组合疗法的制作方法

本发明涉及治疗哺乳动物癌症的方法且涉及可用于这种治疗的组合。特别是，本发明涉及ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂，如抗ox40抗体的组合。
背景技术：
：：有效治疗过度增生性疾病，包括癌症，是肿瘤学领域的持续目标。通常，癌症由控制细胞分裂、分化和凋亡细胞死亡的正常过程的失调引起，并且其特征在于恶性细胞的增殖，其具有无限生长、局部扩张和全身转移的潜力。正常过程的失调包括信号转导途径的异常和对与正常细胞中发现的因子不同的因子的响应。精氨酸甲基化是对参与多种细胞过程的蛋白质的重要的翻译后修饰，例如基因调控、rna加工、dna损伤应答和信号转导。含有甲基化精氨酸的蛋白质存在于细胞核和胞质组分中，这表明催化甲基转移到精氨酸上的酶也存在于这些亚细胞腔隙中(综述于yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013)；lee,y.h.&stallcup,m.r.minireview:proteinargininemethylationofnonhistoneproteinsintranscriptionalregulation.molendocrinol23,425-433,doi:10.1210/me.2008-0380(2009))。在哺乳动物细胞中，甲基化精氨酸以三种主要形式存在：ω-ng-单甲基-精氨酸(mma)、ω-ng,ng-不对称二甲基精氨酸(adma)或ω-ng,n’g-对称的二甲基精氨酸(sdma)。每种甲基化状态都可以以不同方式影响蛋白质-蛋白质相互作用，因此有可能为底物的生物活性赋予不同的功能性后果(yang,y.&bedford,m.t.proteinargininemethyltransferasesandcancer.natrevcancer13,37-50,doi:10.1038/nrc3409(2013))。精氨酸甲基化主要在富含甘氨酸、精氨酸(gar)基序的情况下通过蛋白质精氨酸甲基转移酶(prmt)家族的活性发生，所述蛋白质精氨酸甲基转移酶将甲基从s-腺苷-l-甲硫氨酸(sam)转移至底物精氨酸侧链，产生s-腺苷-高半胱氨酸(sah)和甲基化精氨酸。该蛋白质家族由10个成员组成，其中9个已被证明具有酶活性(bedford,m.t.&clarke,s.g.proteinargininemethylationinmammals:who,what,andwhy.molcell33,1-13,doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013(2009))。根据酶促反应的产物，prmt家族分为四种亚型(i-iv型)。iv型酶甲基化内部胍基氮并且仅在酵母中描述(fisk,j.c.&read,l.k.proteinargininemethylationinparasiticprotozoa.eukaryotcell10,1013-1022,doi:10.1128/ec.05103-11(2011))；i-iii型酶通过单一甲基化事件产生单甲基-精氨酸(mma，rme1)。mma中间体被认为是相对低丰度的中间体，然而，prmt7的主要iii型活性的选择底物可以保持单甲基化，而i型和ii型酶分别催化从mma向不对称二甲基精氨酸(adma，rme2a)或对称的二甲基精氨酸(sdma，rme2s)的进展。ii型prmt包括prmt5和prmt9，然而，prmt5是负责形成对称二甲基化的主要酶。i型酶包括prmt1、prmt3、prmt4、prmt6和prmt8。prmt1、prmt3、prmt4和prmt6普遍表达，而prmt8主要限于脑(综述于bedford,m.t.&clarke,s.g.proteinargininemethylationinmammals:who,what,andwhy.molcell33,1-13,doi:10.1016/j.molcel.2008.12.013(2009))。prmt5在细胞质和细胞核中在几种类型的复合物中起作用，并且prmt5的结合配偶体是底物识别和选择性所必需的。甲基转移酶复合体(methylosome)蛋白50(mep50)是prmt5的已知辅因子，其是prmt5结合和对组蛋白和其他底物的活性所必需的(homc等人structureoftheargininemethyltransferaseprmt5-mep50revealsamechanismforsubstratespecificity.plosone.2013；8(2))。prmt5对称地甲基化多种蛋白质中的精氨酸，优选在富含精氨酸和甘氨酸残基的区域中(karkhanisv等人versatilityofprmt5-inducedmethylationingrowthcontrolanddevelopment.trendsbiochemsci.2011dec；36(12):633-41)。prmt5甲基化各种细胞蛋白中的精氨酸，包括剪接因子、组蛋白、转录因子、激酶等(karkhanisv等人versatilityofprmt5-inducedmethylationingrowthcontrolanddevelopment.trendsbiochemsci.2011dec；36(12):633-41)。剪接体的多个组分的甲基化是剪接体组装中的关键事件，并且通过敲低或基因敲除减弱prmt5活性导致对细胞剪接的破坏(bezzim等人regulationofconstitutiveandalternativesplicingbyprmt5revealsaroleformdm4pre-mrnainsensingdefectsinthespliceosomalmachinery.genesdev.2013sep1；27(17):1903-16)。prmt5还甲基化组蛋白精氨酸残基(h3r8，h2ar3和h4r3)，这些组蛋白标记与肿瘤抑制基因的转录沉默相关，如rb和st7(wangl,pals,sifs.proteinargininemethyltransferase5suppressesthetranscriptionoftherbfamilyoftumorsuppressorsinleukemiaandlymphomacells.molcellbiol.2008oct；28(20):6262-77)。另外，h2ar3的对称二甲基化与胚胎干细胞中分化基因的沉默有关(teeww,pardom,theunissentw,yul,choudharyjs,hajkovap,suranima.prmt5isessentialforearlymousedevelopmentandactsinthecytoplasmtomaintainescellpluripotency.genesdev.2010dec15；24(24):2772-7)。prmt5还通过egfr和pi3k的甲基化在细胞信号转导中起作用(hsujm,chenct,chouck,kuohp,lily,lincy,leehj,wangyn,lium,liaohw,shib,laicc,bedfordmt,tsaich,hungmc.crosstalkbetweenarg1175methylationandtyr1173phosphorylationnegativelymodulatesegfr-mediatederkactivation.natcellbiol.2011feb；13(2):174-81；weity,juancc,hisajy,sulj,leeyc,chouhy,chenjm,wuyc,chiusc,hsucp,liukl,yuct.proteinargininemethyltransferase5isapotentialoncoproteinthatupregulatesg1cyclins/cyclin-dependentkinasesandthephosphoinositide3-kinase/aktsignalingcascade.cancersci.2012sep；103(9):1640-50)。越来越多的证据表明prmt5参与肿瘤发生。prmt5蛋白在许多癌症类型中过表达，包括淋巴瘤、神经胶质瘤，乳腺癌和肺癌，仅prmt5过表达就足以转化正常的成纤维细胞(pals,baiocchira,byrdjc,grevermr,jacobst,sifs.lowlevelsofmir-92b/96induceprmt5translationandh3r8/h4r3methylationinmantlecelllymphoma.emboj.2007aug8；26(15):3558-69；ibrahimr等人expressionofprmt5inlungadenocarcinomaanditssignificanceinepithelial-mesenchymaltransition.humpathol.2014jul；45(7):1397-405；powersma等人proteinargininemethyltransferase5acceleratestumorgrowthbyargininemethylationofthetumorsuppressorprogrammedcelldeath4.cancerres.2011aug15；71(16):5579-87；yanf等人geneticvalidationoftheproteinargininemethyltransferaseprmt5asacandidatetherapeutictargetinglioblastoma.cancerres.2014mar15；74(6):1752-65)。prmt5的敲低通常导致癌细胞系中细胞生长和存活的减少。在乳腺癌中，高prmt5表达与高pdcd4(程序性细胞死亡4)水平一起预测总体不良存活(powersma，等人cancerres。2011年8月15日；71(16)：5579-87)。prmt5甲基化pdcd4改变了肿瘤相关功能。prmt5和pdcd4在乳腺癌的原位模型中的共表达促进肿瘤生长。prmt5在神经胶质瘤中的高表达与高肿瘤等级和总体较差的存活率相关，并且prmt5敲低在原位成胶质细胞瘤模型中提供存活益处(yanf等人geneticvalidationoftheproteinargininemethyltransferaseprmt5asacandidatetherapeutictargetinglioblastoma.cancerres.2014mar15；74(6):1752-65)。增加的prmt5表达和活性有助于沉默神经胶质瘤细胞系中的几种肿瘤抑制基因。目前在prmt5和癌症之间描述的最强的机制联系是套细胞淋巴瘤(mcl)。prmt5经常在mcl中过表达，并且在核区室中高度表达，其中它增加组蛋白甲基化水平并沉默肿瘤抑制基因的子集。最近的研究揭示了mirna在mcl中上调prmt5表达中的作用。预计超过50种mirna退火至prmt5mrna的3'非翻译区。据报道，mir-92b和mir-96水平与mcl中的prmt5水平呈负相关，并且mcl细胞中这些mirna的下调导致prmt5蛋白水平的上调。细胞周期蛋白d1是在绝大多数mcl患者中易位的癌基因，其与prmt5相关，并通过cdk4依赖性机制增加prmt5活性(aggarwalp等人nuclearcyclind1/cdk4kinaseregulatescul4expressionandtriggersneoplasticgrowthviaactivationoftheprmt5methyltransferase.cancercell.2010oct19；18(4):329-40)。prmt5介导负调节dna复制的关键基因的抑制，从而允许细胞周期蛋白d1依赖性肿瘤生长。prmt5敲低抑制了细胞周期蛋白d1依赖性细胞转化，导致肿瘤细胞死亡。这些数据突出了prmt5在mcl中的重要作用，并表明prmt5抑制可用作mcl中的治疗策略。在其他肿瘤类型中，已假定prmt5在分化、细胞死亡、细胞周期进展、细胞生长和增殖中起作用。虽然将prmt5与肿瘤发生联系起来的主要机制尚不清楚，但新出现的数据表明prmt5有助于调节基因表达(组蛋白甲基化，转录因子结合或启动子结合)、剪接改变和信号转导。转录因子e2f1的prmt5甲基化降低其抑制细胞生长和促进细胞凋亡的能力(zhengs等人argininemethylation-dependentreader-writerinterplaygovernsgrowthcontrolbye2f-1.molcell.2013oct10；52(1):37-51)。prmt5也甲基化p53(janssonm等人argininemethylationregulatesthep53response.natcellbiol.2008dec；10(12):1431-9)以响应dna损伤并降低p53诱导细胞周期停滞的能力，同时增加p53依赖性细胞凋亡。这些数据表明，prmt5抑制可通过诱导p53依赖性细胞凋亡使细胞对dna损伤剂敏感。除了直接甲基化p53外，prmt5还通过剪接相关机制上调p53途径。小鼠神经祖细胞中的prmt5敲除导致细胞剪接的改变，包括mdm4基因的同种型转换(bezzim等人regulationofconstitutiveandalternativesplicingbyprmt5revealsaroleformdm4pre-mrnainsensingdefectsinthespliceosomalmachinery.genesdev.2013sep1；27(17):1903-16)。bezzi等人发现prmt5敲除细胞具有降低的长mdm4同种型的表达(导致功能性p53泛素连接酶)和增加的mdm4短同种型的表达(导致无活性的连接酶)。mdm4剪接的这些变化导致mdm4的失活，增加p53蛋白的稳定性，并随后激活p53途径和细胞死亡。在prmt5敲低的癌细胞系中也观察到mdm4选择性剪接。这些数据表明prmt5抑制可以激活p53途径的多个节点。除了癌细胞生长和存活的调节之外，prmt5还涉及上皮-间充质转化(emt)。prmt5与转录因子snail结合，并作为e-钙粘蛋白表达的关键共抑制因子；prmt5的敲低导致e-钙粘蛋白水平的上调(houz等人thelimproteinajubarecruitsproteinargininemethyltransferase5tomediatesnail-dependenttranscriptionalrepression.molcellbiol.2008may；28(10):3198-207)。免疫疗法是另一种治疗过度增生性疾病的方法。增强抗肿瘤t细胞功能和诱导t细胞增殖是癌症治疗的有力和新方法。目前市场上有三种免疫-肿瘤学抗体(例如，免疫调节剂)。抗ctla-4(yervoy/伊匹单抗)被认为在t细胞引发时增强免疫反应，并且抗pd-1抗体(opdivo/纳武单抗和keytruda/派姆单抗)被认为在局部肿瘤微环境中发挥作用，其通过减轻已经引发和激活的肿瘤特异性t细胞中的抑制性检查点。尽管在癌症治疗方面已有许多最新进展，但仍需要对患有癌症影响的个体进行更有效和/或增强的治疗。附图简述图1：prmt催化的四种蛋白质的精氨酸甲基化。图2：已知的prmt5底物。prmt5对称地甲基化多种蛋白质中的精氨酸，优选在富含精氨酸和甘氨酸残基的区域中(karkhanisv等人versatilityofprmt5-inducedmethylationingrowthcontrolanddevelopment.trendsbiochemsci.2011dec；36(12):633-41)。绝大多数这些底物是通过它们与prmt5相互作用的能力来鉴定的。图3：prmt5/mep50复合物活性与细胞周期蛋白d1致癌基因驱动途径之间的分子关系。mep50，一种prmt5共调节因子，是cdk4底物，mep50磷酸化增加了prmt5/mep50活性。增加的prmt5活性介导与细胞周期蛋白d1依赖性肿瘤生长相关的关键事件，包括cul4(cullin4)抑制、cdt1过表达和dna再复制(来自aggarwalp等人nuclearcyclind1/cdk4kinaseregulatescul4expressionandtriggersneoplasticgrowthviaactivationoftheprmt5methyltransferase.cancercell.2010oct19；18(4):329-40)。图4：针对prmt5/mep50的化合物ic50值。在平衡条件下(km表观的底物浓度)使用放射性测定监测prmt5/mep50(4nm)活性，其测量用化合物c、化合物f、化合物b或化合物e处理后3h从sam至h4肽的转移。通过将数据拟合至3参数剂量-响应方程来确定ic50值。图5：与化合物c和西奈芬净复合的prmt5/mep50的晶体结构，分辨率为插图显示该化合物结合在肽结合口袋中并与prmt5骨架进行关键相互作用。图6：进化树，突出显示了在选择性组中测试的甲基转移酶。对于prmt5(10-8m)，化合物c显示出比任何其他测试酶(>10-5m)更高的效力。prmt9仅出于关系目的在家族树中显示，未在组中进行评估。图来来自richonvm.等人。图7：来自一组癌细胞系中的6天生长/死亡测定的化合物c的gic50值。dlbcl-弥漫性大b细胞淋巴瘤、gbm-成胶质细胞瘤、mcl-套细胞淋巴瘤、mm-多发性骨髓瘤图8：来自一组癌细胞系中的6天生长/死亡测定的化合物cgic100(黑色方块)和ymin-t0(条)值(该测定中使用的顶部浓度为30μm)。dlbcl弥漫性大b细胞淋巴瘤、gbm-成胶质细胞瘤、mcl-套细胞淋巴瘤、mm多发性骨髓瘤图9：来自10天2d生长测定的癌细胞系(n＝240)中的化合物b的gic50值。all-急性成淋巴细胞性白血病、aml-急性骨髓性白血病、cml-慢性骨髓性白血病、dlbcl-弥漫型大b-细胞淋巴瘤、hl-霍奇金淋巴瘤、hn-头颈部癌症、mm-多发性骨髓瘤、nhl-非霍奇金淋巴瘤、nsclc-非小细胞肺癌、pel-原发性渗出性淋巴瘤、sclc-小细胞肺癌、tcl-t-细胞淋巴瘤。图10：在患者衍生的和细胞系肿瘤模型中进行的8-13天集落形成测定的化合物e相对ic50值。图11：化合物c对sdma的抑制。(a)第3天的代表性sdma剂量-响应曲线(归一化为gapdh的总sdma)(上图)和第1天和第3天的z138细胞的ic50值(下图)。(b)一组mcl细胞系中的sdmaic50值(第4天)。图12：用prmt5抑制剂处理的淋巴瘤细胞系中的基因表达变化。a.化合物b(0.1和0.5μm)处理(第2天和第4天)后淋巴瘤细胞系中差异表达(de)基因的定量。b.跨淋巴瘤细胞系的de基因的重叠。图13：通过rna测序鉴定的11个基因的组中的化合物c基因表达ec50值。cdkn1a的代表性剂量-响应曲线(第2天和第4天，左图)和基因组ec50汇总表(右图，第4天)。图14：化合物b减弱淋巴瘤细胞系中内含子子集的剪接。a.调节细胞剪接的机制(来自bezzim.等人)。b.用0.1或0.5μm化合物b处理的淋巴瘤细胞系中内含子表达的分析。图15：化合物b诱导淋巴瘤细胞系中基因子集的同种型转换。a.用化合物b(0.1和0.5μm)处理2和4天的4种淋巴瘤细胞系中同种型转换的定量。b.4种淋巴瘤细胞系中同种型转换的重叠。c.在所有4种淋巴瘤细胞系中经历选择性剪接的基因列表(4种细胞系的重叠)。图16：用化合物c处理的mcl细胞系中的mdm4选择性剪接和p53活化。a.在用10和200nm化合物c或5μmnutlin-3处理2天和3天的4种套细胞淋巴瘤细胞系组中的mdm4同种型表达分析(mdm4-fl-长；mdm4-s-短)。b.用10和200nm化合物c或5μmnutlin-3处理3天的mcl细胞系中p53和p21表达的western分析。图17：化合物c诱导z138细胞中mdm4rna(a)剪接和sdma/p53/p21水平的剂量依赖性变化(b)。图18：prmt5抑制剂和依鲁替尼作为单一药剂和组合在mcl细胞系中的活性。a.6天生长/死亡ctg测定中化合物c和依鲁替尼的gic50值。b.化合物b和依鲁替尼的组合在rec1细胞中的代表性生长曲线(第6天，1：1比例)。c.在6天生长/死亡ctg测定中以指定比率的化合物b:依鲁替尼的组合指数(ci)。图19：z138异种移植模型中的化合物c功效和pd。化合物c在z138异种移植模型中的21天功效研究。b.在功效研究结束时(最后一次给药后3小时)从收获的肿瘤中量化sdmawestern数据。图20：maver-1异种移植模型中的化合物c功效和pd。a.在maver-1异种移植模型中的化合物c21天功效研究。b.在功效研究结束时(最后一次给药后3小时)从收获的肿瘤中量化sdmawestern数据。图21：来自7天生长2d测定的一组乳腺癌细胞系中的化合物b生长ic50值(tnbc-三阴性乳腺癌，her2-her2阳性，hr-激素受体阳性)。图22：使用prmt5候选物化合物c和prmt5工具分子化合物b，在乳腺和mcl细胞系中10-12天生长/死亡测定的ymin-t0值。图23：用30、200和1000nm化合物c处理不同时间段的乳腺癌细胞系的碘化丙锭facs分析(第2天、第7天和第10天，生物学n＝2，误差条代表标准偏差)。图24：在一组乳腺癌细胞系中1μm化合物b处理后sdma抑制的时间过程。将细胞用dmso或1μm化合物b处理指定的时间段，并通过蛋白质印迹用sdma和肌动蛋白抗体分析细胞裂解物。每个印迹的最后一个泳道是dmso对照的1/2。图25：mda-mb-468异种移植模型中的化合物c功效(左)和pk/pd(右)。图26：使用prmt5候选物、化合物c和prmt5工具分子化合物b(ymin-t0)在gbm细胞系中的14天生长/死亡ctg测定。图27：化合物b(1μm)降低sdma水平(b)，诱导mdm4的选择性剪接(a)，并激活gbm和淋巴瘤细胞系中的p53(b)。图28：与免疫疗法组合。a20肿瘤模型中单一药剂和组合的平均存活率。图29：与免疫疗法组合。ct26肿瘤模型中单一药物和组合的平均存活率。图30：106-222、人源化106-222(hu106)和人受体x61012(genbank登录号)vh序列的氨基酸序列的比对。图31：106-222、人源化106-222(hu106)和人受体aj388641(genbank登录号)vl序列的氨基酸序列的比对。图32：hu106vh基因的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列，其侧翼为spei和hindiii位点。图33：hu106-222vl基因的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列，其侧翼为nhei和ecori位点。图34：119-122、人源化119-122(hu119)和人受体z14189(genbank登录号)vh序列的氨基酸序列的比对。图35：119-122、人源化119-122(hu119)和人受体m29469(genbank登录号)vl序列的氨基酸序列的比对。图36：hu119vh基因的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列，其侧翼为spei和hindiii位点。图37：hu119vl基因的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列，其侧翼为nhei和ecori位点。图38：小鼠119-43-1vhcdna的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列。图39：小鼠119-43-1vlcdna的核苷酸序列和推导的氨基酸序列。图40：设计的119-43-1vh基因的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列，其侧翼为spei和hindiii位点。图41：设计的119-43-1vl基因的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列，其侧翼为nhei和ecori位点。技术实现要素：在一个实施方案中，本发明提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其中所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，以及以下至少一种：药学上可接受的载体和药学上可接受的稀释剂，从而治疗人的癌症，其中所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含治疗有效量的ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和包含治疗有效量的免疫调节剂的第二药物组合物，其中所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含i型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和包含免疫调节剂的药物组合物的药物组合物，其中所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，从而治疗所述人的癌症。在一个实施方案中，本发明提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合在制备药物中的用途，其中所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，本发明提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合用于治疗癌症的用途，其中所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。发明详述定义如本文所用，“ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶抑制剂”或“ii型prmt抑制剂”是指抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)和/或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)的试剂。在一些实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为小分子化合物。在一些实施方案中，所述ii型prmt抑制剂选择性抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)和/或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)。在一些实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为prmt5的抑制剂。在一些实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为prmt5的选择性抑制剂。鉴于它们在调节多种生物过程中的作用，精氨酸甲基转移酶是调节的有吸引力的靶标。现已发现，本文所述的化合物及其药学上可接受的盐和组合物作为精氨酸甲基转移酶的抑制剂是有效的。以下更具体地描述具体官能团和化学术语的定义。化学元素是根据handbookofchemistryandphysics,75版内页的cas版本元素周期表所定义，且总体来说具体官能团也根据其中所述而定义。此外，在thomassorrell，organicchemistry，universitysciencebooks，sausalito，1999；smith和march，march’sadvancedorganicchemistry，第5版，johnwiley&sons，inc.