本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种用于治疗帕金森病的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
帕金森病(parkinson’sdisease，pd)又名震颤麻痹，是第二大常见的中枢神经退行性疾病，随人口老龄化的加速其发病率不断增高。pd发病机制复杂，由于多种因素导致位于大脑黑质致密部的多巴胺神经元发生不可逆的退经性病变。目前临床上以补充脑内多巴胺含量为主的“对症治疗”治标不治本，对pd发病机制以及抗pd药物的研究仍任重道远。本发明课题组成员根据中医辨证论治理论并结合多年的临床经验，认为pd的病因病机与气血两虚、肝风扰动有关。
西医认为pd是一种跟衰老非常相关的疾病，这在中医对pd病名-老年颤证定义中进一步得到验证。目前统计学表明，年龄60岁以上人群的pd发病率为1-2％，而在85岁以上人群，这一数据增加到5％。pd与阿尔茨海默病(ad)、亨廷顿病(hd)这一类与年龄相关的疾病统称为神经退行性疾病。根据美国国家卫生院(nationalinstitutesofhealth，nih)的数据统计，到21世纪中叶，全球65岁以上老年人口达到20亿，将占到总人口的16％，尤其是像我国这样的老龄化人口大国，老年化社会即将到来的背后暗含着越来越多的人将会遭受此类疾病的折磨并承受由此带来的巨大医疗负担，这有可能成为制约国民健康生活和社会可持续发展的重要因素。
然而目前关于pd的治疗仍处于一个尴尬的局面，包括药物在内的许多治疗方法只能缓解症状和延缓病程，并不能起到神经修复和神经保护进而阻断或逆转病程的作用，加之药物长期应用后疗效减弱而毒副作用增大。中药强调整体和标本兼治的思想，在我国拥有悠久的应用历史和广泛的实践基础。越来越多的学者开始将视线转移到中药及其单体组成抗pd的研究中，因此研发一种高效、低毒的抗pd新药具有重大意义，这对于祖国医学的发展和人民健康事业的保障，具有重要而又现实的意义。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是，根据中医辨证论治理论提供一种用于治疗帕金森病的中药组合物。
本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：
一种用于治疗帕金森病的中药组合物，其由如下重量份的中药原料制成：
制何首乌100～150份；夏枯草80～120份；首乌藤70～90份；丹参50～70份；酸枣仁70～90份；玄参50～70份；白芍70～90份；柴胡30～50份；合欢皮50～70份；甘草20～40份。
优选地，所述的中药组合物，其由如下重量份的中药原料制成：
制何首乌120～150份；夏枯草100～120份；首乌藤80～90份；丹参60～70份；酸枣仁80～90份；玄参60～70份；白芍80～90份；柴胡40～50份；合欢皮60～70份；甘草30～40份。
最优选地，所述的中药组合物，其由如下重量份的中药原料制成：
制何首乌120份；夏枯草100份；首乌藤80份；丹参60份；酸枣仁80份；玄参60份；白芍80份；柴胡40份；合欢皮60份；甘草30份。
本发明还提供一种上述用于治疗帕金森病的中药组合物的制备方法，其包含如下步骤：
将丹参、白芍、柴胡粉碎成细粉，过筛；
其余七味加水煎煮1～3次，每次1.5～3小时，分次滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.28的清膏；
将上述细分与清膏混匀，干燥后即得所述的中药组合物。
优选地，所述的制备方法，其包含如下步骤：
将丹参、白芍、柴胡粉碎成细粉，过筛；
其余七味加水煎煮2次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.28的清膏；
将上述细分与清膏混匀，干燥后即得所述的中药组合物。
本发明还提供另外一种上述用于治疗帕金森病的中药组合物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：
(1)将中药原料用体积分数为30％～50％的乙醇提取，得醇提物；
(2)将醇提物上非极性大孔树脂层析柱，先用2～4倍柱体积的体积分数为6～9％的乙醇水溶液洗脱除杂；然后再用4～6倍柱体积的体积分数为18～25％的乙醇水溶液洗脱，收集体积分数为18～25％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的中药组合物。
优选地，步骤(2)的具体方法为：将醇提物上大孔树脂层析柱，先用3倍柱体积的体积分数为8％的乙醇水溶液洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的体积分数为23％的乙醇水溶液洗脱，收集体积分数为23％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的中药组合物。
上述大孔树脂柱是指装有d101型大孔吸附树脂的层析柱。
所述的柱体积是指用大孔树脂填料装柱后，从柱的底板到大孔树脂填料沉积表面的体积。
