本发明涉及预防和/或治疗阿兹海默症。
背景技术：
：：阿兹海默症是一种复杂的多病因神经退行性病症，尤其是导致记忆丧失和认知功能障碍。阿兹海默症的神经病理学研究结果的特征在于β-类淀粉(aβ)肽以细胞外方式累加积存在老年斑中，还有tau蛋白以细胞内方式聚集在神经纤维缠结中。阿兹海默症(ad)进展与纤维aβ斑的密度增加有关。文档wo2010/130946公开了对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的人源化抗体，以及它们用于治疗与神经退行性病症(诸如阿兹海默症)有关的疾病的用途。公开于文档wo2010/130946中的aβ肽的初原纤维形式相当于具有分子量大于200kda的寡聚体。所述人源化抗体的特征在于，相较于对aβ肽的其他形式的亲和力，对此肽的初原纤维形式的亲和力大为增进，使得其特异结合至老年斑而非弥漫性沉淀物。老年斑主要是由不可溶的具有高分子量的所谓原纤维(fibril)的丝性聚集物组成，且具有已显示分子量大于200kda的初原纤维形式。相对地，弥漫性沉淀物不包含或包含少量aβ肽的原纤维或初原纤维形式。据信弥漫性斑块是老年斑的前驱物。不可溶原纤维确实是由可溶性aβ肽逐渐聚集形成的，所述可溶性aβ肽逐渐聚集导致纤维形式(亦即初原纤维形式)，该纤维形式在被转化成不可溶形式之前最初是可溶的。aβ肽的可溶性寡聚体(包括二聚体、三聚体以及更大的寡聚体)暗示会在阿兹海默症早期造成突触功能紊乱以及认知功能紊乱。这些可溶性寡聚体是导致神经元功能紊乱的主要突触毒性aβ物质。近来阿兹海默症经重新概念化为病理生理学变化的渐进顺序，包括无症状期、症状性痴呆前期(因为ad或前驱ad所致的轻度认知障碍(mci))以及痴呆期。在无症状期时，在无症状或带有细微明显症状的受试者中使用生物标记来确立ad病理学的存在。仍需要提供用于预防阿兹海默症的解决方案，更具体的是通过在认知未受损的风险个体中开始的介入来预防阿兹海默症的临床发病和/或治疗最早期的疾病。技术实现要素：发明人出乎意外地发现到，对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体，尤其是对分子量大于200kda的寡聚体具有特异性的抗体，具有神经元细胞保护作用以对抗含有aβ肽的数种sds稳定形式的制品，而该等形式包括小的寡聚体、大的寡聚体以及分子量少于200kda的聚集物。尽管先前公开了这些对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体会特异地结合至老年斑而非弥漫性沉淀，但这些抗体出乎意料地可预防含有衍生自合成性aβ42的数种形式的aβ制品的神经毒性作用。发明人甚至证实，在小鼠原代神经元细胞培养物中，人源化抗体ab1(由序列seqidno：2的两条重链和序列seqidno：4的两条轻链组成)显著抑制由含有aβ42肽的数种dsd稳定形式的制品(称为“oaβ42”)诱发的神经毒性作用。该人源化抗体确实以浓度依赖的方式同时抑制oaβ42诱发的凋亡蛋白酶-3/7酶活性增加和oaβ42诱发的轴突网络减少。对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体因而尤其可用于预防涉及aβ肽聚集的疾病，尤其可用于预防阿兹海默症，更尤其是预防在有发生症状性阿兹海默症风险的受试者中预防阿兹海默症的临床发病。这些抗体确实能够预防记忆丧失和认知功能障碍。更具体来说，它们能够预防由于毒性aβ寡聚体而非老年斑所造成记忆丧失和认知功能障碍。因此，本发明涉及对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体，其用于预防阿兹海默症和/或治疗早期症状性阿兹海默症。本发明还涉及一种用于在有需要的受试者中预防阿兹海默症和/或治疗早期症状性阿兹海默症的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体。本发明尤其涉及对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体，其用于在(i)未患有记忆丧失和/或认知功能障碍，和/或(ii)不具有老年斑、不具有神经退行性变和/或不具有突触功能紊乱的受试者中预防阿兹海默症。依据本发明使用的抗体优选地在神经元细胞中至少部分地预防aβ诱发的细胞毒性，尤其是在神经元细胞中预防或降低aβ诱发的细胞毒性。依据本发明使用的抗体优选地至少部分地预防aβ诱发的神经元细胞凋亡，和/或至少部分地预防aβ诱发的轴突网络减少。所述抗体优选地为人源化抗体。在一个优选的实施方案中，所述抗体包含(i)序列seqidno：10、12、14、16、18和20的cdr；(ii)序列seqidno：10、12、14、32、18和20的cdr，或(iii)序列seqidno：10、12、30、32、18和20的cdr。所述抗体优选地包含由下列序列所编码的cdr：(i)核苷酸序列seqidno：9、11、13、15、17与19；(ii)核苷酸序列seqidno：9、11、13、31、17与19；(iii)核苷酸序列seqidno：9、11、29、31、17与19；或(iv)与(i)、(ii)、(iii)或(iv)的这些序列分别相差1、2、3、4或5个核苷酸的核苷酸序列。在一个优选的实施方案中，所述抗体的重链的可变部分是由与序列seqidno：5或seqidno：27具有至少80％一致性的序列编码的，和/或(ii)所述抗体的轻链的可变部分是由与序列seqidno：7或seqidno：23具有至少80％一致性的序列编码的。在一个优选的实施方案中，所述抗体的重链的可变部分包含与序列seqidno：6或seqidno：28具有至少80％一致性的序列，和/或所述抗体的轻链的可变部分包含与序列seqidno：8或seqidno：24具有至少80％一致性的序列。所述抗体优选地包含(i)由与核苷酸序列seqidno：1或seqidno：25具有至少80％一致性的序列编码的重链，和/或(ii)由与核苷酸序列seqidno：3或seqidno：21具有至少80％一致性的序列编码的轻链。所述抗体优选地包含(i)与多肽序列seqidno：2或seqidno：26具有至少80％一致性的重链，和/或(ii)与多肽序列seqidno：4或seqidno：22具有至少80％一致性的轻链。所述抗体优选地包含由核苷酸序列(i)seqidno：5和7；(ii)核苷酸序列seqidno：5和23，或(iii)核苷酸序列seqidno：27和23编码的序列。所述抗体的特征优选地在于其序列包含(i)多肽序列seqidno：6和8；(ii)多肽序列seqidno：6和24；或(iii)多肽序列seqidno：28和24。所述抗体优选地包含由(i)核苷酸序列seqidno：1和3；(ii)核苷酸序列seqidno：1和21；或(iii)核苷酸序列seqidno：25和21编码的序列。所述抗体优选地包含(i)多肽序列seqidno：2和4；(ii)多肽序列seqidno：2和22；或(iii)多肽序列seqidno：26和22。aβ肽及其聚集形式表述“aβ肽”或“类淀粉β肽”或“β类淀粉肽(abetapeptide)”在本文表示具有36至43个氨基酸的肽，其是由于类淀粉前驱蛋白(app)受到β分泌酶和γ分泌酶依序剪切所产生。aβ42肽是更为疏水性和原纤维生成性的肽，并构成沉积于脑内的主要物质。可发现aβ肽为单体，或者可聚集形成可溶寡聚体或不可溶原纤维。举例而言，可溶寡聚体为二聚体、三聚体、四聚体或更大的寡聚体或aβ肽的初原纤维形式。表述“初原纤维形式”在本文表示aβ肽的寡聚形式，其在体外可溶，且可以分离为分子量大于200kda、300kda、400kda或500kda的实体并可固定试剂(诸如硫黄素s或刚果红)。表述“老年斑”在本文表示由被营养障碍的轴突与胶细胞反应围绕的类淀粉核心(固定硫黄素s或刚果红)组成的斑块。在体内，老年斑主要包含不可溶原纤维和分子量大于200kda的初原纤维形式。尤其是在患有阿兹海默症的患者中发现到老年斑。表述“弥漫性类淀粉沉积物”或“弥漫性沉积物”在本文表示不固定硫黄素s或刚果红，且不含有或含有少许原纤维与初原纤维形式的无定形aβ次结构。弥漫性类淀粉沉积物数量多得多，但与疾病没有关联。待治疗的受试者需要依据本发明来治疗以预防和/或治疗阿兹海默症的受试者可为人类或非人类哺乳动物，优选为人类。若所述受试者为人类，则也可使用术语“个体”或“患者”。所述人类可为任何年龄的，例如可以是婴儿、儿童、青少年、成人、老人。非人类哺乳动物优选为小鼠、大鼠、猫、狗、兔或灵长类动物。所述受试者可以是有发展症状性阿兹海默症风险(尤其需要预防阿兹海默症)的受试者，或者可以是出于早期症状性阿兹海默症(尤其需要治疗症状性阿兹海默症)的受试者。有发展症状性阿兹海默症风险的受试者并未患有记忆丧失也未患有认知功能障碍。换言之，有发展症状性阿兹海默症风险的受试者具有正常认知或任选地轻微认知减退。可以通过本领域技术人员熟知的任何方法来评定记忆丧失，评定方法为诸如(但不限于)自由与暗示提醒测试(freeandcuedselectiveremindingtest)、雷氏听觉语言学习测试(reyauditoryverballearningtest)和/或加州语言学习测试(californiaverballearningtest)。可以通过本领域技术人员熟知的任何方法来评定认知功能障碍，评定方法为诸如(但不限于)简短智能测试(mini-mentalstateexamination)、阿兹海默症评估量表-认知子量表(alzheimer’sdiseaseassessmentscale-cognitivesubscale)、神经心理学测试组合(neurospychologicaltestbattery)和/或重复性神经心理状态评估组合(repeatablebatteryfortheassessmentofneuropsychologicalstatus)。有发展症状性阿兹海默症风险的受试者可能是阿兹海默症前期受试者或具有无症状阿兹海默症的受试者。阿兹海默症前期受试者不具有任何与发展症状性阿兹海默症风险有关的生物标志物。具有非症状性阿兹海默症的受试者具有与发展症状性阿兹海默症风险相关的至少一种生物标志物和/或至少一种遗传因素。与发展症状性阿兹海默症风险有关的生物标记包括aβ肽累积在脑中的生物标志物(例如，类淀粉pet成像的异常追踪剂保留和/或脑脊髓液(csf)中的低水平aβ肽)，以及神经退行性变或损伤的生物标志物(例如csf中的tau蛋白水平升高和/或pet成像时的脑氟代脱氧葡萄糖摄取降低和/或结构核磁共振时的脑萎缩)。与发展症状性阿兹海默症风险有关的遗传因素包括，但不限于，-就体染色体显性阿兹海默症来说，app、psen1和/或psen2中基因突变；-就散发性阿兹海默症来说，涉及脂质代谢的基因突变(apoe4、clu和/或abca7)、涉及免疫系统的基因突变(clu、cr1、abca7、cd33、epha1和/或ms4a基因簇)，和/或涉及突触功能行使的基因突变(picalm、cd33、cd2ap，epha1和/或bin1)。记忆丧失与认知功能障碍至少一部分是由于突触功能紊乱和/或神经退行性变。因此，有发展症状性阿兹海默症风险的受试者不具有突触功能紊乱和/或神经退行性变，或具有一定水平的突触功能紊乱和/或神经退行性变但还未转成症状。表述“突触功能紊乱”在本文表示突触的数目、结构和/或组织有不正常的变化，特别是在神经退行性病况中，造成突触的功能活性受损。突触功能紊乱包括突触丧失的机制。可以通过本领域技术人员熟知的任何方法来评定突触功能紊乱，评定方法为诸如例如使用静止状态或任务功能性mri(核磁共振成像)来评定功能性脑链接度(参见例如knight等2016,magneticresonanceimagingtodetectearlymolecularandcellularchangesinalzheimer’sdisease,front.agingneurosci.vol.8,article139)，和/或测量csf中的突触蛋白(例如神经颗粒素(neurogranin))的水平。举例而言，如在体内所发现到的突触功能紊乱在体外相当于轴突网络受损。表述“轴突网络受损”在本文表示轴突网络减少，即轴突长度的尺寸减少。可以通过本领域技术人员熟知的任何方法(诸如免疫细胞化学)来评定轴突网络，随后进行细胞成像。表述“神经退行性变”在本文表示神经元细胞减少和/或神经元功能或活性降低。可以通过本领域技术人员熟知的任何方法来评估神经退行性变，评估方法为诸如例如csf中的tau蛋白含量升高和/或pet成像时的脑氟代脱氧葡萄糖摄取降低和/或结构核磁共振时的脑萎缩。在体内所观察到的神经退行性变在体外相当于异常神经元细胞凋亡。异常神经元细胞凋亡表示相较于对照健康细胞，神经元细胞凋亡增加。可以通过本领域技术人员熟知的任何方法来评定神经元细胞凋亡，评定方法为诸如测量半胱天冬酶3/7的酶活性。在本发明的一个优选的实施方案中，有发展症状性阿兹海默症风险的受试者为：-认知正常的受试者，其有至少一位家族成员罹患症状性阿兹海默症或处于症状性阿兹海默症风险下，更优选的是罹患阿兹海默症的体染色体显性形式，和/或-认知正常的受试者，其经诊断携带至少一个涉及阿兹海默症体染色体显性形式的突变，和/或-认知正常或有轻微认知减退的受试者，其基于与发展症状性阿兹海默症的风险有关的生物标志物和/或遗传因素而处于发展症状性阿兹海默症的风险下，该受试者例如处于发展散发性阿兹海默症的风险下。与发展症状性阿兹海默症风险有关的一种或多种所述生物标志物和/或遗传因素如上文所定义。表述“家庭成员”优选地表示前代成员(例如父母、祖父母或曾祖父母)、兄弟、姊妹，或任选为儿子或孙子。家族成员通常是父母或兄弟姐妹。表述“阿兹海默症的体染色体显性形式”在本文表示由于至少一种遗传突变导致的阿兹海默症。阿兹海默症的体染色体显性形式为技术人员所熟知。阿兹海默症的体染色体显性形式例如包括在选自下组的至少一种基因中的至少一种突变：编码类淀粉β前驱蛋白(app)的基因、编码早老素1(psen1)的基因，和编码早老素2(psen2)的基因。cacace等(2016,alzheimer’s&dementiavol.12,pp733-748)描述此类突变的非限制性实例。具有已发展成症状性阿兹海默症(即罹患症状性阿兹海默症)的受试者优选地处于早期症状性阿兹海默症。“早期症状性阿兹海默症”在本文表示其中开始记忆丧失和/或认知功能障碍的阶段。早期症状性阿兹海默症的实例为症状性痴呆前期。症状性痴呆前期例如包括由于阿兹海默症或前驱性阿兹海默症所致的轻度认知障碍(mci)。可分别在albert等,2011,alzheimer's&dementia,7,270-279和dubois等,2016,alzheimer's&dementia,12,292-323中找到由于阿兹海默症和前驱性阿兹海默症所致的mci的特征。晚期症状性阿兹海默症是由于阿兹海默症所致的痴呆，优选的是由于阿兹海默症所致的轻度痴呆。可在mckhann,2011,alzheimer's&dementia,7,263269中找到由于阿兹海默症所致的痴呆的特征。在本发明的一个优选的实施方案中，该受试者未罹患症状性阿兹海默症。在本发明的一个优选的实施方案中，该受试者不具有老年斑。可例如通过脑部的类淀粉pet(正电子放射断层造影术)成像来评定老年斑不存在。