻酸盐以生理盐水配置成溶液b；以及s3，将溶液a和溶液b混合在冻干状态下压成膜状得到天然生物修复膜。
进一步地，溶液a中水溶性壳聚糖的浓度为1.5～4wt％，鱼胶原蛋白活性肽质量为水溶性壳聚糖质量的0.01％～10.0％。
进一步地，溶液a和溶液b混合后，水溶性壳聚糖与海藻酸盐的质量比为1:1～10:1。
进一步地，溶液a和溶液b的配制均在无菌条件下进行；优选的，s3之后还包括对天然生物修复膜进行辐照灭菌的步骤。
本发明提供的天然生物修复膜完全采用天然生物活性材料制成，吸收液体后转为水凝胶贴服于溃疡处，不仅可提供物理屏障减少摩擦导致的痛苦，还可有效促进溃疡创面修复、降低炎性反应对创面的刺激，多方面减轻患者痛苦。此外，本发明提供的口腔溃疡用天然生物修复膜不添加任何药物组份或化学试剂，无药物滥用风险，安全性高。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
根据本发明一种典型的实施方式，提供一种天然生物修复膜。该天然生物修复膜原料由水溶性壳聚糖、海藻酸盐、鱼胶原蛋白活性肽和辅料组成。
其中，壳聚糖类物质具有抑菌、止血、促愈、镇痛的功能，能促进上皮细胞、成纤维细胞等多种细胞分裂和胞外基质生长，明显加速创面的愈合、并减少疤痕形成，可作为功能性敷料。海藻酸类产品可保持伤口的湿性愈合环境，同时还可将伤口表面的细菌、炎性因子、组织或细胞碎屑等锁定在凝胶内部，达到清创效果，可作为伤口护理的产品。鱼胶原蛋白活性肽具有清除自由基、诱导细胞增殖、促进创面愈合等作用，还可表现为抗菌肽活性。
本发明提供的天然生物修复膜完全采用天然生物活性材料制成，吸收液体后转为水凝胶贴服于溃疡处，不仅可提供物理屏障减少摩擦导致的痛苦，还可有效促进溃疡创面修复、降低炎性反应对创面的刺激，多方面减轻患者痛苦。此外，本发明提供的口腔溃疡用天然生物修复膜不添加任何药物组份或化学试剂，无药物滥用风险，安全性高。
另外，本发明所需三种主要组份均可市售购买，成本和风险均可控；本发明提供的天然生物修复膜用于溃疡创面后可转变为水凝胶状态贴付于患处，形成湿性屏障，减少与其他组织或物质的摩擦，并可促进溃疡创面愈合、抑制炎性反应及减少感染等效果；本发明提供的天然生物修复膜不含药物或其他物质，无药物滥用风险，安全性高。
优选的，水溶性壳聚糖与海藻酸盐的质量比为1:1～10:1，更优选为3:2～5:1；鱼胶原蛋白活性肽质量为水溶性壳聚糖质量的0.01％～10.0％。
优选的，水溶性壳聚糖的分子量≥150kda，脱乙酰度60～98％，取代度≥0.8；海藻酸盐的分子量≥100kda，m/g≥1.0；鱼胶原蛋白活性肽的分子量≤3000da。限定上述性能指标，能够在很大程度上优化天然生物修复膜的性能指标。更优选的，水溶性壳聚糖的分子量大于等于200kda小于等于500kda，脱乙酰度75～95％，取代度≥0.85；海藻酸盐的分子量大于等于150kda小于等于500kda，m/g≥1.2；鱼胶原蛋白活性肽的分子量≤3000da，从而进一步优化天然生物修复膜的性能指标。
根据本发明一种典型的实施方式，水溶性壳聚糖选自由羧甲基壳聚糖/甲壳素、羟丙基壳聚糖/甲壳素、羟乙基壳聚糖/甲壳素、羟丁基壳聚糖/甲壳素、壳聚糖季铵盐、壳聚糖乳酸盐、壳聚糖谷氨酸盐和壳聚糖硫酸酯组成的组中的一种或多种；海藻酸盐选自由海藻酸钠、海藻酸钾和海藻酸铵组成的组中的一种或多种；鱼胶原蛋白活性肽来源于海洋鱼类或淡水鱼类的鱼皮、鱼鳞或鱼骨。
根据本发明一种典型的实施方式，天然生物修复膜应用于口腔溃疡，当然也可应用于其他类似创伤的修复。
根据本发明一种典型的实施方式，提供一种上述天然生物修复膜的制备方法。该制备方法包括以下步骤：s1，将水溶性壳聚糖和鱼胶原蛋白活性肽用含0.5％氯化钙的生理盐水溶解，配制成溶液a；s2，将海藻酸盐以生理盐水配置成溶液b；以及s3，将溶液a和溶液b混合在冻干状态下压成膜状得到天然生物修复膜。
水溶性壳聚糖具有良好的止血性和成膜性，可有效促进上皮细胞增殖且抑制成纤维细胞增殖，可提供良好的微环境促进创面止血、愈合和修复，还有一定抗菌消炎作用，可减轻炎性反应；海藻酸盐吸收体液后会形成柔性水凝胶，起到炎性排除、伤口保护作用；采用的鱼胶原蛋白活性肽可有效促进粘膜再生修复、抑制溃疡创面的炎性反应，改善患者的顺应性。本发明以水溶性壳聚糖、海藻酸盐、鱼胶原蛋白活性肽为主要组分，经处理后制备得到天然生物修复膜，可用于口腔溃疡等。本发明中，通过物理交联、冷冻加压成型工艺，最终产品提供形式为力学性能增强的膜剂，使用操作方便。
优选的，溶液a中水溶性壳聚糖的浓度为1.5～4wt％，鱼胶原蛋白活性肽质量为水溶性壳聚糖质量的0.01％～10.0％；更优选的，溶液a和溶液b混合后，水溶性壳聚糖与海藻酸盐的质量比为1:1～10:1。
为了提高天然生物修复膜的使用安全性，溶液a和溶液b的配制均在无菌条件下进行；优选的，s3之后还包括对天然生物修复膜进行辐照灭菌的步骤。
