泽泻提取物在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用的制作方法

本发明属于医药技术领域，特别涉及泽泻提取物在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用。

背景技术：

哮喘是由多种细胞包括气道的炎性细胞和结构细胞(如嗜酸粒胞、肥大细胞、t淋巴细胞、中性粒细胞、平滑肌细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分(cellularelements)参与的气道慢性炎症性疾病。这种慢性炎症导致气道高反应性，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，并引起反复发作性的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和(或)清晨发作、加剧，多数患者可自行缓解或经治疗后缓解。哮喘发病的危险因包括宿主因(遗传因素)和环境因素两个方面。哮喘疾病不仅本身不容易完全根治，而且还会引发多种其他疾病，比如：自发性气胸、肺部感染、呼吸衰竭、慢性支气管炎、肺气肿、肺心病等等。哮喘的周期性发作会导致患者失眠、疲劳、活动量减小，严重影响正常的学习工作。目前，全世界约有3.39亿哮喘患者，中国约有3千万哮喘患者，而且哮喘患者人数仍然在逐年上升，哮喘已然成为一种严重威胁人类健康的慢性呼吸系统疾病。目前的医疗水平仍然不能根治哮喘，只能通过药物控制哮喘发作的时间和症状，病情严重的患者必须常年用药以控制哮喘病情的恶化。

哮喘有三个重要的特征：气道平滑肌收缩性增强、气道高反应(airwayhyperreactivity，ahr)以及气道重塑(airwayremodeling)。气道平滑肌的异常收缩是哮喘患者发病时呼吸困难的主要原因。气道平滑肌细胞的收缩与胞内钙离子浓度有关，胞内钙离子浓度变化主要是通过离子通道的开闭状态进行的。

泽泻(学名：alismaplantago-aquaticalinn.)，多年生水生或沼生草本。块茎直径1-3.5厘米，或更大。花药长约1毫米，椭圆形，黄色，或淡绿色；瘦果椭圆形，或近矩圆形，种子紫褐色，具凸起。产黑龙江、吉林等省区。生于湖泊、河湾、溪流、水塘的浅水带，沼泽、沟渠及低洼湿地亦有生长。花较大，花期较长，可用于花卉观赏。亦可入药，具有利尿、抗炎、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗脂肪肝等多种生物学活性。泽泻提取物舒张气道平滑肌治疗哮喘方面的研究，尚未见国内外有相关报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供泽泻提取物在制备用于舒张气道平滑肌的药物中的应用。

本发明研究发现，通过对实验小鼠离体气管环肌张力的检测，发现泽泻提取物是具有高效的舒张气道平滑肌作用的药物，可应用于缓解哮喘患者发作时气道阻塞的症状。

具体地，所述泽泻提取物通过阻断lvdcc离子通道、soc离子通道或者钙敏感离子通道中的至少一种抑制钙离子内流来舒张预收缩的气道平滑肌。

优选地，所述的药物的剂型为胶囊剂、片剂、口服制剂、微囊制剂、注射剂、栓剂、喷雾剂或软膏剂。

优选地，所述的药物的给药方式为注射、口服、吸入式喷雾或透皮给药。

优选地，所述泽泻提取物包括泽泻乙醇提取物、泽泻石油醚提取物、泽泻乙酸乙酯提取物、泽泻正丁醇提取物中及水相浓缩物中的至少一种。

优选地，所述泽泻提取物的提取步骤为：取泽泻药材，粉碎，加入乙醇浸泡进行回流提取得泽泻粗提物浸膏，即为泽泻乙醇提取物；将所述泽泻乙醇提取物加石油醚萃取分层得石油醚层和第一水层，所述石油醚层经减压浓缩得泽泻石油醚提取物；所述第一水层加乙酸乙酯萃取分层得乙酸乙酯层和第二水层，所述乙酸乙酯层经减压浓缩得泽泻乙酸乙酯提取物；所述第二水层加正丁醇萃取分层得正丁醇层和水相，所述正丁醇层经减压浓缩得正丁醇提取物，所述水相经浓缩得水相浓缩物。

优选地，取所述泽泻药材的干燥块茎，粉碎，按照1∶10的比例加入85％乙醇室温浸泡1w。

本发明的有益效果如下：

本发明通过对实验小鼠离体气管环肌张力的检测，发现泽泻提取物是具有高效的舒张气道平滑肌作用的药物，可用于缓解哮喘患者发作时气道阻塞的症状。

附图说明

图1为泽泻提取物的制备流程示意图；

图2为泽泻提取物舒张高钾诱导的气道平滑肌的预收缩结果图，其中(a)为实验组加泽泻提取物时气管环张力变化图，(b)为对照组加pss时气管环张力变化图，(c)为实验组和对照组在不同浓度的泽泻提取物下的器官舒张率变化图；

图3为泽泻提取物舒张乙酰胆碱诱导的气道平滑肌的预收缩结果图(a)为实验组加泽泻提取物时气管环张力变化图，(b)为对照组加pss时气管环张力变化图，(c)为实验组和对照组在不同浓度的泽泻提取物下的器官舒张率变化图；

