促进皮肤创伤愈合的医药组成物及其用途的制作方法

本发明关于一种可用于皮肤伤口愈合的组成物，特别指一种利用鱼类受精卵萃取物促进伤口愈合、减少伤口感染的医药组成物及其用途。

背景技术：

依据生理学上定义，组织伤口愈合(woundhealing)进程可分成三阶段：发炎期(inflammation)、增生期(proliferation)与成熟期(maturation)，其中如果发炎期间变长将会增加伤口受到感染机会及延迟伤口愈合。再者，伤口的复原又分为表皮层及真皮层的增生修复，通常外表表皮层愈合较快，而内部真皮层却需较长时间来完成组织重塑，回复原状。

亚洲养殖渔业相当进步，其中又以养殖驯化野生鱼种做为种鱼进行繁养的技术独步全球。而种鱼繁殖期生产的受精卵数量是配合市场养殖需求进行孵化放养，因此在淡季或放养品种风向改变时，就会造成该品种受精卵过剩现象，只能废弃，实为可惜。因受精卵具有发育成为完整个体的能力，因此也代表着受精卵中富含所有可能与细胞增生与分化息息相关的各种因子，例如生长因子、细胞激素等。如能将此受精卵进一步提取利用，预期将可应用在创伤护理保养上，不仅物尽其用，更能增进养殖渔业的附加价值。

技术实现要素：

本发提供一种促进皮肤创伤愈合的医药组成物，可促使皮肤创伤愈合，并能增进养殖渔业的附加价值。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种促进皮肤创伤愈合的医药组成物，包括有鱼类受精卵萃取物，所述鱼类受精卵萃取物为低温水萃取鱼类受精卵而得。

进一步，所述鱼类指鲈形目鱼类。

进一步，所述鱼类包括鮨科石斑鱼亚科里的各属鱼类。

进一步，所述鱼类选自：鞍带石斑、棕点石斑、龙虎斑、点带石斑、玛拉巴石斑、驼背鲈、豹纹豹鲙、赤点石斑、褐带石斑、七带石斑所构成群组之一或其组合。

进一步，所述医药组成物促进的皮肤创伤选自切割伤、擦伤、烧烫伤、晒伤所构成群组之一或其组合。

进一步，所述鱼类受精卵萃取物的浓度介于0.01~1wt%。

进一步，其更包括有一个或多个医药上可接受的载体。

进一步，所述鱼类受精卵萃取物为呈水液状、粉体状、颗粒状、凝胶状或乳霜状。

进一步，所述医药组成物包括口服或外用剂型。

本发明的第二目的是提供一种鱼类受精卵萃取物在制备促进皮肤创伤愈合药物的用途。

本发明的第三目的是提供一种皮肤胶原蛋白增生促进剂，其包含使用所述的鱼类受精卵萃取物。

本发明的第四目的是提供一种药用化妆品，其包含使用所述的鱼类受精卵萃取物。

本发明的第五目的是提供一种鱼类受精卵萃取物在制备用于抑制酪氨酸酶活性及促进肌肤胶原蛋白增生的化妆品原料的用途。

本发明的第六目的是提供一种促进皮肤创伤愈合的伤口敷料，其包含使用所述的鱼类受精卵萃取物，用以敷盖于伤口上。

本发明的第七目的是提供一种鱼类受精卵萃取物在制备促进皮肤创伤愈合的伤口敷料的用途。

本发明的第八目的是提供一种抗氧化剂，其包含使用所述的鱼类受精卵萃取物，该鱼类受精卵萃取物浓度0.21wt%具有清除50%自由基的能力。

本发明的有益效果：

1、本发明提取鱼类受精卵萃取物使用在皮肤创伤患处，可以促进伤口愈合，大幅缩短发炎期；如伤口破坏至真皮层，亦能使真皮层乳头结构重塑，使伤口表皮层及真皮层愈后良好。

2、由试验证实鱼类受精卵萃取物具有消除自由基的抗氧化力、抑制细胞酪氨酸酶活性及促进皮肤纤维母细胞分泌大量胶原蛋白功用，因此可进一步应用于化妆保养品与医疗器材的伤口敷料等领域，不仅达到美白、抗老化功效，还能使皮肤创伤(例如医美微创术后、烧烫伤、切割伤、擦伤或晒伤)加速愈合，令其应用层面相当广泛。