下面将结合实施例进一步说明本发明的有益效果。在本发明中未详细写明的试剂或技术手段，均可采用本领域的常规试剂或常规技术手段实现，并不会对实验的最终结果造成具有显著差异的影响。
实施例1
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖1.5g(分子量200kda，脱乙酰度95％，取代度0.8)、鱼胶原蛋白活性肽0.1g(分子量3000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠1.5g(分子量100kda，m/g为1.2)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例2
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖4.0g(分子量250kda，脱乙酰度95％，取代度1.0)、鱼胶原蛋白活性肽0.1g(分子量3000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠0.4g(分子量200kda，m/g为1.2)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例3
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖4.0g(分子量250kda，脱乙酰度95％，取代度1.0)、鱼胶原蛋白活性肽0.4g(分子量2000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠4.0g(分子量200kda，m/g为1.5)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例4
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖4.0g(分子量250kda，脱乙酰度95％，取代度1.0)、鱼胶原蛋白活性肽0.4g(分子量2000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠2.0g(分子量250kda，m/g为1.2)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例5
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖3.0g(分子量300kda，脱乙酰度95％，取代度1.0)、鱼胶原蛋白活性肽0.3g(分子量2000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠2.0g(分子量250kda，m/g为1.5)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例6
s1，取无菌状态的羟丙基壳聚糖3.0g(分子量150kda，脱乙酰度95％，取代度0.8)、鱼胶原蛋白活性肽0.2g(分子量3000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠2.0g(分子量100kda，m/g为1.0)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例7
s1，取无菌状态的壳聚糖乳酸盐3.0g(分子量250kda，脱乙酰度95％，取代度1.0)、鱼胶原蛋白活性肽0.3g(分子量2000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钾2.0g(分子量250kda，m/g为1.2)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例8
s1，取无菌状态的羟丙基壳聚糖3.0g(分子量250kda，脱乙酰度95％，取代度1.0)、鱼胶原蛋白活性肽0.3g(分子量2000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钾2.0g(分子量250kda，m/g为1.2)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例9
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖2.0g(分子量250kda，脱乙酰度95％，取代度1.0)、羟乙基壳聚糖2.0g(分子量250kda，脱乙酰度95％，取代度1.0)、鱼胶原蛋白活性肽0.3g(分子量2000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠2.0g(分子量250kda，m/g为1.2)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例10
