治疗羊口疮的制剂及其制备方法与流程

本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种治疗羊口疮的制剂及其制备方法。

背景技术：

一种因为羊口疮病毒导致的嗜上皮性传染病称之为羊口疮病，这种病无论人畜皆有可能患病，它的发病特征为在口、唇、舌、鼻、上颚等部位形成水疱、脓疱和疣状结痂等现象。羊口疮病常发生在春秋季节，幼年羔羊最易发病，虽然羊口疮病的死亡率不高，但是传播感染速度快，病情严重者会引起继发肺炎等严重疾病，所以在养殖业中依旧需要引起重视。

甘草酸苷制剂最初用于皮肤病治疗，有注射剂和固体制剂两种剂型。1958年尝试用治疗肝病经历了半个多世纪的研究和临床应用，国内外均有大量文献报道甘草酸苷制剂广泛的临床应用及其显著疗效；在非肝病领域用于过敏性反应(如皮疹、荨麻疹、药物疹)、小儿异位性皮炎、扁平苔藓、系统性红斑狼疮、肾综合征出血热及传染性非典型肺炎等。但制备成为一种新制剂应用于动物疾病治疗，未见报道。

大蒜系百合科葱属植物蒜的鳞茎，大蒜中含有丰富的氨基酸、维生素、微量元素等，其作为民间用药已有数千年的历史，现已证明大蒜具有卓越的抗菌、抗病毒、抗氧化、降血脂、抗癌、抗肿瘤、解毒及提高免疫力等功效。大蒜中起到上述作用的是大蒜挥发油，它仅占大蒜的0.2％，大蒜油主要是由大蒜素、大蒜新素及多种烯丙基和甲基组成的硫醚化合物组成，而大蒜素和大蒜新素是大蒜杀菌的有效成分。越来越多的研究表明，大蒜提取物对众多细菌和真菌有较强的抑制活性。大蒜精油由20多种易挥发物组成，主要有大蒜新素、大蒜素及多种烯丙基、丙基、甲基组成的硫醚化合物，经测定其主要成分为c6h10s2o(大蒜辣素)，这种油状物总称为大蒜精油。大蒜精油赋予大蒜多种药理功能，是大蒜的有效成分，具有抗菌消炎、降血脂、抗血小板凝集、抑癌、抗巨细胞病毒等多种药理功能。

茶树油，又被称为澳大利亚黄金，是澳洲土著的治疗皮肤病用品。植物学上把它定义为互叶白千层油。桃金娘科白千层属的一些植物中含有丰富的互叶白千层油。其通过新鲜枝叶经过水蒸汽蒸馏而得到的。茶树油呈无色或浅黄色，平常是以液体形式存在，气味怡人。茶树油有上百种物质组成，成分十分复杂，其主要成分有松油烯-4-醇、α-松油醇、1，8-桉叶油素、γ-松油烯、对异丙基甲苯、α松油烯、芳樟醇等，其中松油烯-4-醇的含量约为30％-45％，经分馏提纯，其纯度可达99％以上，具有较强的抗菌与抗病毒作用。

透皮给药是指在皮肤表面给药，使药物穿过皮肤进入血液或者局部组织产生全身或者局部治疗作用的一种给药方式，相应的剂型为透皮剂。透皮给药在我国中医中有着悠久的历史，我国传统的洗剂、搽剂、糊剂、油膏剂就属于透皮剂的范畴，但由于相关技术的限制，传统的透皮剂选择性和专一性差，药的透皮率以及透皮速率都比较低，治疗作用有限，常需要长时间的用药和反复用药，因此使用范围不是很广泛。随着技术的改进，发展成了现代的透皮剂：膏剂，霜剂等，用于兽医临床的常为浇拨剂，涂抹剂等，本发明将以上3种活性成分科学组方，获得了对羊口疮病较好的治疗作用，通过今后扩大应用，将会取得较大的经济与社会效益。

技术实现要素：

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种治疗羊口疮的制剂及其制备方法。

本发明提供治疗羊口疮的制剂所述制剂包括以下质量份数的各组分：甘草酸苷0-4份、大蒜精油0-4份、茶树精油0-4份；三者合计为6质量份；

作为优选，所述制剂包括以下质量份数的各组分：甘草酸苷1-3份、大蒜精油1-3份、茶树精油1-2份，三者合计为6质量份。

作为优选，所述制剂包括以下质量份数的各组分：甘草酸苷2份、大蒜精油3份、茶树精油1份。

作为优选，所述大蒜精油的制备方法为：将大蒜浸泡于水中，室温下恒温搅拌，过滤收集滤液，按照下述条件对滤液进行分子蒸馏：进料速度为1.5g/min，进料温度25℃，真空度170pa，温度30℃，薄膜蒸馏刮板转速300r/min，冷凝水温度3℃。