附图说明

图1为本发明实施例中鱼类受精卵萃取物对细胞毒性测试的存活率结果图。

图2为本发明实施例中以鱼类受精卵萃取物对人类纤维母细胞处理后，促进胶原蛋白增生的效果图。

图3为本发明实施例中以鱼类受精卵萃取物对大鼠皮肤烧烫伤口处理后，愈合情况影像图。

图4为本发明实施例中以鱼类受精卵萃取物对大鼠皮肤烧烫伤口处理后，促进伤口愈合的效果比较图。

图5为本发明实施例中以鱼类受精卵萃取物对大鼠皮肤烧烫伤口处理后的皮肤组织切片及染色图。

具体实施方式

为了达到上述目的与功效，进一步理解本发明的技术方案，以下特举出较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下：

首先，本发明提出一种促进皮肤创伤愈合的医药组成物，其中，该医药组成物包括有鱼类受精卵萃取物。而前述鱼类受精卵萃取物是通过习知低温水萃方法获得，包含在低温下(10至18℃)使用超音波或高速均质机对受精卵进行均质化处理，令受精卵中蛋白或胜肽分子释放入水液中，再经过多阶段杂质过滤(1mm至0.1um孔径滤网/膜)及除味过程(1g活性碳/1l萃取液)而得。

本发明所属技术领域中具通常知识者皆可理解的是，前述鱼类受精卵萃取物是一种蛋白质总和的概念，意即将受精卵中所有可能存在与细胞增生分化有关的蛋白质、胜肽分子都保留下来，因为其中可能包含了许许多多未知的生长因子(growthfactor)或细胞激素(cytokines)。而在目前全球基因体库尚未完成鮨科石斑鱼亚科鱼种基因体序列定序前，仍无法针对前述未知的生长因子或细胞激素进行单离及定义(尚无标准品可得)，故仅能先以蛋白质总和的概念来定义前述鱼类受精卵萃取物，亦以此尽可能地保留对细胞增生及分化最有利的蛋白质及胜肽分子，以期应用于抗老化美妆产品及医药产品领域。

较佳的是，前述鱼类是指鲈形目鱼类。较佳的是，前述鱼类包括鮨科石斑鱼亚科里的各属鱼类。较佳的是，前述鱼类系选自：鞍带石斑、棕点石斑、龙虎斑、点带石斑、玛拉巴石斑、驼背鲈、豹纹豹鲙、赤点石斑、褐带石斑、七带石斑所构成群组之一或其组合。此外，前述鱼类受精卵亦可以是上述任两品种杂交产生的受精卵，可兼具亲代优良遗传。前述鱼类指被捕捞驯养后可供大量人工繁养殖的鱼种，因已能大量繁养，故所能取得的受精卵数量才得以量化生产出萃取物以供应市场需求，深具产业利用价值。

本发明实施例中，以前述鞍带石斑、棕点石斑、龙虎斑、点带石斑、玛拉巴石斑等五种鱼类的受精卵等比例混合进行萃取所得的萃取物为范例进行说明，但不以此限定鱼类受精卵来自多品种混合，也可以是单一品种受精卵进行萃取。本发明所属技术领域中具通常知识者皆能理解同品种鱼类所产的受精卵，其萃取物所具功效应属可推测范围内，可视为相同或相近。

本发明实施例中，前述鱼类受精卵萃取物的重量百分比浓度大体介于0.01~1wt%。浓度范围的界定，理论上，浓度越高，应该所呈现出的效果越好，但仍须考量皮肤使用安全性，故经皮肤贴布安全性评估后，以浓度1wt%为上限。较佳的是，前述鱼类受精卵萃取物呈水液状、凝胶状；或经冷冻干燥为粉体状、颗粒状；或经乳化作用成为乳霜状，借以因应不同剂型需求。当然，本发明的促进皮肤创伤愈合的医药组成物更可进一步包括有一或多个医药上可接受的载体，使剂型更多元化。较佳的是，该医药组成物包括口服或外用剂型，因传统可供食用鱼类的受精卵亦被认定为可供食用食材，因此亦可做成口服剂型使用，如使用在口腔内膜。而本发明实施例中以水液状(习知精华液剂型)的外用剂型作为进行各种试验的范例说明。