预防阿兹海默症或治疗早期症状性阿兹海默症表述“预防阿兹海默症”在本文表示在待治疗受试者中(优选在有发展症状性阿兹海默症风险的受试者中)至少部分地预防(具体而言，预防、降低和/或延迟)记忆丧失和/或认知功能障碍，特别是通过至少部分地在神经元细胞中预防aβ-诱发的细胞毒性(尤其是在神经元细胞中通过预防、延迟和/或降低aβ-诱发的细胞毒性)。预防阿兹海默症的期望效果包括：-至少部分地预防神经退行性变，特别是预防、延迟和/或降低神经退行性变，和/或-至少部分地预防突触功能紊乱，例如预防、延迟和/或降低突触功能紊乱，特别是至少部分地预防突触的丧失(尤其是预防、延迟和/或降低突触的丧失)。表述“治疗早期症状性阿兹海默症”在本文中表示在待治疗受试者中(优选在罹患早期症状性阿兹海默症的受试者中，例如罹患症状性痴呆前期的受试者)至少部分地治疗(具体而言，中止、减缓和/或减少)记忆丧失和/或认知功能障碍，特别是通过至少部分地在神经元细胞中预防aβ-诱发的细胞毒性(特别是在神经元细胞中通过中止、减缓和/或减少aβ-诱发的细胞毒性)。治疗早期症状性阿兹海默症的期望作用包括：-中止或减缓神经退行性变，和/或-中止或减缓发生突触功能紊乱发生，特别是中止或或减缓突触的丧失。表述“记忆丧失”、“认知功能障碍”和“待治疗受试者”如同上文所定义。神经退行性变、突触功能紊乱以及突触丧失如同上文定义且可如上文进行评定。待依据本发明来预防和/或治疗的记忆丧失以及认知功能障碍是由于毒性aβ寡聚体而非老年斑所致。抗体天然抗体通常包含一个四聚物。每个这样的四聚物典型由两个相同的多肽链对所构成，每对具有一条全长“轻”链(通常具有约25kda的分子量)和一条全长“重”链(通常具有约50-70kda的分子量)。如本文所用的术语“重链”和“轻链”是指任一种免疫球蛋白多肽，该免疫球蛋白多肽具有足够的可变域序列以提供对靶抗原的特异性。各个轻链与重链的氨基末端部分典型地包括约100至110个或更多个氨基酸的通常负责抗原识别的可变域。各链的羧基末端部分典型地定义一个负责效应功能的恒定域。因此，在天然存在的抗体中，全长重链免疫球蛋白多肽包括一个可变域(vh)和三个恒定域(ch1、ch2和ch3)，其中vh域在多肽的氨基端，且ch3域在羧基端，且全长轻链免疫球蛋白多肽包括一个可变域(vl)和一个恒定域(cl)，其中vl域在多肽的氨基端，且cl域在羧基端。人轻链通常分类为κ轻链和λ轻链，且人重链通常分类为μ、δ、γ、α或ε，并将抗体同种型分别定义为igm、igd、igg、iga和ige。igg有数个亚型，包括(但不限于)igg1、igg2、igg3和lgg4。igm的亚型包括(但不限于)igm1和igm2。iga以类似的方式细分为包括(但不限于)iga1和iga2的亚型。在全长轻链和重链中，可变域和恒定域通常是通过具有约12个或更多个氨基酸的“j”区而接合，其中重链还包括约10个以上氨基酸的“d”区。参见例如fundamentalimmunology(paul,w.,ed.,ravenpress,2nded.,1989)。各个轻/重链对的可变区通常形成抗原结合部位。天然存在的抗体的可变域通常展现出相同的一般性结构，也就是由三个超变区所接合的相对保守的骨架区(fr)，又称为互补决定区或cdr。每一对的两条链的cdr典型通过骨架区比对，它们能够结合至特定表位。从氨基端至羧基端，轻链和重链可变域通常包含结构域fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3和fr4。术语“cdr组”是指在能够结合抗原的单个可变区中出现的三个cdr的组。已依据不同系统有差异地定义出这些cdr的明确边界。kabat所述的系统(kabat等,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1987)与(1991))不但提供清楚的残基编号系统供应用于抗体的任何可变区，还提供界定出三个cdr的明确残基边界。这些cdr可称为kabatcdr。chothia和同事(chothiaandlesk,1987,j.m01.biol.196:901—17；chothiaetal.,1989,nature342:877-83)发现，kabatcdr中的某些子部分采取几乎相同的肽架构构像，尽管在氨基酸序列水平来说有很大的差异性。这些子部分被命名为l1、l2和l3，或h1、h2和h3，其中“l”和“h”分别表示轻链区和重链区。这些区域可称为chothiacdr，它们的边界与kabatcdr相重叠。padlan,1995,fasebj.9:133-39；maccallum,1996,j.mol.biol.262(5):732-45；和lefranc,2003,dev.comp.immunol.27:55-77已描述定义出与kabatcdr相重叠的cdr的其他边界。其他cdr边界界定法可能未严格遵循本文系统之一，但仍会与kabatcdr相重叠，虽然它们可能因为特定残基或残基群或甚至整个cdr并未显著影响抗原结合的预测或实验结果而有所缩短或延长。本文使用的方法采用依据这些系统中任一者所定义的cdr，虽然某些实施方案使用kabat或chothia定义的cdr。使用氨基酸序列鉴定预测的cdr为本领域中熟知的，诸如在martin,a.c."proteinsequenceandstructureanalysisofantibodyvariabledomains,"inantibodyengineering,vol.2.kontermannr.,dubels.,eds.springer-verlag,berlin,p.33-51(2010)中。也可以检视重链和/或轻链可变域的氨基酸序列以通过其他常规方法来鉴定cdr序列，例如通过比较其他重链与轻链可变区的已知氨基酸序列来确定序列超可变性的区域。已编号的序列可以由目视来比对，或通过采用诸如thompson,1994,nucleicacidsres.22:4673-80中所述的比对程序(诸如clustal程序套组之一)来对准。分子模型通常用来正确描述骨架区和cdr区并因而校正基于序列的排布。如本文所用的术语“抗体”含括上文定义的抗体和抗体的任何功能性片段。优选地，抗体的功能性片段为fv型片段、scfv(单链fv)、fab(片段抗原结合)、f(ab')2、fab'、scfv-fc、双抗体、多特异性抗体(尤其是双特异性)、含有一或多个cdr序列的合成多肽，它们通常具有与其衍生而来的抗体相同的固定特异性。抗体的功能性片段可以通过诸如由酶(诸如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)消化，和/或通过由化学还原剪切二硫桥的方法而获得。纳米抗体也包括在抗体的定义内。如本文所用的术语“fc”是指一种包含源自抗体消化或通过其他方式生产的非抗原结合片段序列的分子，不论是呈单体形式或多聚物形式，且可含有铰链区。天然fc的原有免疫球蛋白来源优选为人来源的且可以是任一种免疫球蛋白，虽然优选igg1与igg2。fc分子是由单体多肽所构成，单体多肽可以通过共价(即二硫键)和非共价缔合而被连接成二聚体或多聚体形式。天然fc分子的单体亚基之间的分子间二硫键数目范围在1至4个，其取决于类型(例如igg、iga和ige)和亚型(例如igg1、igg2、igg3、iga1和igga2)。fc的一个实例是由木瓜蛋白酶消化igg产生的二硫键二聚体。如本文所用的术语“fc”对于单体、二聚体以及多聚体形式是通用的。f(ab)片段通常包括一个轻链和一个重链的vh与ch1域，其中f(ab)片段的vh-ch1重链部分无法与另一个重链多肽形成双硫键。如本文所用，f(ab)片段还可以包括一个含有两个被氨基酸接头区隔开来的可变域的轻链，和一个含有两个被氨基酸接头区隔开来的可变域与ch1域的重链。f(ab’)片段通常包括一个轻链和一个重链的一部份，该部分含有更多的恒定区(介于ch1和ch2域之间)，使得链间二硫键可以在两个重链之间形成而形成f(ab’)2分子。“表位”表示抗原被抗体所结合的位点。如果抗原为聚合物(诸如蛋白质或多糖)，则表位可由连续或不连续的残基形成。在此，表位为构像性，即与初原纤维a-β肽的三维结构有关。如本文所用的术语“vh”是指抗体的重链可变区，包括下列片段的重链：fv、scfv、dsfv、fab、fab'或f(ab)'。如本文所用的术语“vl”是指抗体的轻链可变区，包括下列片段的轻链：fv、scfv、dsfv、fab、fab'或f(ab)'。“人源化抗体”表示主要含有人免疫球蛋白序列的抗体。此术语通常是指通过并入人序列或并入在人序列中所发现的残基来经修饰的非人免疫球蛋白。一般来说，人源化抗体包含一个或通常是两个可变域，其中所有或一部分cdr区对应于衍生自非人亲代序列的部分，且其中所有或一部分fr区衍生自人免疫球蛋白序列。人源化抗体继而可包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(fc)，尤其是选择的参考人免疫球蛋白的部分。人源化抗体优选在人体内尽可能具有最低免疫原性。为此，一或多个cdr的一或两个氨基酸可以通过对人宿主具有较少免疫原性，但实质上不会降低抗体对aβ肽的初原纤维形式的结合特异性的氨基酸来被修饰。此外，骨架区的残基不必是人的，它们可以不经修饰，因为它们不会贡献抗体的免疫原性。本领域技术人员已知数种人源化方法以供将非人亲代抗体修饰成在人体内具有较少免疫原性的抗体。序列并不需要与人抗体具有完全一致性。事实上，完全序列一致性不一定是免疫原性降低的预测指标，且修饰有限数量的残基就可以导致在人类体内呈现出免疫原性大为减弱的人源化抗体(molecularimmunology(2007)44,1986-1998)。例如，一些方法包括例如cdr(移植)(epo0239400；wo91/09967和美国专利第5,530,101号和第5,585,089号)、表面重建(resurfacing)(epo0592106；epo0519596；和padlan,1991,molecimm28(4/5):489-498；studnicka等,1994,proteng7(6):805-814；与roguska等,1994,pnas91:969-973)或链混合(chainmixing)(美国专利第5,565,332号)。人源化抗体可能具有依据国际专利申请wo2009/032661中解释的技术经修饰的可变部分。此技术特别使用基于抗体的三维模型的动态分子模拟，该模型依据同源性构建。抗体可具有减弱的效应功能，诸如带有降低其对免疫系统的受体的亲和力的fc域的突变的免疫球蛋白或诸如纳米抗体。“效应功能”表示抗体的fc域固定受体或蛋白质而引起免疫反应。降低这些效应功能使其减少不良反应，诸如诱发微出血(racke等jneurosci2005,25:629)。可以通过本领域技术人员已知的任何技术来测量亲和力。通过biostatspeed技术来测量是有利的，该技术是基于ratkovskda与reedytj(bio-metrics,1986,42,575-82)所描述的算法开发的。为了表达抗体的重链和/或轻链，编码所述一条或多条链的多核苷酸可被插入至表达载体中。表达载体可以是质粒、yac、粘粒、逆转录病毒、衍生自ebv的附加体，或本领域技术人员判断适用于表达所述一条或多条链的任何载体。载体可用于转化细胞，有利的是衍生自一种细胞系的细胞。所述细胞株甚至更有利的是衍生自哺乳动物。cho细胞系或衍生自此细胞系的细胞株，或hek293细胞系或衍生自此细胞系的细胞系是有利的。可以通过本领域技术人员熟知的任何方法来进行细胞转化，以便于将多核苷酸引入宿主细胞内。所述方法可为使用葡聚糖的转化、通过磷酸钙的沉淀、使用聚凝胺的转染、原生质体融合、电穿孔、多核苷酸囊封于脂质体内、生物射弹注射和dna直接显微注射至细胞核中。序列一致性“与参考序列至少x％一致的氨基酸或核酸序列”意指主题肽或核酸的序列与参考序列一致或与参考序列相差至多100-x个氨基酸或核苷酸变异/参考序列的每100个氨基酸或核苷酸。换言之，为了获得具有与参考序列有至少x％一致的序列的多肽或核酸，在主题序列中至多100-x％的氨基酸或核苷酸可被插入、删除或用另一个氨基酸或核苷酸替代。相较于参考序列，与参考序列具有至少80％、85％、90％、95％或99％一致性的多肽可包含一个或多个突变，诸如一个或多个删除、插入和/或替代。在替代的情况下，替代优选地对应于如下表1中所指出的保守性替代，和/或替代成特别是对于人宿主来说免疫原性较低的氨基酸。相较于参考序列，与参考序列具有“至少80％、85％、90％、95％或99％一致”的核酸序列可包含一个或多个突变，诸如删除、插入和/或替代。在替代的情况下，相较于参考序列，替代优选地对应于沉默替代或者是在翻译的氨基酸序列中产生保守性替代或产生较低免疫原性的替代，例如在下表1中所指出的。表1在一个优选的实施方案中，与参考序列具有至少80％、85％、90％、95％或99％一致的核酸序列与参考序列的相差仅在于沉默替代和/或造成保守性氨基酸替代和/或产生较低免疫原性氨基酸的替代。用于比较两个或更多个序列的一致性的方法是本领域所熟知的。例如在wisconsinsequenceanalysispackage，版本9.1中可供使用的程序，例如程序bestfit和gap，可用来测定两个序列之间的％一致性。bestfit使用smith与waterman的“局部同源性”算法并且找到两个序列之间相似性的最佳单一区域。其他用于测定序列之间的一致性的程序也是本领域所知的，例如needle程序，其是基于needleman与wunsch算法，描述于needlemanandwunsch(1970)j.molbiol.48:443-453中，其中多肽序列比较为例如下列参数：比较矩阵：blosum62，空位开放罚分：10和空位延伸罚分：0.5，末端空位罚分：不正确，末端空位开放罚分＝10，末端空位延伸罚分＝0.5；且多核苷酸序列比较为下列参数：比较矩阵：dnafull；空位开放罚分＝10，空位延伸罚分＝0.5，末端空位罚分：不正确，末端空位开放罚分＝10，末端空位延伸罚分＝0.5。对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体依据本发明使用的抗体对aβ肽的初原纤维形式具有特异性。因此，抗体特异地结合aβ肽的初原纤维形式，即结合如上文定义的高分子量肽。抗体尤其结合具有分子量大于200、300、400或500kda的aβ肽。抗体优选地特异地结合aβ肽的初原纤维形式，而非类淀粉结构的其他蛋白质(例如iapp、胰岛类淀粉多肽)。“特异性结合”在本文表示结合aβ肽的其他形式与结合aβ肽的初原纤维形式的强度之间的系数差为至少约10、20、30、40、50或100。抗体对肽aβ的初原纤维形式的亲和力比对此肽的其他形式优选地高至少100倍，更优选至少150倍，又更预选至少170倍。亲和力可为通过elisa测量的ec50。因此，抗体的特征在于其结合聚集成初原纤维的aβ肽的能力。依据本发明使用的抗体也至少部分地预防aβ诱发的神经元细胞凋亡，和/或至少部分地预防aβ诱发的轴突网络减少，特别是在体外。表述“抗体至少部分地预防aβ诱发的神经元细胞凋亡”尤其是表示该抗体在体外预防或降低aβ诱发的神经元细胞凋亡，特别是相较于在所述抗体不存在下的aβ诱发的神经元细胞凋亡。表述“抗体至少部分地预防aβ诱发的轴突网络减少”表示抗体在体外预防或降低aβ诱发的轴突网络减少，特别是相较于在所述抗体不存在下的aβ诱发的轴突网络减少。可以如上文或在实施例中所述来评定神经元细胞凋亡和轴突网络。抗体优选为人源化抗体。