作为优选，将大蒜浸泡于水中，室温下恒温搅拌4小时。

作为优选，所述制剂还包括赋形剂。

作为优选，所述赋形剂为丙二醇和医用白油；所述药物中，丙二醇的质量份数为2份，医用白油的质量份数为4份。

本发明提供上述制剂的制备方法，将配方量的甘草酸苷、大蒜精油、医用白油、丙二醇混合，加入蒸馏水加热至49-51℃，搅拌使其充分溶解，然后将温度降低至8℃，加入配方量的茶树精油，搅拌均匀。

本发明提供上述制剂在制备治疗羊口疮病或抗羊口疮病毒的药物中的应用。

本发明提供一种药物，其有效成分为上述的制剂。

作为优选，所述药物为透皮剂。

甘草酸苷是甘草中的主要有效成分：大蒜精油由大蒜中分离获得，由多种易挥发物组成；茶树油由茶树全株通过水蒸气蒸馏获得，其挥发性与渗透性强，三种活性成分均具有可抗菌与病毒活性，但是不是有活性的化合物组合起来就一定活性更强，本发明在大量试验的基础上，通过科学的组合，制备出一种治疗羊口疮新制剂，取得了非常好的临床使用效果，相关研究未见报道。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1为甘草酸标准曲线。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。实施例1分子蒸馏法提取大蒜精油

分子蒸馏是一种特殊的液-液分离技术，它不同于传统蒸馏依靠沸点差分离原理，而是靠不同物质分子运动平均自由程的差别实现分离。当液体混合物沿加热板流动并被加热，轻、重分子会逸出液面而进入气相，由于轻、重分子的自由程不同，因此，不同物质的分子从液面逸出后移动距离不同，若能恰当地设置一块冷凝板，则轻分子达到冷凝板被冷凝排出，而重分子达不到冷凝板沿混合液排出。这样，达到物质分离的目的。国外已成功用于从油菜籽中提取ve和脂肪酸甲酯类化合物，从动、植物原料中分离游离脂肪酸；从棕榈油中提取类胡萝卜素等，还用于从奶脂肪中分离去除含氯杀虫剂。大蒜的化学成分极其复杂，大部分有效成分怕热。大蒜精油常规的提取方法均存在着不同程度的缺陷，大都存在大蒜素含量低、产率低、色泽、风味差或溶剂残留等，本发明的大蒜精油能够获得比较好的效果。

1材料与方法

1.1材料与试剂

新鲜大蒜(产于甘肃临夏)市购。

1.2仪器与设备

md-80型分子蒸馏器广州市浩立生物科技有限公司，fw100型高速粉碎机天津泰斯特公司；dcw-1015恒温水浴机南京先欧仪器制造有限公司。

1.3方法

1.3.1大蒜的处理

称取1kg新鲜大蒜，用水洗涤干净，阴干，捣成糊状，浸泡于4l水中，在室温下恒温搅拌4h，过滤除去残渣，收集滤液。

1.3.2大蒜精油的分子蒸馏法分离

分子蒸馏每次进料量200g，进料速度为1.5g/min，进料温度25℃，真空度170pa，温度30℃，薄膜蒸馏刮板转速控制在300r/min，冷凝水温度3℃。以上条件下的得率与纯度见表1。

表1分子蒸馏大蒜精油条件及收率

2结论

分子蒸馏技术可用于高品质大蒜精油的提取与分离，但随着蒸馏温度、蒸馏压力、进料量及进料温度分子蒸馏操作条件的改变，大蒜精油的提取分离效果有不同程度的变化。实验研究所得的最佳提取条件为蒸馏温度30℃、压力170pa、进料速度1.5g/min、进料温度25℃。所得大蒜精油产品外观质量明显提高，色泽与风味好，总提取率为0.528％，纯度为99.90％。

实施例2

甘草酸苷是甘草中的主要有效成分，可抑制肝炎病毒等；大蒜精油由多种易挥发物组成，可抗菌与病毒；茶树油挥发性与渗透性强，可抗菌与病毒。本发明发现将这三种活性成分制备一种治疗羊口疮的制剂，取得了非常好的效果，相关研究未见报道。

1.实验部分

1.1辅料批准及生产厂家见表2。

表2辅料批准及生产厂家

1.2处方组成

根据甘草酸苷抗病毒活性，配以大蒜精油、茶树精油作为活性增强剂、皮肤渗透等特性，本发明选择甘草酸苷、大蒜精油、茶树精油为核心成分同时选用医用辅料丙二醇、医用白油，取得较好的效果。医用辅料丙二醇、医用液体石蜡在处方中是作为赋形剂使用。处方中核心成分的重量比如表3所示。