，newyork，2001；larock，comprehensiveorganictransformations，vchpublishers，inc.，newyork，1989；和carruthers，somemodernmethodsoforganicsynthesis，第3版，cambridgeuniversitypress，cambridge，1987中描述了有机化学的一般原则以及具体官能团和反应性。本文所述的化合物可包含一个或多个不对称中心，并因此可以不同异构体形式存在，如对映异构体和/或非对映异构体。例如，本文所述的化合物可为单一对映异构体、非对映异构体或几何异构体的形式，或可为立体异构体混合物的形式，包括外消旋混合物和富含一种或多种立体异构体的混合物。可通过本领域技术人员已知的方法将异构体从混合物中分离，包括手性高效液相色谱(hplc)以及手性盐的形成和结晶；或者可通过不对称合成制备优选的异构体。例如参见：jacques等人，enantiomers，racemates和resolutions(wileyinterscience，newyork，1981)；wilen等人，tetrahedron33:2725(1977)；eliel，stereochemistryofcarboncompounds(mcgraw–hill，ny，1962)；以及wilen，tablesofresolvingagentsandopticalresolutionsp.268(e.l.eliel，ed.，univ.ofnotredamepress，notredame，in1972)。本发明还包括本文所述的作为单个异构体的化合物，其基本不含其它异构体，或者包括作为不同异构体混合物的化合物。应理解，本发明的化合物可描绘为不同的互变异构体。还应当理解，当化合物具有互变异构形式时，所有互变异构形式都包括在本发明的范围内，并且本文所述任何化合物的命名不排除任何互变异构形式。除非另有说明，否则本文描述的结构也意味着包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在方面不同的化合物。例如，具有本发明结构的化合物，不同的是用氘或氚替代氢，用18f替代19f，或用富含13c-或14c-的碳替代碳，都在本发明的范围内。这些化合物可用作例如生物测定中的分析工具或探针。术语"脂族基团"，如本文所述，包括饱和以及不饱和、非芳族、直链(即，无支链的)、支链、非环状和环状(即，碳环的)的烃。在一些实施方案中，脂族基团任选取代有一个或多个官能团。本领域技术人员应理解，"脂族基团"在此旨在包括烷基、烯基、炔基、环烷基和环烯基部分。列出一系列值时，它旨在包含该范围内的每个值和子范围。例如"c1-6烷基"预期包括，c1；c2、c3、c4、c5、c6、c1-6、c1-5、c1-4、c1-3、c1-2、c2-6、c2-5、c2-4、c2-3、c3-6、c3-5、c3-4、c4-6、c4-5和c5-6烷基。"基(radical)"是指特定基团上的连接点。基包括特定基团上的二价自由基。“烷基”是指具有1至20个碳原子的直链或支链饱和烃基基团(“c1–20烷基”)。在一些实施方案中，烷基具有1至10个碳原子("c1-10烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至9个碳原子("c1-9烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至8个碳原子("c1-8烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至7个碳原子("c1-7烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至6个碳原子("c1-6烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至5个碳原子("c1-5烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至4个碳原子("c1-4烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至3个碳原子("c1-3烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1至2个碳原子("c1-2烷基")。在一些实施方案中，烷基具有1个碳原子("c1烷基")。在一些实施方案中，烷基具有2至6个碳原子("c2-6烷基")。c1-6烷基基团的实例包括甲基(c1)、乙基(c2)、正丙基(c3)、异丙基(c3)、正丁基(c4)、叔丁基(c4)、仲丁基(c4)、异丁基(c4)、正戊基(c5)、3-戊基(c5)、戊基(c5)、新戊基(c5)、3-甲基-2-丁基(c5)、叔戊基(c5)、和正己基(c6)。烷基的其它实例包括正庚基(c7)、正辛基(c8)等。在某些实施方案中，烷基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的烷基")或取代有一个或多个取代基(“取代的烷基")。在某些实施方案中，烷基为未取代的c1-10烷基(例如、-ch3)。在某些实施方案中，烷基为取代的c1-10烷基。在一些实施方案中，烷基取代有一个或多个卤素。"全卤代烷基"为其中所有氢原子独立地被卤素，例如，氟、溴、氯或碘代替的本文定义的取代的烷基。在一些实施方案中，烷基部分具有1至8个碳原子("c1-8全卤代烷基")。在一些实施方案中，烷基部分具有1至6个碳原子("c1-6全卤代烷基")。在一些实施方案中，烷基部分具有1至4个碳原子("c1-4全卤代烷基")。在一些实施方案中，烷基部分具有1至3个碳原子("c1-3全卤代烷基")。在一些实施方案中，烷基部分具有1至2个碳原子("c1-2全卤代烷基")。在一些实施方案中，所有氢都被氟原子代替。在一些实施方案中，所有氢原子都被氯代替。全卤代烷基基团的实例包括-cf3、-cf2cf3、-cf2cf2cf3、-ccl3、-cfcl2、-cf2cl等。"烯基"是指具有2至20个碳原子和一个或多个碳-碳双键(例如，1、2、3或4个双键)，和任选一个或多个三键(例如，1、2、3或4个三键)的直链或支链的烃基基团("c2-20烯基")。在某些实施方案中，烯基不包含三键。在一些实施方案中，烯基具有2至10个碳原子("c2-10烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至9个碳原子("c2-9烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至8个碳原子("c2-8烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至7个碳原子("c2-7烯基")在一些实施方案中，烯基具有2至6个碳原子("c2-6烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至5个碳原子("c2-5烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至4个碳原子("c2-4烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2至3个碳原子("c2-3烯基")。在一些实施方案中，烯基具有2个碳原子("c2烯基")。一个或多个碳-碳双键可为内部的(如在2-丁烯基中)或末端的(如在1-丁烯基中)。c2-4烯基基团的实例包括乙烯基(c2)、1-丙烯基(c3)、2-丙烯基(c3)、1-丁烯基(c4)、2-丁烯基(c4)、丁二烯基(c4)等。c2-6烯基基团的实例包括上述c2-4烯基以及戊烯基(c5)、戊二烯基(c5)、己烯基(c6)，等。烯基的其它实例包括庚烯基(c7)、辛烯基(c8)、辛三烯基(c8)，等。在某些实施方案中，烯基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的烯基")或取代有一个或多个取代基(“取代的烯基")。在某些实施方案中，烯基为未取代的c2-10烯基。在某些实施方案中，烯基为取代的c2-10烯基。"炔基"是指具有2至20个碳原子和一个或多个碳-碳三键(例如，1、2、3或4个三键)，和任选一个或多个双键(例如，1、2、3或4个双键)的直链或支链的烃基基团("c2-20炔基")。在某些实施方案中，炔基不包含双键。在一些实施方案中，炔基具有2至10个碳原子("c2-10炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至9个碳原子("c2-9炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至8个碳原子("c2-8炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至7个碳原子("c2-7炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至6个碳原子("c2-6炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至5个碳原子("c2-5炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至4个碳原子("c2-4炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2至3个碳原子("c2-3炔基")。在一些实施方案中，炔基具有2个碳原子("c2炔基")。一个或多个碳碳三键可为内部的(如在2-丁炔基中)或末端的(如在1-丁炔基中)。c2-4炔基基团的实例包括，但不限于，乙炔基(c2)、1-丙炔基(c3)、2-丙炔基(c3)、1-丁炔基(c4)、2-丁炔基(c4)，等。c2-6烯基基团的实例包括上述c2-4炔基以及戊炔基(c5)、己炔基(c6)，等。炔基的其他实例包括庚炔基(c7)、辛炔基(c8)，等。在某些实施方案中，炔基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的炔基")或取代有一个或多个取代基(“取代的炔基")。在某些实施方案中，炔基为未取代的c2-10炔基。在某些实施方案中，炔基为取代的c2-10炔基。“稠合”或“邻位稠合”在本文中可互换使用，并且是指具有共同的两个原子和一个键的两个环，例如，“桥接”是指以下环系统，其包含(1)桥头原子或原子团，所述桥头原子或原子团连接同一环的两个或更多个非相邻位置；或(2)桥头原子或原子团，所述桥头原子或原子团连接环系统的不同环的两个或多个位置，并且因此不形成邻位稠合的环，例如，“螺”或“螺稠合”是指连接到碳环或杂环系统的相同原子的一组原子(偕位连接)，从而形成环，例如，还考虑了桥头原子处的螺环融合。"碳环基"或"碳环的"是指在非芳环体系中具有3至14个环碳原子("c3-14碳环基")和0个杂原子的非芳族环状烃基基团。在某些实施方案中，碳环基是指在非芳环体系中具有3至10个环碳原子(c3-10碳环基")和0个杂原子的非芳族环状烃基基团。在一些实施方案中，碳环基具有3至8个环碳原子("c3-8碳环基”)。在一些实施方案中，碳环基具有3至6个环碳原子("c3-6碳环基”)。在一些实施方案中，碳环基具有3至6个环碳原子("c3-6碳环基”)。在一些实施方案中，碳环基具有5至10个环碳原子("c5-10碳环基")。示例性c3-6碳环基包括，但不限于，环丙基(c3)、环丙烯基(c3)、环丁基(c4)、环丁烯基(c4)、环戊基(c5)、环戊烯基(c5)、环己基(c6)、环己烯基(c6)、环己二烯基(c6)，等。示例性c3-8碳环基包括，但不限于，上述c3-6碳环基以及环庚基(c7)、环庚烯基(c7)、环庚二烯基(c7)、环庚三烯基(c7)、环辛基(c8)、环辛烯基(c8)、双环[2.2.1]庚基(c7)、双环[2.2.2]辛基(c8)，等。示例性c3-10碳环基包括，但不限于，上述c3_8碳环基以及环壬基(c9)、环壬烯基(c9)、环癸基(c10)、环癸烯基(c10)、八氢-lh-茚基(c9)、十氢萘基(c10)、螺[4.5]癸基(c10)，等。如此前实例所述，在一些实施方案中，碳环基基团为单环(“单环碳环基”)或为稠合、桥接或螺环稠合的系统(如二环系统(“二环碳环基”))，并且可为饱和的或可为部分不饱和的。“碳环基”也包括环系统，其中如上所述的碳环基环与一个或多个芳基或杂芳基基团稠合，其中连接点位于碳环基环上，且在该情况下，碳的数目继续被指定为碳环环系统中的碳数目。在某些实施方案中，碳环基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的碳环基")或取代有一个或多个取代基(“取代的碳环基")。在某些实施方案中，所述碳环基为未取代的c3-10碳环基。在某些实施方案中，所述碳环基为取代的c3-10碳环基。在一些实施方案中，"碳环基"为具有3至14个环碳原子的单环、饱和碳环基("c3-14环烷基")。在一些实施方案中，"碳环基"为具有3至10个环碳原子的单环、饱和碳环基("c3-10环烷基")。在一些实施方案中，环烷基具有3至8个环碳原子("c3-8环烷基")。在一些实施方案中，环烷基具有3至6个环碳原子("c3-6环烷基")。在一些实施方案中，环烷基具有5至6个环碳原子("c5-6环烷基")。在一些实施方案中，环烷基具有5至10个环碳原子("c5-10环烷基")。c5-6环烷基基团的实例包括环戊基(c5)和环己基(c5)。c3-6环烷基基团的实例包括上述c5-6环烷基以及环丙基(c3)和环丁基(c4)。c3-8环烷基基团的实例包括上述c3-6环烷基以及环庚基(c7)和环辛基(c8)。在某些实施方案中，环烷基的每种情况独立地为未取代的(“未取代的环烷基")或取代有一个或多个取代基(“取代的环烷基")。在某些实施方案中，环烷基为未取代的c3-10环烷基。在某些实施方案中，环烷基为取代的c3-10环烷基。"杂环基"或"杂环的"是指具有环碳原子和1至4个环杂原子的3-至14-元非芳环体系的基团，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("3-14元杂环基")。在某些实施方案中，杂环基或杂环的是指具有环碳原子和1-4个环杂原子的3-10元非芳环体系的基团，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("3-10元杂环基")。在包含一个或多个氮原子的杂环基中，连接点可为碳或氮原子，只要化合价允许。杂环基可为单环("单环杂环基")或稠合、桥接或螺环稠合的的环体系，如双环体系("双环杂环基")，且可为饱和或可为部分不饱和的。杂环基二环环系统可在一个或两个环中包含一个或多个杂原子。“杂环基”还包括环系统，其中如上所定义的杂环基环，与一个或多个碳环基基团稠合，其中连接点位于碳环基上或杂环基环上，或者包括环系统，其中如上所定义的杂环基环与一个或多个芳基或杂芳基基团稠合，其中连接点位于杂环基环上，且在该情况下，环成员的数目继续被指定为杂环基环系统中的环成员数目。在某些实施方案中，杂环基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的杂环基")或取代有一个或多个取代基(“取代的杂环基")。在某些实施方案中，杂环基为未取代的3-10元杂环基。在某些实施方案中，杂环基为取代的3-10元杂环基。在一些实施方案中，杂环基为具有环碳原子和1-4个环杂原子的5-10元非芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-10元杂环基")。在一些实施方案中，杂环基为具有环碳原子和1-4个环杂原子的5-8元非芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-8元杂环基")。在一些实施方案中，杂环基为具有环碳原子和1-4个环杂原子的5-6元非芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-6元杂环基")。在一些实施方案中，所述5-6元杂环基具有1-3个独立选自氮、氧和硫的环杂原子。在一些实施方案中，所述5-6元杂环基具有1-2个独立选自氮、氧和硫的环杂原子。在一些实施方案中，所述5-6元杂环基具有一个选自氮、氧和硫的环杂原子。示例性的包含一个杂原子的3元杂环基基团包括但不限于氮杂环丙烷基、氧杂环丙烷基、硫杂环丙烷基。示例性的包含一个杂原子的4元杂环基基团包括但不限于氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基和硫杂环丁烷基。包含一个杂原子的示例性的5元杂环基基团包括但不限于四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢噻吩基、吡咯烷基、二氢吡咯基和吡咯基-2,5–二酮。示例性的包含两个杂原子的5元杂环基基团包括但不限于二氧杂环戊烷基、氧杂硫杂环戊烷基(oxasulfuranyl)、二硫杂环戊烷基(disulfuranyl)和噁唑烷-2-酮。示例性的包含三个杂原子的5元杂环基基团包括但不限于三唑啉基、噁二唑啉基和噻二唑啉基。示例性的包含一个杂原子的6元杂环基基团包括但不限于哌啶基、四氢吡喃基、二氢吡啶基和硫杂环己基。示例性的包含两个杂原子的6元杂环基基团包括但不限于哌嗪基、吗啉基、二硫杂环己基、二氧杂环己烷基。示例性的包含三个杂原子的6元杂环基基团包括但不限于三氮杂环己烷基(triazinanyl)。示例性的包含一个杂原子的7元杂环基基团包括但不限于氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基和硫杂环庚烷基。示例性的包含一个杂原子的8元杂环基基团包括但不限于氮杂环辛烷基、氧杂环辛烷基和硫杂环辛烷基。示例性的与c6芳基环稠合的5元杂环基基团(本文也称为5,6-二环杂环)包括但不限于二氢吲哚基、异二氢吲哚基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、苯并噁唑啉酮基(benzoxazolinonyl)等。示例性的与芳基环稠合的6元杂环基基团(本文也称为6,6-二环杂环)包括但不限于四氢喹啉基、四氢异喹啉基等。“芳基”是指单环或多环(如二环或三环)的4n+2芳香环系统(如具有6、10或14个在环形排列中共享的π电子)并在该芳香环系统中具有6-14个环碳原子和0个杂原子的基团(“c6–14芳基”)。在一些实施方案中，芳基基团具有六个环碳原子(“c6芳基”；如苯基)。在一些实施方案中，芳基基团具有十个环碳原子(“c10芳基”；如萘基如1–萘基和2–萘基)。在一些实施方案中，芳基基团具有十四个环碳原子(“c14芳基”；如蒽基)。“芳基”还包括环系统，其中芳基环，如上所定义，与一个或多个碳环基或杂环基基团稠合，其中连接基团或连接点位于芳基环上，且在该情况下，碳原子的数目继续被指定为芳基环系统中的碳原子数目。在某些实施方案中，芳基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的(“未取代的芳基")或取代有一个或多个取代基(“取代的芳基")。在某些实施方案中，芳基为未取代的c6-14芳基。在某些实施方案中，芳基为取代的c6-14芳基。"杂芳基"是指5-14元单环或多环(如二环或三环)的4n+2芳香环系统(如具有6或10个在环形排列中共享的π电子)并在该芳香环系统中具有环碳原子和1-4个环杂原子的基团，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-14元杂芳基")。在某些实施方案中，杂芳基是指具有环碳原子和在芳环体系中的1-4个环杂原子的5-10元单环或双环的4n+2芳环体系的基团，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-10元杂芳基")。在含有一个或多个氮原子的杂芳基基团中，只要原子价允许，连接点可为碳或氮原子。杂芳基二环系统可在一个或两个环内包含一个或多个杂原子。“杂芳基”包括这样的环系统，其中如上所定义的杂芳基环与一个或多个碳环基或杂环基基团稠合，其中连接点位于杂芳基环上，且在该情况下，环成员的数目继续被指定为杂芳基环系统中环成员的数目。“杂芳基”还包括这样的环系统，其中如上所定义的杂芳基环与一个或多个芳基基团稠合，其中连接点位于芳基或杂芳基环上，且在该情况下，环成员的数目继续被指定为稠合(芳基/杂芳基)环系统中环成员的数目。二环杂芳基基团中的一个环不含有杂原子(如吲哚基，喹啉基，咔唑基等)，连接点可位于两环之一上，例如位于具有杂原子的环(如2–吲哚基)上或位于不含有杂原子的环(如5–吲哚基)上。在一些实施方案中，杂芳基为具有环碳原子和设置在芳环体系中的1-4个环杂原子的5-14元芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-14元杂芳基")。在一些实施方案中，杂芳基为具有环碳原子和设置在芳环体系中的1-4个环杂原子的5-10元芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-10元杂芳基")。在一些实施方案中，杂芳基为具有环碳原子和设置在芳环体系中的1-4个环杂原子的5-8元芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-8元杂芳基")。在一些实施方案中，杂芳基为具有环碳原子和设置在芳环体系中的1-4个环杂原子的5-6元芳环体系，其中各杂原子独立地选自氮、氧和硫("5-6元杂芳基")。在一些实施方案中，所述5-6元杂芳基具有1-3个独立选自氮、氧和硫的环杂原子。在一些实施方案中，所述5-6元杂芳基具有1-2个独立选自氮、氧和硫的环杂原子。在一些实施方案中，所述5-6元杂芳基具有1个选自氮、氧和硫的环杂原子。在某些实施方案中，杂芳基的每种情况独立地为任选取代的，例如，未取代的("未取代的杂芳基")或取代有一个或多个取代基("取代的杂芳基")。在某些实施方案中，杂芳基为未取代的5-14元杂芳基。在某些实施方案中，杂芳基为取代的5-14元杂芳基。包含一个杂原子的示例性5-元杂芳基包括，但不限于，吡咯基，呋喃基和噻吩基。包含2个杂原子的示例性5-元杂芳基包括，但不限于，咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基和异噻唑基。包含3个杂原子的示例性5-元杂芳基包括，但不限于，三唑基、噁二唑基和噻二唑基。包含4个杂原子的示例性5-元杂芳基包括，但不限于，四唑基。包含1个杂原子的示例性6-元杂芳基包括，但不限于，吡啶基。包含2个杂原子的示例性6-元杂芳基包括，但不限于，哒嗪基，嘧啶基和吡嗪基。包含3或4个杂原子的示例性6-元杂芳基分别包括，但不限于，三嗪基和四嗪基。包含1个杂原子的示例性7-元杂芳基包括，但不限于，氮杂环庚三烯基、氧杂环庚三烯基和硫杂环庚三烯基。示例性6,6-双环杂芳基包括，但不限于，二氮杂萘基、蝶啶基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、喹喔啉基、酞嗪基和喹唑啉基。示例性5,6-双环杂芳基包括，但不限于，下式任一种：在单环或双环杂芳基基团的任一个中，连接点可为任何碳或氮原子，只要化合价允许。“部分不饱和”是指包含至少一个双键或三键的基团。术语“部分不饱和”旨在涵盖具有多个不饱和位点的环，但并不包括如本文所定义的芳族基(例如，芳基或杂芳基基团)。同样，“饱和”是指不包含双键或三键的基团，即全包含单键。在一些实施方案中，本文所定义的脂族基团、烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基，为任选取代的(例如，“取代”或“未取代的”脂族基团，“取代”或“未取代的”烷基，“取代”或“未取代的”烯基，“取代”或“未取代的”炔基，“取代”或“未取代的”碳环基，“取代”或“未取代的”杂环基，“取代”或“未取代的”芳基或“取代”或“未取代的”杂芳基)。通常，术语“取代的”，不管其前面是否有术语“任选地”，是指基团(如碳或氮原子)上存在的至少一个氢被可允许的取代基代替，如其取代产生稳定化合物的取代基，所述化合物例如为不自发进行转化的化合物，所述转化例如为重排、环化、消除或其它反应。除非另外说明，“取代的”基团在该基团的一个或多个可取代的位置具有取代基，且当在任何给定结构中的多于一个位置被取代时，每个位置上的取代基相同或不同。术语“取代的”被认为包括被有机化合物所有可允许的取代基取代，包括导致形成稳定的化合物的任何本文所述的取代基。本发明考虑到任何以及所有的该组合以获得稳定化合物。为了本文的目的，例如氮的杂原子可具有氢取代基和/或如本文所述的任何合适的取代基，其满足杂原子的原子价并导致形成稳定部分。