人源化抗体优选地具有较低的效应功能，使其能够限制不良反应，诸如微出血和/或血管源性水肿的发展。依据本发明使用的优选的抗体不再具有效应功能。有利地，该抗体可为免疫球蛋白g4，其fc域经历了减少半分子产生的突变。有利地，该抗体可为免疫球蛋白g4，其fc域经历了降低效应活性的突变。该抗体可经充分地唾液酸化。在一个实施方案中，该抗体未经充分唾液酸化。表述“充分唾液酸化”在本文表示抗体的fc域带有的至少80％，优选至少85％，更优选至少90％，甚至更优选至少95％，又更优选至少97％或最优选至少99％的n-多聚糖通过寡糖链包含两个唾液酸残基。经充分唾液酸化的抗体例如是通过在下列细胞系中表达抗体而获得，该细胞系由编码在fc域中带有突变的重链的核酸序列来表达β-半乳糖基转移酶和唾液酸基转移酶活性，该突变诸如是在位置d265，f243和/或v264(对应于序列seqidno：1或seqidno：25中的位置d260、f238和/或v259)。fc域中的突变例如是通过选自由丙氨酸、甘氨酸、亮氨酸和赖氨酸组成的组的氨基酸的氨基酸替代。通过参考序列seqidno：1或seqidno：25，突变为例如d260l、d260k、d260a、f238a或v259a。该抗体优选地包含至少一个cdr，cdr由具有与序列seqidno：9、11、13、15、17和19之一相同的序列，或与上述序列分别相差1、2、3、4或5个核苷酸的序列的核苷酸序列所编码。该抗体优选地包含至少一个cdr，cdr具有与序列seqidno：10、12、14、16、18和20之一相同的序列。该抗体优选地包含至少一个cdr，cdr序列相对于序列seqidno：10、12、14、16、18、20和32之一相差一至两个氨基酸，只要该抗体维持其结合特异性即可。优选的抗体包含序列seqidno：10、12、14、16、18和20的cdr，序列seqidno：10、12、14、32、18和20的cdr，或序列seqidno：10、12、30、32、18和20的cdr。例如，该抗体包含由下列编码的cdr：(i)核苷酸序列seqidno：9、11、13、15、17和19；(ii)核苷酸序列seqidno：9、11、13、31、17和19；(iii)核苷酸序列seqidno：9、11、29、31、17和19，或(iv)与(i)、(ii)或(iii)的这些序列分别相差0、1、2、3、4或5个核苷酸的序列。在一个优选的实施方案中，该抗体为人源化抗体，其：-包含序列seqidno：10、12、14、16、18和20的cdr，序列seqidno:10、12、14、32、18和20的cdr，或序列seqidno：10、12、30、32、18和20的cdr，且-对aβ肽的初原纤维形式的亲和力比其对此肽的其他形式的亲和力高至少100倍，亲和力优选是通过elisa测量的ec50。在一个有利的实施方案中，该抗体包含下列或由下列组成：(i)由与序列seqidno：5或序列seqidno：27具有至少80％、85％、90％、95％或99％一致性的序列编码的其重链的可变部分(vh)，和/或(ii)由与序列seqidno：7或序列seqidno：23具有至少80％、85％、90％、95％或99％一致性的序列编码的其轻链的可变部分(vl)。在一个有利的实施方案中，该抗体包含下列或由下列组成：(i)包含与序列seqidno：6或序列seqidno：28具有至少80％、85％、90％、95％或99％一致性的序列的其重链的可变部分(vh)，和/或(ii)包含与序列seqidno：8或序列seqidno：24具有至少80％、85％、90％、95％或99％一致性的序列的其轻链的可变部分(vl)。在又一个更有利的实施方案中，该人源化抗体包含下列或由下列组成：(i)包含由核苷酸序列seqidno：5或seqidno：27编码的可变部分(vh)的重链，和/或(ii)包含由核苷酸序列seqidno：7或seqidno：23编码的可变部分(vl)的轻链。在又一个更有利的实施方案中，该人源化抗体包含下列或由下列组成：(i)包含多肽序列seqidno：6或seqidno：28的可变部分(vh)的重链，和/或(ii)包含多肽序列seqidno：8或seqidno：24的可变部分(vl)的轻链。在一个有利的实施方案中，该人源化抗体包含由下列编码的多肽序列或由其组成：(i)核苷酸序列seqidno：5和7，(ii)核苷酸序列seqidno：5和23，或(iii)核苷酸序列seqidno：27和23。在一个有利的实施方案中，该人源化抗体包含下列或由下列组成：(i)多肽序列seqidno：6和8，(ii)多肽序列seqidno：6和24，或(iii)多肽序列seqidno：28和24。该抗体可包含下列或由下列组成：(i)由与核苷酸序列seqidno：1或seqidno：25具有至少80％、85％、90％、95％或99％一致性的序列编码的重链，和/或(ii)由与核苷酸序列seqidno：3或seqidno：21具有至少80％、85％、90％、95％或99％一致性的序列编码的轻链。该抗体可包含下列或由下列组成：(i)与多肽序列seqidno：2或与多肽序列seqidno：26具有至少80％、85％、90％、95％或99％一致性的重链，和/或(ii)含有与多肽序列seqidno：4或seqidno：22具有至少80％、85％、90％、95％或99％一致性的序列的轻链。例如，该人源化抗体包含由下列编码的序列或由下列编码的序列组成：核苷酸序列seqidno：1和3；核苷酸序列seqidno：1和21；或核苷酸序列seqidno：25和21。例如，该人源化抗体包含下列或由下列组成：多肽序列seqidno：2和4；多肽序列seqidno：2和22；或多肽序列seqidno：26和22。人源化抗体(例如抗体ab1(vh1+vl1)、ab2(vh1+vl2)或ab3(vh2+vl2))可通过在哺乳动物细胞系(例如细胞系hek293，命名为freestyle293-f)中瞬时表达来产生。编码轻链与重链的人源化可变域(例如vl1或vl2；和vh1或vh2)的cdna与编码人恒定区(例如分别为cκ与igg4)的cdna融合。恒定区igg4的序列可以是以kabat命名法命名的具有替代s241p和l248e的变体序列，以便显著降低半分子的生成(参见例如angla等,1993,mol.immunol.,30:105-108)和效应功能(参见例如wo97/09351)。分别编码重链(例如vh1+ch1或vh2+ch2)和轻链(例如vl1+cl1或vl2+cl2)的核酸序列可独立地克隆至两个表达载体中。然后，在共转染此两种表达载体后，人源化抗体可通过在哺乳动物细胞中瞬时转染来产生。然后，抗体优选地通过亲和力层析来纯化，例如在mabselect凝胶(amersham)柱上，该柱优选地配制在缓冲液中，例如pbs缓冲液并视情况进行无菌过滤(0.2μm)。药物组合物依据本发明使用的对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体优选以药物组合物形式提供。如本文所用的术语“药物组合物”是指当适当地施用至受试者时能够引起期望治疗作用的组合物。药物组合物包含如上文所定义对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体和至少一种药学上可接受的载剂。如本文所用的表述“药学上可接受的载剂”或“生理学上可接受的载剂”是指一或多种适用于达到或增进抗体递送的配制剂材料。药物组合物优选地包含至少一种药学上可接受的媒介物供可注射配制剂用。此类媒介物是本领域技术人员熟知的，并且包括无菌、等渗盐水溶液(磷酸二氢钠或磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙或氯化镁，和/或所述盐的混合物)，或无水组合物(尤其是冻干的)，无水组合物视情况地通过添加无菌水或生理血清而允许可注射。例如，药物组合物包含(1)杜贝可磷酸盐缓冲液(ph～7.4)，任选地含有1mg/ml至25mg/ml人血清白蛋白，(2)0.9％w/v的氯化钠(nacl)，和(3)5％(w/v)的右旋糖。其还可包含诸如色胺的抗氧化剂以及诸如吐温20的稳定剂。药物组合物优选地包含有效量的对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体和至少一种药学上可接受的载剂。术语“有效量”和“治疗有效量”用于指包含对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体的药物组合物时，意指足以产生期望治疗结果的数量或剂量。更具体而言，治疗有效量是足以至少部分地预防一种或多种与待治疗病况有关的临床上定义的病理学过程达一段时间的抗体的量。有效量可随着所使用的特定抗体变化，且还取决于多种因素以及与待治疗受试者的病况和病症严重程度。例如，如果抗体是在体内施用，则在这些因素中特别要考虑诸如患者的年龄、体重与健康状态，以及在临床前动物研究中获得的剂量响应曲线和毒性数据。确定指定药物组合物的有效量或治疗有效量在本领域技术人员的能力范围内。药物组合物可适于通过非肠道、鼻内、静脉内、肌肉内、皮下、脑内和/或眼内路径的施用。对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体用于预防阿兹海默症和/或治疗早期症状性阿兹海默症本发明尤其涉及如上文所定义的对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体，其用于预防阿兹海默症，和/或治疗早期症状性阿兹海默症，尤其是在有需要的受试者中。本发明还涉及一种在有需要的受试者中预防阿兹海默症和/或治疗早期症状性阿兹海默症的方法，其中该方法包含向该受试者施用有效量的如上文定义的对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体。词句“预防阿兹海默症”」“治疗早期症状性阿兹海默症”和“对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体”尤其如上文所定义。所述抗体是以如上文定义的药物组合物形式提供。有需要的受试者是如上文段落“待治疗的受试者”中定义的。需要预防阿兹海默症的受试者优选为出于发展非症状性阿兹海默症风险的受试者，例如阿兹海默症前期受试者或具有非症状性阿兹海默症的受试者。需要治疗早期症状性阿兹海默症的受试者优选地具有非症状性痴呆前期。抗体优选地是通过非肠道、鼻内、静脉内、肌肉内、皮下、脑内和/或眼内路径使用或施用。抗体的剂量取决于期望效果、治疗持续时间和所用的施用路径。通常，医生将基于疾病阶段、受试者的年龄和体重，或被考虑的与受试者相关的任何其他因素来决定适当剂量。抗体优选地以每次施用含有5mg至4500mg抗体的量，更优选以每次施用100mg至1200mg的抗体，又更优选以每次施用100mg至450mg的抗体来使用或施用，特别针对成人。进一步依据下面实施例和附图来说明本发明。本文引用的所有参考，包括期刊文章或摘要、公开或未公开的专利申请案、公布的专利或任何其他参考全都以引用的方式并入本文，包括引用的文献中所呈现的全部数据、表格、图式和文本。附图简述图1：人源化抗体ab1(h)及其鼠对应物(m)在小鼠原代神经元培养物中抑制oaβ42-诱发的半胱天冬酶-3/7酶活性增加。纵坐标：半胱天冬酶3/7酶活性(％对照)。横坐标：浓度，单位为μg/ml。点表示通过实验以及通过处理表示为对照组的百分比的数据的平均值。条形对应于中位值。*p<0.05；**p<0.01：相对于oaβ42的双尾dunnett氏检验。图2：人源化抗体ab1(h)及其鼠对应物(m)在小鼠原代神经元培养物中抑制oaβ42-诱发的轴突网络减少。纵坐标：轴突网络(％对照)。横坐标：浓度，单位为μg/ml。点表示通过实验以及通过处理表示为对照组的百分比的数据的平均值。x对应于平均值。*p<0.01；**p<0.001：相对于oaβ42的双尾dunnett氏检验。图3：在经oaβ42处理的小鼠原代神经元培养物中，人源化抗体ab1(h)(150μg/ml)及其鼠对应物(m)(150μg/ml)与其相应的同种型对照higg4(150μg/ml)与migg1(150μg/ml)分别对半胱天冬酶-3/7酶活性的作用的比较。相对于igg4，**p<0.001。相对于igg1，***p<0.001。p：在oaβ42存在或不存在的情况下，在对经秩转换数据进行单向分析之后，对应于就多样性使用bonferroni-holm校正的对比分析的p-值，以便比较7组与igg对应组(在各个浓度下的ab1及其鼠对应物分别相对于在相同浓度下的higg4与migg1)。只呈现出在oaβ42存在下的最高测试浓度结果(150μg/ml的ab1+oaβ42相对于150μg/ml的igg4及其鼠抗体+oaβ42相对于igg1)。点表示通过实验以及通过处理表示为对照组的百分比的数据的平均值。条形对应于中位值。图4：在经oaβ42处理的小鼠原代神经元培养物中，人源化抗体ab1(h)(150μg/ml)及其鼠对应物(m)(150μg/ml)与相应的同种型对照higg4(150μg/ml)和migg1(150μg/ml)分别对轴突网络的作用的比较。相对于igg4，**p<0.001，相对于igg1，***p<0.001。p：在oaβ42存在或不存在的情况下，在对经秩转换数据进行单向分析之后，对应于就多样性使用bonferroni-holm校正的对比分析的p-值，以比较7组与igg(在各个浓度下的ab1及其鼠对应物分别相对于在相同浓度下的higg4与migg1)。只呈现出在oaβ42存在下的最高测试浓度结果(150μg/ml的ab1+oaβ42相对于150μg/ml的igg4150μg/ml及鼠抗体+oaβ42相对于150μg/ml的igg1)。点表示通过实验以及通过处理表示为对照组的百分比的数据的平均值。条形对应于平均值。图5：聚集型aβ-42(oab42；5μm)制品使用抗-aβ4g8mab的western印迹。mw：分子量标记。序列简述下表2归纳了对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的人源化抗体ab1、ab2和ab3的序列。“vh”、“vl”、“ch”或“cl”后的数字(1或2)在本文中意指序列变体，而不是例如三个恒定区ch1、ch2和ch3的常规命名。表2实施例实施例1：对aβ肽的初原纤维形式具有特异性的抗体在体外的神经元细胞保护作用材料与方法(i)动物16天大小的小鼠胚胎(of1,charlesriverlaboratories,france)的大脑皮质用于制备原代神经元培养物。(ii)化合物测试化合物：由sanofir&d,vitry-sur-seine,france的globalbiotherapeuticsdepartment合成人源化抗体ab1(50mg/ml)及其鼠类对应物(30mg/ml)。对照同种型：由sanofir&d,vitry-sur-seine,france的globalbiotherapeuticsdepartment合成小鼠igg1(抗dm4_hyb_caa162_igg1)(7.28mg/ml)和人igg4(抗dm4_hyb_caa162_igg4)(4.97mg/ml)。在实验当天，通过将各原液在杜贝可氏改良伊格氏培养基(dmem)中稀释至1.5mg/ml来将所有抗体和对照同种型的浓缩工作溶液制备为10x溶液。更低的测试浓度通过将浓缩工作溶液稀释于dmem中来进行制备。