中药药物在制备预防和/或治疗慢性盆腔炎的药物中的应用的制作方法

本发明涉及中药领域，具体而言，涉及一种中药药物在制备预防和/或治疗慢性盆腔炎的药物中的应用。

背景技术：

慢性盆腔炎是指女性内生殖器及其周围结缔组织、盆腔腹膜的慢性炎症。常为急性盆腔炎未彻底治疗，在患者体质较差的情况下，急性盆腔炎的病程可迁延及反复发作，造成慢性盆腔炎；但是亦可无急性盆腔炎症病史过程，如沙眼衣原体感染所致输卵管炎。慢性盆腔炎病情较顽固，可导致月经紊乱、白带增多、腰腹疼痛及不孕等。

目前，对于慢性盆腔炎的治疗主要包括物理疗法、抗菌药物治疗、糜蛋白酶或玻璃酸酶注射、手术治疗等，但是这些方法或疗效不显著，或费用过高，病人痛苦。

癃清片(或癃清胶囊)为一种中成药，为清热通淋剂，具有清热解毒，凉血通淋之功效。用于下焦湿热所致的热淋，症见尿频、尿急、尿痛、腰痛、小腹坠胀；亦用于慢性前列腺炎湿热蕴结兼瘀血证，症见小便频急，尿后余沥不尽，尿道灼热，会阴少腹腰骶部疼痛或不适等。癃清片的组成有泽泻，车前子，败酱草，金银花，牡丹皮，白花蛇舌草，赤芍，仙鹤草，黄连和黄柏。方中泽泻、车前子利水渗湿；金银花、败酱草、黄连、黄柏、白花蛇舌草清热解毒燥湿；赤芍、牡丹皮清热凉血，活血散瘀；仙鹤草止血解毒；诸药合用，共奏清热解毒，凉血通淋之功效。目前，癃清片主要应用于清热通淋解毒的治疗，癃清片的药效并没有得到充分的开发与利用。

有鉴于此，特提出本发明。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种可以有效治疗慢性盆腔炎的中药药物，使得该中药药物得以充分开发与利用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种中药药物在制备预防和/或治疗慢性盆腔炎的药物中的应用，所述中药药物的原料包括：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连和黄柏。

进一步地，所述中药药物通过抑制子宫充血和/或水肿起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用。

进一步地，所述中药药物通过抑制子宫内膜细胞凋亡起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用。

进一步地，所述中药药物通过抑制阴道炎细胞浸润起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用。

进一步地，所述中药药物通过抑制子宫炎症细胞因子表达量升高起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用；

优选地，所述炎症细胞因子包括tgf-α和/或il-4。

进一步地，所述中药药物通过抑制子宫纤维化起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用；

优选地，所述中药药物通过抑制子宫icam-1表达量升高起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用。

进一步地，所述中药药物的用量为0.12-0.24g/kg/天。

进一步地，按重量份数计，所述中药药物的原料包括：黄柏87-348份、金银花90-350份、黄连87-348份、败酱草150-495份、白花蛇舌草165-500份、赤芍90-350份、牡丹皮87-348份、仙鹤草90-350份、车前子5-68份和泽泻87-348份。

进一步地，所述中药药物采用下述方法制备得到：将水提膏、醇提膏和赋形粉混合干燥得到干燥物；

所述水提膏包括金银花、败酱草、白花蛇舌草和仙鹤草的水提取物；

所述醇提膏包括车前子、黄连、黄柏、赤芍和牡丹皮的醇提取物；

所述赋形粉包括泽泻粉。

进一步地，所述中药药物还含有药剂学可接受的辅料；

优选地，所述药剂学可接受的辅料包括淀粉、微晶纤维素、蔗糖、阿斯巴甜、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁、微粉硅胶、维生素c、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠的至少一种；