示例性碳原子取代基包括，但不限于，卤素、-cn、-no2、-n3、-so2h、-s03h、-oh、-oraa、-on(rbb)2、-n(rbb)2、-n(rbb)3+x、-n(orcc)rbb、-sh、-sraa、-ssrcc、-c(＝o)raa、-co2h、-cho、-c(orcc)2、-co2raa、-oc(＝o)raa、-oco2raa、-c(＝o)n(rbb)2、-oc(＝o)n(rbb)2、-nrbbc(＝o)raa、-nrbbco2raa、-nrbbc(＝o)n(rbb)2、-c(＝nrbb)raa、-c(＝nrbb)oraa、-oc(＝nrbb)raa、-oc(＝nrbb)oraa、-c(＝nrbb)n(rbb)2、-oc(＝nrbb)n(rbb)2、-nrbbc(＝nrbb)n(rbb)2、-c(＝o)nrbbso2raa、-nrbbso2raa、-so2n(rbb)2、-so2raa、-so2oraa、-oso2raa、-s(＝o)raa、-os(＝o)raa、-si(raa)3、-osi(raa)3-c(＝s)n(rbb)2、-c(＝o)sraa、-c(＝s)sraa、-sc(＝s)sraa、-sc(＝o)sraa、-oc(＝o)sraa、-sc(＝o)oraa、-sc(＝o)raa、-p(＝o)2raa、-op(＝o)2raa、-p(＝o)(raa)2、-op(＝o)(raa)2、-op(＝o)(orcc)2、-p(＝o)2n(rbb)2、-op(＝o)2n(rbb)2、-p(＝o)(nrbb)2、-op(＝o)(nrbb)2、-nrbbp(＝o)(orcc)2、-nrbbp(＝o)(nrbb)2、-p(rcc)2、-p(rcc)3、-op(rcc)2、-op(rcc)3、-b(raa)2、-b(orcc)2、-braa(orcc)、c1-10烷基、c1-10全卤代烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rdd基团；或碳原子上的两个偕位氢被基团＝o、＝s、＝nn(rbb)2、＝nnrbbc(＝o)raa、＝nnrbbc(＝o)oraa、＝nnrbbs(＝o)2raa、＝nrbb、或＝norcc替代；raa的每种情况独立选自c1-10烷基、c1-10全卤代烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基，或两个raa基团连接以形成3-14元杂环基或5-14元杂芳基环，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rdd基团；rbb的每种情况独立选自氢、-oh、-oraa、-n(rcc)2、-cn、-c(＝o)raa、-c(＝o)n(rcc)2、-co2raa、-so2raa、-c(＝nrcc)oraa、-c(＝nrcc)n(rcc)2、-so2n(rcc)2、-so2rcc、-so2orcc、-soraa、-c(＝s)n(rcc)2、-c(＝o)srcc、-c(＝s)srcc、-p(＝o)2raa、-p(＝o)(raa)2、-p(＝o)2n(rcc)2、-p(＝o)(nrcc)2、c1-10烷基、c1-10全卤代烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基，或两个rbb基团连接以形成3-14元杂环基或5-14元杂芳基环，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rdd基团；rcc的每种情况独立选自氢、c1-10烷基、c1-10全卤代烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基，或两个rcc基团连接以形成3-14元杂环基或5-14元杂芳基环，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rdd基团；rdd的每种情况独立选自卤素、-cn、-no2、-n3、-so2h、-so3h、-oh、-oree、-on(rff)2、-n(rff)2、-n(rff)3+x、-n(oree)rff、-sh、-sree、-ssree、-c(＝o)ree、-co2h、-co2ree、-oc(＝o)ree、-oco2ree、-c(＝o)n(rff)2、-oc(＝o)n(rff)2、-nrffc(＝o)ree、-nrffco2ree、-nrffc(＝o)n(rff)2、-c(＝nrff)oree、-oc(＝nrff)ree、-oc(＝nrff)oree、-c(＝nrff)n(rff)2、-oc(＝nrff)n(rff)2、-nrffc(＝nrff)n(rff)2,-nrffso2ree、-so2n(rff)2、-so2ree、-so2oree、-oso2ree、-s(＝o)ree、-si(ree)3、-osi(ree)3、-c(＝s)n(rff)2、-c(＝o)sree、-c(＝s)sree、-sc(＝s)sree、-p(＝o)2ree、-p(＝o)(ree)2、-op(＝o)(ree)2、-op(＝o)(oree)2、c1-6烷基、c1-6全卤代烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c3-10碳环基、3-10元杂环基、c6-10芳基、5-10元杂芳基，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rgg基团，或两个偕位rdd取代基可连接以形成＝o或＝s；ree的每种情况独立选自c1-6烷基、c1-6全卤代烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c3-10碳环基、c6-10芳基、3-10元杂环基和3-10元杂芳基，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rgg基团；rff的每种情况独立选自氢、c1-6烷基、c1-6全卤代烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c3-10碳环基、3-10元杂环基、c1-6芳基和5-10元杂芳基，或两个rff基团连接以形成3-14元杂环基或5-14元杂芳基环，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rgg基团；且rgg的每种情况独立地为，卤素、-cn、-no2、-n3、-so2h、-so3h、-oh、-o1-6烷基、-on(c1-6烷基)2、-n(c1-6烷基)2、-n(c1-6烷基)3+x-、-nh(c1-6烷基)2+x-、-nh2(c1-6烷基)+x-、-nh3+x、-n(oc1-6烷基)(c1-6烷基)、-n(oh)(c1-6烷基)、-nh(oh)、-sh、-s1-6烷基、-ss(c1-6烷基)、-c(＝o)(c1-6烷基)、-co2h、-co2(c1-6烷基)、-oc(＝o)(c1-6烷基)、-oco2(c1-6烷基)、-c(＝o)nh2、-c(＝o)n(c1-6烷基)2、-oc(＝o)nh(c1-6烷基)、-nhc(＝o)(c1-6烷基)、-n(c1-6烷基)c(＝o)(c1-6烷基)、-nhco2(c1-6烷基)、-nhc(＝o)n(c1-6烷基)2、-nhc(＝o)nh(c1-6烷基)、-nhc(＝o)nh2、-c(＝nh)o(c1-6烷基)、-oc(＝nh)(c1-6烷基)、-oc(＝nh)oc1-6烷基、-c(＝nh)n(c1-6烷基)2、-c(＝nh)nh(c1-6烷基)、-c(＝nh)nh2、-oc(＝nh)n(c1-6烷基)2、-oc(nh)nh(c1-6烷基)、-oc(nh)nh2、-nhc(nh)n(c1-6烷基)2、-nhc(＝nh)nh2、-nhso2(c1-6烷基)、-so2n(c1-6烷基)2、-so2nh(c1-6烷基)、-so2nh2,-so2c1-6烷基、-so2oc1-6烷基、-oso2c1-6烷基、-soc1-6烷基、-si(c1-6烷基)3、-osi(c1-6烷基)3-c(＝s)n(c1-6烷基)2、c(＝s)nh(c1-6烷基)、c(＝s)nh2、-c(＝o)s(c1-6烷基)、-c(＝s)sc1-6烷基、-sc(＝s)sc1-6烷基、-p(＝o)2(c1-6烷基)、-p(＝o)(c1-6烷基)2、-op(＝o)(c1-6烷基)2、-op(＝o)(oc1-6烷基)2、c1-6烷基、c1-6全卤代烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c3-10碳环基、c6-10芳基、3-10元杂环基、5-10元杂芳基；或两个偕位rgg取代基可连接以形成＝o或＝s；其中x为抗衡离子。“抗衡离子”或“阴离子抗衡离子”为与阳离子季氨基相缔合以保持电中性的带负电荷的基团。示例性的抗衡离子包括卤素离子(如f–、cl–、br–、i–)、no3–、clo4–、oh–、h2po4–、hso4–、so4–2、磺酸根离子(如甲磺酸根、三氟甲磺酸根、对甲苯磺酸根、苯磺酸根、10–樟脑磺酸根、萘–2–磺酸根、萘–1–磺酸–5–磺酸根、乙烷–1–磺酸–2–磺酸根等)和羧酸根离子(如醋酸根、乙酸根、丙酸根、苯甲酸根、甘油酸根、乳酸根、酒石酸根、羟乙酸根等)。"卤代"或"卤素"是指氟(氟代、-f)、氯(氯代、-ci)、溴(溴代、-br)、或碘(碘代、-i)。只要化合价允许，氮原子可为取代或未取代的，且包括伯氮、仲氮、叔氮和季氮原子。示例性的氮原子取代基包括但不限于，氢、-oh、-oraa、-n(rcc)2、-cn、-c(＝o)raa、-c(＝o)n(rcc)2、-co2raa、-so2raa、-c(＝nrbb)raa、-c(＝nrcc)oraa、-c(＝nrcc)n(rcc)2、-so2n(rcc)2、-so2rcc、-so2orcc、-soraa、-c(＝s)n(rcc)2、-c(＝o)srcc、-c(＝s)srcc、-p(＝o)2raa、-p(＝o)(raa)2、-p(＝o)2n(rcc)2、-p(＝o)(nrcc)2、c1-10烷基、c1-10全卤代烷基、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基，或连接至氮原子的两个rcc基团连接以形成3-14元杂环基或5-14元杂芳基环，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个rdd基团，且其中raa、rbb、rcc和rdd如上定义。在某些实施方案中，氮原子上存在的取代基为氮保护基(也称为氨基保护基)。氮保护基包括，但不限于、-oh、-oraa、-n(rcc)2、-c(＝o)raa、-c(＝o)n(rcc)2、-co2raa、-so2raa、-c(＝nrcc)raa、-c(＝nrcc)oraa、-c(＝nrcc)n(rcc)2、-so2n(rcc)2、-so2rcc、-so2orcc、-soraa、-c(＝s)n(rcc)2、-c(＝o)srcc、-c(＝s)srcc、c1-10烷基{例如、芳烷基、杂芳烷基)、c2-10烯基、c2-10炔基、c3-10碳环基、3-14元杂环基、c6-14芳基和5-14元杂芳基基团，其中各个烷基、烯基、炔基、碳环基、杂环基、芳烷基、芳基和杂芳基独立地取代有0、1、2、3、4或5个r基团，且其中raa、rbb、rcc和rdd如本文所定义。氮保护基是本领域众所周知的且包括protectinggroupsinorganicsynthesis,t.w.greeneandp.g.m.wuts,第3版,johnwiley&sons,1999中所述的那些，在此引入作为参考。酰胺氮保护基(例如、-c(＝o)raa)包括，但不限于，甲酰胺、乙酰胺、氯乙酰胺、三氯乙酰胺、三氟乙酰胺、苯基乙酰胺、3-苯基丙酰胺、吡啶酰胺、3-吡啶基甲酰胺、n-苯甲酰基苯基丙氨酰基衍生物、苯甲酰胺、对苯基苯甲酰胺、邻硝基苯基乙酰胺、邻硝基苯氧基乙酰胺、乙酰乙酰胺、(n'-二硫基苄基氧基酰基氨基)乙酰胺、3-{对-羟基苯基)丙酰胺、3-(邻-硝基苯基)丙酰胺、2-甲基-2-(邻硝基苯氧基)丙酰胺、2-甲基-2-(邻-苯偶氮基苯氧基)丙酰胺、4-氯丁酰胺、3-甲基-3-硝基丁酰胺、邻-硝基肉桂酰胺、n-乙酰基甲硫氨酸、邻硝基苯甲酰胺、和邻-(苯甲酰基氧基甲基)苯甲酰胺。氨基甲酸酯氮保护基(例如、-c(＝o)oraa)包括，但不限于，氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯、氨基甲酸9–芴基甲酯(fmoc)、氨基甲酸9–(2–磺基)芴基甲酯、氨基甲酸9–(2,7-二溴)芴基甲酯、氨基甲酸2,7-二–叔丁基–[9–(10,10-二氧–10,10,10,10–四氢噻吨基)]甲酯(dbd–tmoc)、氨基甲酸4–甲氧基苯甲酰甲酯(phenoc)、氨基甲酸2,2,2-三氯乙酯(troc)、氨基甲酸2-三甲基甲硅烷基乙酯(teoc)、氨基甲酸2–苯基乙酯(hz)、氨基甲酸1–(1–金刚烷基)–1–甲基乙酯(adpoc)、氨基甲酸1,1-二甲基–2–卤代乙酯、氨基甲酸1,1-二甲基–2,2-二溴乙酯(db–t–boc)、氨基甲酸1,1-二甲基–2,2,2-三氯乙酯(tcboc)、氨基甲酸1–甲基–1–(4–联苯基)乙酯(bpoc)、氨基甲酸1–(3,5-二–叔丁基苯基)–1–甲基乙酯(t–bumeoc)、氨基甲酸2–(2’–和4’–吡啶基)乙酯(pyoc)、氨基甲酸2–(n,n-二环己基甲酰胺基)乙酯、氨基甲酸叔丁酯(boc)、氨基甲酸1–金刚烷基酯(adoc)、氨基甲酸乙烯酯(voc)、氨基甲酸烯丙酯(alloc)、氨基甲酸1–异丙基烯丙酯(ipaoc)、氨基甲酸肉桂酯(coc)、氨基甲酸4–硝基肉桂酯(noc)、氨基甲酸8–喹啉基酯、氨基甲酸n–羟基哌啶基酯、烷基二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸苄酯(cbz)、氨基甲酸对-甲氧基苄酯(moz)、氨基甲酸对-硝基苄酯、氨基甲酸对-溴苄酯、氨基甲酸对-氯苄酯、氨基甲酸2,4-二氯苄酯、氨基甲酸4–甲基亚硫酰基苄酯(msz)、氨基甲酸9–蒽基甲酯、氨基甲酸二苯基甲酯、氨基甲酸2–甲基硫代乙酯、氨基甲酸2–甲基磺酰基乙酯、氨基甲酸2–(对-甲苯磺酰基)乙酯、氨基甲酸[2–(1,3-二硫杂环己基)]甲酯(dmoc)、氨基甲酸4–甲基硫代苯酯(mtpc)、氨基甲酸2,4-二甲基硫代苯酯(bmpc)、氨基甲酸2–磷基乙酯(peoc)、氨基甲酸2-三苯基磷基异丙酯(ppoc)、氨基甲酸1,1-二甲基–2–氰基乙酯、氨基甲酸间-氯–对-酰氧基苄酯、氨基甲酸对-(二羟基硼基)苄酯、氨基甲酸5–苯并异唑基甲酯、氨基甲酸2–(三氟甲基)–6–色酮基甲酯(tcroc)、氨基甲酸间-硝基苯酯、氨基甲酸3,5-二甲氧基苄酯、氨基甲酸邻-硝基苄酯、氨基甲酸3,4-二甲氧基–6–硝基苄酯、氨基甲酸苯基(邻-硝基苯基)甲酯、氨基甲酸叔戊酯、硫代氨基甲酸s–苄酯、氨基甲酸对-氰基苄酯、氨基甲酸环丁酯、氨基甲酸环己酯、氨基甲酸环戊酯、氨基甲酸环丙基甲酯、氨基甲酸对-癸氧基苄酯、氨基甲酸2,2-二甲氧基酰基乙烯酯、氨基甲酸邻-(n,n-二甲基甲酰胺基)苄酯、氨基甲酸1,1-二甲基–3–(n,n-二甲基甲酰胺基)丙酯、氨基甲酸1,1-二甲基丙炔酯、氨基甲酸二(2–吡啶基)甲酯、氨基甲酸2–呋喃基甲酯、氨基甲酸2–碘乙酯、氨基甲酸异冰片酯、氨基甲酸异丁酯、氨基甲酸异烟碱酯、氨基甲酸对-(对’–甲氧基苯基偶氮)苄酯、氨基甲酸1–甲基环丁酯、氨基甲酸1–甲基环己酯、氨基甲酸1–甲基–1–环丙基甲酯、氨基甲酸1–甲基–1–(3,5-二甲氧基苯基)乙酯、氨基甲酸1–甲基–1–(对-苯基偶氮苯基)乙酯、氨基甲酸1–甲基–1–苯基乙酯、氨基甲酸1–甲基–1–(4–吡啶基)乙酯、氨基甲酸苯酯、氨基甲酸对-(苯基)苄酯、氨基甲酸2,4,6-三–叔丁基苯酯、氨基甲酸4–(三甲基铵)苄酯和氨基甲酸2,4,6-三甲基苄酯。磺酰胺氮保护基(例如、-s(＝o)2raa)包括，但不限于，对甲苯磺酰胺(ts)、苯磺酰胺、2,3,6,-三甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(mtr)、2,4,6-三甲氧基苯磺酰胺(mtb)、2,6-二甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(pme)、2,3,5,6-四甲基-4-甲氧基苯磺酰胺(mte)、4-甲氧基苯磺酰胺(mbs)、2,4,6-三甲基苯磺酰胺(mts)、2,6-二甲氧基-4-甲基苯磺酰胺(imds)、2,2,5,7,8-五甲基色满-6-磺酰胺(pmc)、甲磺酰胺(ms)、β-三甲基甲硅烷基乙烷磺酰胺(ses)、9-蒽磺酰胺、4-(4',8'-二甲氧基萘基甲基)苯磺酰胺(dnmbs)、苄基磺酰胺、三氟甲基磺酰胺和苯甲酰甲基磺酰胺。其它氮保护基包括，但不限于，吩噻嗪基–(10)–酰基衍生物、n’–对-甲苯磺酰氨基酰基衍生物、n’–苯基氨基硫代酰基衍生物、n–苯甲酰基苯基丙氨酰基衍生物、n–乙酰基蛋氨酸衍生物、4,5-二苯基–3–唑啉–2–酮、n–邻苯二甲酰亚胺、n-二硫代琥珀酰亚胺(n–dithiasuccinimide，dts)、n–2,3-二苯基马来酰亚胺、n–2,5-二甲基吡咯、n–1,1,4,4–四甲基二甲硅烷基氮杂环戊烷加合物(stabase)、5–取代的1,3-二甲基–1,3,5-三氮杂环己烷–2–酮、5–取代的1,3-二苄基–1,3,5-三氮杂环己烷–2–酮、1–取代的3,5-二硝基–4–吡啶酮、n–甲基胺、n–烯丙基胺、n–[2–(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基胺(sem)、n–3–乙酰氧基丙基胺、n–(1–异丙基–4–硝基–2–氧代-3–吡咯啉–3–基)胺、季铵盐、n–苄基胺、n-二(4–甲氧基苯基)甲基胺、n–5-二苯并环庚基胺、n-三苯基甲基胺(tr)、n–[(4–甲氧基苯基)二苯基甲基]胺(mmtr)、n–9–苯基芴基胺(phf)、n–2,7-二氯–9–芴基亚甲基胺、n–二茂铁基甲基氨基(fcm)、n–2–吡啶甲基氨基n’–氧化物、n–1,1-二甲基硫代亚甲基胺、n–亚苄基胺、n–对-甲氧基亚苄基胺、n-二苯基亚甲基胺、n–[(2–吡啶基)基]亚甲基胺、n–(n’,n’-二甲基氨基亚甲基)胺、n,n’–亚异丙基二胺、n–对-硝基亚苄基胺、n–亚水杨基胺、n–5–氯亚水杨基胺、n–(5–氯–2–羟基苯基)苯基亚甲基胺、n–亚环己基胺、n–(5,5-二甲基–3–氧代-1–环己烯基)胺、n–硼烷衍生物、n-二苯基硼酸(borinicacid)衍生物、n–[苯基(五酰基铬-或钨)酰基]胺、n–铜螯合物、n–锌螯合物、n–硝基胺、n–亚硝基胺、胺n-氧化物、二苯基磷酰胺(dpp)、二甲基硫代磷酰胺(mpt)、二苯基硫代磷酰胺(ppt)、氨基磷酸二烷基酯、氨基磷酸二苄基酯、氨基磷酸二苯基酯、苯亚磺酰胺、邻-硝基苯亚磺酰胺(nps)、2,4-二硝基苯亚磺酰胺、五氯苯亚磺酰胺、2–硝基–4–甲氧基苯亚磺酰胺、三苯基甲基亚磺酰胺和3–硝基吡啶亚磺酰胺(npys)。在一些实施方案中，存在于氧原子上的取代基为氧保护基(也称作羟基保护基)。氧保护基包括，但不限于、-raa、-n(rbb)2、-c(＝o)sraa、-c(＝o)raa、-co2raa、-c(＝o)n(rbb)2、-c(＝nrbb)raa、-c(＝nrbb)oraa、-c(＝nrbb)n(rbb)2、-s(＝o)raa、-so2raa、-si(raa)3、-p(rcc)2、-p(rcc)3、-p(＝o)2raa、-p(＝o)(raa)2、-p(＝o)(orcc)2、-p(＝o)2n(rbb)2和-p(＝o)(nrbb)2，其中raa、rbb和rcc如本文所定义。氧保护基是本领域中公知的且包括在protectinggroupsinorganicsynthesis，t.w.greene和p.g.m.wuts，第3版，johnwiley&sons，1999中详细描述的那些，将该文献通过参考引入本文中。示例性的氧保护基包括，但不限于，甲基、甲氧基甲基(mom)、甲基硫甲基(mtm)、叔丁基硫甲基、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基(smom)、苄氧基甲基(bom)、对-甲氧基苄氧基甲基(pmbm)、(4–甲氧基苯氧基)甲基(p-aom)、愈创木酚甲基(gum)、叔丁氧基甲基、4–戊烯基氧基甲基(pom)、甲硅烷氧基甲基、2–甲氧基乙氧基甲基(mem)、2,2,2-三氯乙氧基甲基、双(2–氯乙氧基)甲基、2–(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(semor)、四氢吡喃基(thp)、3–溴四氢吡喃基、四氢噻喃基、1–甲氧基环己基、4–甲氧基四氢吡喃基(mthp)、4–甲氧基四氢噻喃基、4–甲氧基四氢噻喃基s,s-二氧化物、1–[(2–氯–4–甲基)苯基]–4–甲氧基哌啶–4-基(ctmp)、1,4-二烷–2-基、四氢呋喃基、四氢噻喃基(tetrahydrothiofuranyl)、2,3,3a,4,5,6,7,7a–八氢-7,8,8-三甲基–4,7–桥亚甲基苯并呋喃–2–基(2,3,3a,4,5,6,7,7a–octahydro–7,8,8–trimethyl–4,7–methanobenzofuran–2–yl)、1–乙氧基乙基、1–(2–氯乙氧基)乙基、1–甲基–1–甲氧基乙基、1–甲基–1–苄氧基乙基、1–甲基–1–苄氧基–2–氟乙基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、2–(苯基硒基)乙基(2–(phenylselenyl)ethyl)、叔丁基、烯丙基、对-氯苯基、对-甲氧基苯基、2,4-二硝基苯基、苄基(bn)、对-甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、邻-硝基苄基、对-硝基苄基、对-卤代苄基、2,6-二氯苄基、对-氰基苄基、对-苯基苄基、2–吡啶甲基、4–吡啶甲基、3–甲基–2–吡啶甲基n–氧桥(oxido)、二苯基甲基、p,p’-二硝基二苯甲基、5-二苯并环庚基、三苯基甲基、α–萘基二苯基甲基、对-甲氧基苯基二苯基甲基、二(对-甲氧基苯基)苯基甲基、三(对-甲氧基苯基)甲基、4–(4′–溴苯甲酰甲基氧基苯基)二苯基甲基、4,4′,4″-三(4,5-二氯苯二酰亚胺基苯基)甲基、4,4′,4″-三(乙酰丙酰基(levulinoyl)氧基苯基)甲基、4,4′,4″-三(苯甲酰氧基苯基)甲基、3–(咪唑–1-基)双(4′,4″-二甲氧基苯基)甲基、1,1–双(4–甲氧基苯基)–1′–芘基甲基、9–蒽基、9–(9–苯基)吨基、9–(9–苯基–10–氧代)蒽基、1,3–benzodisulfuran–2-基、苯并异噻唑基s,s-二氧化物、三甲基甲硅烷基(tms)、三乙基甲硅烷基(tes)、三异丙基甲硅烷基(tips)、二甲基异丙基甲硅烷基(ipdms)、二乙基异丙基甲硅烷基(deips)、二甲基己基(乙基，thexyl)甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基(tbdms)、叔丁基二苯基甲硅烷基(tbdps)、三苄基甲硅烷基、三–对-二甲苯基甲硅烷基、三苯基甲硅烷基、二苯基甲基甲硅烷基(dpms)、叔丁基甲氧基苯基甲硅烷基(tbmps)、甲酸酯、苯甲酰基甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、对-氯苯氧基乙酸酯、3–苯基丙酸酯、4–氧代戊酸酯(乙酰丙酸酯)、4,4–(亚乙基二硫代)戊酸酯(乙酰丙酰基二硫代乙缩醛)、新戊酸酯、金刚烷酸酯(adamantoate)、巴豆酸酯、4–甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、对-苯基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯(酸酯(mesitoate))、碳酸叔丁酯(boc)、碳酸烷基甲基酯、碳酸9–芴基甲酯(fmoc)、碳酸烷基乙酯、碳酸烷基2,2,2-三氯乙酯(troc)、碳酸2–(三甲基甲硅烷基)乙酯(tmsec)、碳酸2–(苯基磺酰基)乙酯(psec)、碳酸2–(三苯基磷基)乙酯(peoc)、碳酸烷基异丁酯、碳酸烷基乙烯酯、碳酸烷基烯丙酯、碳酸烷基对-硝基苯基酯、碳酸烷基苄酯、碳酸烷基对-甲氧基苄酯、碳酸烷基3,4-二甲氧基苄酯、碳酸烷基邻-硝基苄酯、碳酸烷基对-硝基苄酯、硫代碳酸烷基s–苄基酯、碳酸4–乙氧基–1–萘基酯、二硫代碳酸甲酯、2–碘苯甲酸酯、4–叠氮基丁酸酯、4–硝基–4–甲基戊酸酯、邻-(二溴甲基)苯甲酸酯、2–甲酰基苯磺酸酯、2–(甲基硫代甲氧基)乙基、4–(甲基硫代甲氧基)丁酸酯、2–(甲基硫代甲氧基甲基)苯甲酸酯、2,6-二氯–4–甲基苯氧基乙酸酯、2,6-二氯–4–(1,1,3,3–四甲基丁基)苯氧基乙酸酯、2,4–双(1,1-二甲基丙基)苯氧基乙酸酯、氯二苯基乙酸酯、异丁酸酯、单琥珀酸酯、(e)–2–甲基–2–丁烯酸酯、邻-(甲氧基酰基)苯甲酸酯、α–萘甲酸酯、硝酸酯、n,n,n’,n’–四甲基二氨基磷酸烷基酯、n–苯基氨基甲酸烷基酯、硼酸酯、二甲基硫膦基、2,4-二硝基苯基次磺酸烷基酯、硫酸酯、甲烷磺酸酯(甲磺酸酯)、苄磺酸酯和甲苯磺酸酯(ts)。在某些实施方案中，存在于硫原子上的取代基为硫保护基(也称作硫醇保护基)。硫保护基包括，但不限于、-raa、-n(rbb)2、-c(＝o)sraa、-c(＝o)raa、-co2raa、-c(＝o)n(rbb)2、-c(＝nrbb)raa、-c(＝nrbb)oraa、-c(＝nrbb)n(rbb)2、-s(＝o)raa、-so2raa、-si(raa)3-p(rcc)2、-p(rcc)3、-p(＝o)2raa、-p(＝o)(raa)2、-p(＝o)(orcc)2、-p(＝o)2n(rbb)2和-p(＝o)(nrbb)2，其中raa、rbb和rcc如本文所定义。硫保护基是本领域中公知的并且包括在protectinggroupsinorganicsynthesis，t.w.greene和p.g.m.wuts，第3版，johnwiley&sons，1999中详细描述的那些，将该文献通过参考引入本文中。如本文所用，“离去基团”或“lg”是本领域中理解的术语，指在异裂键裂解时与一对电子分离的分子片段，其中分子片段是阴离子或中性分子。参见，例如，smith，marchadvancedorganicchemistry第6版(501-502)。合适的离去基团的实例包括但不限于卤素(例如氯、溴或碘)、烷氧基羰基氧基、芳基氧基羰基氧基、烷烃磺酰基氧基、芳烃磺酰基氧基、烷基-羰基氧基(例如、乙酰氧基)、芳基羰基氧基、芳基氧基、甲氧基、n,o-二甲基羟基氨基、pixyl、卤代甲酸酯、-no2、三烷基铵和芳基碘鎓盐。在一些实施方案中，离去基团是磺酸酯。在一些实施方案中，磺酸酯包括式-oso2rlg1，其中rlg1选自任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的杂烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳烷基和任选取代的杂芳基烷基。在一些实施方案中，rlgl为取代或未取代的c1-c6烷基。在一些实施方案中，rlgl为甲基。在一些实施方案，rlgl为取代或未取代的芳基。在一些实施方案中，rlgl为取代的或未取代的苯基。在一些实施方案中，rlgl为：在一些情况下，离去基团为甲苯磺酸酯(甲苯磺酸酯，ts)，甲烷磺酸酯(甲磺酸酯，ms)，对溴苯磺酰基(对溴苯磺酸酯，bs)，或三氟甲烷磺酸酯(三氟甲磺酸酯，tf)。在一些情况下，离去基团为对溴苯磺酸酯(对溴苯磺酰基)。在一些情况下，离去基团为硝基苯磺酸基(2-硝基苯磺酰基)。在一些实施方案中，所述离去基团为含磺酸酯的基团。在一些实施方案中，所述离去基团为甲苯磺酸酯基团。离去基团也可为氧化膦(例如，mitsunobu反应中形成)或内部离去基团如环氧化物或环状硫酸酯。“药学上可接受的盐”是指那些在合理的医学判断范围内适用于与人和其它动物的组织接触而没有过多毒性、刺激、过敏反应等，且与合理的利益/风险比相称的盐。药学上可接受的盐是本领域熟知的。例如，berge等人在j.pharmaceuticalsciences(1977)66:1–19中详细描述了药学上可接受的盐。本发明化合物的药学上可接受的盐包括源自合适的无机和有机酸和碱的那些。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)形成的或与有机酸(例如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)或者通过使用本领域中所用的方法(例如离子交换)形成的氨基的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2–羟基–乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2–萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3–苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。源自合适的碱的盐包括碱金属、碱土金属、铵和n+(c1–4烷基)4盐。代表性的碱或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。在适当时，其他药学上可接受的盐包括季铵盐。本发明提供ii型prmt抑制剂。在一个实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为式(iii)的化合物:或其药学上可接受的盐,其中表示单键或双键；r1为氢、rz或-c(o)rz，其中rz为任选取代的c1-6烷基；l为-n(r)c(o)-、-c(o)n(r)-、-n(r)c(o)n(r)-、-n(r)c(o)o-、或-oc(o)n(r)-；各个r独立地为氢或任选取代的c1-6脂族基团；ar为具有0-4个独立选自氮、氧和硫的杂原子的单环或双环芳环，其中ar取代有0、1、2、3、4或5个ry基团，只要化合价允许；各个ry独立地选自卤素、-cn、-no2、任选取代的脂族基团、任选取代的碳环基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的杂芳基、-ora、-n(rb)2、-sra、-c(＝o)ra、-c(o)ora、-c(o)sra、-c(o)n(rb)2、-c(o)n(rb)n(rb)2、-oc(o)ra、-oc(o)n(rb)2、-nrbc(o)ra、-nrbc(o)n(rb)2、-nrbc(o)n(rb)n(rb)2、-nrbc(o)ora、-sc(o)ra、-c(＝nrb)ra、-c(＝nnrb)ra、-c(＝nora)ra、-c(＝nrb)n(rb)2、-nrbc(＝nrb)rb、-c(＝s)ra、-c(＝s)n(rb)2、-nrbc(＝s)ra、-s(o)ra、-os(o)2ra、-so2ra、-nrbso2ra或-so2n(rb)2；各个ra独立地选自氢、任选取代的脂族基团、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；各个rb独立地选自氢、任选取代的脂族基团、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基，或两个rb基团与介于它们之间原子一起形成任选取代的杂环；r5、r6、r7和r8独立地为氢、卤素或任选取代的脂族基团；各个rx独立地选自卤素、-cn、任选取代的脂族基团、-or'和-n(r")2；r'为氢或任选取代的脂族基团；各个r"独立地为氢或任选取代的脂族基团，或两个r"与介于它们之间原子一起形成杂环；且n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，只要化合价允许。