测试的抗体在培养孔中的最终浓度为150、50或15μg/ml，即分别对应于1、0.33或0.1μm。β类淀粉(1-42)：人(aβ42)(参考品641-15(californiapeptideresearchinc,usa))在六氟异丙醇(sigmah8508(hfip))中制备为1mm的原液。所得溶液等分于微量离心管(vwr20170-293)中，然后使hfip在通风柜中蒸发，且在真空下于speedvac中干燥所得的澄清肽膜并真空干燥储存于-20℃。在实验当天，从经hfip处理的冷冻等分式样来制备浓缩工作溶液，通过移液器混合以5mm再悬浮于二甲亚砜(dmso)(sigmad2650，批次rnbb9702)中，然后在超音波浴中温育10分钟(branson)。通过在冰冷细胞培养基(无酚红ham’sf12,panbiotechp04-14559)中将5mmaβ42工作溶液稀释至100μm，涡旋30秒钟，并且在室温下温育1小时来获得aβ42寡聚体(oaβ42)。已经报道此类型的制品含有aβ42聚集物，其主要含有高分子量aβ42寡聚体。将aβ42的此制品以5μm的最终浓度添加至培养基。(iii)原代神经元培养物原代神经元培养物是通过解剖然后在0.25％胰蛋白酶大脑皮质中解离而由16天大小的小鼠(of1)胚肽的脑部制备的。在室温下以120g离心之后，以4x105个细胞/ml的细胞密度重悬于10ml培养基中的所得细胞沉淀被铺于96孔微量培养盘(greiner,655946,germany)的经聚-d-赖氨酸包被的孔中，该孔中有补充n2和b27的100μl培养基dmem。在体外6天之后，去除培养基并由不含b27的新培养基取代，且神经元预先经抗aβ抗体处理1小时。然后，神经元与oaβ42(5μm)一起温育48小时。应用无药物培养基但补充有对应dmso浓度(即0.1％，与oaβ42处理相同)的对照，平行应用测试物质。使用以下两个读数来评估测试化合物的效果：半胱天冬酶-3/7酶活性和轴突网络。(iv)量化半胱天冬酶-3/7酶活性在实验处理之后，从孔中去除50μl培养基，并且将50μl半胱天冬酶-glo3/7测定试剂盒溶液(promegacorporationusa,g7790)混合至各孔，然后在室温下温育4小时。温育之后，使用spectramaxgemini酶标仪(xs,s/nxso2810,moleculardevices,softmaxpro3.1软件)使用499nm作为激发波长和521nm作为发射波长来量化各个样品的荧光。荧光强度测量值与半胱天冬酶-3/7酶活性成比例。(v)量化轴突网络固定细胞在实验处理之后，将100μl的4％甲醛溶液(merck,100496)添加至各孔，然后在室温下温育10分钟。之后去除培养基并且替换成100μl的4％甲醛溶液并容许在室温下再温育10分钟。然后去除培养基并且用100μl杜贝可氏磷酸盐缓冲盐水(dpbs)(gibco,14190)洗涤孔四次。在染色之前，将微量培养盘于dpbs中储存于4℃。免疫细胞化学将微量培养盘的孔中的经固定细胞应用于免疫细胞荧光程序。简言之，在室温于dpbs/10％胎牛血清(fbs)-0.2％tritonx-100中使细胞膜通透30分钟。经通透的细胞与识别神经元蛋白标记map2(微管相关蛋白2)的第一抗体(在此为抗-map2兔多克隆抗体)(milliporeab5622，批次2049208，1/1000稀释度)在4℃一起温育过夜，然后在pbs+0.1％吐温中的洗涤步骤后与第二抗体在室温一起温育1小时，第二抗体对应于alexafluor594偶合的-抗兔抗体(molecularprobes，a11012，批次47098a，1/1000稀释度)。在额外的洗涤步骤之后，接着将经固定的细胞与hoechst33342(molecularprobesh3570)温育15分钟以便将细胞核染色(0.2μg/ml)，且最后在通过成像分析之前用dpbs冲洗。神经元相关延伸(亦即轴突)的测量是基于map-2阳性免疫荧光阳性信号。量化成像分析使用高内容成像分析对96孔微量培养盘中的经map2-免疫染色和经hoechst染色的细胞进行轴突网络分析。在两种颜色激发波长处，在配备有20x数字大光圈放大和16位scmos相机的采用固态光激发的incellanalyzer2200成像系统(gehealthcare,cardiff,uk)中进行每孔5个视野的自动荧光图像采集。在基于计算机的工作站上使用incelldevelopertoolbox软件(gehealthcare)进行量化成像分析步骤。在将细胞核(基于hoechst染色)和轴突(基于检测到的map2免疫反应性)分割后，在界定每个细胞的“目标蒙像(objectmask)”后，然后对所捕获的每个视野进行后加工并且在microsoftexcel电子表格中通过incelldevelopertoolbox软件自动编辑后，测量轴突面积。轴突面积的测量值(表示为μm2)用作轴突网络指标。用于此分析的数据通常来自五个独立的实验。(vi)统计分析就每个参数来说，数据表示为对照组的百分率。然后，按照实验计算出各处理组的平均值用于统计分析。使用sas9.2软件进行统计分析。少于5％(p<0.05)的可能性被认为是显著的。结果在诱发神经毒性的实验中使用的聚集型aβ42制品包含数种sds-稳定物质，其包括小的和大的寡聚体(参见图1)。在小鼠原代神经元培养物中，显示oaβ42通过半胱天冬酶3/7酶活性的显著增加(+648.6％)(p＝0.0105)而诱发毒性作用。在用50和150μg/ml的人源化抗体ab1共处理之后观察到显著抑制了oaβ42-诱发的毒性，50和150μg/ml对应于97％和98％的保护作用(分别为p＝0.0062和p<0.0001相对于oaβ42)(参见图1)。在用50和150μg/ml鼠抗体共处理之后观察到显著抑制了oaβ42-诱发的毒性，50和150μg/ml对应于96％和98％的保护作用(分别为p＝0.0352和p<0.0001相对于oaβ42)(参见图1)。在oaβ42不存在的情况下，对照以及50和150μg/ml人源化抗体ab1之间未观察到显著差异(分别为p＝0.5309和p＝0.4207)。单独以15和50μg/ml的浓度测试时未观察到对照和鼠抗体之间的显著差异(分别为p＝0.9279和p＝0.1811)。相对于对照，使用150μg/ml的最高浓度鼠抗体观察到半胱天冬酶-3/7酶活性在统计学上有显著增加(+15％；p＝0.0352)。还通过在小鼠原代神经元培养物中的轴突网络显著减少来说明oaβ42在小鼠原代神经元培养物中诱发毒性作用(-47％相对于对照；p＝0.0009)。在用oaβ42以及50与150μg/ml人源化抗体共处理之后，观察到显著抑制oaβ42-诱发的轴突网络减少，50和150μg/ml分别对应于84％与111％的神经保护作用(两个浓度p<0.0001相对于oaβ42)(参见图2)。在用oaβ42和50与150μg/ml鼠抗体共处理之后，观察到明显抑制oaβ42-诱发的轴突网络减少(分别为p＝0.0023和p<0.0001，相对于oaβ42)(参见图2)。在oaβ42不存在的情况下，在轴突网络水平未观察到处理作用(p＝0.3580)。在oaβ42的存在下，在150μg/ml下测试的ab1和同种型对照higg4之间观察到所分析的两种读值的显著差异，该读值即半胱天冬酶3/7酶活性与轴突网络(分别为p＝0.0007和p<0.0001)(参见图3和图4)。在oaβ42存在的情况下，在150μg/ml下的鼠抗体与同型对照migg1之间也观察到所分析的两种读值之间的显著差异，该读值即半胱天冬酶3/7酶活性与轴突网络(对于这两种参数，p<0.0001)，，在oaβ42存在的情况下，在50μg/ml下对于轴突网络也观察到显著差异(p＝0.0026)(参见图3和图4)。结论在测定条件中，oaβ42制品对于小鼠原代神经元培养物具有神经毒性，如通过半胱天冬酶3/7酶活性显著且明显增加还有同时通过轴突网络明显减少所观察到的。在测定条件中，oaβ42与人源化抗体ab1或其鼠对应物的共处理显著抑制oaβ42诱发的对小鼠原代神经元培养物的神经毒性作用，如通过浓度依赖性抑制oaβ42-诱发的半胱天冬酶-3/7酶活性增加还有oaβ42-诱发的轴突网络减少所证明的。定向针对aβ肽的初原纤维形式的抗体(诸如ab1)出乎意料地具有在体外针对oaβ42-诱发的神经毒性的神经保护活性，并因而可在疾病最早期作为治疗剂用于类淀粉蛋白诱发的病状并用于预防疾病。实施例2：抗体ab1相对于其他抗体的神经元细胞保护作用材料与方法皮质神经元的原代培养物是从16天大小的小鼠胚肽(of1)解剖下来并且铺于经聚-d-赖氨酸包被的96孔培养盘(greiner)中，该孔中有补充n2和b27(40,000个细胞/孔/100μl)的杜贝可氏改良伊格氏培养基(dmem)。在体外6天之后，去除所有培养基并且替换成不含b27的新培养基，而神经元与抗aβ抗体一起预温育1小时。然后神经元在48小时期间与oaβ42制品(如实施例1中所获得的)温育。对照应用无药物但补充有相应dmso浓度(与oaβ42相同)的培养基，同时应用测试物质。测试化合物为ab1、ab4(由序列seqidno：33的两条重链和序列seqidno：34的两条轻链组成)，和ab5(由序列seqidno：35的两条重链和序列seqidno：36的两条轻链组成)。对照抗体为higg4和higg1。抗体的浓度为50μg/ml或150μg/ml。如在实施例1中评定半胱天冬酶3/7活性和轴突网络抑制。结果关于其他两个测试抗体，ab4特异地结合aβ原纤维上的构像性表位，且ab5结合aβ小的与大的β类淀粉蛋白装配体。首先核实，就两种参数(半胱天冬酶3/7和轴突网络)来说，在没有oaβ42的对照和oaβ42组之间观察到有显著差异，而在oaβ42不存在的情况下未观察到测试抗体的显著处理作用。如先前在实施例1中所示，相较于oaβ42，抗体ab1+oaβ42在测试浓度下观察到两种参数半胱天冬酶3/7和轴突网络的显著差异。然而，相较于oaβ42，则只有ab4在50和150μg/ml的浓度下，以及ab5在50和150的浓度下观察到轴突网络的显著差异。序列表<110>赛诺菲<120>对β-类淀粉肽的初原纤维形式具有特异性的抗体的神经元细胞保护作用<130>bet18p0090<150>ep17305110.3<151>2017-01-31<160>36<170>patentinversion3.5<210>1<211>1326<212>dna<213>人工序列<220><223>vh1+ch1<220><221>cds<222>(1)..(1326)<400>1gaggtccagctgcagcagtctgggcctgaggtggtgaagcctggggtc48gluvalglnleuglnglnserglyprogluvalvallysproglyval151015tcagtgaagatttcctgcaagggttccggctacacattcactgattat96servallysilesercyslysglyserglytyrthrphethrasptyr202530gctatgcactgggtgaagcagagtcctggcaagagtctggagtggatt144alamethistrpvallysglnserproglylysserleuglutrpile354045ggagttattagtactaagtatggtaagacaaactacaaccccagcttt192glyvalileserthrlystyrglylysthrasntyrasnproserphe505560cagggccaggccacaatgactgttgacaaatcctccagcacagcctat240glnglyglnalathrmetthrvalasplysserserserthralatyr65707580atggagcttgccagcttgaaggcctccgattctgccatctattactgt288metgluleualaserleulysalaseraspseralailetyrtyrcys859095gcaagaggggacgatggttattcctggggtcaaggaacctcagtcacc336alaargglyaspaspglytyrsertrpglyglnglythrservalthr100105110gtctccagcgcttctaccaagggcccttccgtgttccctctggcccct384valserseralaserthrlysglyproservalpheproleualapro115120125tgctcccggtccacctccgagtccaccgccgctctgggctgcctggtg432cysserargserthrsergluserthralaalaleuglycysleuval130135140aaggactacttccctgagcctgtgaccgtgtcctggaactctggcgcc480lysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyala145150155160ctgacctccggcgtgcacaccttccctgccgtgctgcagtcctccggc528leuthrserglyvalhisthrpheproalavalleuglnsersergly165170175ctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttcctcctccctgggc576leutyrserleuserservalvalthrvalproserserserleugly180185190accaagacctacacctgtaacgtggaccacaagccttccaacaccaag624thrlysthrtyrthrcysasnvalasphislysproserasnthrlys195200205gtggacaagcgggtggagtccaagtacggccctccttgccctccctgc672valasplysargvalgluserlystyrglyproprocysproprocys210215220cctgcccctgagttcgagggcggacctagcgtgttcctgttccctcct720proalaprogluphegluglyglyproservalpheleuphepropro225230235240aagcctaaggacaccctgatgatctcccggacccctgaggtgacctgt768lysprolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcys245250255gtggtggtggacgtgtcccaggaggaccctgaggtccagttcaactgg816valvalvalaspvalserglngluaspprogluvalglnpheasntrp260265270tacgtggacggcgtggaggtgcacaacgccaagaccaagcctcgggag864tyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproargglu275280285gagcagttcaattccacctaccgggtggtgtctgtgctgaccgtgctg912gluglnpheasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleu290295300caccaggactggctgaacggcaaagaatacaagtgtaaggtctccaac960hisglnasptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasn305310315320aagggcctgccctcctccatcgagaaaaccatctccaaggccaagggc1008lysglyleuproserserileglulysthrileserlysalalysgly325330335cagcctagggagcctcaggtgtacaccctgcctcctagccaggaagag1056glnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserglngluglu340345350atgaccaagaaccaggtgtccctgacctgtctggtgaagggcttctac1104metthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyr355360365ccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcctgagaac1152proseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasn370375380aactacaagaccacccctcctgtgctggactccgacggctccttcttc1200asntyrlysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphephe385390395400ctgtactccaggctgaccgtggacaagtcccggtggcaggagggcaac1248leutyrserargleuthrvalasplysserargtrpglngluglyasn405410415gtcttttcctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacc1296valphesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthr420425430cagaagtccctgtccctgtctctgggctga1326glnlysserleuserleuserleugly435440<210>2<211>441<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>2gluvalglnleuglnglnserglyprogluvalvallysproglyval151015servallysilesercyslysglyserglytyrthrphethrasptyr202530alamethistrpvallysglnserproglylysserleuglutrpile354045glyvalileserthrlystyrglylysthrasntyrasnproserphe505560glnglyglnalathrmetthrvalasplysserserserthralatyr65707580metgluleualaserleulysalaseraspseralailetyrtyrcys859095alaargglyaspaspglytyrsertrpglyglnglythrservalthr100105110valserseralaserthrlysglyproservalpheproleualapro115120125cysserargserthrsergluserthralaalaleuglycysleuval130135140lysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyala145150155160leuthrserglyvalhisthrpheproalavalleuglnsersergly165170175leutyrserleuserservalvalthrvalproserserserleugly180185190thrlysthrtyrthrcysasnvalasphislysproserasnthrlys195200205valasplysargvalgluserlystyrglyproprocysproprocys210215220proalaprogluphegluglyglyproservalpheleuphepropro225230235240lysprolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcys245250255valvalvalaspvalserglngluaspprogluvalglnpheasntrp260265270tyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproargglu275280285gluglnpheasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleu290295300hisglnasptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasn305310315320lysglyleuproserserileglulysthrileserlysalalysgly325330335glnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserglngluglu340345350metthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyr355360365proseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasn370375380asntyrlysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphephe385390395400leutyrserargleuthrvalasplysserargtrpglngluglyasn405410415valphesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthr420425430glnlysserleuserleuserleugly435440<210>3<211>660<212>dna<213>人工序列<220><223>vl1+cl1<220><221>cds<222>(1)..(660)<400>3gagatcgtgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttgga48gluilevalmetthrglnthrproleuserleuprovalserleugly151015gatagagcctccatctcttgcagatctggtcagagccttgtgcacagt96aspargalaserilesercysargserglyglnserleuvalhisser202530aatggaaacacctatctgcattggtacctgcagaagccaggccagtct144asnglyasnthrtyrleuhistrptyrleuglnlysproglyglnser354045ccaaagctcctgatctatacagtttccaaccgattttctggggtcccg192prolysleuleuiletyrthrvalserasnargpheserglyvalpro505560gacaggttcagtggcagtggatcagggtcagatttcacactcaccatc240aspargpheserglyserglyserglyseraspphethrleuthrile65707580agcagagtggaggctgaggatctgggagtttatttctgctctcaaaat288serargvalglualagluaspleuglyvaltyrphecysserglnasn859095acatttgttccttggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa336thrphevalprotrpthrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105110cgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgag384argthrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglu115120125cagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttc432glnleulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphe130135140tatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaa480tyrproargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleugln145150155160tcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagc528serglyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspser165170175acctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgag576thrtyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglu180185190aaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcg624lyshislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserser195200205cccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttga660provalthrlysserpheasnargglyglucys210215<210>4<211>219<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>4gluilevalmetthrglnthrproleuserleuprovalserleugly151015aspargalaserilesercysargserglyglnserleuvalhisser202530asnglyasnthrtyrleuhistrptyrleuglnlysproglyglnser354045prolysleuleuiletyrthrvalserasnargpheserglyvalpro505560aspargpheserglyserglyserglyseraspphethrleuthrile65707580serargvalglualagluaspleuglyvaltyrphecysserglnasn859095thrphevalprotrpthrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105110argthrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglu115120125glnleulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphe130135140tyrproargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleugln145150155160serglyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspser165170175thrtyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglu180185190lyshislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserser195200205provalthrlysserpheasnargglyglucys210215<210>5<211>345<212>dna<213>人工序列<220><223>vh1<220><221>cds<222>(1)..(345)<400>5gaggtccagctgcagcagtctgggcctgaggtggtgaagcctggggtc48gluvalglnleuglnglnserglyprogluvalvallysproglyval151015tcagtgaagatttcctgcaagggttccggctacacattcactgattat96servallysilesercyslysglyserglytyrthrphethrasptyr202530gctatgcactgggtgaagcagagtcctggcaagagtctggagtggatt144alamethistrpvallysglnserproglylysserleuglutrpile354045ggagttattagtactaagtatggtaagacaaactacaaccccagcttt192glyvalileserthrlystyrglylysthrasntyrasnproserphe505560cagggccaggccacaatgactgttgacaaatcctccagcacagcctat240glnglyglnalathrmetthrvalasplysserserserthralatyr65707580atggagcttgccagcttgaaggcctccgattctgccatctattactgt288metgluleualaserleulysalaseraspseralailetyrtyrcys859095gcaagaggggacgatggttattcctggggtcaaggaacctcagtcacc336alaargglyaspaspglytyrsertrpglyglnglythrservalthr100105110gtctccagc345valserser115<210>6<211>115<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>6gluvalglnleuglnglnserglyprogluvalvallysproglyval151015servallysilesercyslysglyserglytyrthrphethrasptyr202530alamethistrpvallysglnserproglylysserleuglutrpile354045glyvalileserthrlystyrglylysthrasntyrasnproserphe505560glnglyglnalathrmetthrvalasplysserserserthralatyr65707580metgluleualaserleulysalaseraspseralailetyrtyrcys859095alaargglyaspaspglytyrsertrpglyglnglythrservalthr100105110valserser115<210>7<211>339<212>dna<213>人工序列<220><223>vl1<220><221>cds<222>(1)..