本发明又提出一种鱼类受精卵萃取物在制备促进皮肤创伤愈合药物的用途。

本发明再提出一种药用化妆品，使用包含前述促进皮肤创伤愈合的医药组成物，具有加速修复肌肤损伤、抑制酪胺酸酶活性及促进肌肤胶原蛋白增生的功效。

本发明复提出一种鱼类受精卵萃取物在制备用于抑制酪胺酸酶活性及促进肌肤胶原蛋白增生的化妆品原料的用途。

本发明又再提出一种促进皮肤创伤愈合的伤口敷料，包含使用前述促进皮肤创伤愈合的医药组成物，用以敷盖于伤口上。

本发明复再提出一种鱼类受精卵萃取物在制备促进皮肤创伤愈合的伤口敷料的用途。

本发明复再提出一种抗氧化剂，包含使用前述鱼类受精卵萃取物，该鱼类受精卵萃取物浓度于0.21wt%时具有清除50%自由基的能力。

本发明实施例说明如下：

一、细胞毒性试验

参阅图1所票，本发明实施例以鱼类受精卵萃取物对细胞毒性测试的存活率结果图。利用本发明所属技术领域中具通常知识者皆能理解的细胞存活率分析法(mttassay)来分析鱼类受精卵萃取物对人类皮肤纤维母细胞(hs68)的生长影响，在给予不同浓度的前述鱼类受精卵萃取物(0.01wt%、0.05wt%、0.1wt%及0.5wt%)培养24小时后进行观察。其中，前述浓度0.01wt%、0.05wt%、0.1wt%及0.5wt%经测280nm吸光值换算所含总蛋白质浓度依序约为0.03mg/ml、0.15mg/ml、0.3mg/ml及1.5mg/ml。上述各组细胞型态经显微镜照相结果发现当到达0.5%高浓度时，细胞外观无显著变化，也无明显伤害，显示对其生长并无不良影响，且各组经计算该hs68细胞仍有90%以上存活率，表示前述鱼类受精卵萃取物对hs68细胞无毒性影响。

二、自由基清除能力试验

本发明实施例以常被用于检测抗氧化力的dpph(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼；1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)试剂来进行检测，三重复试验结果发现本发明中前述鱼类受精卵萃取物的自由基抑制率50%浓度(ic50)为2.11±0.31mg/ml，换算重量百分浓度为0.21%左右即具有清除50%自由基的能力。由此证实，前述鱼类受精卵萃取物具有消除自由基的抗氧化能力，进而能协助皮肤抵抗环境自由基的侵袭，延缓肌肤老化情形。

三、酪氨酸酶活性抑制试验

本发明实施例以老鼠黑色素细胞瘤细胞株(b16-f10;bcrc60031)进行试验，分为对照组(未处理)与实验组，实验组以0.0125wt%之前述鱼类受精卵萃取物与细胞进行72小时处理培养，将细胞收下。以20mmtris-0.1%tritonx-100将细胞溶解后离心，取部份上清液先进行蛋白质定量分析。再取其上清液加入l-dopa(l-3,4-dihydroxyphenylanine)溶液中，置于37℃、反应10分钟后，测475nm吸光值。经换算获得结果如下：对照组的酪氨酸酶活性当作100%，实验组中的酪氨酸酶活性只剩下76.93%，换句话说，0.0125wt%之前述鱼类受精卵萃取物具有23.07%的酪氨酸酶活性抑制率。由上述试验证实，前述鱼类受精卵萃取物确实具有抑制酪氨酸酶活性的功效，进而抑制皮肤黑色素生成，达到美白肌肤的效果。

四、促进胶原蛋白增生试验

参阅图2所示，本发明实施例中以鱼类受精卵萃取物对人类纤维母细胞株(hs68)处理后，促进胶原蛋白增生的效果图。本发明实施例以习知总胶原蛋白分析套组(totalcollagenassaykit,biovision)进行检测分析。试验中以人类纤维母细胞为受试对象添加前述鱼类受精卵萃取物进行培养，所取浓度点分别为：对照组(0%)、0.01%、0.05%、0.1%及0.5%，各试验进行三重复。经培养24小时后收取细胞，以20mmtris-0.1%tritonx-100将细胞溶解后离心，收集蛋白质溶液进行检测分析。测得个别560nm吸光值，经换算结果发现，与对照组相比，前述鱼类受精卵萃取物0.01%、0.05%、0.1%、0.5%依序分别有约24%、48.2%、88.2%及126.4%的胶原蛋白增生率，且p<0.05(参阅图2中*处)，显示与对照组有显著性差异。虽本实施例以前述0.01%、0.05%、0.1%、0.5%等四个浓度点进行试验，且依据数据结果的线性规则合理推测，随着浓度往0.5%以上提升拉高，可预期能获得更佳的胶原蛋白增生率，故具通常知识者应可理解不以此浓度范围作为本发明可达成促进胶原蛋白增生功效的限制。习知背景知识认知胶原蛋白是皮肤细胞外基质的主要组成成分，它使皮肤保持弹性，而胶原蛋白的流失与老化，则使皮肤失去弹性而出现皱纹。因此由上述试验结果可知，促进皮肤内胶原蛋白的增生，可进一步达到皮肤紧实、回复弹性及抚平细纹的效果，实现皮肤抗老化作用。