在一方面，l为-c(o)n(r)-。在一方面，r1为氢。在一方面，n为0。在一个实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为式(iv)的化合物:或其药学上可接受的盐。在一方面，至少一个ry为–nhrb。在一方面，rb为任选取代的环烷基。在一个实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为式(vii)的化合物:或其药学上可接受的盐。在一方面，l为-c(o)n(r)-。在一方面，r1为氢。在一方面，n为0。在一个实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为式(viii)的化合物:或其药学上可接受的盐。在一方面，l为-c(o)n(r)-。在一方面，r1为氢。在一方面，n为0。在一个实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为式(ix)的化合物:或其药学上可接受的盐。在一方面，r1为氢。在一方面，n为0。在一个实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为化合物b：或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为式(x)的化合物:或其药学上可接受的盐。在一方面，ry为–nhrb。在一方面，rb为任选取代的杂环基。在某些实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为式(xi)的化合物:或其药学上可接受的盐，其中x为–c(rxc)2-，–o-、-s-、或-nrxn-，其中rxc的每种情况独立地为氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、或任选取代的杂芳基；rxn独立地为氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、-c(＝o)rxa，或氮保护基；rxa为任选取代的烷基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、或任选取代的杂芳基。在一个实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为化合物c：或其药学上可接受的盐。化合物c和制备化合物c的方法公开于pct/us2013/077235，至少在141页(化合物208)和291页第[00464]段至第294页第[00469]段。在另一实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为化合物e:或其药学上可接受的盐。在另一实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为化合物f:或其药学上可接受的盐。ii型prmt抑制剂进一步公开于pct/us2013/077235和pct/us2015/043679，将其引入参考。示例性ii型prmt抑制剂公开于pct/us2013/077235的表1a、表1b、表1c、表1d、表1e、表1f和表1g，制备ii型prmt抑制剂的方法至少描述于pct/us2013/077235的第239页第[00359]段至第301页第[00485]段。ii型prmt抑制剂或prmt5抑制剂的其它非限制性实例公开于以下公开的专利申请wo2011/079236、wo2014/100695、wo2014/100716、wo2014/100730、wo2014/100764和wo2014/100734、和美国临时申请号62/017,097和62/017,055。这些专利申请的通式和具体化合物在此引入作为参考且可如本文所述用于治疗癌症。在一些实施方案中，所述ii型prmt抑制剂为核酸(例如，sirna)。对prmt5的sirnas描述于例如molcancerres.2009apr；7(4)：557-69，和biochemj.2012sep1；446(2):235-41。“抗原结合蛋白(abp)”是指结合抗原的蛋白质，包括以与抗体相似的方式起作用的抗体或工程化分子。此类供选抗体形式包括三链抗体、四链抗体、微型抗体和微抗体。还包括替代性支架，其中根据本发明的任何分子的一个或多个cdr可以排列在合适的非免疫球蛋白蛋白质支架或骨架上，例如亲和体、spa支架、ldl受体a类结构域、avimer(参见，例如，美国专利申请公开号2005/0053973、2005/0089932、2005/0164301)或egf结构域。abp还包括此类抗体或其他分子的抗原结合片段。此外，abp可以包含本发明的vh区，当与适当的轻链配对时，其成形为全长抗体、(fab’)2片段、fab片段、双特异性或双互补位(biparatopic)分子或其等同物(如scfv，双链抗体、三链抗体或四链抗体、tandabs，等)。abp可包含抗体，其为igg1、igg2、igg3或igg4；或igm；iga、ige或igd或其修饰变体。可以相应地选择抗体重链的恒定结构域。轻链恒定域可以是κ或λ恒定域。abp也可以是wo86/01533中所述类型的嵌合抗体，其包含抗原结合区和非免疫球蛋白区。术语“abp”、“抗原结合蛋白”和“结合蛋白”在本文中可互换使用。蛋白质程序性死亡受体1(pd-1)是cd28受体家族的抑制成员，其还包括cd28、ctla-4、icos和btla。pd-1在活化的b细胞、t细胞和骨髓细胞上表达(agata等人，同上；okazaki等人(2002)curr.opin.immunol14:391779-82；bennett等人(2003)jimmunol170:711-8)。该家族的初始成员cd28和icos是通过添加单克隆抗体后增强t细胞增殖的功能性作用而发现的(hutloff等人(1999)nature397:263-266；hansen等人(1980)immunogenics10:247-260)。通过筛选凋亡细胞中的差异表达来发现pd-1(ishida等人(1992)emboj11:3887-95)。该家族的其他成员，ctla-4和btla，通过分别筛选细胞毒性t淋巴细胞和th1细胞中的差异表达来发现。cd28、icos和ctla-4都具有未配对的半胱氨酸残基，允许同源二聚化。相反，暗示pd-1作为单体存在，缺乏其他cd28家族成员中未配对的半胱氨酸残基特征。pd-1抗体和用于治疗疾病的方法描述于美国专利号：us7,595,048；us8,168,179；us8,728,474；us7,722,868；us8,008,449；us7,488,802；us7,521,051；us8,088,905；us8,168,757；us8,354,509；和美国公开号us20110171220；us20110171215；和us20110271358。ctla-4和pd-1抗体的组合描述于美国专利号9,084,776中。如本文所用，“pd-1拮抗剂”是指阻断癌细胞上表达的pd-l1与免疫细胞(t细胞、b细胞或nkt细胞)上表达的pd-1结合的任何化学化合物或生物分子，并且优选还阻断癌细胞上表达的pd-l2与免疫细胞表达的pd-1的结合。pd-1及其配体的替代名称或同义词包括：对于pd-1的pdcd1、pd1、cd279和sleb2；对于pd-l1的pdcd1l1、pdl1、b7h1、b7-4、cd274和b7-h；和对于pd-l2的pdcd1l2、pdl2、b7-dc、btdc和cd273。人pd-1氨基酸序列可以在ncbi基因座号(locusno.)：np_005009中找到。人pd-l1和pd-l2氨基酸序列可分别在ncbi基因座号：np_054862和np_079515中找到。可用于本发明任何方面的pd-1拮抗剂包括单克隆抗体(mab)或其抗原结合片段，其特异性结合pd-1或pd-l1，并且优选特异性结合人pd-1或人pd-l1。mab可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自igg1、igg2、igg3和igg4恒定区，并且在优选的实施方案中，人恒定区是igg1或igg4恒定区。在一些实施方案中，抗原结合片段选自fab、fab'-sh、f(ab')2、scfv和fv片段。结合人pd-1并且可用于本发明的各个方面和实施方案的mab的实例描述于美国专利号8,552,154；美国专利号8,354,509；美国专利号8,168,757；美国专利号8,008,449；美国专利号7,521,051；美国专利号7,488,802；wo2004072286；wo2004056875；和wo2004004771。可用于本发明任何方面和实施方案的其他pd-1拮抗剂包括特异性结合pd-1的免疫粘附素，并且优选特异性结合人pd-1，例如含有细胞外或pd-l1或pd-l2的pd-1结合部分的融合蛋白，其与免疫球蛋白分子的恒定区如fc区融合。在wo2010027827和wo2011066342中描述了特异性结合pd-1的免疫粘附素分子的实例。在本发明的治疗方法、药物和用途中用作pd-1拮抗剂的特异性融合蛋白包括amp-224(也称为b7-dcig)，其是pd-l2-fc融合蛋白并且与人pd-1结合。纳武单抗是一种人源化单克隆抗pd-1抗体，以商购。纳武单抗适用于治疗一些不可切除或转移性黑素瘤。纳武单抗通过其配体pd-l1和pd-l2结合并阻断pd-1(ig超家族跨膜蛋白)的活化，导致t细胞的活化和针对肿瘤细胞或病原体的细胞介导的免疫应答。活化的pd-1通过抑制p13k/akt途径激活来负调节t细胞活化和效应功能。纳武单抗的其他名称包括：bms-936558、mdx-1106和ono-4538。纳武单抗的氨基酸序列以及使用和制备方法公开于美国专利us8,008,449中。派姆单抗为人源化单克隆抗pd-1抗体，以商购。派姆单抗适用于治疗一些不可切除或转移性黑素瘤。派姆单抗的氨基酸序列和使用方法公开于美国专利号8,168,757。pd-l1是b7家族成员，其在许多细胞类型上表达，包括apc和活化的t细胞(yamazaki等人(2002)j.immunol.169:5538)。pd-l1与pd-1和b7-1结合。通过pd-l1结合t细胞表达的b7-1和通过b7-1结合t细胞表达的pd-l1都导致t细胞抑制(butte等人(2007)immunity27:111)。还有证据表明，与其他b7家族成员一样，pd-l1也可以向t细胞提供共刺激信号(subudhi等人(2004)j.clin.invest.113:694；tamura等人(2001)blood97:1809)。作为pd-1的配体的pd-l1(人pd-l1cdna由embl/genbank登录号af233516所示的碱基序列组成，小鼠pd-l1cdna由nm.sub.--021893所示的碱基序列组成)在所谓的抗原呈递细胞如活化的单核细胞和树突细胞中表达(journalofexperimentalmedicine(2000)，第19卷，第7期，第1027-1034页)。这些细胞呈递相互作用分子，其向t淋巴细胞诱导多种免疫诱导信号，并且pd-l1是这些分子中的一种，其通过pd-1诱导抑制信号。已经揭示pd-l1配体刺激抑制了表达pd-1的t淋巴细胞的活化(细胞增殖且诱导各种细胞因子产生)。pd-l1表达不仅在免疫活性细胞中得到证实，而且在某种肿瘤细胞系中得到证实(来自单核细胞白血病的细胞系，来自肥大细胞的细胞系，来自肝癌的细胞系，来自成神经细胞的细胞系，和来自乳腺癌的细胞系)(natureimmunology(2001)，第2卷，第3期，第261-267页)。抗pd-l1抗体及其制备方法是本领域已知的。这种针对pd-l1的抗体可以是多克隆的或单克隆的，和/或重组的，和/或人源化的。pd-l1抗体作为用于治疗癌症的免疫调节剂正在开发中。示例性pd-l1抗体公开于美国专利号9,212,224；美国专利号8,779,108；美国专利no8,552,154；美国专利号8,383,796；美国专利号8,217,149；美国专利公开号20110280877；wo2013079174；和wo2013019906。pd-l1(也称为cd274或b7-h1)的其它示例性抗体和使用方法公开于美国专利号8,168,179；美国专利号7,943,743；美国专利号7,595,048；wo2014055897；wo2013019906；和wo2010077634。可用作本发明的治疗方法、药物和用途中的pd-1拮抗剂的特异性抗人pd-l1单克隆抗体包括mpdl3280a、bms-936559、medi4736、msb0010718c。阿特珠单抗为完全人源化单克隆抗pd-l1抗体，以tecentriqtm商购。阿特珠单抗适用于治疗一些局部晚期或转移性尿路上皮癌。阿特珠单抗阻断pd-l1与pd-1和cd80的相互作用。cd134，也称为ox40，是受体的tnfr-超家族的成员，与cd28不同，其在静息的幼稚t细胞上不组成型表达。ox40是次级共刺激分子，在激活后24至72小时表达；其配体ox40l也不在静息抗原呈递细胞上表达，而是在其活化后表达。ox40的表达依赖于t细胞的完全活化；没有cd28，ox40的表达被延迟并且水平降低至四分之一。ox40/ox40-配体(ox40受体)/(ox40l)是一对对t细胞增殖、存活、细胞因子产生和记忆细胞生成至关重要的共刺激分子。早期体外实验证明，通过ox40在cd4+t细胞上的信号转导导致th2，但不导致th1发育。这些结果得到了体内研究的支持，这些研究表明阻断ox40/ox40l相互作用阻止了th2介导的过敏性免疫应答的诱导和维持。然而，阻断ox40/ox40l相互作用可改善或预防th1介导的疾病。此外，可溶性ox40l的施用或ox40l基因转移到肿瘤中显示出强烈增强小鼠的抗肿瘤免疫力。最近的研究还表明，ox40/ox40l可能在促进cd8t细胞介导的免疫反应中发挥作用。如本文所讨论的，ox40信号转导阻断cd4+cd25+天然存在的调节性t细胞的抑制功能，并且ox40/ox40l对在外周免疫相对于耐受性的全局调节中起关键作用。ox-40抗体、ox-40融合蛋白及其使用方法公开于美国专利号：us7,504,101；us7,758,852；us7,858,765；us7,550,140；us7,960,515；和us9,006,399和国际公开：wo2003082919；wo2003068819；wo2006063067；wo2007084559；wo2008051424；wo2012027328；和wo2013028231。本文中，本发明的抗原结合蛋白(abp)或抗ox40抗原结合蛋白是结合ox40的蛋白，并且在一些实施方案中，进行以下一种或多种：通过ox40调节信号转导，调节ox40的功能，激动ox40信号转导，刺激ox40功能，或共刺激ox40信号转导。美国专利9,006,399的实施例1公开了ox40结合试验。本领域技术人员将容易地认识到建立这些功能的各种其他熟知的测定法。在一个实施方案中，所述ox40抗原结合蛋白为wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日中公开的蛋白。在另一实施方案中，所述抗原结合蛋白包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日中公开的抗体的cdr，或与公开的cdr序列具有90％同一性的cdr。在另一实施方案中所述抗原结合蛋白包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日中公开的抗体的vh、vl或这二者，或与公开的vh或vl序列具有90％同一性的vh或vl。在另一实施方案中，所述ox40抗原结合蛋白公开于wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日。在另一实施方案中，所述抗原结合蛋白包含wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日中公开的抗体的cdr，或与公开的cdr序列具有90％同一性的cdr。在另一实施方案中，所述抗原结合蛋白包含wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日中公开的抗体的vh、vl或这二者，或与公开的vh或vl序列具有90％同一性的vh或vl。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含本文图30至41所示的cdr或vh或vl序列或与其具有90％同一性的序列中的一种或多种。在一个实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含以下cdr任一种或其组合:在一些实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区。适当地，本发明的ox40结合蛋白可包含与seqidno:5具有约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％序列同一性的重链可变区。人源化重链(vh)可变区:在本发明一个实施方案中，所述ox40abp或抗体在具有如seqidno:11所示的氨基酸序列的轻链可变区包含cdrl1(seqidno:7)、cdrl2(seqidno:8)和cdrl3(seqidno:9)。在一些实施方案中，本发明的ox40结合蛋白包含seqidno:11所述的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的ox40结合蛋白包含seqidno:5的重链可变区和seqidno:11的轻链可变区。人源化轻链(vl)可变区在一些实施方案中，所述本发明的ox40结合蛋白包含与如seqidno:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变区。适当地，本发明的ox40结合蛋白可包含与seqidno:11具有约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％序列同一性的轻链可变区。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含以下cdr任一种或其组合:在一些实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含具有与seqidno:17至少90％序列同一性的重链可变区。适当地，本发明的ox40结合蛋白可包含与seqidno:17具有约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％序列同一性的重链可变区。人源化重链(vh)可变区:在本发明一个实施方案中所述ox40abp或抗体在具有seqidno:23所述的氨基酸序列的轻链可变区包含cdrl1(seqidno:19)、cdrl2(seqidno:20)和cdrl3(seqidno:21)。在一些实施方案中，本发明的ox40结合蛋白包含seqidno:23所述的轻链可变区。在一个实施方案中，本发明的ox40结合蛋白包含seqidno:17的重链可变区和seqidno:23的轻链可变区。人源化轻链(vl)可变区在一些实施方案中，所述本发明的ox40结合蛋白包含与seqidno:23所述的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的轻链可变区。适当地，本发明的ox40结合蛋白可包含与seqidno:23具有约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％序列同一性的轻链可变区。cdr或最小结合单元可以通过至少一个氨基酸取代、删除或添加来修饰，其中变体抗原结合蛋白基本上保留未修饰蛋白的生物学特征，例如包含seqidno：5和seqidno:11的抗体或包含seqidno：17和seqidno：23的抗体。应当理解，cdrh1、h2、h3、l1、l2、l3中的每一个可以以任何排列或组合单独修饰或与任何其他cdr组合修饰。在一个实施方案中，通过取代、删除或添加至多3个氨基酸(例如1或2个氨基酸，例如1个氨基酸)来修饰cdr。通常，修饰是取代，特别是保守取代，例如如下表1中所示。表1侧链成员疏水的met，ala，val，leu，ile中性亲水的cys，ser，thr酸性asp，glu碱性asn，gln，his，lys，arg影响链取向的残基gly，pro芳族trp，tyr，phe在一个实施方案中，本发明的abp或抗体包含106-222抗体的cdr，例如，如本发明图30-31所示，例如，具有如图30所公开的seqidno1、2和3的氨基酸序列的cdrh1、cdrh2和cdrh3，和例如分别具有seqidno7、8和9的序列的cdrl1、cdrl2和cdrl3。在一个实施方案中，本发明的abp或抗体包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日公开的106-222、hu106或hu106-222抗体的cdr。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含本发明图30-31所示的106-222抗体的vh和vl区，例如，具有seqidno:4的氨基酸序列的vh和如图31所示具有seqidno:10的氨基酸序列的vl。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体包含具有本发明图30中seqidno:5的氨基酸序列的vh，和具有本发明图31中seqidno:11的氨基酸序列的vl。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日公开的hu106-222抗体或106-222抗体或hu106抗体的vh和vl区。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体为106-222，hu106-222或hu106，例如，如wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日所公开。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体包含与该段落中的序列具有90％同一性的cdr或vh或vl或抗体序列。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含119-122抗体的cdr，例如，如本发明图34-35所示，例如，分别具有seqidno13、14和15的氨基酸序列的cdrh1、cdrh2和cdrh3。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日公开的119-122或hu119或hu119-222抗体的cdr。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含具有本发明图34中的seqidno:16的氨基酸序列的vh，和具有本发明图35中的seqidno:22的氨基酸序列的vl。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含具有seqidno:17的氨基酸序列的vh和具有seqidno:23的氨基酸序列的vl。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日公开的119-122或hu119或hu119-222抗体的vh和vl区。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体为119-222或hu119或hu119-222抗体，例如，如wo2012/027328(pct/us2011/048752)，国际申请日2011年8月23日所公开。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体包含与该段落中的序列具有90％同一性的cdr或vh或vl或抗体序列。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含119-43-1抗体的cdr，例如，如本发明图38-39所示。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日公开的119-43-1抗体的cdr。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含图38-41所示的119-43-1抗体的vh区之一和vl区之一。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日公开的119-43-1抗体的vh和vl区。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体为本发明图38-41公开的119-43-1或119-43-1嵌合体(chimeric)。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体如wo2013/028231(pct/us2012/024570)，国际申请日2012年2月9日公开。在其它实施方案中，该段落所述的abp或抗体的任一个是人源化的。在其它实施方案中，该段落所述的abp或抗体的任一个被设计为制备人源化抗体。在另一实施方案中，本发明的abp或抗体包含与该段落中的序列具有90％同一性的cdr或vh或vl或抗体序列。在另一实施方案中，本发明任何抗ox40abp或抗体的任何小鼠或嵌合序列被改造以制备人源化抗体。在一个实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含：(a)包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；(b)包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；(c)包含seqidno.3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；(d)包含seqidno.7的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；(e)包含seqidno.8的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和(f)包含seqidno.9的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含：(a)包含seqidno：13的氨基酸序列的重链可变区cdr1；(b)包含seqidno：14的氨基酸序列的重链可变区cdr2；(c)包含seqidno.15的氨基酸序列的重链可变区cdr3；(d)包含seqidno.19的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；(e)包含seqidno.20的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和(f)包含seqidno.21的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含：包含seqidno：1或13的氨基酸序列的重链可变区cdr1；包含seqidno：2或14的氨基酸序列的重链可变区cdr2；和/或包含seqidno：3或15的氨基酸序列的重链可变区cdr3，或与其具有90％同一性的重链可变区cdr。