(339)<400>7gagatcgtgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttgga48gluilevalmetthrglnthrproleuserleuprovalserleugly151015gatagagcctccatctcttgcagatctggtcagagccttgtgcacagt96aspargalaserilesercysargserglyglnserleuvalhisser202530aatggaaacacctatctgcattggtacctgcagaagccaggccagtct144asnglyasnthrtyrleuhistrptyrleuglnlysproglyglnser354045ccaaagctcctgatctatacagtttccaaccgattttctggggtcccg192prolysleuleuiletyrthrvalserasnargpheserglyvalpro505560gacaggttcagtggcagtggatcagggtcagatttcacactcaccatc240aspargpheserglyserglyserglyseraspphethrleuthrile65707580agcagagtggaggctgaggatctgggagtttatttctgctctcaaaat288serargvalglualagluaspleuglyvaltyrphecysserglnasn859095acatttgttccttggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa336thrphevalprotrpthrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105110cgt339arg<210>8<211>113<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>8gluilevalmetthrglnthrproleuserleuprovalserleugly151015aspargalaserilesercysargserglyglnserleuvalhisser202530asnglyasnthrtyrleuhistrptyrleuglnlysproglyglnser354045prolysleuleuiletyrthrvalserasnargpheserglyvalpro505560aspargpheserglyserglyserglyseraspphethrleuthrile65707580serargvalglualagluaspleuglyvaltyrphecysserglnasn859095thrphevalprotrpthrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105110arg<210>9<211>33<212>dna<213>人工序列<220><223>cdr1vh1<220><221>cds<222>(1)..(33)<400>9tccggctacacattcactgattatgctatgcac33serglytyrthrphethrasptyralamethis1510<210>10<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>10serglytyrthrphethrasptyralamethis1510<210>11<211>30<212>dna<213>人工序列<220><223>cdr2vh1<220><221>cds<222>(1)..(30)<400>11gttattagtactaagtatggtaagacaaac30valileserthrlystyrglylysthrasn1510<210>12<211>10<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>12valileserthrlystyrglylysthrasn1510<210>13<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>cdr3vh1<220><221>cds<222>(1)..(18)<400>13ggggacgatggttattcc18glyaspaspglytyrser15<210>14<211>6<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>14glyaspaspglytyrser15<210>15<211>48<212>dna<213>人工序列<220><223>cdr1vl1<220><221>cds<222>(1)..(48)<400>15agatctggtcagagccttgtgcacagtaatggaaacacctatctgcat48argserglyglnserleuvalhisserasnglyasnthrtyrleuhis151015<210>16<211>16<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>16argserglyglnserleuvalhisserasnglyasnthrtyrleuhis151015<210>17<211>24<212>dna<213>人工序列<220><223>cdr2vl1<220><221>cds<222>(1)..(24)<400>17acagtttccaaccgattttctggg24thrvalserasnargphesergly15<210>18<211>8<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>18thrvalserasnargphesergly15<210>19<211>27<212>dna<213>人工序列<220><223>cdr3vl1<220><221>cds<222>(1)..(27)<400>19tctcaaaatacatttgttccttggacg27serglnasnthrphevalprotrpthr15<210>20<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>20serglnasnthrphevalprotrpthr15<210>21<211>660<212>dna<213>人工序列<220><223>vl2+cl2<220><221>cds<222>(1)..(660)<400>21gagatcgtgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttgga48gluilevalmetthrglnthrproleuserleuprovalserleugly151015gatagagcctccatctcttgcagatctggtcagagccttgtgcacagt96aspargalaserilesercysargserglyglnserleuvalhisser202530aataccaacacctatctgcattggtacctgcagaagccaggccagtct144asnthrasnthrtyrleuhistrptyrleuglnlysproglyglnser354045ccaaagctcctgatctatacagtttccaaccgattttctggggtcccg192prolysleuleuiletyrthrvalserasnargpheserglyvalpro505560gacaggttcagtggcagtggatcagggtcagatttcacactcaccatc240aspargpheserglyserglyserglyseraspphethrleuthrile65707580agcagagtggaggctgaggatctgggagtttatttctgctctcaaaat288serargvalglualagluaspleuglyvaltyrphecysserglnasn859095acatttgttccttggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa336thrphevalprotrpthrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105110cgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgag384argthrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglu115120125cagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttc432glnleulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphe130135140tatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaa480tyrproargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleugln145150155160tcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagc528serglyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspser165170175acctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgag576thrtyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglu180185190aaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcg624lyshislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserser195200205cccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgttga660provalthrlysserpheasnargglyglucys210215<210>22<211>219<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>22gluilevalmetthrglnthrproleuserleuprovalserleugly151015aspargalaserilesercysargserglyglnserleuvalhisser202530asnthrasnthrtyrleuhistrptyrleuglnlysproglyglnser354045prolysleuleuiletyrthrvalserasnargpheserglyvalpro505560aspargpheserglyserglyserglyseraspphethrleuthrile65707580serargvalglualagluaspleuglyvaltyrphecysserglnasn859095thrphevalprotrpthrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105110argthrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglu115120125glnleulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphe130135140tyrproargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleugln145150155160serglyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspser165170175thrtyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglu180185190lyshislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserser195200205provalthrlysserpheasnargglyglucys210215<210>23<211>339<212>dna<213>人工序列<220><223>vl2<220><221>cds<222>(1)..