优选地，所述中药药物的剂型为口服剂型，优选为丸剂、片剂、胶囊、颗粒剂、糖浆剂、口服溶液剂、口服混悬剂或口服乳剂。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明提供的中药药物的原料包括：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连和黄柏，该中药药物在慢性盆腔炎的预防和/或治疗中具有显著的疗效。本发明经过研究发现：该中药药物对慢性盆腔炎引发的子宫水肿，子宫充血，子宫细胞加速凋亡，子宫炎症以及阴道炎细胞浸润都具有良好的治疗效果，可以作为慢性盆腔炎的有效治疗药物。该中药药物的原料全部取自中药材，并且通过处理提取得到有效活性成分，安全无毒副作用，可以作为慢性妇科炎症的预防或治疗药物。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例3中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠子宫肿胀率评分结果；

图2为本发明实施例4中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠子宫损伤he检查结果；

图3a为本发明实施例4中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠子宫细胞凋亡tunel检查结果；

图3b本发明实施例4中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠子宫细胞凋亡统计结果；

图4为本发明实施例5中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠阴道炎症评分结果；

图5为本发明实施例5中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠阴道炎症检测结果；

图6a为本发明实施例6中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠子宫免疫组化染色icam-1检查结果；

图6b为本发明实施例6中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠子宫免疫组化染色icam-1检查阳性表达面积统计结果；

图7a为本发明实施例6中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠子宫免疫组化染色il-4检查结果；

图7b为本发明实施例6中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠子宫免疫组化染色il-4检查阳性表达面积统计结果；

图8a为本发明实施例6中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠子宫免疫组化染色tnf-α检查结果；

图8b为本发明实施例6中中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠子宫免疫组化染色tnf-α检查阳性表达面积统计结果。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。

一种中药药物在制备预防和/或治疗慢性盆腔炎的药物中的应用，其中，中药药物的原料包括：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连和黄柏。

慢性盆腔炎(cpid)是增生性炎症慢性炎症黏连形成与多种因素有关，且随病程延长有加重的趋势。其反复的炎性细胞活化及免疫病理损伤，是促炎/抗炎因子相互作用和局部免疫调节共同参与的结果。机体参与免疫系统的炎症因子主要分为前炎症因子和抑炎症因子两类。本发明经过研究发现：该中药药物对慢性盆腔炎引发的子宫水肿，子宫充血，子宫细胞加速凋亡，子宫炎症以及阴道炎细胞浸润都具有良好的治疗效果，可以作为慢性盆腔炎的有效治疗药物。该中药药物的原料全部取自中药材，并且通过处理提取得到有效活性成分，安全无毒副作用，可以作为慢性妇科炎症的预防或治疗药物。

在本发明一个优选地实施方式中，中药药物通过抑制子宫充血和/或水肿起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用。慢性盆腔炎经常带有子宫充血和/或水肿的症状，子宫扩张，内膜受压变得菲薄导致充血和水肿严重，本发明通过试验发现该中药药物可以明显的抑制子宫水肿，显著减少充血水肿现象，有效抑制炎性浸润。

在本发明一个优选地实施方式中，中药药物通过抑制子宫内膜细胞凋亡起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用。慢性盆腔炎会加速子宫内膜细胞的凋亡，本发明通过试验发现该中药药物可以有效抑制子宫内膜细胞的凋亡速度，从而达到治疗的作用。

在本发明一个优选地实施方式中，中药药物通过抑制阴道炎细胞浸润起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用。慢性盆腔炎经常伴有阴道炎症，本发明通过实验发现，该中药药物同样可以抑制阴道炎细胞浸润，改善阴道炎症。

在本发明一个优选地实施方式中，中药药物通过抑制子宫炎症细胞因子表达量升高起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用。

在本发明一个优选地实施方式中，炎症细胞因子包括tgf-α和/或il-4。tnf-α是一种促炎症因子和免疫调节因子，它持续升高则导致一些病理生理改变。il-4是由活化th2细胞产生的一种重要的细胞因子，对机体的免疫功能和炎症过程具有重要的调节作用。慢性盆腔炎会导致子宫组织中肿瘤坏死因子α和白介素4的表达量升高，炎症细胞因子表达量升高进一步危害健康，本发明的中药药物通过调节子宫组织中的炎症细胞因子表达水平，来提高抗炎能力，减轻炎症损伤，抑制炎症的发展。