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含：包含seqidno：7或19的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；包含seqidno：8或20的氨基酸序列的轻链可变区cdr2和/或包含seqidno：9或21的氨基酸序列的轻链可变区cdr3，或与其具有90％同一性的重链可变区。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含：包含seqidno：10、11、22或23的氨基酸序列的轻链可变区(“vl”)，或与seqidno：10，11，22或23的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含含有seqidno：4、5、16和17的氨基酸序列，或与seqidno：4、5、16和17的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链可变区(“vh”)。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含seqidno:5的可变重链序列和seqidno：11的可变轻链序列，或与其具有90％同一性的序列。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含seqidno:17的可变重链序列和seqidno：23的可变轻链序列或与其具有90％同一性的序列。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含由seqidno：12或24的核酸序列或与seqidno：12或24的核苷酸序列具有至少90％同一性的核酸序列编码的可变轻链。在另一实施方案中，本发明的抗ox40abp或抗体包含seqidno：6或18的核酸序列或与seqidno：6或18的核苷酸序列具有至少90％同一性的核酸序列编码的可变重链。本文还提供单克隆抗体。在一个实施方案中，所述单克隆抗体包含含有seqidno：10或22的氨基酸序列或与seqidno：10或22的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的可变轻链。还提供单克隆抗体，其包含含有seqidno：4或16的氨基酸序列或与seqidno：4或16的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的可变重链。ctla-4是t细胞表面分子，其最初通过鼠细胞溶解性t细胞cdna文库的差异筛选来鉴定(brunet等人，nature328:267-270(1987))。ctla-4也是免疫球蛋白(ig)超家族的成员；ctla-4包含单个胞外ig结构域。已经在具有细胞毒活性的t细胞群中发现ctla-4转录物，表明ctla-4可能在细胞溶解反应中起作用(brunet等人，以上；brunet等人，immunol.rev.103-(21-36(1988))。研究人员报道了ctla-4(dariavach等人，eur.j.immunol.18:1901-1905(1988))的人类对应物基因的克隆和定位到同一染色体区域(2q33-34)作为cd28(lafage-pochitaloff等人，immunogenetics31:198-201(1990))。该人ctla-4dna与编码cd28蛋白的序列比较揭示了序列的显著同源性，在近膜和细胞质区域中具有最大程度的同源性(brunet等，1988，同上；dariavach等，1988，同上)。yervoy(伊匹单抗)是由bristolmyerssquibb销售的完全人ctla-4抗体。伊匹单抗的蛋白质结构和使用的方法描述于美国专利号6,984,720和7,605,238中。用于本发明的方法合适的抗ctla4抗体包括，但不限于，抗ctla4抗体、人抗ctla4抗体、小鼠抗ctla4抗体、哺乳动物抗ctla4抗体、人源化抗ctla4抗体、单克隆抗ctla4抗体、多克隆抗ctla4抗体、嵌和抗ctla4抗体、伊匹单抗、曲美目单抗、抗cd28抗体、抗ctla4adnectins、抗ctla4结构域抗体、单链抗ctla4片段、重链抗ctla4片段、轻链抗ctla4片段、激动共刺激途径的ctla4抑制剂、pct公开号wo2001/014424公开的抗体、pct公开号wo2004/035607公开的抗体、u.s.公开的申请号us2005/0201994公开的抗体、和授权欧洲专利号ep1212422b1公开的抗体。其它ctla-4抗体描述于u.s.pat.nos.5,811,097、5,855,887、6,051,227和6,984,720；pct公开号wo01/14424和wo00/37504；和u.s.公开号us2002/0039581和us2002/086014。可用于本发明方法的其它抗ctla-4抗体包括，例如，以下公开的那些：wo98/42752；u.s.pat.nos.6,682,736和6,207,156；hurwitz等人，proc.natl.acad.sci.usa，95(17):10067-10071(1998)；camacho等人，j.clin.oncology，22(145):abstractno.2505(2004)(抗体cp-675206)；mokyr等人，癌症res.，58:5301-5304(1998)，和u.s.pat.nos.5,977,318，6,682,736，7,109,003和7,132,281。如本文所用，“免疫调节剂”或“免疫调节试剂”是指包括影响免疫系统的单克隆抗体的任何物质。在一些实施方案中，免疫调节剂或免疫调节试剂上调免疫系统。免疫调节剂可用作抗肿瘤剂用于治疗癌症。例如，免疫调节剂包括但不限于抗pd-1抗体(opdivo/纳武单抗和keytruda/派姆单抗)、抗ctla-4抗体如伊匹单抗(yervoy)、和抗ox40抗体。如本发明所用，术语“激动剂”是指抗原结合蛋白，包括但不限于抗体，其在与共同信号转导受体接触时引起以下中的一种或多种：(1)刺激或活化icos受体；(2)增强、增加或促进、诱导或延长受体的活性、功能或存在；和/或(3)增强、增加、促进或诱导受体的表达。可以通过本领域已知的各种分析在体外测量激动剂活性，例如但不限于测量细胞信号转导、细胞增殖、免疫细胞活化标记、细胞因子产生。还可以通过测量替代终点(例如但不限于测量t细胞增殖或细胞因子产生)的各种分析在体内测量激动剂活性。如本文所用，术语“拮抗剂”是指抗原结合蛋白，包括但不限于抗体，其在与共信号受体接触时引起以下一种或多种：(1)通过其天然配体减弱、阻断或灭活受体和/或或阻断受体的活化，(2)减少、降低或缩短受体的活性、功能或存在和/或(3)减少、降低、消除受体的表达。拮抗剂活性可以通过本领域已知的各种测定在体外测量，例如但不限于测量细胞信号转导、细胞增殖、免疫细胞活化标记、细胞因子产生的增加或减少。拮抗剂活性还可以通过测量替代终点的各种测定在体内测量，例如但不限于t细胞增殖或细胞因子产生的测量。如本发明所用，术语“交叉竞争结合”是指将与本发明的任何试剂竞争结合至靶点的试剂如抗体。针对两种抗体之间的结合竞争可以通过本领域已知的各种方法测试，包括流式细胞测量术、mesoscalediscovery和elisa。结合可被直接测量，意味着可以将两种或更多种结合蛋白与共同信号转导受体接触，并且可以测量其中一种或每种蛋白的结合。或者，可以针对结合或天然配体来测试感兴趣的分子的结合，并彼此进行定量比较。术语“抗体”在本发明中就最广义来说是指具有免疫球蛋白样结构域(例如igg、igm、iga、igd或ige)的分子，并且包括单克隆、重组、多克隆、嵌合、人、人源化、多特异性的抗体包括双特异性抗体和异源缀合抗体；单个可变结构域(例如vh、vhh、vl、结构域抗体(dabtm))、抗原结合抗体片段、fab、f(ab')2、fv、二硫键连接的fv、单链fv、二硫键连接的scfv、双抗体、tandabstm等，以及上述任一种的修改版本(可选的“抗体”形式的综述参见，例如，holliger和hudson，naturebiotechnology，2005，vol23，no.9，1126-1136)。可选择的抗体形式包括可选择骨架，其中抗原结合蛋白的一个或多个cdr可以被排列在合适的非免疫球蛋白骨架或基本部分上，例如亲合体、spa骨架、ldl受体型a型结构域、avimer(参见，例如，美国专利申请公开号2005/0053973，2005/0089932，2005/0164301)或egf结构域。术语“结构域”是指折叠的蛋白质结构，其保留其独立于蛋白质的其余部分的三级结构。结构域一般是负责蛋白质的离散的功能性质，并且在许多情况下可以被添加、除去或转移到其他蛋白质，而不损失蛋白质和/或结构域的其余部分的功能。术语“单一可变域”是指包含抗体可变域特征序列的折叠多肽结构域。因此，其包括例如vh、vhh和vl的完整抗体可变域以及经修饰的抗体可变域(例如，其中一个或多个环已经被抗体可变域的非特征序列替代)，或已被截短或包含n-或c-末端延伸的抗体可变域，以及至少保留全长结构域的结合活性和特异性的可变域的折叠片段。单一可变域能够独立结合不同的可变区或可变域的抗原或表位。“域抗体”或“dabtm”可以被认为与“单一可变域”相同。单一可变域可为人的单一可变域，但也包括来自其他物种的单一可变域，如啮齿类铰口鲨和骆驼科vhhdabtm。骆驼科vhh是衍生自包括骆驼，美洲驼，羊驼，单峰骆驼和原驼的物种的免疫球蛋白单一可变域多肽，其产生天然缺乏轻链的重链抗体。这样的vhh结构域可以根据本领域可用的标准技术被人源化，并且这样的结构域被认为是“单一可变域”。如本发明所用，vh包括骆驼科vhh域。可以通过在非抗体蛋白骨架上布置一个或多个cdr来提供抗原结合片段。如本发明所用，“蛋白质骨架”包括但不限于免疫球蛋白(ig)骨架，例如可以是四链或二链抗体的igg骨架，或可仅包含抗体的fc区，或其可以包含来自抗体的一个或多个恒定区，其中该恒定区可以是人或灵长类来源，或者可以是人和灵长类动物恒定区的人工嵌合体。蛋白质骨架可以是ig骨架，例如igg或iga骨架。igg骨架可以包含抗体的一些或全部结构域(即，ch1、ch2、ch3、vh、vl)。抗原结合蛋白可以包含选自igg1、igg2、igg3、igg4或igg4pe的igg骨架。例如，骨架可以是igg1。骨架可以由抗体的fc区组成或包含抗体的fc区，或者是其一部分。亲和力是一个分子(例如本发明的抗原结合蛋白)与另一分子(例如其目标抗原)在单一结合位点的结合强度。可以通过平衡方法(例如酶联免疫吸附测定(elisa)或放射性免疫测定(ria))或动力学(例如biacoretm分析)来确定抗原结合蛋白与其靶标的结合亲和力。例如，实施例5中描述的biacoretm方法可用于测量结合亲和力。亲合力(avidity)是两个分子在多个位点彼此结合的强度的总和，例如，考虑到相互作用的价数。“分离”是指将该分子，例如抗原结合蛋白或核酸，从发现其的自然界环境中移出。例如，分子可以从与其一起正常存在于自然界中的物质中纯化出来。例如，样品中分子的质量可以是总质量的95％。如本发明所用术语“表达载体”，是指分离的核酸，其可用于将感兴趣的核酸引入细胞(如真核细胞或原核细胞)或无细胞表达系统中，其中感兴趣的核酸序列被表达为肽链，如蛋白质。这样的表达载体可以是例如包含感兴趣的核酸的粘粒、质粒、病毒序列、转座子和线性核酸。一旦将表达载体导入细胞或无细胞表达系统(例如网织红细胞裂解物)中，由感兴趣的核酸编码的蛋白质通过转录/翻译机制产生。本发明范围内的表达载体可为真核或原核表达提供必要的元件，并且包括病毒启动子驱动的载体，例如cmv启动子驱动的载体(例如pcdna3.1、pcep4及其衍生物)、杆状病毒表达载体，果蝇表达载体；以及由哺乳动物基因启动子，如人ig基因启动子驱动的表达载体。其他实例包括原核表达载体，例如t7启动子驱动的载体(例如pet41)、乳糖启动子驱动的载体和阿拉伯糖基因启动子驱动的载体。本领域普通技术人员将认识到许多其它合适的表达载体和表达系统。术语“重组宿主细胞”如本发明所用，是指包含感兴趣的核酸序列的细胞，所述核酸序列在将其引入细胞之前被分离。例如，感兴趣的核酸序列可以是表达载体，而细胞可以是原核的或真核的。示例性真核细胞是哺乳动物细胞，例如但不限于cos-1、cos-7、hek293、bhk21、cho、bsc-1、hepg2、653、sp2/0、ns0、293、hela、骨髓瘤细胞、淋巴瘤细胞或其衍生物。最优选地，真核细胞是hek293、ns0、sp2/0或cho细胞。大肠杆菌是示例性的原核细胞。根据本发明的重组t细胞可以通过转染、细胞融合、永生化或本领域熟知的其它方法产生。转染入细胞的感兴趣的核酸序列，例如表达载体，可以是染色体外的或被稳定整合到细胞染色体中。“嵌合抗体”是指一种工程化抗体，其含有衍生自供体抗体的天然存在的可变区(轻链和重链)，其与衍生自受体抗体的轻链和重链恒定区缔合。“人源化抗体”是指具有衍生自非人供体免疫球蛋白的cdr的工程化抗体类型，该分子的其它免疫球蛋白衍生部分衍生自一种或多种人免疫球蛋白。另外，可以改变框架支撑残基以保持结合亲和力(参见例如，queen等人，proc.natlacadsciusa,86:10029-10032(1989),hodgson等人，bio/technology,9:421(1991))。根据与供体抗体的核苷酸和氨基酸序列的同源性，可以由常规数据库中选择合适的人受体抗体，例如kabattm数据库、losalamos数据库和swissprotein数据库。特征在于与供体抗体的框架区同源(基于氨基酸)的人抗体可适于提供重链恒定区和/或重链可变框架区以用于插入供体cdr。可以类似的方式选择能够提供轻链恒定区或可变框架区的合适的受体抗体。应当注意，受体抗体的重链和轻链不需要来源于相同的受体抗体。现有技术描述了生产这种人源化抗体的几种方法-例如参见ep-a-0239400和ep-a-054951。术语“完全人抗体”包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区(如果存在)的抗体。本发明的人序列抗体可以包括不被人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变引入的突变，或通过体内体细胞突变引入的突变)。完全人抗体包含仅由最终人类来源的多核苷酸编码的氨基酸序列或与这些序列相同的氨基酸序列。如本发明所述，插入到转基因小鼠中产生的小鼠基因组中的抗体(由编码人免疫球蛋白的dna编码)是完全人抗体，因为它们由最终为人类来源的dna编码。在这种情况下，编码人免疫球蛋白的dna可以在小鼠内重排(以编码抗体)，并且也可能发生体细胞突变。由在小鼠中经历这种变化的人类来源的dna编码的抗体是本发明所指的完全人抗体。使用这样的转基因小鼠使得可以针对人抗原选择完全人抗体。如本领域所理解的，可以使用噬菌体展示技术制备完全人抗体，其中将人dna库插入噬菌体中以产生包含人种系dna序列的抗体。术语“供体抗体”是指将其可变区、cdr或其它功能片段或类似物的氨基酸序列贡献给第一免疫球蛋白配偶体的抗体。因此，供体提供了改变的免疫球蛋白编码区，并导致所表达改变的抗体，该表达改变的抗体具有供体抗体的抗原特异性和中和活性特征。术语“受体抗体”是指与供体抗体异源的抗体，其向第一免疫球蛋白配偶体贡献编码其重链和/或轻链框架区和/或其重链和/或轻链恒定区的全部(或任何部分)氨基酸序列。人抗体可以是受体抗体。本发明所用的术语“vh”和“vl”分别指抗原结合蛋白的重链可变区和轻链可变区。“cdr”被定义为抗原结合蛋白的互补决定区氨基酸序列。这些是免疫球蛋白重链和轻链的高可变区。在免疫球蛋白的可变部分中有三个重链cdr和三个轻链cdr(或cdr区)。因此，“cdr”，如本发明所用，是指全部三个重链cdr、全部三个轻链cdr、全部重链cdr和轻链cdr、或至少两个cdr。在本说明书中，可变域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基根据kabat编号惯例编号。类似地，实施例中使用的术语“cdr”、“cdrl1”、“cdrl2”、“cdrl3”、“cdrh1”、“cdrh2”、“cdrh3”遵循kabat编号惯例。有关更多信息，请参见kabat等人，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第五版，u.s.departmentofhealthandhumanservices,nationalinstitutesofhealth(1991)。对于本领域技术人员显而易见的是，在可变域序列和全长抗体序列中存在氨基酸残基的替代性编号惯例。也有cdr序列的替代编号惯例，例如在chothia等人(1989)nature342:877-883中列出的那些。抗体的结构和蛋白质折叠可意味着其他残基被认为是cdr序列的一部分，且为本领域技术人员所理解。本领域技术人员可获得的cdr序列的其他编号惯例包括“abm”(universityofbath)和“接触(contact)”(universitycollegelondon)方法。可使用kabat、chothia、abm和接触方法中的至少两种确定最小重叠区域以提供“最小结合单元”。最小结合单元可以是cdr的子部分。在一个实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含治疗有效量的ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和第二药物组合物，该第二药物组合物包含治疗有效量的免疫调节剂，其中所述免疫调节剂选自：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一方面，ii型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)抑制剂或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与如seqidno:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变重链序列和与如seqidno:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变轻链序列。在一方面，ii型prmt抑制剂为式iii、iv、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在另一方面，ii型prmt抑制剂为化合物b。在一方面，ii型prmt抑制剂为化合物c。在一个实施方案中，提供了ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供了ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供了ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在另一实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含治疗有效量的ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和第二药物组合物，该第二药物组合物包含治疗有效量的选自以下的免疫调节剂：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一方面，ii型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)抑制剂或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与如seqidno:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变重链序列和与如seqidno:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变轻链序列。在一方面，ii型prmt抑制剂为式iii、iv、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在另一方面，ii型prmt抑制剂为化合物b。在一方面，ii型prmt抑制剂为化合物c。在一个实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含治疗有效量的ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和第二药物组合物，该第二药物组合物包含治疗有效量的免疫调节剂，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供药物组合物，其包含治疗有效量的ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和第二药物组合物，该第二药物组合物包含治疗有效量的免疫调节剂，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一实施方案中，提供药物组合物，其包含治疗有效量的ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和第二药物组合物，该第二药物组合物包含治疗有效量的免疫调节剂，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，提供了在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，以及以下至少一种：药学上可接受的载体和药学上可接受的稀释剂，从而治疗人的癌症，其中所述免疫调节剂选自：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一方面，ii型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)抑制剂或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与如seqidno:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变重链序列和与如seqidno:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变轻链序列。在一方面，ii型prmt抑制剂为式iii、iv、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在另一方面，ii型prmt抑制剂为化合物b。在一方面，ii型prmt抑制剂为化合物c。在一方面，ii型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在另一方面，ii型prmt抑制剂口服给药。在一个实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用化合物c和激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段的组合。在另一实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用化合物c和抗ox40抗体或其抗原结合片段的组合，该抗ox40抗体或其抗原结合片段包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一实施方案中，提供在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用化合物c和抗ox40抗体或其抗原结合片段的组合，该抗ox40抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在另一实施方案中，提供了在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂的药物组合物和包含选自以下的免疫调节剂的药物组合物：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，从而治疗人的癌症。在一方面，ii型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)抑制剂或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与如seqidno:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变重链序列和与如seqidno:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变轻链序列。在一方面，ii型prmt抑制剂为式iii、iv、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在另一方面，ii型prmt抑制剂为化合物b。在一方面，ii型prmt抑制剂为化合物c。在一方面，ii型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，ii型prmt抑制剂口服给药。在一个实施方案中，提供了在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含化合物c的药物组合物和包含激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段的药物组合物。在另一实施方案中，提供了在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含化合物c的药物组合物和包含抗ox40抗体或其抗原结合片段的药物组合物，所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一实施方案中，提供了在需要的人中治疗癌症的方法，所述方法包括向人施用治疗有效量的包含化合物c的药物组合物和包含抗ox40抗体或其抗原结合片段的第二药物组合物，所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在另一实施方案中，本发明提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合在制备药物中的用途，其中所述免疫调节剂选自：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一实施方案中，本发明提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合用于治疗癌症的用途，其中所述免疫调节剂选自抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一方面，ii型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)抑制剂或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)抑制剂。