五、促进烧烫伤口愈合试验

实验分为三组：对照组(以注射用生理食盐水处理)、试验a组(前述鱼类受精卵萃取物0.05wt%)及试验b组(点带石斑受精卵萃取物0.05wt%)，各6只大鼠，每只大鼠于麻醉后在背上以92℃铜棒接触皮肤12秒，以开创一个直径2公分左右的圆形深二度烧烫伤口，建立烧烫伤的模式。于开创后第0、1、2、3、5、7、9、12、15、18、21、24天重新清创伤口、投药及包扎。伤口于0、1、2、3、5、7、9、12、15、18、21、24、28天，以isoflurane将动物进行麻醉，利用照相机拍摄存档(伤口旁附校正用的贴纸)，以投影片描绘伤口后再扫描成图档，再以imagej软件分析计算伤口愈合百分比(woundhealingrate,%)。伤口愈合百分比%=[(第0天伤口面积－第n天伤口面积)/第0天伤口面积]×100%。

如图3所示，本发明实施例中以鱼类受精卵萃取物对大鼠皮肤烧烫伤口处理后，愈合情况影像图。从图中可明显看出试验a组与试验b组在开创后第2天已出现伤口愈合缩小情形，相较对照组在第5天才有伤口愈合缩小情形，确实能提早2至3天启动伤口愈合修复机制。由此证实，前述鱼类受精卵萃取物对于烧烫伤口具有提早并促进愈合的功效。

再参阅图4所示，本发明实施例中以鱼类受精卵萃取物对大鼠皮肤烧烫伤口处理后，促进伤口愈合的效果图。图中可明显发现，相较于对照组，前述试验a组与试验b组确实能提早并且加速伤口的愈合。其中值得注意的是，在统计学上，试验a组在第3、5、9、12、15、19及21天(参图中标示a处)与对照组相比具有显著性差异(p<0.05)。由这结果，我们推测，前述鱼类受精卵来自多品系混合所得萃取物其功效可能较来自单一品系所得萃取物为佳。

请再参阅图5所示，本发明实施例中以鱼类受精卵萃取物对大鼠皮肤烧烫伤口处理后的皮肤组织切片及染色图。本试验于开创后第14天(伤口增生期)每组随机牺牲大鼠将其背部烫伤的部位皮肤取下，并于第28天(伤口成熟期)将其余大鼠全部牺牲，同样将其背部烫伤的皮肤部位取下，直接浸泡于10%(v/v)福尔马林溶液中至少24小时后进行组织切片及染色(h&estain)。图中为显微照相下观察(40x、200x)，第14天时各组别伤口处包含形成结痂(参阅图中标示*处)、新生上皮(参图中标示&处)、多核白血球浸润、纤维母细胞浸润、新生血管及胶原蛋白表现上均无显著差异。另在第28天时，与对照组相较，前述试验a组与试验b组的纤维母细胞增殖程度更显著(p<0.05)，表示可分泌大量胶原蛋白，促使表皮层及真皮层皮肤进行新生修复(参图中标示&处)。而值得注意的是，前述试验a组相较于其他二组可看到其新生表皮组织向下延展至真皮层，重建出原始真皮乳头（dermalpapilla）结构(参阅图中箭头所指)，使表皮与真皮的连接面扩大，有利于两者牢固连接，并便于表皮从真皮的血管获得营养，使得新生皮肤组织结构恢复的较为完整。

由上述动物烧烫伤愈合试验结果得知，对于此种深二度烧烫伤，伤及表皮层及真皮层，可以说是相当严重的一种皮肤创伤，而本发明证实对于促进此种严重皮肤创伤愈合修复有着明显的功效。因此，发明人相信在本发明所属技术领域中具通常知识者都应能理解，前述鱼类受精卵萃取物对一般只伤及表皮层的轻度皮肤创伤(如医美雷射微创术后、轻度烧烫伤、切割伤、擦伤或晒伤)理应有着相同促进伤口愈合修复的功效。

结合上述各种试验结果证实，前述鱼类受精卵萃取物确实具有抗氧化能力、抑制黑色素生成、增进皮肤胶原蛋白增生以及促进皮肤创伤愈合等显著功效，使其具有应用于医药产品、药用化妆品及医疗器材的敷料开发上潜力，创造渔业及消费者双赢的新局面。

综合上述实施例的说明，当可充分了解本发明的操作、使用及本发明产生的功效，然以上所述实施例仅为本发明的较佳实施例，当不能以此限定本发明实施的范围，即依本发明申请专利范围及发明说明内容所作简单的等效变化与修饰，皆属本发明涵盖的范围内。