在本发明一个优选地实施方式中，中药药物通过抑制子宫纤维化起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用。

在本发明一个优选地实施方式中，中药药物通过抑制子宫icam-1表达量升高起到预防和/或治疗慢性盆腔炎的作用。

icam-1属于免疫球蛋白超家族成员，具有介导白细胞在血管壁滚动、稳定、粘附和穿越内皮细胞、游出并在炎症区域募集的功能，通过白细胞激活，释放大量炎症介质。在慢性炎症中，其具有诱导组织损伤及局部组织慢性纤维化过程。本发明的中药药物可以有效抑制子宫icam-1表达量，抑制组织的纤维化，防止和缓解粘连，从而减轻病情，达到治疗慢性盆腔炎的作用

在本发明一个优选地实施方式中，中药药物的用量为0.12-0.24g/kg/天。g/kg/天表示每天每1kg体重用量克数，例如，60kg体重的患者每天的用药量为7.2g-14.4g。在该用量下可以有效预防和/或治疗慢性盆腔炎，疗效显著。

在本发明一些实施方式中，按重量份数计，中药药物的原料包括：黄柏87-348份、金银花90-350份、黄连87-348份、败酱草150-495份、白花蛇舌草165-500份、赤芍90-350份、牡丹皮87-348份、仙鹤草90-350份、车前子5-68份和泽泻87-348份。黄柏典型但非限制性的为87份、137份、187份、237份、287份、337份或348份；金银花典型但非限制性的为90份、140份、190份、240份、290份、340份或350份；黄连典型但非限制性的为87份、137份、187份、237份、287份、337份或348份；败酱草典型但非限制性的为150份、200份、250份、300份、350份、400份、450份或495份；白花蛇舌草典型但非限制性的为165份、215份、265份、315份、365份、415份、465份或500份；赤芍典型但非限制性的为90份、140份、190份、240份、290份、340份或350份；牡丹皮典型但非限制性的为87份、137份、187份、237份、287份、337份或348份；仙鹤草典型但非限制性的为90份、140份、190份、240份、290份、340份或350份；车前子典型但非限制性的为5份、15份、25份、35份、45份、55份或68份；泽泻典型但非限制性的为87份、137份、187份、237份、287份、337份或348份。

在本发明一个优选地实施方式中，中药药物采用下述方法制备得到：将水提膏、醇提膏和赋形粉混合干燥得到干燥物，其中，水提膏包括金银花、败酱草、白花蛇舌草和仙鹤草的水提取物，醇提膏包括车前子、黄连、黄柏、赤芍和牡丹皮的醇提取物，赋形粉包括泽泻粉。

在本发明一个优选地实施方式中，中药药物的制备方法包括：黄柏、金银花、黄连、败酱草、白花蛇舌草、赤芍、牡丹皮、仙鹤草、车前子和泽泻，以上十味，泽泻粉碎成细粉，过筛备用；白花蛇舌草、仙鹤草、金银花、败酱草加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩成相对密度为1.25-1.30(50℃)的清膏；其余车前子等五味用60％乙醇加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25-1.30(50℃)的清膏。与上述清膏合并，加入泽泻细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，或包薄膜衣，即得。

在本发明一个优选地实施方式中，中药药物还含有药剂学可接受的辅料。药学上可接受的辅料是指生产药品和调配处方时，使用的的赋形剂和附加剂，是指除活性成分外，在安全性方面已进行了合理的评估，并且包含在药物制剂中的物质。同一药用辅料可用于不同给药途径的药物制剂，且有不同的作用和用途。优选地，药剂学可接受的辅料包括淀粉、微晶纤维素、蔗糖、阿斯巴甜、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁、微粉硅胶、维生素c、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠的至少一种。按照不同的需求将中药药物添加不同的辅料，制备成不同的剂型药物。