在一方面，ii型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)抑制剂或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与如seqidno:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变重链序列和与如seqidno:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变轻链序列。在一方面，ii型prmt抑制剂为式iii、iv、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在另一方面，ii型prmt抑制剂为化合物b。在一方面，ii型prmt抑制剂为化合物c。在一方面，ii型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，ii型prmt抑制剂口服给药。在一个实施方案中，提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合在制备药物中的用途，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合在制备药物中的用途，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合在制备药物中的用途，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在另一实施方案中，本发明提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其用于治疗癌症，其中所述免疫调节剂选自抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一方面，ii型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)抑制剂或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与如seqidno:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变重链序列和与如seqidno:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变轻链序列。在一方面，ii型prmt抑制剂为式iii、iv、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在另一方面，ii型prmt抑制剂为化合物b。在一方面，ii型prmt抑制剂为化合物c。在一方面，ii型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，ii型prmt抑制剂口服给药。在一个实施方案中，提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其用于治疗癌症，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其用于治疗癌症，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供ii型蛋白质精氨酸甲基转移酶(ii型prmt)抑制剂和免疫调节剂的组合，其用于治疗癌症，其中所述ii型prmt抑制剂为化合物c且所述免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，提供了包含ii型prmt抑制剂和选自以下的免疫调节剂的产品：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其作为组合制剂用于在用药中同时、分开或相继使用。在一方面，ii型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)抑制剂或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与如seqidno:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变重链序列和与如seqidno:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变轻链序列。在一方面，ii型prmt抑制剂为式iii、iv、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在另一方面，ii型prmt抑制剂为化合物b。在一方面，ii型prmt抑制剂为化合物c。在一方面，ii型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，ii型prmt抑制剂口服给药。在一个实施方案中，提供包含化合物c和激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于在用药中同时、分开或相继使用。在一个实施方案中，提供包含化合物c和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于在用药中同时、分开或相继使用，其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供包含化合物c和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于在用药中同时、分开或相继使用，其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，提供包含ii型prmt抑制剂和选自以下的免疫调节剂的产品：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其作为组合制剂用于在用药中同时、分开或相继使用。在一方面，ii型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)抑制剂或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与如seqidno:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变重链序列和与如seqidno:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变轻链序列。在一方面，ii型prmt抑制剂为式iii、iv、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在另一方面，ii型prmt抑制剂为化合物b。在一方面，ii型prmt抑制剂为化合物c。在一方面，ii型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，ii型prmt抑制剂口服给药。在一个实施方案中，提供包含化合物c和激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于在用药中同时、分开或相继使用。在一个实施方案中，提供包含化合物c和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于在用药中同时、分开或相继使用，其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供包含化合物c和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于在用药中同时、分开或相继使用，其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，提供包含ii型prmt抑制剂和选自以下的免疫调节剂的产品：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其作为组合制剂用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症。在一方面，ii型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)抑制剂或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与如seqidno:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变重链序列和与如seqidno:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变轻链序列。在一方面，ii型prmt抑制剂为式iii、iv、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在另一方面，ii型prmt抑制剂为化合物b。在一方面，ii型prmt抑制剂为化合物c。在一方面，ii型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，ii型prmt抑制剂口服给药。在一个实施方案中，提供包含化合物c和激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症。在一个实施方案中，提供包含化合物c和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供包含化合物c和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在一个实施方案中，提供包含ii型prmt抑制剂和选自以下的免疫调节剂的产品：抗ctla4抗体或其抗原结合片段、抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、和抗ox40抗体或其抗原结合片段，其作为组合制剂用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述癌症为结肠癌或淋巴瘤。在一方面，ii型prmt抑制剂为蛋白质精氨酸甲基转移酶5(prmt5)抑制剂或蛋白质精氨酸甲基转移酶9(prmt9)抑制剂。在一方面，免疫调节剂为抗pd-1抗体或其抗原结合片段。在一方面，抗pd-1抗体为派姆单抗或纳武单抗。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在另一方面，免疫调节剂为抗ox40抗体或其抗原结合片段，其包含与如seqidno:5所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变重链序列和与如seqidno:11所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的可变轻链序列。在一方面，ii型prmt抑制剂为式iii、iv、vii、viii、ix、x或xi的化合物。在另一方面，ii型prmt抑制剂为化合物b。在一方面，ii型prmt抑制剂为化合物c。在一方面，ii型prmt抑制剂和免疫调节剂以选自以下的途径给药于患者：同时、相继、以任何顺序、全身、口服、静脉内和瘤内。在一方面，ii型prmt抑制剂口服给药。在一个实施方案中，提供包含化合物c和激动剂抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述癌症为结肠癌或淋巴瘤。在一个实施方案中，提供包含化合物c和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述癌症为结肠癌或淋巴瘤，且其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含以下一个或多个：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。在一个实施方案中，提供包含化合物c和抗ox40抗体或其抗原结合片段的产品，其用于同时、分开或相继使用以治疗人受试者的癌症，其中所述癌症为结肠癌或淋巴瘤，且其中所述抗ox40抗体或其抗原结合片段包含与seqidno:5具有至少90％序列同一性的重链可变区和与seqidno：11具有至少90％同一性的轻链可变区。在本文实施方案任一个的一方面，所述癌症为实体瘤或血液癌症。在一方面，为黑素瘤、乳腺癌、淋巴瘤或膀胱癌。在一方面，癌症选自头颈癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、bannayan-zonana综合征、考登病、lhermitte-duclos疾病、炎性乳腺癌、威尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、肾癌、肝癌、黑素瘤、胰腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨的巨细胞肿瘤、甲状腺癌、成淋巴细胞性t细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、aml、慢性中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性t细胞白血病、浆细胞瘤、成免疫细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞性白血病、前髓细胞性白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、成淋巴细胞性t细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、成神经细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、外阴癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、睾丸癌、颊癌、口腔癌、gist(胃肠道间质瘤)、和睾丸癌。在一方面，本发明的方法进一步包括向所述人给药至少一种肿瘤药物。在一方面所述人具有实体瘤。在一方面，肿瘤选自头颈部癌症、胃癌、黑素瘤、肾细胞癌(rcc)、食管癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌和胰腺癌。在另一方面所述人具有液体肿瘤如弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、滤泡性淋巴瘤、急性骨髓性白血病和慢性髓细胞性白血病。本发明还涉及治疗或减轻选自以下的癌症的严重性的方法：脑(神经胶质瘤)、成胶质细胞瘤、bannayan-zonana综合征、考登病、lhermitte-duclos疾病、乳腺癌、炎性乳腺癌、威尔姆斯肿瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、结肠、头与颈、肾、肺、肝、黑素瘤、卵巢、胰腺、前列腺、肉瘤、骨肉瘤、骨的巨细胞肿瘤、甲状腺、成淋巴细胞性t-细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性中性粒细胞性白血病、急性成淋巴细胞性t-细胞白血病、浆细胞瘤、成免疫细胞性大细胞白血病、套细胞白血病、多发性骨髓瘤、巨核细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性巨核细胞性白血病、前髓细胞性白血病、红白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、成淋巴细胞性t细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、成神经细胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌、外阴癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、间皮瘤、食管癌、唾液腺癌、肝细胞癌、胃癌、鼻咽癌、颊癌、口腔癌、gist(胃肠道间质瘤)和睾丸癌。本发明所用术语“治疗”及其语法变化形式是指治疗性治疗。在提到特定病症时，治疗意味着，(1)改善或预防病症或该病症的一种或多种生物学表现；(2)干扰(a)引发或造成该病症的生物级联中的一个或多个点或(b)病症的一种或多种生物学表现；(3)缓解与病症或其治疗相关的一种或多种症状、效应或副作用；或(4)延缓病症的发展或该病症的一种或多种生物学表现。从而也能推想预防性治疗。技术人员将会意识到，“预防”不是绝对的术语。在医学中，“预防”被理解为是指药物的预防性给药，以显著降低病症或其生物学表现的可能性或严重性，或延迟该病症或其生物学表现的发生。例如当认为受试者是处于发展为癌症的高风险时，预防性治疗是适当的(例如当受试者具有极强的癌症家族病史或当受试者暴露于致癌物质时)。如本发明所用，术语“癌症”、“赘生物”和“肿瘤”可以单数或复数形式互换使用，是指经历恶性转化使其变为对宿主生物体具有病理性的细胞。可以通过成熟的技术，特别是组织学检查，容易地将原发性癌细胞与非癌细胞区分开来。如本发明所用的癌细胞的定义不仅包括原发性癌细胞，还包括衍生自前驱癌细胞的任何细胞。这包括转移的癌细胞，以及衍生自癌细胞的体外培养物和细胞系。当提及通常表现为实体瘤的癌症类型时，“临床可检测”的肿瘤是基于肿瘤块可检测到的肿瘤；例如，通过诸如计算机断层摄影(ct)扫描、磁共振成像(mri)、x射线、超声或物理检查触诊的程序，和/或由于可检测到从患者获得的样品中一种或多种癌症特异性抗原的表达。肿瘤可能是造血性(或血液学或血液或血液相关的)癌症，例如衍生自血细胞或免疫细胞的癌症，其可被称为“液体肿瘤”。基于血液肿瘤的临床病症的具体实例包括：白血病，如慢性髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病，慢性淋巴细胞性白血病和急性淋巴细胞性白血病；浆细胞恶性肿瘤，如多发性骨髓瘤、mgus和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症；淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤；等等。癌症可以是其中存在异常数量的母细胞或不期望的细胞增殖或被诊断为造血系统癌症(包括淋巴性和骨髓性恶性肿瘤)的任何癌症。骨髓性恶性肿瘤包括但不限于：急性骨髓性(或髓细胞性或骨髓性或成髓细胞性)白血病(未分化或分化的)、急性早幼粒细胞(或早幼粒细胞性或前髓细胞性或前髓母细胞性)白血病、急性骨髓单核细胞性(或骨髓单核母细胞性)白血病、急性单核细胞性(或单核母细胞性)白血病、红细胞白血病和巨核细胞性(或巨核母细胞性)白血病。这些白血病可以一起称为急性骨髓性(或髓细胞性或骨髓性的)白血病(aml)。骨髓恶性肿瘤还包括骨髓增生性疾病(mpd)，其包括但不限于：慢性骨髓性(或髓细胞性)白血病(cml)、慢性骨髓单核细胞性白血病(cmml)、原发性血小板增多症(或血小板增多症)和真性红细胞增多症(pcv)。骨髓恶性肿瘤还包括：骨髓发育不良(或骨髓增生异常综合征或mds)，其可被称为难治性贫血(ra)、具有过量母细胞的难治性贫血(raeb)以及具有过量转化中的母细胞的难治性贫血(raebt)；以及伴有或不伴有原因不明性髓样化生的骨髓纤维化(mfs)。造血系统癌症还包括淋巴恶性病，其会影响淋巴结、脾脏、骨髓、外周血和/或结外位点。淋巴癌包括b细胞恶性病，包括但不限于b细胞非霍奇金淋巴瘤(b-nhl)。b-nhl可以是无痛的(或低度)、中度(或侵袭性)或高度(高侵袭性)。无痛b细胞淋巴瘤包括：滤泡性淋巴瘤(fl)；小淋巴细胞性淋巴瘤(sll)；边缘区淋巴瘤(mzl)，包括结节mzl、结外mzl、脾mzl和具有绒毛状淋巴细胞的脾mzl；淋巴浆细胞性淋巴瘤(lpl)；以及粘膜相关淋巴样组织(malt或结外边缘区)淋巴瘤。中度b-nhl包括：涉及或不涉及白血病的套细胞性淋巴瘤(mcl)、弥漫性大细胞淋巴瘤(dlbcl)、滤泡性大细胞(或3级或3b级)淋巴瘤和原发性纵隔淋巴瘤(pml)。高度b-nhl包括伯基特淋巴瘤(bl)、伯基特样淋巴瘤、小无裂细胞淋巴瘤(snccl)和成淋巴细胞性淋巴瘤。其它b-nhl包括免疫母细胞性淋巴瘤(或免疫细胞瘤)、原发性渗出性淋巴瘤、hiv相关(或aids相关)的淋巴瘤和移植后淋巴增生性病症(ptld)或淋巴瘤。b细胞恶性病还包括但不限于：慢性淋巴细胞性白血病(cll)、幼淋巴细胞性白血病(pll)、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(wm)、毛细胞白血病(hcl)、大颗粒淋巴细胞性(lgl)白血病、急性淋巴性(或淋巴细胞性或成淋巴细胞性)白血病和卡斯尔曼氏病。nhl还可包括：t细胞非霍奇金淋巴瘤(t-nhl)，其包括但不限于未列名(nos)的t细胞非霍奇金淋巴瘤、外周t细胞淋巴瘤(ptcl)、间变性大细胞淋巴瘤(alcl)、血管免疫母细胞性淋巴样病(aild)、鼻腔型自然杀伤(nk)细胞/t细胞淋巴瘤、γ/δ淋巴瘤、皮肤型t细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿和塞扎里综合征(sezarysyndrome)。造血系统癌症还包括霍奇金淋巴瘤(或疾病)，其包括典型霍奇金淋巴瘤,结节硬化型霍奇金淋巴瘤,混合细胞型霍奇金淋巴瘤,淋巴细胞主导型(lp)霍奇金淋巴瘤,结节lp霍奇金淋巴瘤和淋巴细胞缺乏型霍奇金淋巴瘤。造血系统癌症还包括浆细胞疾病或癌症，如多发性骨髓瘤(mm)，其包括郁积型mm,意义未确定(或未知或未明)的单克隆丙种球蛋白病(mgus),浆细胞瘤(骨,髓外),淋巴浆细胞性淋巴瘤(lpl),瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症,浆细胞白血病和原发性淀粉样变性病(al)。造血系统癌症还可包括其它造血细胞的其它癌症，包括多形核白细胞(或中性粒细胞),嗜碱性粒细胞,嗜酸性粒细胞,树突状细胞,血小板,红细胞和自然杀伤细胞。包括造血细胞的组织在本发明中被称为“造血细胞组织”，其包括骨髓；外周血；胸腺；和外周淋巴组织，诸如脾脏、淋巴结、与粘膜相关的淋巴组织(例如与肠相关淋巴组织)、扁桃体，派伊尔淋巴集结和阑尾，以及与其他粘膜相关的淋巴组织，例如支气管内衬。如本文所用，术语“化合物a2”是指选自以下的免疫调节剂：抗pd-1抗体或其抗原结合片段、抗pdl1抗体或其抗原结合片段、抗ctla4抗体或其抗原结合片段，或抗ox40抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，化合物a2为抗pd-1抗体。适当地，化合物a2可选自纳武单抗和派姆单抗。在一些实施方案中，化合物a2为针对ox40或其抗原结合部分的激动剂抗体，该ox40或其抗原结合部分包含含有与如seqidno:5所示的氨基酸序列至少90％等同的氨基酸序列的vh结构域；和与如seqidno:11所示的氨基酸序列至少90％等同的氨基酸序列的vl结构域。在其它实施方案中，化合物a2为针对ox40或其抗原结合部分的激动剂抗体，包括包含以下一个或多个的抗ox40抗体或其抗原结合片段：如seqidno:1所示的cdrh1；如seqidno:2所示的cdrh2；如seqidno:3所示的cdrh3；如seqidno:7所示的cdrl1；如seqidno:8所示的cdrl2和/或如seqidno:9所示的cdrl3或各cdr的直接等同物，其中直接等同物在所述cdr中具有不超过两个氨基酸取代。如本文所用，术语“化合物b2”是指ii型prmt抑制剂。在一些实施方案中，化合物b2为式iii、iv、vii、viii、ix、x或xi的化合物。适当地，化合物b2为化合物c。适当地，本发明的组合“在规定的期间内”给药。如本文所使用的术语“规定的期间(specifiedperiod)”及其语法变形，表示给药化合物a2和化合物b2中的一种以及给药化合物a2和化合物b2中的另一种之间的时间间隔。除非另有说明，规定的期间可以包括同时给药。除非另有说明，规定的期间是指在一天内给药化合物a2和化合物b2。适当地，如果在“规定的期间”内给药所述化合物而不同时给药，它们均可以在彼此相隔约24小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约24小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约12小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约12小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约11小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约11小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约10小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约10小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约9小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约9小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约8小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约8小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约7小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约7小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约6小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约6小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约5小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约5小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约4小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约4小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约3小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约3小时；适当地，它们可以在彼此相隔约2小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约2小时；适当地，它们均可以在彼此相隔约1小时内给药–在该情况中，所述规定的期间将为约1小时。如本发明所使用的，化合物a2和化合物b2的给药相隔小于约45分钟被认为是同时给药。适当地，当本发明的组合以一段“规定的期间”给药时，各化合物共同给药一段“持续时间”。