优选地，步骤(1)所述的提取为加热回流提取，提取次数为1～3次，每次的提取时间为1～2h；其中中药原料总重量与乙醇水溶液的用量比为1g：8～12ml。
上述用于治疗帕金森病的中药组合物在制备治疗帕金森病的药物中的应用。
优选地，所述药物的具体剂型为片剂、丸剂、散剂、口服液、或注射剂。
有益效果：本发明根据中医辨证论治理论提供一种全新组成的用于治疗帕金森病的中药组合物；所述的中药组合物具有高效的治疗帕金森病的作用；进一步地，本发明在传统水煎方法的基础上，我们还采用了乙醇提取和大孔树脂柱层析技术进行了中药有效成分的富集，试验表明，通过本发明所述的大孔树脂柱层析技术富集了大量的治疗帕金森病的有效成分，其效果要优于传统的水煎方法制备得到的中药组合物；此外，通过实验还表明，本发明所述的中药组合物还具有低毒的作用。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
实施例1中药组合物的制备
原料重量份组成：制何首乌120份；夏枯草100份；首乌藤80份；丹参60份；酸枣仁80份；玄参60份；白芍80份；柴胡40份；合欢皮60份；甘草30份。
制备方法：将丹参、白芍、柴胡粉碎成细粉，过筛；其余七味加水煎煮2次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.28的清膏；将上述细分与清膏混匀，干燥后即得所述的中药组合物。
实施例2中药组合物的制备
原料重量份组成：制何首乌120份；夏枯草100份；首乌藤80份；丹参60份；酸枣仁80份；玄参60份；白芍80份；柴胡40份；合欢皮60份；甘草30份。
制备方法：
(1)将中药原料用体积分数为40％的乙醇进行加热回流提取2次，每次提取1.5h，合并两次的提取液浓缩至无醇味后得醇提物；其中中药原料总重量与乙醇水溶液的用量比为1g：10ml；
(2)将醇提物上d101型非极性大孔树脂层析柱，先用3倍柱体积的体积分数为8％的乙醇水溶液洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的体积分数为23％的乙醇水溶液洗脱，收集体积分数为23％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的中药组合物。
对比例1中药组合物的制备
原料重量份组成：制何首乌120份；夏枯草100份；首乌藤80份；丹参60份；酸枣仁80份；玄参60份；柴胡40份；合欢皮60份；甘草30份。
制备方法：将丹参、柴胡粉碎成细粉，过筛；其余七味加水煎煮2次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.28的清膏；将上述细分与清膏混匀，干燥后即得所述的中药组合物。
对比例1与实施例1的区别在于，对比例1原料中不含白芍。
对比例2
原料重量份组成：制何首乌120份；夏枯草100份；首乌藤80份；酸枣仁80份；玄参60份；合欢皮60份；甘草30份。
制备方法：将上述七味加水煎煮2次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.28的清膏；将上述细分与清膏混匀，干燥后即得所述的中药组合物。
对比例2与实施例1的区别在于，对比例1原料中不含丹参、白芍和柴胡三味药材。
对比例3中药组合物的制备
原料重量份组成：制何首乌120份；夏枯草100份；首乌藤80份；丹参60份；酸枣仁80份；玄参60份；白芍80份；柴胡40份；合欢皮60份；甘草30份。
制备方法：
(1)将中药原料用体积分数为40％的乙醇进行加热回流提取2次，每次提取1.5h，合并两次的提取液浓缩至无醇味后得醇提物；其中中药原料总重量与乙醇水溶液的用量比为1g：10ml；
(2)将醇提物上d101型非极性大孔树脂层析柱，先用3倍柱体积的体积分数为15％的乙醇水溶液洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的体积分数为30％的乙醇水溶液洗脱，收集体积分数为30％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的中药组合物。
对比例3与实施例2的区别在于，大孔树脂层析柱的洗脱条件不同。实施例2是先用8％的乙醇水溶液洗脱除杂，再用23％的乙醇水溶液洗脱；而对比例3则是先用15％的乙醇水溶液洗脱除杂，再用30％的乙醇水溶液洗脱。
对比例4中药组合物的制备
原料重量份组成：制何首乌120份；夏枯草100份；首乌藤80份；丹参60份；酸枣仁80份；玄参60份；白芍80份；柴胡40份；合欢皮60份；甘草30份。
制备方法：
(1)将中药原料用体积分数为40％的乙醇进行加热回流提取2次，每次提取1.5h，合并两次的提取液浓缩至无醇味后得醇提物；其中中药原料总重量与乙醇水溶液的用量比为1g：10ml；
(2)将醇提物上d101型非极性大孔树脂层析柱，先用3倍柱体积的体积分数为20％的乙醇水溶液洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的体积分数为40％的乙醇水溶液洗脱，收集体积分数为40％的乙醇水溶液洗脱部位，浓缩干燥即得所述的中药组合物。