表3抗羊口疮病制剂核心成分重量比

1.3羊口疮制剂的制备

称取甘草酸苷1-4份(w/w)，大蒜精油1-4份(w/w)，医用白油4份(w/w)、丙二醇2份(w/w)放入烧杯中，将以上液体混合，加入5份蒸馏水并加热至50℃，在机械搅拌(800r/min)10min，使其充分溶解。待温度降至8℃时，加入茶树精油1-4份(w/w)，搅拌10min，使其混匀即得羊口疮制剂。

降温至8℃，再加入茶树精油的目的是：茶树精油挥发性强，温度高了就挥发了。

1.4体外透皮实验

1.4.1离体鼠皮的制备

将6周龄的昆明小白鼠，断颈处死，用10％硫化钠溶液去毛，剥离腹部皮肤，除去皮下脂肪选取完整皮肤用生理盐水洗净，浸于生理盐水中，在4℃保存备用，一周内用完。

1.4.2透皮实验方法

将备用的昆明小白鼠的皮肤固定在yb-p6智能透皮试验仪的扩散池与接受池之间，皮肤内层面向接受池。在接受池中充满乙腈作接受液(排除里面的气泡，使接受液与皮肤紧密接触)，然后将羊口疮病制剂处方样品充满整个扩散池。接受液温度维持30±1℃，电磁搅拌器转速维持在600r/min。分别在第1、2、4、6、8、10小时取0.5ml接收液，同时用乙腈将接受池补满。在同样的条件下，依次对15个处方样品做透皮实验。

1.4.3hplc定量测定方法的建立

1.4.3.1色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(250mm×4.6mm，5μm)；以0.025mol·l^-1醋酸钠溶液(ph值3.50)∶乙腈为流动相，两者体积比为59：41；检测波长为251nm；流速1.0ml·min^-1；柱温35℃；进样量20μl。以空白辅料溶液、对照品溶液和供试品溶液分别进样测定，甘草酸苷的rt为5.3min。

1.4.3.2甘草酸苷含量测定的方法学考察

1.4.3.3甘草酸溶液的制备

对照品溶液的制备：精密称取甘草酸对照品适量，50％甲醇溶解定容制成每1ml含甘草酸100μg的溶液。

供试品溶液的制备：取1.2中1-15号处方，精密称取适量(约含甘草酸20mg)，置100ml量瓶中，加50％甲醇适量，超声溶解，定容，摇匀，即得。

1.4.3.4线性考察

取对照品适量，以50％甲醇溶解并稀释制成浓度为0.506、1.012、5.06、25.3、50.6、101.2、202.4、303.6、404.8、506μg·ml^-1的甘草酸对照品系列溶液，分别取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线(见图1)。

由图1可知，甘草酸回归方程：y＝15311x-5888，r＝0.9999，线性关系良好。

1.4.3.5最佳处方的筛选

用1.4.3.1的色谱条件，对体外透皮试验的样品进行色谱分析，将10h的峰面积带入标准曲线方程，得到10h的累积透皮后甘草酸的含量见表4，由表4结果可以得出：试验组2透皮效果最好，为最佳配比，以下试验均考察2组(其他组也能用来治疗羊口疮，只不过效果不如试验组2好)。

表4不同配比羊口疮制剂透皮后甘草酸的含量

1.5稳定性试验

取制备好制剂2号，于室温(25℃)条件下贮存100d，结果无分层现象。

1.6家兔皮肤刺激实验

动物分组及实验前处理：取健康白色家兔16只，普通级，体重2.0-2.5kg，公母各半，实验前饲养5d并观察饮食和行为，若正常则按性别、体重随机分为4组，每组4只。一组给药前24h将家兔背部脊柱两侧被毛剪去，随后用8％硫化钡脱毛，脱毛区皮肤以消毒针头划成小“#”形，至渗血为度，作为破损皮肤组，另一组为完整皮肤组，两组都设赋形剂对照组。

给药方法：两组动物都在右侧脱毛区涂以制剂2号，左侧涂赋形剂(制备方法同上，只是没有加甘草酸苷与大蒜精油以及茶树精油)约2g作对照。给药后局部覆盖纱布和保鲜薄膜，并以胶布固定，保持药物与皮肤接触4h后去除纱布和保鲜薄膜，然后以温水洗去残留药物。每天给药1次，连续5d。完整皮肤组以同样方法给药。每次去除药物后1h及再次给药前观察皮肤状态。末次给药及去除药物后1、24、48和72h再次观察并记录涂抹部位有无红斑和水肿及恢复情况，其评价标准见表5、表6。