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖2.0g(分子量250kda，脱乙酰度95％，取代度1.0)、羟乙基壳聚糖2.0g(分子量250kda，脱乙酰度95％，取代度1.0)、鱼胶原蛋白活性肽0.3g(分子量2000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠2.0g(分子量250kda，m/g为1.2)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例11
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖3.0g(分子量250kda，脱乙酰度60％，取代度0.8)、鱼胶原蛋白活性肽0.3g(分子量2000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠2.0g(分子量250kda，m/g为1.5)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例12
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖3.0g(分子量250kda，脱乙酰度75％，取代度0.8)、鱼胶原蛋白活性肽0.3g(分子量2000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠2.0g(分子量250kda，m/g为1.5)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例13
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖3.0g(分子量250kda，脱乙酰度75％，取代度0.85)、鱼胶原蛋白活性肽0.3g(分子量2000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠2.0g(分子量250kda，m/g为1.5)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例14
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖3.0g(分子量250kda，脱乙酰度75％，取代度0.85)、鱼胶原蛋白活性肽0.3g(分子量2000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠2.0g(分子量250kda，m/g为1.5)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
实施例15
s1，取无菌状态的羧甲基壳聚糖1.5g(分子量200kda，脱乙酰度95％，取代度0.8)、鱼胶原蛋白活性肽0.1g(分子量3000da)，溶于100ml含0.5％氯化钙的无菌生理盐水，制备均匀溶液a；
s2，取无菌状态的海藻酸钠1.5g(分子量100kda，m/g为1.0)，溶于100ml生理盐水，制备均匀溶液b；
s3，均匀搅拌条件下，将溶液a缓缓加入溶液b中，搅拌均匀后，真空去气泡，倒入预冷模具中，冷冻干燥后再压制成膜片，包装后辐照灭菌，即得天然生物修复膜。
以上步骤均在无菌、洁净状态下进行。
将上述各实施例与市场销售西瓜霜喷剂进行效果比较，口腔溃疡患者每天早晚溃疡处各贴一片，每次1片；西瓜霜喷剂按说明书使用；实施例和对比例各统计40名患者的使用效果，记录如下表1。
表1
注：1至3天溃疡面愈合为显著；4至7天溃疡面愈合为一般；8天以后溃疡面愈合为低效。
从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：
1)本发明的天然生物修复膜由水溶性壳聚糖、海藻酸盐和鱼胶原蛋白活性肽等天然生物基质组成，高度结构仿生和功能仿生，用于溃疡创面后可转变为水凝胶状态贴付于患处，形成湿性屏障，减少与其他组织或物质的摩擦，并可促进溃疡创面愈合、抑制炎性反应及减少感染等效果；
2)不含有任何药物或化学试剂，通过天然生物基质自身的抗菌、消炎及促愈合活性改善溃疡创面的再生修复状况和患者的顺应性，安全性高，无药物滥用风险或化学试剂残留致毒、致畸风险；
3)通过物理交联、冷冻加压成型工艺改善创伤修复膜的力学性能，所得膜剂具有较强的力学性能，便于使用操作；
4)仅含水溶性壳聚糖、天然生物基质，无其他任何添加成分，交叉污染风险低；还具有工艺可操作性强、周期短、质量稳定性好、成本低廉等优势；
5)配方简单，不引入任何其他药物或成分，无药物耐受或过敏风险；生产周期短，风险可控，成本低廉，质量稳定。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。