对比例4与实施例2的区别在于，大孔树脂层析柱的洗脱条件不同。实施例2是先用8％的乙醇水溶液洗脱除杂，再用23％的乙醇水溶液洗脱；而对比例4则是先用20％的乙醇水溶液洗脱除杂，再用40％的乙醇水溶液洗脱。
试验例1中药组合物对帕金森病模型小鼠爬杆能力的影响
采用mptp诱导c57bl/6小鼠黑质多巴胺神经元损伤制作帕金森病模型，mptp造模方法为30mg/kg腹腔注射，每天一次，连续给5天，间歇3天让多巴胺神经元进行性损伤。
取造模成功的c57bl/6小鼠和正常的c57bl/6小鼠进行试验。试验分为正常组，模型组以及实验组1～6，每组20只。分组后实验组1～6灌胃给药，正常组和模型组分别灌胃蒸馏水，每天两次，连续给药14天，14天后测试小鼠的爬杆能力，并记录爬杆时间，具体结果见表1。
上述的灌胃给药是指分别灌胃实施例1～2以及对比例1～4所述的中药提取物，给药剂量为30mg/kg。其中，实验组1灌胃给药实施例1制备得到的中药提取物；实验组2灌胃给药实施例2制备得到的中药提取物；实验组3灌胃给药对比例1制备得到的中药提取物；实验组4灌胃给药对比例2制备得到的中药提取物；实验组5灌胃给药对比例3制备得到的中药提取物；实验组6灌胃给药对比例4制备得到的中药提取物。
表1.中药组合物对帕金森病模型小鼠爬杆能力的影响
与正常组比较，**p＜0.01,***p＜0.001；与模型组比较，##p＜0.01，###p＜0.01
从表1小鼠的爬杆试验可以看出，帕金森病模型组的爬杆时间显著高于正常组的爬杆时间，经药物干预后的实验组1和2与模型组相比，其爬杆时间大幅缩短；这说明实施例1通过传统的水煎方法制备得到的中药组合物与实施例2通过醇提以及大孔树脂方法制备得到的中药组合物对帕金森病模型小鼠的爬杆能力均有很大程度的改善，而施例2制备得到的中药组合物改善程度更为明显；这说明采用本发明所述的醇提以及大孔树脂方法制备得到的中药组合物其富集了大量的治疗帕金森病的有效成分，其对帕金森病的治疗作用要好于采用传统水煎方法制备得到的中药组合物。
通过实验组1与实验组3(采用对比例1中药组合物)和实验组4(采用对比例2中药组合物)的爬杆时间对比可以看出，实验组3和4的爬杆时间要明显大于实验组1的爬杆时间；这说明对比例1和2的中药组合物在制备过程中少添加了1种和多种中药原料会导致帕金森病的治疗作用减弱甚至严重减弱。
通过实验组2与实验组5(采用对比例3中药组合物)和实验组6(采用对比例4中药组合物)的爬杆时间对比可以看出，实验组5和6的爬杆时间要明显大于实验组2的爬杆时间；这说明在大孔树脂柱层析过程中未按照本发明所述的洗脱条件进行洗脱，得不到治疗帕金森病的有效成分或得不到具有如本发明所述高效的治疗帕金森病的有效成分。
实验例2中药组合物对小鼠纹状体中多巴胺及其代谢产物的影响
参照实验例1的分组与方法，对c57bl/6小鼠连续给药14天，给药14天后断头处理，取脑纹状体，用hplc测定小鼠纹状体中多巴胺(da)及其代谢产物二羟苯乙酸(dopac)和高香草酸(hav)的含量，结果见表2。
表2.中药组合物对小鼠纹状体中多巴胺及其代谢产物的影响
与正常组比较，**p＜0.01,***p＜0.001；与模型组比较，##p＜0.01，###p＜0.01
从表2实验数据可以看出，帕金森病模型组的小鼠纹状体中多巴胺及其代谢产物二羟苯乙酸和高香草酸的含量显著低于正常组，而经药物干预后的实验组1和2与模型组相比，小鼠纹状体中多巴胺及其代谢产物显著升高；这说明实施例1通过传统的水煎方法制备得到的中药组合物与实施例2通过醇提以及大孔树脂方法制备得到的中药组合物对对帕金森病均具有很好的治疗作用。此外还可以看出实施例2制备得到的中药组合物比实施例1制备得到的中药组合物对多巴胺及其代谢产物的含量提高得更为明显；这说明采用本发明所述的醇提以及大孔树脂方法制备得到的中药组合物其富集了大量的治疗帕金森病的有效成分，其对帕金森病的治疗作用要好于采用传统水煎方法制备得到的中药组合物。
通过实验组1与实验组3(采用对比例1中药组合物)和实验组4(采用对比例2中药组合物)对小鼠纹状体中多巴胺及其代谢产物的含量的影响可以看出，实验组3和4的小鼠纹状体中多巴胺及其代谢产物的含量明显低于实验组1；这说明对比例1和2的中药组合物在制备过程中少添加了1种和多种中药原料会导致帕金森病的治疗作用减弱甚至严重减弱。
通过实验组2与实验组5(采用对比例3中药组合物)和实验组6(采用对比例4中药组合物)对小鼠纹状体中多巴胺及其代谢产物的含量的影响可以看出，实验组5和6的的小鼠纹状体中多巴胺及其代谢产物的含量明显低于实验组2；这说明在大孔树脂柱层析过程中未按照本发明所述的洗脱条件进行洗脱，得不到治疗帕金森病的有效成分或得不到具有如本发明所述高效的治疗帕金森病的有效成分。
实验例3急毒性试验
取大鼠sd大鼠20只，雌雄各半，分为2组，每组分别按4.0g/kg灌胃给予实施例1和实施2所述的中药组合物，每天两次，给药当天严密观察记录动物反应，然后每天上、下午各观察1次，连续14天。结果显示：动物灌药后，卧伏少动，摄食、饮水正常。继续观察14天，动物无一例死亡，未见其他毒性反应。