表5皮肤刺激反应程度评分标准

表6皮肤刺激强度评价

2结果

通过实验给药和观察得知，完整皮肤组在每次去除药物后1h和再次给药前以及末次给药后1、24、48和72h，肉眼观察均无明显红斑、水肿等皮肤刺激反应症状；破损皮肤组给药后第1d给药侧和对照侧均可见划伤部位有轻微红肿，至第4天完全恢复正常，其后每次去除药物后1h及再次给药前以及末次给药后1、24、48和72h，肉眼观察均无明显红斑、水肿等皮肤刺激性反应症状，各项分值均为零，说明制剂2号对皮肤没有刺激性。

实施例3羊口疮制剂的临床疗效试验

羊口疮又名羊传染性脓疱或羊传染性脓疱性皮炎，是由羊接触传染性脓疱皮炎病毒引起的急性接触性传染病，其特征为口腔黏膜、唇部、面部、腿部和乳房部的皮肤形成丘疹、脓疱、溃疡和结成疣状厚痂。近年来，本申请发明人用甘草酸苷、茶树精油及大蒜精油制备成新制剂治疗羊口疮，均取得显著疗效，为了进一步确定该制剂最适宜治疗浓度及临床疗效，开展了本试验。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1药物来源实施例2制备的羊口疮制剂2号(即含甘草酸苷2份、大蒜精油3份、茶树精油1份的组方)。

1.1.2实验动物试验羊45只购自甘肃榆中县养殖户，为1岁龄未免疫健康羊只，随机分为9组，ⅰ-ⅴ组为2号制剂试验组，ⅵ为甘草酸苷，ⅶ为大蒜精油组，ⅷ组为茶树精油组，ⅸ组为对照组(不加甘草酸苷与大蒜精油及茶树精油精油)。

1.1.3药物制备为了临床应用的方便，将制剂2号，用乙醇稀释获得临床应用的制剂：分别将新制剂2号用60％乙醇配制8.0mg/ml、16.0mg/ml、32.0mg/ml、64.0mg/ml、128mg/ml浓度的制剂，备用。用乙醇分别稀释甘草酸苷、大蒜精油、茶树精油到132mg/ml，备用。

2方法

将45只试验羊只随机分为9组，每组5只，适应饲养条件后，在下唇内侧用注射用针头划线，用羊口疮痂块毒感染试验羊只，建立羊口疮病理模型。1周后口唇部形成脓疱。治疗前用透明硫酸纸描摹溃疡面轮廓，方格法测定溃疡面积，然后用灭菌脱脂棉球拭去脓疱及脓液，ⅰ组、ⅱ组、ⅲ组、ⅳ组、ⅴ组分别用浓度8.0mg/ml、16.0mg/ml、32.0mg/ml、64.0mg/ml、128mg/ml新制剂2号乙醇制剂涂抹患处，ⅵ组、ⅶ组、ⅷ组分别用浓度甘草酸苷、大蒜精油、茶树精油128mg/ml制剂涂抹患处，ⅸ组用灭菌生理盐水涂抹患处，每日早中晚各1次。分别测定用药1-5d的溃疡面积，并计算溃疡面愈合百分率(愈合率)，溃疡面愈合率(用药前溃疡面积,并计算溃疡面愈合百分率(愈合率)。

溃疡面愈合率＝(用药前溃疡面积-用药后溃疡面积)/用药前溃疡面积×100％

2结果与分析

2.1治疗效果

对治疗5d后的数据进行分析，获得其愈合率。治疗1-5d各组溃疡面愈合率见表7。

表7不同浓度制剂治疗羊口疮1-5d试验结果

3结果分析

3.1甘草酸苷是甘草中的主要有效成分，主要治疗肝炎等疾病。大蒜精油由20多种易挥发物组成，主要有大蒜新素、大蒜素及多种烯丙基、丙基、甲基组成的硫醚化合物，经测定其主要成分为c6h10s2o(大蒜素)，这种油状物总称为大蒜精油或大蒜素。茶树油生物活性非常好，无论抗菌或抗病毒都有较好的效果，除此之外，本申请发明人研究发现这三者可作为一种皮肤渗透剂，有广泛研究前景。本发明发现将这三种活性成分制备一种治疗羊口疮制剂，取得了非常好的效果，相关研究未见报道。

3.2从本试验来看，治疗羊口疮制剂对羊口疮具有良好疗效，用浓度为128.0mg/ml治疗5d后，溃疡面平均愈合率80.48％。有非常好的应用前景。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。