在本发明一些优选地实施方式中，中药药物的剂型为口服剂型，优选为丸剂、片剂、胶囊、颗粒剂、糖浆剂、口服溶液剂、口服混悬剂或口服乳剂。

下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。如无特别说明，本发明实施例中使用的细胞、药品及试剂均来源于正规而已购渠道：

大鼠(sd)，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司(scxk(京)2016-0006)，雌性，210-240g。

苯酚：分析纯，天津市化学试剂供销公司，批号：20170823。水合氯醛(天津市瑞特金化学品公司)。注射用青霉素钠：哈药集团制药总厂，生产批号：18020402-2。千金方片：株洲千金药业股份有限公司生产。生产批号：201706022。il-4抗体:武汉博士德生物工程有限公司，批号：10k274。icam抗体:武汉博士德生物工程有限公司，批号：zp435abp35。肿瘤坏死因子-α/tnfα/tnf-α抗体：北京博奥森生物技术有限公司，批号：p01375。

实施例1中药药物及其制备

黄柏、金银花、黄连、败酱草、白花蛇舌草、赤芍、牡丹皮、仙鹤草、车前子和泽泻，以上十味，泽泻粉碎成细粉，过筛备用；白花蛇舌草、仙鹤草、金银花、败酱草加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩成相对密度为1.25-1.30(50℃)的清膏；其余车前子等五味用60％乙醇加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25-1.30(50℃)的清膏。与上述清膏合并，加入泽泻细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，每片为0.60g，得到中药组合物。

实施例2造模及给药

根据动物实验剂量设计要求，配制方法如下：采用粉碎机将中药药物片剂打碎，加纯净水配制成相应剂量浓度。

中药药物高剂量组：48片加纯净水打碎，研磨，加水定容至100ml，为临床人用剂量的12倍。

中药药物中剂量组：24片加纯净水打碎，研磨，加水定容至100ml，为临床人用剂量的6倍(即等效剂量)。

中药药物低剂量组：12片加纯净水打碎，研磨，加水定容至100ml，为临床人用剂量的3倍。

造模：取雌性大鼠采用10％水合氯醛0.35ml/100g腹腔麻醉后，剪去下腹正中毛，酒精棉球消毒，于下腹部正中切口2cm，暴露子宫，用0.1ml注射器于子宫分岔处进针入子宫腔内，朝右侧方向缓慢推注25％苯酚胶浆0.06ml，左侧子宫不注射作为自身对照。术后给予10万u青霉素单腹腔注射，连用3d预防感染。注射完成后分层关腹，消毒术区。保留10只仅进行开腹和关腹手术，不注射苯酚胶浆造模，作为空白对照组。

分组：于造模后7d开始给药，分为：空白对照组(sham)、模型对照组(model)、中药药物高(l-h)、中(l-m)、低(l-l)三个剂量组、阳性药组(妇科千金方yd)。给药周期14d。

给药：于造模后7d开始给药，各剂量组分别灌胃相应受试药液10ml/kg，1次/d，连续14d。空白对照组灌胃等体积纯净水，阳性对照组灌胃千金方1.8片/kg(为临床等效剂量)。

实施例3子宫肿胀率及肿胀抑制率

于给药后15d，10％水合氯醛腹腔麻醉大鼠后，摘取左、右侧子宫，分别称质量，肿胀率＝(致炎侧子宫质量-未致炎侧子宫质量)/未致炎子宫质量×100％；抑制率＝(模型组子宫平均肿胀率-给药组子宫平均肿胀率)/模型组子宫平均肿胀率×100％。