如本发明所使用的术语“持续时间”及其语法变形，表示本发明的两种化合物连续给药指定数目的天数。除非另有说明，连续的天数不必须是在治疗起点开始或治疗终点结束，它只需要在治疗过程中的某时间点出现连续的天数。关于“规定的期间”给药：适当地，两种化合物在规定的期间内给药至少一天–在该情况中，所述持续时间为至少一天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续3天–在该情况中，所述持续时间为至少3天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续5天–在该情况中，所述持续时间为至少5天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续7天–在该情况中，所述持续时间为至少7天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续14天–在该情况中，所述持续时间为至少14天；适当地，在治疗过程中，两种化合物在规定的期间内给药至少连续30天–在该情况中，所述持续时间为至少30天。适当地，如果所述化合物不历经“规定的期间内(duringaspecifiledperiod)”给药，那么它们就是顺序给药。如本发明所使用的术语“顺序给药”及其语法变形，表示每天给药一次化合物a2和化合物b2中的一种，连续两天或更多天，接着每天给药一次化合物a2和化合物b2中的另一种，连续两天或更多天。同样地，本发明还包括在顺序给药化合物a2和化合物b2中的一种以及给药化合物a2和化合物b2中的另一种之间所使用的休药期。如本发明所使用的，休药期为在顺序给药化合物a2和化合物b2中的一种之后和在给药化合物a2和化合物b2中的另一种之前不给药化合物a2也不给药化合物b2的间隔天数。休药期为选自以下的一段天数：1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天和14天。关于顺序给药(sequentialadministration)：适当地，给药化合物a2和化合物b2中的一种连续1至30天，接着是任选的休药期，接着给药化合物a2和化合物b2中的另一种连续1至30天。适当地，给药化合物a2和化合物b2中的一种连续1至21天，接着是任选的休药期，接着给药化合物a2和化合物b2中的另一种连续1至21天。适当地，给药化合物a2和化合物b2中的一种连续1至14天，接着是1至14天的休药期，接着给药化合物a2和化合物b2中的另一种连续1至14天。适当地，给药化合物a2和化合物b2中的一种连续1至7天，接着是1至10天的休药期，接着给药化合物a2和化合物b2中的另一种连续1至7天。适当地，在该顺序中化合物b2首先给药，接着是任选的休药期，接着给药化合物a2。适当地，给药化合物b2连续3至21天，接着是任选的休药期，接着给药化合物a2连续3至21天。适当地，给药化合物b2连续3至21天，接着是1至14天的休药期，接着给药化合物a2连续3至21天。适当地，给药化合物b2连续3至21天，接着是3至14天的休药期，接着给药化合物a2连续3至21天。适当地，给药化合物b2连续21天，接着是任选的休药期，接着给药化合物a2连续14天。适当地，给药化合物b2连续14天，接着是1至14天的休药期，接着给药化合物a2连续14天。适当地，给药化合物b2连续7天，接着是3至10天的休药期，接着给药化合物a2连续7天。适当地，给药化合物b2连续3天，接着是3至14天的休药期，接着给药化合物a2连续7天。适当地，给药化合物b2连续3天，接着是3至10天的休药期，接着给药化合物a2连续3天。应当理解，“规定的期间”给药和“顺序”给药之后可以为重复给药(dosing)或者可以接着交替的给药方案，休药期可以在重复给药或交替的给药方案之前。本发明的方法还可以与其他治疗癌症的治疗方法一起使用。化合物a2和化合物b2可以通过任何适合的途径给药。合适的途径包括经口、经直肠、经鼻、局部(包括含服(buccal)和舌下)、瘤内、经阴道和肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)。可以理解优选途径可随着例如该组合的受试者的状况和所治疗的癌症而变化。还可以理解所施用的各个药物可以通过相同或不同的途径给药，化合物a2和化合物b2可以一起配制成药物组合物/制剂。在一个实施方案中，本发明的组合中的一种或多种成分静脉内给药。在一个实施方案中，本发明的组合中的一种或多种成分口服给药。在另一实施方案中，本发明的组合中的一种或多种成分经瘤内给药。在另一实施方案中，本发明的组合中的一种或多种成分全身性给药，如静脉内，以及本发明组合中的一种或多种其它成分经瘤内给药。在该实施方案的任一者中，如在此段中，本发明的各成分作为一种或多种药物组合物给药。典型地，在本发明中，对所治疗的易感肿瘤具有活性的任何抗肿瘤剂都可以在癌症治疗中被共同施用。该药物的实例可以在cancerprinciplesandpracticeofoncologybyv.t.devita，t.s.lawrence，和s.a.rosenberg(编辑)，第10版(2014年12月5日)，lippincottwilliams&wilkinspublishers中找到。本领域普通技术人员将能够基于药物的特定特征和所涉及的癌症来辨别可使用哪些药剂组合。可用于本发明的典型的抗肿瘤剂包括但不限于：抗微管或抗有丝分裂剂如二萜和长春花生物碱；铂配位络合物；烷基化剂如氮芥、氧氮磷环类(oxazaphosphorine)、烷基磺酸酯、亚硝基脲和三氮烯；抗生素如放线菌素、蒽环类和博来霉素；拓扑异构酶i抑制剂如喜树碱；拓扑异构酶ii抑制剂如表鬼臼毒素；抗代谢物如嘌呤和嘧啶类似物和抗-叶酸化合物；激素和激素类似物；信号转导途径抑制剂；非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂；免疫治疗剂；促凋亡剂；细胞周期信号转导抑制剂；蛋白酶体抑制剂；热休克蛋白抑制剂；癌症代谢抑制剂；和癌症基因治疗剂如基因修饰的t细胞。用于与本发明方法或组合联合或共同施用的其他活性成分的实例是抗肿瘤剂。抗肿瘤剂的实例包括但不限于化学治疗剂；免疫调控剂(immuno-modulatoryagent)；免疫调节剂(immune-modulator)；和免疫刺激佐剂。实施例以下实施例示出本发明的多个非限制性方面。实施例1背景prmt5为对称的蛋白质精氨酸甲基转移酶蛋白质精氨酸甲基转移酶(prmt)是酶的子集，其在含有富含甘氨酸和精氨酸残基的区域(gar基序)的蛋白质中甲基化精氨酸。基于酶促反应的产物将prmt分为四种亚型(i-iv型)(图1,fiskjc等人，atypeiiiproteinargininemethyltransferasefromtheprotozoanparasitetrypanosomabrucei.jbiolchem.2009apr24；284(17):11590-600)。i-iii型酶产生ω-n-单甲基-精氨酸(mma)。最大的亚型，i型(prmt1、3、4、6和8)，使mma成为不对称二甲基精氨酸(adma)，而ii型产生对称的二甲基精氨酸(sdma)。虽然prmt9/fbxo11也可以产生sdma，但prmt5是负责对称二甲基化的主要酶。prmt5在细胞质和细胞核中的几种类型的复合物中起作用，并且prmt5的结合配偶体是底物识别和选择性所必需的。甲基转移酶复合体蛋白50(mep50)是prmt5的已知辅因子，其是prmt5结合和对组蛋白和其他底物的活性所必需的(homc等人structureoftheargininemethyltransferaseprmt5-mep50revealsamechanismforsubstratespecificity.plosone.2013；8(2))。prmt5底物prmt5甲基化各种细胞蛋白中的精氨酸，包括剪接因子、组蛋白、转录因子、激酶等(图2)(karkhanisv，等人trendsbiochemsci.2011dec；36(12):633-41)。剪接体的多种组分的甲基化是剪接体组装中的关键事件，并且通过敲低或基因敲除减弱prmt5活性导致细胞剪接的破坏(bezzim等人regulationofconstitutiveandalternativesplicingbyprmt5revealsaroleformdm4pre-mrnainsensingdefectsinthespliceosomalmachinery.genesdev.2013sep1；27(17):1903-16)。prmt5还甲基化组蛋白精氨酸残基(h3r8，h2ar3和h4r3)，这些组蛋白标记与肿瘤抑制基因的转录沉默相关，如rb和st7(wangl等人proteinargininemethyltransferase5suppressesthetranscriptionoftherbfamilyoftumorsuppressorsinleukemiaandlymphomacells.molcellbiol.2008oct；28(20):6262-77；pals等人lowlevelsofmir-92b/96induceprmt5translationandh3r8/h4r3methylationinmantlecelllymphoma.emboj.2007aug8；26(15):3558-69)。另外，h2ar3的对称二甲基化与胚胎干细胞中分化基因的沉默有关(teeww等人prmt5isessentialforearlymousedevelopmentandactsinthecytoplasmtomaintainescellpluripotency.genesdev.2010dec15；24(24):2772-7)。prmt5还通过egfr和pi3k的甲基化在细胞信号传导中起作用(hsujm等人crosstalkbetweenarg1175methylationandtyr1173phosphorylationnegativelymodulatesegfr-mediatederkactivation.natcellbiol.2011feb；13(2):174-81；weity,juancc,hisajy,sulj,leeyc,chouhy,chenjm,wuyc,chiusc,hsucp,liukl,yuct.proteinargininemethyltransferase5isapotentialoncoproteinthatupregulatesg1cyclins/cyclin-dependentkinasesandthephosphoinositide3-kinase/aktsignalingcascade.cancersci.2012sep；103(9):1640-50)。prmt5在参与癌症相关的途径的蛋白质的甲基化中的作用如下所述。prmt5敲除模型prmt5的完全丧失是胚胎致死的。prmt5在胚胎发育中发挥关键作用，其通过prmt5缺失小鼠在胚胎期3.5至6.5天之间死亡而证明(teeww，等人prmt5isessentialforearlymousedevelopmentandactsinthecytoplasmtomaintainescellpluripotency.genesdev.2010dec15；24(24):2772-7)。早期研究表明prmt5在hsc(造血干细胞)和npc(神经祖细胞)发育中起重要作用。人脐带血cd34+细胞中prmt5的敲低导致红细胞分化增加(liuf等人jak2v617f-mediatedphosphorylationofprmt5downregulatesitsmethyltransferaseactivityandpromotesmyeloproliferation.cancercell.2011feb15；19(2):283-94)。在npc中，prmt5调节神经分化、胞生长和存活(bezzim等人regulationofconstitutiveandalternativesplicingbyprmt5revealsaroleformdm4pre-mrnainsensingdefectsinthespliceosomalmachinery.genesdev.2013sep1；27(17):1903-16)。癌症中的prmt5越来越多的证据表明prmt5参与肿瘤发生。prmt5蛋白在许多癌症类型中过表达，包括淋巴瘤、神经胶质瘤，乳腺癌和肺癌，仅prmt5过表达就足以转化正常成纤维细胞(pals等人lowlevelsofmir-92b/96induceprmt5translationandh3r8/h4r3methylationinmantlecelllymphoma.emboj.2007aug8；26(15):3558-69；ibrahimr等人expressionofprmt5inlungadenocarcinomaanditssignificanceinepithelial-mesenchymaltransition.humpathol.2014jul；45(7):1397-405；powersma等人proteinargininemethyltransferase5acceleratestumorgrowthbyargininemethylationofthetumorsuppressorprogrammedcelldeath4.cancerres.2011aug15；71(16):5579-87；yanf等人geneticvalidationoftheproteinargininemethyltransferaseprmt5asacandidatetherapeutictargetinglioblastoma.cancerres.2014mar15；74(6):1752-65)。prmt5的敲低通常导致癌细胞系中细胞生长和存活的减少。在乳腺癌中，高prmt5表达与高pdcd4(程序性细胞死亡因子4)水平一起预测总体不良存活(powersma等人proteinargininemethyltransferase5acceleratestumorgrowthbyargininemethylationofthetumorsuppressorprogrammedcelldeath4.cancerres.2011aug15；71(16):5579-87)。prmt5甲基化pdcd4改变了肿瘤相关功能。prmt5和pdcd4在乳腺癌的原位模型中的共表达促进肿瘤生长。prmt5在神经胶质瘤中的高表达与高肿瘤等级和总体较差的存活率相关，并且prmt5敲低在原位成胶质细胞瘤模型中提供存活益处(yanf等人geneticvalidationoftheproteinargininemethyltransferaseprmt5asacandidatetherapeutictargetinglioblastoma.cancerres.2014mar15；74(6):1752-65)。增加的prmt5表达和活性有助于沉默神经胶质瘤细胞系中的几种肿瘤抑制基因。目前在prmt5和癌症之间描述的最强的机制联系是套细胞淋巴瘤(mcl)。prmt5经常在mcl中过表达，并且在核区室中高表达，其中该高表达增加了组蛋白甲基化水平并沉默肿瘤抑制基因的子集。最近的研究揭示了mirna在mcl中上调prmt5表达中的作用。预计超过50种mirna退火至prmt5mrna的3'非翻译区。据报道，mir-92b和mir-96水平与mcl中的prmt5水平呈负相关，并且mcl细胞中这些mirna的下调导致prmt5蛋白水平的上调。细胞周期蛋白d1是绝大多数mcl患者易位的癌基因，与prmt5相关，并通过cdk4依赖性机制增加prmt5活性(图3,aggarwalp等人cancercell.2010oct19；18(4):329-40)。prmt5介导负调节dna复制的关键基因的抑制，从而允许细胞周期蛋白d1依赖性肿瘤生长。prmt5敲低抑制细胞周期蛋白d1依赖性细胞转化，导致肿瘤细胞死亡。这些数据突出了prmt5在mcl中的重要作用，并表明prmt5抑制可用作mcl中的治疗策略。在其他肿瘤类型中，已假定prmt5在分化、细胞死亡、细胞周期进展、细胞生长和增殖中起作用。虽然将prmt5与肿瘤发生联系起来的主要机制尚不清楚，但新出现的数据表明prmt5有助于调节基因表达(组蛋白甲基化，转录因子结合或启动子结合)、剪接改变和信号转导。转录因子e2f1的prmt5甲基化降低其抑制细胞生长和促进细胞凋亡的能力(zhengs等人argininemethylation-dependentreader-writerinterplaygovernsgrowthcontrolbye2f-1.molcell.2013oct10；52(1):37-51)。prmt5也甲基化p53(janssonm等人argininemethylationregulatesthep53response.natcellbiol.2008dec；10(12):1431-9)以响应dna损伤并降低p53诱导细胞周期停滞的能力，同时增加p53依赖性细胞凋亡。这些数据表明，prmt5抑制可通过诱导p53依赖性细胞凋亡使细胞对dna损伤剂敏感。除了直接甲基化p53外，prmt5还通过剪接相关机制上调p53途径。小鼠神经祖细胞中的prmt5敲除导致细胞剪接的改变，包括mdm4基因的同种型转换(bezzim等人regulationofconstitutiveandalternativesplicingbyprmt5revealsaroleformdm4pre-mrnainsensingdefectsinthespliceosomalmachinery.genesdev.2013sep1；27(17):1903-16)。bezzi等人发现prmt5敲除细胞具有降低的长mdm4同种型的表达(产生功能性p53泛素连接酶)和增加的mdm4短同种型的表达(产生无活性的连接酶)。mdm4剪接的这些变化导致mdm4的失活，增加p53蛋白的稳定性，并随后激活p53途径和细胞死亡。在prmt5敲低的癌细胞系中也观察到mdm4选择性剪接。这些数据表明prmt5抑制可以激活p53途径的多个节点。除了癌细胞生长和存活的调节之外，prmt5还涉及上皮-间充质转化(emt)。prmt5与转录因子snail结合，并作为e-钙粘蛋白表达的关键共抑制因子；prmt5的敲低导致e-钙粘蛋白水平的上调(houz等人thelimproteinajubarecruitsproteinargininemethyltransferase5tomediatesnail-dependenttranscriptionalrepression.molcellbiol.2008may；28(10):3198-207)。这些数据突出了prmt5作为多种癌症相关途径的关键调节因子的作用，并表明prmt5抑制剂可在血液和实体癌症中具有广泛的活性。prmt5抑制剂作为mcl以及乳腺癌和脑癌的治疗策略有很强的理论基础。这些数据还强调了在适当的细胞环境中使用prmt5抑制剂的机制原理：·抑制mcl中细胞周期蛋白d1依赖性功能；·激活和调节p53途径活性；·调节依赖e2f1的细胞生长和凋亡功能；·去抑制(de-repress)e-钙粘蛋白的表达；化合物c是prmt5/mep50复合物的中等分子量的(mw＝452.55)有效的、选择性的、肽竞争性的、可逆的抑制剂，具有良好的总体物理性质和口服生物利用度。化合物c影响几种癌症相关途径，最终在体外和体内模型中产生有效的抗癌活性，为治疗mcl、乳腺癌和脑癌提供了新的治疗机制。生物化学在许多体外生物化学测定中分析化合物c以表征其抑制prmt5的效力、可逆性、选择性和机制。使用放射性测定法评估化合物c的抑制效力，所述放射性测定法测量从sam到组蛋白h4衍生的肽的3h转移，其中所述组蛋白h4衍生的肽通过组蛋白肽库筛选鉴定。使用120分钟的长反应时间来捕获效力的任何时间依赖性增加。发现化合物c是prmt5/mep50的有效抑制剂，ic50为8.7±5nm(n＝3)。该效力接近测定的紧密结合极限(2nm)，因此代表分子真实效力的上限(图4)。化合物c的近似类似物的抑制效力相似，包括化合物f、化合物b和化合物e(关键差异在分子左侧)，其在一些生物学研究中被用作工具化合物。为了评估化合物c抑制除组蛋白h4之外的细胞底物的prmt5依赖性甲基化的能力，组装了一组prmt5底物用于评估，包括smd3、lsm4、hnrnph1和fubp1(参与剪接和转录沉默的这些底物的大部分通过下文生物学部分中描述的细胞methylscantm研究发现)。化合物c有效地抑制prmt5/mep50催化的所有这些底物的甲基化，尽管极低的km表观排除了对效力的准确测定。为了能够解释安全性研究，还在与人prmt5测定相似的条件下针对prmt5/mep50复合物的大鼠和狗直系同源物评估化合物c的效力。化合物c效力相对于所有物种变化<3倍(表2)。表2.使用放射性测定法在平衡条件下(km表观的底物浓度)监测prmt5/mep50活性，其测量用化合物c处理后3h从sam至蛋白质底物的转移。通过将数据拟合至3参数剂量-响应方程来确定ic50值。化合物为了确定抑制机制和抑制剂结合模式，将化合物c与prmt5/mep50复合物和西奈芬净(一种天然产物sam类似物)共结晶(分辨率)(图5)。该抑制剂结合在通常由底物肽占据的裂缝中并且紧邻占据sam袋的西奈芬净。四氢异喹啉的芳基环与西奈芬净的氨基形成π-芳基堆积相互作用。在化合物c的羟基与leu437骨架和glu244之间形成氢键。在嘧啶环的酰胺和phe580的骨架nh基团之间也形成氢键相互作用。末端哌啶乙酰胺位于溶剂暴露表面上，没有明显的临界接触。总的来说，该结构支持一种抑制机制，该机制与sam为反竞争性的(uncompetitive)并且与底物竞争。为了确定化合物c是否是prmt5/mep50的可逆抑制剂并且为了进一步探索抑制机制，使用亲和力选择质谱法(asms)来测量化合物c与各种prmt5/mep50复合物的结合。可以在以下检测到阳性结合：含有prmt5/mep50与sam、西奈芬净或sah的二元复合物，到prmt5/mep50:h4肽：sah或西奈芬净的死端三元复合物。由于asms无法检测到不可逆结合的化合物c，因此这些结果与可逆结合机制一致。在与10倍过量的h4肽竞争时，化合物c的结合在prmt5/mep50：h4肽：西奈芬净复合物内降低。用prmt5/mep50：h4肽复合物或单独用prmt5/mep50检测不到化合物c的结合，表明需要占用sam结合口袋用于化合物c结合。这些结果与以下抑制机制最匹配，即与sam为反竞争性的且与h4肽竞争。在一组酶中评估化合物c的选择性，所述酶包括i型和ii型prmt和赖氨酸甲基转移酶(kmt)。由于缺乏功能性酶测定，未包括prmt9/fbxo11，其为另一种ii型prmt和唯一缺乏thw环的prmt。化合物c不抑制甲基转移酶选择性组中的任何19种酶，其ic50值>40μm，导致prmt5/mep50的选择性>4000倍(图6)。对于在本发明的生物学部分中使用的prmt5工具化合物(化合物b，化合物f和化合物e)，也观察到其对于prmt5/mep50相对于其他甲基转移酶的选择性。总之，化合物c是prmt5/mep50复合物的有效、选择性、可逆抑制剂，ic50为8.7±5nm。prmt5/mep50与化合物c复合物的晶体结构和asms结合数据与sam反竞争性、蛋白质底物竞争性机制一致。生物学摘要prmt5在许多人类癌症中过表达，并且涉及多种癌症相关途径。使用prmt5抑制剂作为mcl以及乳腺癌和脑癌的治疗策略有很强的理论基础。为了理解prmt5抑制剂抗增殖活性的范围，使用2d和3d生长测定法在各种体外和体内肿瘤模型中分析化合物c.受prmt5抑制影响的基因和途径的特性对于理解适应症优先级、预测性生物标志物的发现和合理组合研究的设计所需的prmt5抑制剂的机制是至关重要的。进行了几项体外机制研究以评估对prmt5抑制的响应的生物学。评估许多prmt5底物的精氨酸甲基化水平以监测细胞和异种移植肿瘤中针对prmt5的化合物c活性。进行许多细胞系的rna测序以评估化合物c对基因表达、剪接以及受prmt5活性调节的其他分子机制和途径的影响。在用prmt5抑制剂处理的细胞系中监测p53途径活性。最后，在mcl和乳腺癌的几种异种移植模型中测试化合物c活性，以评估prmt5抑制在临床前癌症模型中的功效并评估分子机制和响应的潜在生物标志物。细胞系敏感性为了评估prmt5抑制在各种肿瘤类型中的抗增殖活性，使用广泛组的癌症细胞系和来自患者的肿瘤模型在2d和3d体外测定中分析化合物c。首先，在2d6天生长/死亡测定中在一组癌细胞系中评估化合物c(图7)。选择细胞系以代表肿瘤类型，在该肿瘤类型中已报道prmt5活性调节关键途径和/或细胞生长和存活(例如淋巴瘤和mcl，神经胶质瘤，乳腺癌和肺癌细胞系)。总体而言，测试的大多数细胞系表现出低于1μm的gic50值，而最敏感的淋巴瘤细胞系(套细胞淋巴瘤和弥漫型大b细胞淋巴瘤细胞系)具有几个nm范围的gic50值。在6天生长/死亡测定中，浓度高于100nm的化合物c在弥漫型大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、套细胞淋巴瘤(mcl)、成胶质细胞瘤、乳腺癌和膀胱癌细胞系中诱导细胞毒性反应(图8，负ymin-t0值)。总体而言，mcl和dlblc细胞系显示出最强的细胞毒性反应。大多数乳腺癌细胞系具有低ymin-t0值，表明prmt5抑制导致乳腺癌模型中的完全生长抑制，而其余细胞系表现出部分细胞抑制反应(正ymin-t0值)。在用prmt5工具分子进行的大型癌细胞系筛选(240种细胞系，10天2d生长测定)中进一步测试prmt5抑制的抗增殖活性(图9，图4中的化合物c和化合物b的生物化学/细胞活性比较)。总之，大多数细胞系表现出低于1μm的gic50值。中值gic50<100nm的肿瘤类型为急性骨髓性白血病(aml)、慢性髓细胞性白血病(cml)、霍奇金淋巴瘤(hl)、多发性骨髓瘤(mm)、乳腺癌、神经胶质瘤、肾癌、黑素瘤和卵巢癌。这些数据表明prmt5抑制剂对各种血液癌症(heme)和实体瘤类型表现出广泛的抗增殖活性。在软琼脂3d集落形成测定中，在一组来自患者的肿瘤模型和细胞系(n＝73)中用prmt5工具化合物观察到类似的宽范围的抗生长作用(图10)。在37％的模型中观察到相对生长ic50值低于1μm，包括非小细胞肺癌(nsclc)、乳腺癌、黑素瘤、结肠癌和神经胶质瘤。具有最低中值ic50值的肿瘤类型是大细胞肺癌、乳腺癌、肾癌和神经胶质瘤。总之，这些数据表明prmt5抑制剂在各种实体和血液癌症模型中具有有效的抗增殖活性。根据上述研究中观察到的活性、文献假设和临床开发潜力，选择以下适应症进行额外研究：·mcl和dlbcl(对prmt5抑制产生有效的抗增殖和细胞毒性应答)·乳腺癌(细胞系中低gic50值和完全生长抑制，以及在来自患者的模型组中的集落形成测定中ic50值低)·成胶质细胞瘤(集落形成测定中的低ic50值)。淋巴瘤生物学如上所述，化合物c在套细胞和弥漫型大b细胞淋巴瘤细胞系的子集中诱导了有效的细胞毒性应答(图7-8)。由于prmt5在mcl中经常过表达并且在mcl途径(例如细胞周期蛋白d1和p53)中起重要作用，因此在几种细胞机制研究中评估了化合物c活性和机制。在套细胞淋巴瘤的两种异种移植模型中评估化合物c的功效。细胞机制数据(淋巴瘤)sdma抑制prmt5负责绝大多数细胞的对称精氨酸二甲基化。为了更好地理解将prmt5抑制与抗癌表型联系起来的生物学机制，使用识别在精氨酸残基上对称二甲基化的细胞蛋白亚组的sdma抗体鉴定底物。通过用sdma抗体免疫沉淀和质谱分析(methylscantm)，在z138细胞裂解物(来自对照和prmt5抑制剂处理的细胞)中鉴定由sdma抗体检测的蛋白质。在含有sdma的蛋白质中，绝大多数是参与细胞剪接和rna加工(smb、lsm4、hnrnph1和其他)、转录(fubp1)和翻译的因子，突出了prmt5作为细胞rna稳态的重要调节剂的作用。然后将sdma抗体用于western和elisa测定以测量化合物c依赖性的甲基化抑制。