(339)<400>23gagatcgtgatgacccaaactccactctccctgcctgtcagtcttgga48gluilevalmetthrglnthrproleuserleuprovalserleugly151015gatagagcctccatctcttgcagatctggtcagagccttgtgcacagt96aspargalaserilesercysargserglyglnserleuvalhisser202530aataccaacacctatctgcattggtacctgcagaagccaggccagtct144asnthrasnthrtyrleuhistrptyrleuglnlysproglyglnser354045ccaaagctcctgatctatacagtttccaaccgattttctggggtcccg192prolysleuleuiletyrthrvalserasnargpheserglyvalpro505560gacaggttcagtggcagtggatcagggtcagatttcacactcaccatc240aspargpheserglyserglyserglyseraspphethrleuthrile65707580agcagagtggaggctgaggatctgggagtttatttctgctctcaaaat288serargvalglualagluaspleuglyvaltyrphecysserglnasn859095acatttgttccttggacgttcggtggaggcaccaagctggaaatcaaa336thrphevalprotrpthrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105110cgt339arg<210>24<211>113<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>24gluilevalmetthrglnthrproleuserleuprovalserleugly151015aspargalaserilesercysargserglyglnserleuvalhisser202530asnthrasnthrtyrleuhistrptyrleuglnlysproglyglnser354045prolysleuleuiletyrthrvalserasnargpheserglyvalpro505560aspargpheserglyserglyserglyseraspphethrleuthrile65707580serargvalglualagluaspleuglyvaltyrphecysserglnasn859095thrphevalprotrpthrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105110arg<210>25<211>1326<212>dna<213>人工序列<220><223>vh2+ch2<220><221>cds<222>(1)..(1326)<400>25gaggtccagctgcagcagtctgggcctgaggtggtgaagcctggggtc48gluvalglnleuglnglnserglyprogluvalvallysproglyval151015tcagtgaagatttcctgcaagggttccggctacacattcactgattat96servallysilesercyslysglyserglytyrthrphethrasptyr202530gctatgcactgggtgaagcagagtcctggcaagagtctggagtggatt144alamethistrpvallysglnserproglylysserleuglutrpile354045ggagttattagtactaagtatggtaagacaaactacaaccccagcttt192glyvalileserthrlystyrglylysthrasntyrasnproserphe505560cagggccaggccacaatgactgttgacaaatcctccagcacagcctat240glnglyglnalathrmetthrvalasplysserserserthralatyr65707580atggagcttgccagcttgaaggcctccgattctgccatctattactgt288metgluleualaserleulysalaseraspseralailetyrtyrcys859095gcaagaggggacgagggttattcctggggtcaaggaacctcagtcacc336alaargglyaspgluglytyrsertrpglyglnglythrservalthr100105110gtctccagcgcttctaccaagggcccttccgtgttccctctggcccct384valserseralaserthrlysglyproservalpheproleualapro115120125tgctcccggtccacctccgagtccaccgccgctctgggctgcctggtg432cysserargserthrsergluserthralaalaleuglycysleuval130135140aaggactacttccctgagcctgtgaccgtgtcctggaactctggcgcc480lysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyala145150155160ctgacctccggcgtgcacaccttccctgccgtgctgcagtcctccggc528leuthrserglyvalhisthrpheproalavalleuglnsersergly165170175ctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttcctcctccctgggc576leutyrserleuserservalvalthrvalproserserserleugly180185190accaagacctacacctgtaacgtggaccacaagccttccaacaccaag624thrlysthrtyrthrcysasnvalasphislysproserasnthrlys195200205gtggacaagcgggtggagtccaagtacggccctccttgccctccctgc672valasplysargvalgluserlystyrglyproprocysproprocys210215220cctgcccctgagttcgagggcggacctagcgtgttcctgttccctcct720proalaprogluphegluglyglyproservalpheleuphepropro225230235240aagcctaaggacaccctgatgatctcccggacccctgaggtgacctgt768lysprolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcys245250255gtggtggtggacgtgtcccaggaggaccctgaggtccagttcaactgg816valvalvalaspvalserglngluaspprogluvalglnpheasntrp260265270tacgtggacggcgtggaggtgcacaacgccaagaccaagcctcgggag864tyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproargglu275280285gagcagttcaattccacctaccgggtggtgtctgtgctgaccgtgctg912gluglnpheasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleu290295300caccaggactggctgaacggcaaagaatacaagtgtaaggtctccaac960hisglnasptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasn305310315320aagggcctgccctcctccatcgagaaaaccatctccaaggccaagggc1008lysglyleuproserserileglulysthrileserlysalalysgly325330335cagcctagggagcctcaggtgtacaccctgcctcctagccaggaagag1056glnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserglngluglu340345350atgaccaagaaccaggtgtccctgacctgtctggtgaagggcttctac1104metthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyr355360365ccttccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggccagcctgagaac1152proseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasn370375380aactacaagaccacccctcctgtgctggactccgacggctccttcttc1200asntyrlysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphephe385390395400ctgtactccaggctgaccgtggacaagtcccggtggcaggagggcaac1248leutyrserargleuthrvalasplysserargtrpglngluglyasn405410415gtcttttcctgctccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacc1296valphesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthr420425430cagaagtccctgtccctgtctctgggctga1326glnlysserleuserleuserleugly435440<210>26<211>441<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>26gluvalglnleuglnglnserglyprogluvalvallysproglyval151015servallysilesercyslysglyserglytyrthrphethrasptyr202530alamethistrpvallysglnserproglylysserleuglutrpile354045glyvalileserthrlystyrglylysthrasntyrasnproserphe505560glnglyglnalathrmetthrvalasplysserserserthralatyr65707580metgluleualaserleulysalaseraspseralailetyrtyrcys859095alaargglyaspgluglytyrsertrpglyglnglythrservalthr100105110valserseralaserthrlysglyproservalpheproleualapro115120125cysserargserthrsergluserthralaalaleuglycysleuval130135140lysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyala145150155160leuthrserglyvalhisthrpheproalavalleuglnsersergly165170175leutyrserleuserservalvalthrvalproserserserleugly180185190thrlysthrtyrthrcysasnvalasphislysproserasnthrlys195200205valasplysargvalgluserlystyrglyproprocysproprocys210215220proalaprogluphegluglyglyproservalpheleuphepropro225230235240lysprolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcys245250255valvalvalaspvalserglngluaspprogluvalglnpheasntrp260265270tyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproargglu275280285gluglnpheasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleu290295300hisglnasptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasn305310315320lysglyleuproserserileglulysthrileserlysalalysgly325330335glnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserglngluglu340345350metthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyr355360365proseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasn370375380asntyrlysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphephe385390395400leutyrserargleuthrvalasplysserargtrpglngluglyasn405410415valphesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthr420425430glnlysserleuserleuserleugly435440<210>27<211>345<212>dna<213>人工序列<220><223>vh2<220><221>cds<222>(1)..(345)<400>27gaggtccagctgcagcagtctgggcctgaggtggtgaagcctggggtc48gluvalglnleuglnglnserglyprogluvalvallysproglyval151015tcagtgaagatttcctgcaagggttccggctacacattcactgattat96servallysilesercyslysglyserglytyrthrphethrasptyr202530gctatgcactgggtgaagcagagtcctggcaagagtctggagtggatt144alamethistrpvallysglnserproglylysserleuglutrpile354045ggagttattagtactaagtatggtaagacaaactacaaccccagcttt192glyvalileserthrlystyrglylysthrasntyrasnproserphe505560cagggccaggccacaatgactgttgacaaatcctccagcacagcctat240glnglyglnalathrmetthrvalasplysserserserthralatyr65707580atggagcttgccagcttgaaggcctccgattctgccatctattactgt288metgluleualaserleulysalaseraspseralailetyrtyrcys859095gcaagaggggacgagggttattcctggggtcaaggaacctcagtcacc336alaargglyaspgluglytyrsertrpglyglnglythrservalthr100105110gtctccagc345valserser115<210>28<211>115<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>28gluvalglnleuglnglnserglyprogluvalvallysproglyval151015servallysilesercyslysglyserglytyrthrphethrasptyr202530alamethistrpvallysglnserproglylysserleuglutrpile354045glyvalileserthrlystyrglylysthrasntyrasnproserphe505560glnglyglnalathrmetthrvalasplysserserserthralatyr65707580metgluleualaserleulysalaseraspseralailetyrtyrcys859095alaargglyaspgluglytyrsertrpglyglnglythrservalthr100105110valserser115<210>29<211>18<212>dna<213>人工序列<220><223>cdr3vh2<220><221>cds<222>(1)..