与空白对照组相比，模型对照组子宫肿胀明显，肿胀率为38.7％。与模型对照组相比，中药药物各剂量组治疗后子宫肿胀率均有所降低，尤以中药药物中剂量组为甚(5.9％)。给药组肿胀抑制率各组均高于50％，说明给药后具有明显抑制子宫水肿的发生。中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠子宫肿胀率评分具体结果见图1(注：与sham比较，*p<0.05；与model比较，#p<0.05，##p<0.01)。

实施例4子宫内膜形态学及细胞凋亡tunel染色

取双侧造模子宫置于10％中性甲醛中固定，he常规染色，光学显微镜下观察大鼠子宫的病理变化程度，而后通过tunel染色观察子宫内膜细胞凋亡程度。

与空白对照组相比，模型对照组子宫可见明显扩张，内膜受压变得菲薄，内膜充血明显，水肿程度严重。给药各组中充血水肿现象少见，尤以中药药物中剂量组效果为佳，在炎性浸润方面，中药药物各组改善效果不如千金方组。具体数据见图2。

与空白对照组相比，模型对照组子宫细胞凋亡程度明显增加，tunel染色后阳性细胞评分值(his)为5.0，远高于空白对照组。而中药药物高剂量组的阳性细胞评分值(3.5)明显低于模型对照组。说明中药药物能够明显改善子宫内膜细胞的凋亡程度，从而达到治疗的作用。具体染色结果见图3a，数据统计结果见图3b(注：与sham比较，*p<0.05)。

实施例5阴道壁黏膜炎细胞数量

取大鼠阴道样本置于10％中性甲醛中固定，he常规染色，光学显微镜下观察大鼠子宫的病理变化程度：腔壁结构改变、上皮细胞增生、上皮细胞变性坏死、慢性炎症细胞浸润及内膜充血水肿等，根据炎症病变程度，每项为无(-)、轻度(+)、中度(++)和重度(+++)，分别评分为0、1、2、3分，以各组评分之和为炎性评分结果进行统计学分析。

与空白对照组相比，模型对照组阴道可见上皮细胞增生，表层出现黏液层，以中性粒细胞为主的炎细胞浸润。给药各组中炎细胞浸润程度较模型组轻。中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠阴道炎症评分结果见图4，中药药物对慢性盆腔炎模型大鼠阴道炎症检测结果见图5。

实施例6对子宫组织中肿瘤坏死因子α(tnf-α)、白介素4(il-4)和细胞粘附因子(icam-1)进行免疫组化染色检测

摘取双侧子宫，置10％中性甲醛中固定，常规切片，免疫组化染色。20倍的光学显微镜下，选择阳性细胞较多的区域，采集3个光镜视野计算每张切片阳性细胞面积大小，计算平均值来反应各组不同指标的表达变化情况。

tnf-α、il-4及icam-1(cd54)蛋白表达均在胞浆及胞核，呈棕黄色，正常对照组大鼠子宫腺体及炎细胞可见弱阳性表达，模型组大鼠子宫腺体及炎细胞可见强阳性表达，其余各组表达均较模型组有不同程度减弱。icam-1染色见图6a，统计结果见图6b；il-4染色见图7a，统计结果见图7b；tnf-α染色见图8a，统计结果见图8b。

上述实施例中统计方法为：应用spss17.0软件包进行统计学分析。计量资料以表示，组间比较单因素方差分析，以p<0.05为差异有统计学意义。

本实验中模型对照组大鼠子宫组织中tgf-α、il-4表达明显高于正常组，证明了子宫中出现了炎症病变，加之icam-1表达模型组仍高于正常组，也说明了在子宫出现的炎症程度向组织慢性纤维化演变。而采用中药药物灌胃治疗后，以上三个指标的表达水平均有下调。其中中药药物高剂量组各项指标表达下调最为明显。

综上所述，中药药物通过调节子宫组织中的炎症细胞因子表达水平，来提高抗炎能力，减轻炎症损伤，抑制炎症的发展。同时通过下调大鼠子宫组织中icam-1的表达，抑制组织的纤维化，防止和缓解粘连，从而减轻病情，达到治疗慢性盆腔炎的作用。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。