首先，用递增浓度的化合物c处理z138mcl细胞(化合物cgic502.7nm、gic9582nm和gic100880nm，在6天生长/死亡测定中的细胞毒性应答，图7-8)以确定处理后第1天和第3天的sdma抑制的细胞ic50(图11)。sdmaelisa显示sdma水平的时间依赖性变化，第3天的ic50值为4.79nm，第1天和第3天的ec50分别为7.3和2.35(图11，图a)。在第3天在高于19nm(ec90)的浓度下观察到sdma的完全抑制。在gic95(82nm)和gic100(880nm)之间观察到z138细胞中的完全生长抑制(在6天生长/死亡测定中)，浓度高于sdma抑制的ec90。这些数据表明，为了在z138细胞中触发完全生长抑制和细胞毒性，需要将prmt5活性抑制>90％。为了评估sdma水平的抑制是否是对化合物c的细胞生长应答的预测，在一组mcl细胞系中测定sdmaic50值。在一组5个mcl细胞系中，sdmaic50值在0.3至14nm的范围内(图11，图b)(敏感的z138，granta-519，maver-1和中度抗性的mino以及jeko-1，图7-8)，表明sdma不是应答标记，而是prmt5活性的标记，可用于监测敏感和抗性模型中的prmt5抑制。淋巴瘤细胞系的基因表达谱prmt5将参与rna加工的组蛋白和蛋白质甲基化，因此预期prmt5抑制对细胞mrna稳态具有深远影响。为了进一步破译由prmt5调节并有助于prmt5抑制剂的细胞应答的细胞机制，在对prmt5抑制敏感的淋巴瘤模型中评估全局基因表达变化。为了阐明在prmt5抑制剂处理后在淋巴瘤细胞系中发生的基因表达变化，通过rna测序分析4个敏感性淋巴瘤细胞系(2个mcl细胞系-z138和granta-519和2个dlbcl细胞系-dohh2和rl)。首先，在用递增浓度的prmt5工具分子处理2天和4天的淋巴瘤细胞系中评估基因表达变化(图12)。对rna表达的作用是时间和剂量依赖性的，并且通常在4个淋巴瘤细胞系中调节48种基因。这些数据表明prmt5抑制引发数百个基因的表达变化，并且这些变化的子集对于所测试的所有4种敏感性淋巴瘤细胞系是常见的。正在评估这些基因在prmt5抑制的细胞应答机制中的相关性。sdma和基因表达变化为了证实rna-seq实验发现的基因表达变化，进行了基因子集表达的qpcr分析(具有强烈变化的基因和参与p53途径的基因)。用递增剂量的化合物c处理z138细胞2天和4天，分离rna并通过qpcr分析。图13在左图中显示代表性剂量-响应曲线，并且在右图中总结了基因表达ec50值(第4天)。总体而言，测试的所有11个基因显示时间和剂量依赖性表达变化，ec50值在22至332nm的范围内，中值基因表达ec50为212nm。重要的是，基因表达中值ec50值对应于导致z138中细胞甲基化的最大抑制的化合物c浓度(通过sdma抗体elisa测量，图11)，表明需要几乎完全抑制prmt5活性，以建立基因表达程序的变化。这些数据突出了prmt5抑制程度与基因表达和生长表型变化的关系，其中两者都需要接近完全抑制prmt5活性。prmt5抑制和剪接由于prmt5甲基化剪接体亚基且prmt5抑制作用减弱了参与剪接的许多蛋白质的精氨酸甲基化，因此研究了prmt5抑制对细胞剪接的影响。在上述淋巴瘤rna-seq数据集中评估rna剪接的变化。存在几种可以调节细胞剪接的分子机制(图14，图a)，其中内含子保留(b)通常导致基因表达的改变，而外显子跳跃或替代剪接位点的使用导致同种型转换(a，c-e)。prmt5工具化合物处理导致所测试的所有淋巴瘤细胞系中内含子保留的剂量和时间依赖性增加(图14，图b)。有趣的是，剪接因子图分析表明，剪接因子结合位点的子集在所有四种细胞系中保留的内含子中富集，包括hnrnph1(由prmt5直接甲基化)、hnrnpf、srsf1和srsf5，表明prmt5对细胞剪接的影响可依赖于剪接体机制的多种组分(sm和hnrnp蛋白)的甲基化。prmt5抑制还诱导淋巴瘤细胞系中的同种型转换(选择性剪接)(图15，图a)且34种基因在所有测试的细胞系中显示出一致的选择性剪接变化(图15，图b和c)。总体而言，观察到数百个基因的剪接变化，显示prmt5对剪接的影响不是全局的，而是针对有限数量的rna有特异性。这种特异性的一个解释是，prmt5直接调节特定剪接因子的rna结合，例如hnrnph1等。正在研究prmt5抑制剂作用机制中选择性剪接变化的作用，下面将讨论一个特定的例子。mdm4剪接和p53途径的激活据报道，prmt5敲除或敲低导致mdm4同种型转换，其导致mdm4泛素连接酶活性失活至p53(在
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：部分中描述)。prmt5抑制导致在rna-seq实验(gsea)中测试的4种淋巴瘤细胞系中p53途径的激活。为了理解p53活化是否与mdm4同种型转换相关，分析了mdm4选择性剪接。在所有4个淋巴瘤细胞系中观察到mdm4同种型转换。接下来，通过rt-pcr在一组4个mcl细胞系中确认mdm4剪接的变化(图16，图a，z138，jvm-2和maver-1mcl细胞系对化合物c敏感，而rec-1是最具抗性的mcl细胞系)。在z138和jvm-2细胞(两种p53野生型)中，化合物c诱导mdm4同种型转换。在maver-1和rec-1细胞(两种p53突变体)中，mdm4长型的基础表达低/不可检测，因此，不能检测到mdm4同种型转换。随后，在jvm-2和z138细胞中p53和p21(或cdkn1a，p53靶基因)蛋白表达增加(图16，图b)。重要的是，在z138细胞中，200nm化合物c和5μmmdm2抑制剂(nutlin-3)处理使p53和p21表达增加至相似水平。这些数据表明prmt5抑制调节表达高水平mdm4长同种型的细胞系中的mdm4剪接，并在p53野生型细胞系中诱导p53途径活性。正在评估p53途径在p53野生型mcl细胞对prmt5抑制的应答的生物学中的作用。此外，在用递增浓度的化合物c处理的z138细胞中评估mdm4剪接、sdma抑制和p53表达的变化的剂量响应，以评估prmt5抑制、mdm4剪接和p53活化的关系(图17，图a和b)。在高于8nm的化合物c的浓度下，通过western印迹检测不到sdma水平。同时，在高于8nm的化合物c的浓度下，mdm4剪接和p53/p21蛋白表达的变化是明显的。这些结果表明，在基因剪接和随后的途径活性发生变化(mdm4/p53/p21)之前，需要基本上抑制prmt5活性(没有western可检测到的sdma水平)。这些数据表明prmt5抑制通过调节mdm4剪接来激活野生型p53。这种机制可用于其中p53不经常突变的癌症类型，例如血液和儿科恶性肿瘤。在淋巴瘤模型中，prmt5抑制导致显著的(gsea分析)和相对快速的p53途径激活，这可有助于在用prmt5抑制剂处理的细胞系中观察到的生长/死亡表型。敲低/拯救实验将用于进一步评估mdm4/p53途径在prmt5抑制剂诱导的细胞应答中的作用。mdm4同种型表达和p53突变是mcl中prmt5抑制应答的潜在预测性生物标志物。在mcl细胞系组中，仅有的两种野生型p53系z138和jvm-2是最敏感的细胞系(最低的gic50值，且仅有两种在6天生长/死亡分析中表现出细胞毒性的mcl细胞系)。在两种细胞系中，化合物c处理导致mdm4同种型转换和p53途径活化。有限数量的mcl细胞系和建立初级mcl模型的极低成功率使我们无法进一步评估p53预测性生物标志物假说。虽然p53途径可在p53野生型细胞对prmt5抑制剂的应答的生物学中起重要作用，但我们的数据强烈强调了其他可以驱动抗肿瘤效力的途径的重要性，因为prmt5抑制在缺失功能性p53的情况下导致抗增殖作用(例如maver-1细胞系)。套细胞淋巴瘤：化合物c和依鲁替尼的比较和组合活性。布鲁顿酪氨酸激酶(btk)抑制剂依鲁替尼最近被批准用于mcl，其在复发/难治性环境中具有前所未有的接近70％的总体应答率(wangml，等人nengljmed.2013aug8；369(6):507-16)。然而，接受依鲁替尼治疗的大多数患者未达到完全缓解，中位无进展生存期约为14个月。为了解化合物c是否可用于依鲁替尼抗性mcl，在6天生长/死亡测定中评估化合物c和依鲁替尼敏感性(图18，图a)。具有低化合物cgic50值的细胞系(z-138，maver-1和jvm-2)对依鲁替尼具有抗性，而依鲁替尼敏感细胞系(mino，jeko-1)仅对化合物c具有中度敏感性(图18，图a)。该数据表明依鲁替尼和化合物c的活性谱不重叠，并且依鲁替尼抗性mcl模型对prmt5抑制敏感。此外，prmt5抑制剂和依鲁替尼的组合在大多数测试的mcl细胞系中显示出协同的抗增殖活性(组合指数(ci)<1)(图18，图b和c)，表明两种化合物的组合可以提供增加的治疗益处。这些数据表明prmt5抑制剂可用于依鲁替尼抗性的mcl患者群体，并且可以在依鲁替尼难治性和敏感性环境中探索prmt5抑制剂与依鲁替尼的组合。套细胞淋巴瘤模型中的功效为了测试在淋巴瘤细胞系模型中体外生长/死亡测定中观察到的功效是否适用于体内环境，在套细胞淋巴瘤(敏感z138和maver-1细胞系)的异种移植模型中进行化合物c功效研究。首先，在z-138mcl异种移植模型中的21天功效研究中测试化合物c治疗对肿瘤生长的治疗效果。与载体样品相比，所有化合物c剂量组中的肿瘤显示出重量和体积的显著差异，从最低剂量组(25mg/kgbid)的最低40％tgi至最高100mg/kgbid剂量组的高达>90％(在所有功效研究中，在所有组中均未观察到体重减轻，图19，图a)。使用sdmawestern对肿瘤进行pd分析显示，所有剂量组的甲基标记降低超过70％，在最高剂量组中高达>98％(图19，图b)。接下来，在maver-1mcl异种移植模型中评估化合物c的功效(图20)。在第18天测量的所有化合物c剂量组中的肿瘤与载体样品相比在体积上显示出显著差异，范围从最低剂量组的最小50％tgi到最高剂量组中高达>90％。使用sdma对肿瘤进行pd分析显示所有剂量组的甲基标记减少了80-95％。这些数据表明化合物c处理在套细胞淋巴瘤的异种移植模型中导致显著的肿瘤生长抑制(接近100％tgi)。对于最大tgi(>90％)几乎完全抑制了sdma信号(>90％)，表明为了在肿瘤中获得显著功效，需要将prmt5活性抑制>90％。淋巴瘤生物学总结·prmt5与癌症之间目前描述的最强的机制联系是在mcl中。prmt5经常在mcl中过表达，并且在核区室中高表达，其中其增加组蛋白甲基化水平并沉默肿瘤抑制基因的子集。重要的是，细胞周期蛋白d1(在绝大多数mcl患者中易位的癌基因)与prmt5相关并通过cdk4依赖性机制增加prmt5活性。prmt5介导了对负调节dna复制的关键基因的抑制，从而允许细胞周期蛋白d1依赖性肿瘤生长。prmt5敲低抑制了细胞周期蛋白d1依赖性的细胞转化，导致肿瘤细胞死亡。这些数据突出了prmt5在mcl中的重要作用，并表明prmt5抑制可用作mcl中的治疗策略。·化合物c抑制mcl细胞系中的生长并诱导死亡，mcl细胞系是迄今为止测试的最敏感细胞系之一(在6天生长/死亡测定中)。在一组测试的mcl细胞系中，3个细胞系的gic50<10nm，2个细胞系显示gic50≤100nm，1个细胞系的gic50>1μm。目前正在研究化合物c对prmt5和细胞周期蛋白d1的下游靶标的影响，以评估其是否有助于抗生长和促细胞凋亡反应。·sdma抗体methylscantm用于评估mcl细胞系中的prmt5底物。绝大多数含有sdma的蛋白质是参与细胞剪接和rna加工(smb，lsm4，hnrnph1和其他)、转录(fubp1)和翻译的因子，突出了prmt5作为细胞rna稳态的重要调节剂的作用。sdma抗体进一步用于评估一组mcl细胞系中的prmt5抑制，其中sdmaic50值在敏感和抗性模型中相似，表明sdma不是反应的标记，而是prmt5抑制的标记。·化合物c处理诱导rna亚组中的剪接变化，特别是在mcl和dlbcl细胞系中观察到mdm4同种型转换，表明prmt5抑制通过调节mdm4剪接激活p53途径。敲低/拯救实验将用于进一步评估mdm4/p53途径在prmt5抑制剂诱导的细胞应答中的作用。·mdm4同种型表达和p53突变是mcl中对prmt5抑制反应的潜在预测性生物标志物。在mcl细胞系组中，两种野生型p53细胞系z138和jvm-2是最敏感的细胞系(最低的gic50值和仅有两个在6天生长/死亡测定中表现出细胞毒性的mcl细胞系)。·近年来，依鲁替尼的临床探索彻底改变了mcl治疗的方法。体外数据表明，prmt5抑制剂可用于依鲁替尼抗性的mcl患者群体，并且可以在依鲁替尼难治性和敏感性环境中探索prmt5抑制剂与依鲁替尼的组合。·体内研究表明，化合物c治疗在套细胞淋巴瘤的异种移植模型中导致了显著的肿瘤生长抑制(接近100％tgi)。为了在肿瘤中获得最大功效(tgi>90％)，需要几乎完全抑制prmt5活性(>90％)。乳腺癌生物学细胞系筛选数据证明乳腺癌细胞系对prmt5抑制敏感，并且在2d6天生长/死亡测定中显示出几乎完全的生长抑制(低ymin-t0，图7-9)。另外，来自患者的(pdx)肿瘤模型组中的集落形成测定的数据表明，乳腺肿瘤是该组中最敏感的肿瘤之一(基于化合物erel.ic50值，图10)。因此，在若干生长/死亡和机制研究中评估乳腺癌细胞系，以评估prmt5抑制在乳腺癌中的作用和治疗潜力。为了理解跨不同乳腺肿瘤亚型的prmt5抑制剂活性，使用prmt5工具化合物在7天生长测定中分析一组乳腺癌细胞系(图21)。prmt5抑制在所测试的乳腺癌细胞系的各种亚型中以低ic50值减弱细胞生长。与her2或激素受体(hr)阳性细胞系相比，tnbc(三阴性乳腺癌)细胞系中的值ic50值最低。在6天的生长/死亡测定中，大多数乳腺癌细胞系表现出细胞抑制效果。为了评估是否长期暴露于化合物c将影响应答的细胞抑制性与细胞毒性性质，在长期生长/死亡测定中评估prmt5抑制剂(图22)。在skbr3、mda-mb-468和mcf-7细胞中，用化合物c(以及工具分子化合物b)处理在长时间暴露于化合物后(7-10天)导致细胞毒性反应。在zr-75-1细胞中，prmt5抑制剂在所有时间点(第3-12天)引发细胞抑制应答，而z-138(mcl，包括作为对照)细胞在测定的所有时间点(第3-10天)表现出严重的总体净细胞死亡。这些数据表明prmt5抑制在一部分乳腺癌细胞系中导致在长时间暴露(>5天)后的净细胞死亡(细胞毒性应答)。为了测试化合物c对细胞生长的影响是否与细胞周期分布的变化相关，使用碘化丙锭facs(荧光激活细胞分选)分析评估化合物c对细胞周期的影响(图23)。总体而言，facs结果与长期增殖数据一致，表明在4个乳腺癌细胞系中的3个中，长期化合物c处理在7-10天处理后诱导细胞死亡(<2n增加)。在mcf-7细胞(p53野生型)中，化合物c处理导致在第2天细胞在g1期(2n)的积累和细胞周期的s期细胞的丢失(>2n和<4n)，随后细胞死亡，如第10天细胞在亚g1期(<2n)积累所证明。在zr-75-1细胞(p53野生型)中，化合物c对细胞周期分布影响较小。其中在第7天和第10天g1(2n)减少，且在>4n细胞部分增加。mda-mb-468和skbr-3细胞系对化合物c处理的应答类似，在g1(2n)期(第7天或第10天)减少，g2/m(4n)和>4ndna含量增加，这与subg1(<2n)中细胞的积累一致，表明细胞死亡。这些数据表明prmt5抑制影响细胞周期中细胞的分布，并且表型结果取决于细胞环境。为了评估prmt5活性是否在敏感和抗性乳腺癌细胞系中被同等地抑制，在prmt5抑制剂处理后的细胞中测量sdma水平(图24)。总体而言，sdma降低的时间对于所有测试的细胞系(敏感和抗性)是相似的。在第3天观察到sdma的最大抑制。mda-mb-468细胞中的sdmaic50为5.4nm，类似于z138细胞中的sdmaic50。这些数据表明sdma是prmt5催化活性的标志物，并且不能预测prmt5抑制的抗增殖反应。sdmaic50值正在一组乳腺癌细胞系中被进一步评估。体内乳腺癌模型中的效力接下来，在乳腺癌的体内模型中评估prmt5抑制的效力。首先，用100mg/kg(qd和bid)和200mg/kg(qd)的化合物c处理mda-mb-468，三阴性乳腺癌异种移植模型(图25)。在100mg/kgbid处理组中观察到最大肿瘤生长抑制(tgi＝83％)，其中sdma抑制大于90％，而在100mg/kgqd处理的动物中，化合物c处理无效且sdma抑制率低于80％。该数据表明sdma水平需要几乎完全被抑制(>90％)，以便在体内乳腺癌异种移植模型中看到显著的tgi。乳腺癌概述·在乳腺癌中，高prmt5表达和高pdcd4(程序性细胞死亡因子4)水平预测总体不良存活率。·乳腺癌细胞系和乳腺癌患者衍生模型是2d生长/死亡和集落形成测定中测试的最敏感模型之一。·化合物c处理在6天生长/死亡测定中导致完全生长抑制，并且在测试的4个细胞系中的3个中长期暴露于prmt5抑制剂诱导细胞死亡。·在7天增殖试验中，tnbc细胞系对prmt5的抑制作用比her2和激素受体阳性细胞系更敏感。·用prmt5抑制剂处理的敏感和抗性的乳腺癌细胞系的sdma水平降低，表明sdma不是应答的标志物，而是prmt5活性的标志物。·在mda-mb-468异种移植模型中，化合物c治疗在100mg/kgbid治疗组中导致肿瘤生长抑制(tgi＝83％)，其中sdma抑制大于90％，而在100mg/kgqd治疗的动物中，化合物c治疗无效并且sdma抑制小于80％。该数据表明，为了在体内乳腺癌异种移植模型中观察到显著的tgi，需要几乎完全抑制sdma水平(>90％)。·总体而言，这些数据表明prmt5抑制作为乳腺癌，特别是tnbc亚型的潜在治疗策略。成胶质细胞瘤(gbm)生物学prmt5蛋白在成胶质细胞瘤肿瘤中经常过表达，并且高prmt5水平与gbm患者的等级(iv级)和较差的存活率强烈相关(yanf，等人cancerres。2014年3月15日；74(6)：1752-65)。prmt5敲低减弱了gbm细胞系的生长和存活并显著改善原位gli36异种移植模型中的存活(yanf，等人cancerres.2014年3月15日；74(6):1752-65)。prmt5还通过调节神经祖细胞的生长和分化在正常小鼠脑发育中起重要作用(bezzim，等人，genesdev.2013年9月1日；27(17)：1903-16)。成胶质细胞瘤细胞系模型是软琼脂集落形成测定中最敏感的肿瘤类型之一(图10)。在2d，6天生长/死亡ctg测定中，gbm细胞系具有40-22000nm范围内的gic50值，其中响应主要是细胞抑制，sf539细胞系除外(图7和8)。为了理解prmt5抑制对更长时间暴露于prmt5抑制剂后细胞生长和存活的影响，在2d、14天生长/死亡ctg测定中测试化合物c活性(图26)。总体而言，细胞抑制/细胞毒性应答的性质在长时间暴露于化合物后没有变化，并且响应于prmt5抑制而经历凋亡的唯一细胞系是sf539。接下来，通过测量sdma、p53和p21蛋白水平和mdm4剪接，在用prmt5抑制剂处理的gbm细胞中评估对细胞甲基化和p53途径的影响(图27)。prmt5抑制导致所有测试细胞系中sdma信号的减少(图27，图b)，而不考虑它们对prmt5抑制的敏感性。在所有细胞系中检测到备选的mdm4剪接，除了sf539，其是p53突变体并且具有长mdm4同种型的低基础表达(图27，图a)。所有细胞系中p53水平均增加，而仅在具有野生型p53的细胞系(z138(mcl)、u87-mg和a172(gbm))中观察到p21蛋白的诱导。这些数据表明prmt5抑制剂可以通过mdm4活性的失活而激活gbm模型中的p53途径，类似于在淋巴瘤模型中观察到的效应。重要的是，gbm细胞系敏感性与p53突变状态无关，表明其他机制有助于prmt5抑制诱导的生长抑制表型。有趣的是，prmt5抑制导致野生型p53gbm细胞系中的细胞抑制应答。p53在gbm细胞系对prmt5抑制的应答中的作用将在未来的研究中进一步测试。此外，正在探索prmt5抑制对gbm模型中细胞周期和神经分化的影响。成胶质细胞瘤概述·prmt5蛋白在成胶质细胞瘤肿瘤中经常过表达，高prmt5水平与gbm患者的较高级别(iv级)和较差的生存率密切相关。·成胶质细胞瘤细胞系模型是软琼脂集落形成测定中最敏感的肿瘤类型之一。·在2d、6天和14天生长/死亡ctg测定中，gbm对prmt5抑制的应答主要是细胞抑制(4个细胞系中有3个，1个细胞系具有细胞毒性应答)。·prmt5抑制导致所有测试细胞系中sdma信号的减少，而不考虑它们对prmt5抑制的敏感性。其他敏感性肿瘤类型细胞系和患者衍生的模型筛选数据表明prmt5抑制剂在广泛的肿瘤类型中减弱细胞生长和存活(图7-10)。整体生物学总结·化合物c抑制多种细胞蛋白上的对称精氨酸二甲基化，包括剪接体成分、组蛋白、转录因子和激酶。因此，prmt5抑制剂通过多种机制影响rna稳态，包括转录、剪接和mrna翻译的变化。·prmt5抑制导致基因表达和剪接变化，最终导致p53的诱导。化合物c在p53泛素连接酶mdm4中诱导同种型转换，稳定p53蛋白，并在套细胞和弥漫性大b细胞淋巴瘤以及乳腺癌和胶质瘤癌细胞系(迄今唯一测试的肿瘤类型)中诱导p53靶基因表达信号转导。·化合物c抑制广泛的实体和血液肿瘤细胞系中的增殖，并诱导一部分套细胞和弥漫型大b细胞淋巴瘤、乳腺癌、膀胱癌和神经胶质瘤细胞系的细胞死亡。在套细胞和弥漫型大b细胞淋巴瘤细胞系中观察到最有效的生长抑制。在套细胞淋巴瘤和乳腺癌的异种移植模型中测试化合物c的效力，其中其显著抑制肿瘤生长。这些数据为使用化合物c作为套细胞淋巴瘤、弥漫型大b细胞淋巴瘤、乳腺癌和脑癌的治疗策略提供了强有力的理论依据。实施例2组合测定用化合物c和抗ox40作为单一试剂和组合治疗的ct-26(结肠癌)肿瘤模型小鼠和a20(淋巴瘤)肿瘤模型小鼠的存活优势。小鼠口服给药载体或126.1mg/kg化合物c，每天一次，持续3周。给小鼠腹膜内施用5mg/kg的抗ox40(克隆ox86)或相应的载体，每周两次，持续21天。克隆ox86是大鼠抗小鼠ox40受体抗体。图28显示用相应载体(第1组和第3组)、化合物c(第6组)、抗ox40(第2组)和化合物c与抗ox40的组合(第11组)治疗的a20肿瘤模型中的平均存活率。图29显示用相应载体(第1组和第3组)、化合物c(第6组)、抗ox40(第2组)和化合物c与抗ox40的组合(第11组)治疗的ct-26肿瘤模型的平均存活率。。用抗ox-40抗体和化合物c的组合治疗a20异种移植肿瘤导致适中的存活优势，突出了两种药剂之间潜在的协同相互作用。序列表<110>葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司<120>组合疗法<130>pu66171<150>us62/428,764<151>2016-12-01<150>us62/433,363<151>2016-12-13<160>38<170>patentinversion3.5<210>1<211>5<212>prt<213>mussp.<400>1asptyrsermethis15<210>2<211>17<212>prt<213>mussp.<400>2trpileasnthrgluthrglygluprothrtyralaaspaspphelys151015gly<210>3<211>13<212>prt<213>mussp.<400>3protyrtyrasptyrvalsertyrtyralametasptyr1510<210>4<211>122<212>prt<213>mussp.<400>4glnileglnleuvalglnserglyprogluleulyslysproglyglu151015thrvallysilesercyslysalaserglytyrthrphethrasptyr202530sermethistrpvallysglnalaproglylysglyleulystrpmet354045glytrpileasnthrgluthrglygluprothrtyralaaspaspphe505560lysglyargphealapheserleugluthrseralaserthralatyr65707580leuglnileasnasnleulysasngluaspthralathrtyrphecys859095alaasnprotyrtyrasptyrvalsertyrtyralametasptyrtrp100105110glyhisglythrservalthrvalserser115120<210>5<211>122<212>prt<213>人工序列<220><223>人工序列的说明:合成多肽<400>5glnvalglnleuvalglnserglysergluleulyslysproglyala151015servallysvalsercyslysalaserglytyrthrphethrasptyr202530sermethistrpvalargglnalaproglyglnglyleulystrpmet354045glytrpileasnthrgluthrglygluprothrtyralaaspaspphe505560lysglyargphevalpheserleuaspthrservalserthralatyr65707580leuglnileserserleulysalagluaspthralavaltyrtyrcys859095alaasnprotyrtyrasptyrvalsertyrtyralametasptyrtrp100105110glyglnglythrthrvalthrvalserser115120<210>6<211>458<212>dna<213>人工序列<220><223>人工序列的说明:合成多核苷酸<400>6actagtaccaccatggcttgggtgtggaccttgctattcctgatggcagctgcccaaagt60atccaagcacaggttcagttggtgcagtctggatctgagctgaagaagcctggagcctca120gtcaaggtttcctgcaaggcttctggttataccttcacagactattcaatgcactgggtg180cgacaggctccaggacaaggtttaaagtggatgggctggataaacactgagactggtgag240ccaacatatgcagatgacttcaagggacggtttgtcttctctttggacacctctgtcagc300actgcctatttgcagatcagcagcctcaaagctgaggacacggctgtgtattactgtgct360aatccctactatgattacgtctcttactatgctatggactactggggtcagggaaccacg420gtcaccgtctcctcaggtaagaatggcctctcaagctt458<210>7<211>11<212>prt<213>mussp.<400>7lysalaserglnaspvalserthralavalala1510<210>8<211>7<212>prt<213>mussp.<400>8seralasertyrleutyrthr15<210>9<211>9<212>prt<213>mussp.<400>9glnglnhistyrserthrproargthr15<210>10<211>107<212>prt<213>mussp.<400>10aspilevalmetthrglnserhislysphemetserthrservalarg151015aspargvalserilethrcyslysalaserglnaspvalserthrala202530valalatrptyrglnglnlysproglyglnserprolysleuleuile354045tyrseralasertyrleutyrthrglyvalproaspargphethrgly505560s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