图4为泽泻提取物阻断离子通道图，其中(a)为泽泻提取物阻断lvdcc离子通道；(b)为泽泻提取物阻断soc离子通道；(c)为泽泻提取物阻断钙敏感离子通道。

具体实施方式

实施例1泽泻提取物的制备

如图1所示，取泽泻药材的干燥块茎，粉碎，按照1∶10的比例加入85％乙醇室温浸泡1w，回流提取获得提取液，提取液减压蒸干获得泽泻粗提物浸膏(即为泽泻乙醇提取物)，将所述泽泻粗提物浸膏用石油醚进行萃取，萃取的有机相减压蒸干浓缩成浸膏，即为泽泻石油醚提取物。石油醚萃取时分离出的水相，继续加入乙酸乙酯进行萃取，萃取的有机相减压蒸干浓缩成浸膏，即为泽泻乙酸乙酯提取物。乙酸乙酯萃取时分离出的水相，继续加入正丁醇进行萃取，萃取的有机相减压蒸干浓缩成浸膏，即为泽泻正丁醇提取物，水相经浓缩得水相浓缩物。

每个部分的提取物进行活性检测，组织水平用肌张力(气道平滑肌的张力检测)，细胞水平检测内钙情况。

实施例2泽泻提取物舒张高钾诱导的气道平滑肌的预收缩

1、小鼠气管的体外分离：

周龄相近的雄性成年的balb/c小鼠颈椎脱臼法处死，小鼠腹部朝上固定在解剖板上，剪开胸腔，暴露出心肺组织，移除心脏之后取下从喉结至肺部的一整段组织，将取下的组织马上浸泡于pss溶液(nacl135mm，kcl5mm，mgcl21mm，cacl22mm，hepes10mm，glucose10mm，naoh调ph至7.4)中，然后再转移至胶板上进一步分离出气管环。在体视显微镜下用维纳斯剪小心去除气管外周的结缔组织及内腔中的残留血液，分离出约5-7mm左右的主气管环。

2、小鼠气道平滑肌的张力检测方法：

将小鼠气管剪成长约5mm的气管环后与挂钩连接，小心衔接张力换能器后置于内有6mlpss并持续通氧的37℃的恒温水浴槽中。前负荷调至300mg，开始平衡。平衡期间，每15min换液1次，共换液4次。平衡完毕后使用80mm高钾溶液(h-k)进行预刺激，充分刺激组织活性后换液洗脱，至恢复至基线。30min后即可开始试验。使用80mm高钾溶液(h-k)再次进行刺激，然后开始试验：实验组按照浓度梯度加入pss溶解的泽泻提取物，对照组加入等量的pss，看是否引起预收缩的气管环舒张。

实验结果表明：如图2，离体小鼠气管环在80mm高钾溶液中发生稳定持续的预收缩，浓度依赖性地加入泽泻提取物后收缩的气管环张力逐渐下降。表明泽泻提取物可部分舒张高钾引起的气道平滑肌收缩，且该药物作用呈现浓度依赖性。

实施例3泽泻提取物舒张乙酰胆碱诱导的气道平滑肌的预收缩

除平衡完毕后将高钾溶液(h-k)替换为使用80mm高钾溶液(h-k)或100μm乙酰胆碱(ach)溶液进行预刺激外，其余步骤同实施例2。

如图3，离体小鼠气管环在100μmach溶液中发生稳定持续的预收缩，浓度依赖性地加入泽泻提取物后收缩的气管环张力逐渐下降，直至降到收缩前的基线水平。表明泽泻提取物可基本完全舒张乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩，且该药物作用呈现浓度依赖性。

实施例4泽泻提取物阻断lvdcc,soc,钙敏感等离子通道

将采用实施例2中的方法得到的离体小鼠气管环在100μmach溶液中发生稳定持续的预收缩，分别加入三种阻断剂nifedipine(10μm)、ym-58483(3μm)、y-27632(10μm)后，再加入泽泻提取物，观察气管环张力，结果如图4所示。

实验发现，分别加入三种阻断剂nifedipine(10μm)、ym-58483(3μm)、y-27632(10μm)，在阻断剂存在的情况下，收缩的气管环会发生部分舒张，但不会舒张完全，此时再加入泽泻提取物，能完全舒张至收缩前的基线水平。nifedipine是lvdcc的阻断剂、ym-58483是soc阻断剂，y-27632是钙敏感离子通道的阻断剂。实验结果表明泽泻提取物可以阻断lvdcc、soc和钙敏感离子通道。

综上所述，可知泽泻提取物具有高效的舒张气道平滑肌的药物，有望应用于缓解哮喘患者发作时气道阻塞的症状，具有极大的推广价值。所述泽泻提取物在作为中药制剂时的活性成分时，加些辅料或载体，可制成胶囊剂、片剂、口服剂、微囊制剂、注射剂、栓剂、喷雾剂或软膏剂。

需要说明的是，实施例2-实施例4的实验中，所示泽泻提取物采用的是泽泻乙醇提取物；泽泻石油醚提取物、泽泻乙酸乙酯提取物、泽泻正丁醇提取物，水相浓缩物也能实现相同或相似的技术效果。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。