(18)<400>29ggggacgagggttattcc18glyaspgluglytyrser15<210>30<211>6<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>30glyaspgluglytyrser15<210>31<211>48<212>dna<213>人工序列<220><223>cdr1vl2<220><221>cds<222>(1)..(48)<400>31agatctggtcagagccttgtgcacagtaataccaacacctatctgcat48argserglyglnserleuvalhisserasnthrasnthrtyrleuhis151015<210>32<211>16<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建体<400>32argserglyglnserleuvalhisserasnthrasnthrtyrleuhis151015<210>33<211>456<212>prt<213>人工序列<220><223>ab4heavychain<400>33glnvalgluleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serleuargleusercysalaalaserglyphethrphesersertyr202530alametsertrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045seralaileasnalaserglythrargthrtyrtyralaaspserval505560lysglyargphethrileserargaspasnserlysasnthrleutyr65707580leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys859095alaargglylysglyasnthrhislysprotyrglytyrvalargtyr100105110pheaspvaltrpglyglnglythrleuvalthrvalserseralaser115120125thrlysglyproservalpheproleualaproserserlysserthr130135140serglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyrphepro145150155160gluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyval165170175histhrpheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuser180185190servalvalthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrile195200205cysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplyslysval210215220gluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproala225230235240progluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolyspro245250255lysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalval260265270valaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrval275280285aspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglugln290295300tyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisgln305310315320asptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysala325330335leuproalaproileglulysthrileserlysalalysglyglnpro340345350arggluproglnvaltyrthrleuproproserargaspgluleuthr355360365lysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproser370375380aspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyr385390395400lysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyr405410415serlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphe420425430sercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlys435440445serleuserleuserproglylys450455<210>34<211>215<212>prt<213>人工序列<220><223>ab4轻链<400>34aspilevalleuthrglnserproalathrleuserleuserprogly151015gluargalathrleusercysargalaserglnservalserserser202530tyrleualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleu354045iletyrglyalaserserargalathrglyvalproalaargpheser505560glyserglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglu65707580progluaspphealathrtyrtyrcysleuglniletyrasnmetpro859095ilethrpheglyglnglythrlysvalgluilelysargthrvalala100105110alaproservalpheilepheproproseraspgluglnleulysser115120125glythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproargglu130135140alalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnser145150155160glngluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleu165170175serserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysval180185190tyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlys195200205serpheasnargglyglucys210215<210>35<211>454<212>prt<213>人工序列<220><223>ab5重链<400>35gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serleuargleusercysseralaserglyphethrpheserserphe202530glymethistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045alatyrileserserglyserserthriletyrtyrglyaspthrval505560lysglyargphethrileserargaspasnalalysasnserleuphe65707580leuglnmetserserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys859095alaarggluglyglytyrtyrtyrglyargsertyrtyrthrmetasp100105110tyrtrpglyglnglythrthrvalthrvalserseralaserthrlys115120125glyproservalpheproleualaproserserlysserthrsergly130135140glythralaalaleuglycysleuvallysasptyrpheproglupro145150155160valthrvalsertrpasnserglyalaleuthrserglyvalhisthr165170175pheproalavalleuglnserserglyleutyrserleuserserval180185190valthrvalproserserserleuglythrglnthrtyrilecysasn195200205valasnhislysproserasnthrlysvalasplysargvalglupro210215220lyssercysasplysthrhisthrcysproprocysproalaproglu225230235240leuleuglyglyproservalpheleupheproprolysprolysasp245250255thrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalasp260265270valserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyrvalaspgly275280285valgluvalhisasnalalysthrlysproargglugluglntyrasn290295300serthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrp305310315320leuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysalaleupro325330335alaproileglulysthrileserlysalalysglyglnproargglu340345350proglnvaltyrthrleuproproserarggluglumetthrlysasn355360365glnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspile370375380alavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthr385390395400thrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyrserlys405410415leuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnvalphesercys420425430servalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleu435440445serleuserproglylys450<210>36<211>219<212>prt<213>人工序列<220><223>ab5轻链<400>36aspvalvalmetthrglnserproleuserleuprovalthrprogly151015alaproalaserilesercysargserserglnserilevalhisser202530asnglyasnthrtyrleuglutrptyrleuglnlysproglyglnser354045prolysleuleuiletyrlysvalserasnargpheserglyvalpro505560aspargpheserglyserglyserglythraspphethrleuargile65707580serargvalglualagluaspvalglyiletyrtyrcyspheglngly859095serhisvalproprothrpheglyproglythrlysleugluilelys100105110argthrvalalaalaproservalpheilepheproproseraspglu115120125glnleulysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphe130135140tyrproargglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleugln145150155160serglyasnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspser165170175thrtyrserleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglu180185190lyshislysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserser195200205provalthrlysserpheasnargglyglucys210215当前第1页12当前第1页12