本发明属于黑果腺肋花楸果活性物质提取的技术领域，特别是指一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法及其所得的黑果腺肋花楸果多酚提取物。
背景技术：
2018年，黑果腺肋花楸果被国家卫健委定性为新食品原料，(学名：aroniamelanocarpa(michx.)elliott)是蔷薇科，腺肋花楸属灌木，高可达3m。根棕黄色，潜根系，根不具发枝能力。嫩枝无绒毛。树皮红棕色或灰褐色，具有明显的圆形皮孔，叶色深绿，单叶，互生；网状叶脉，叶片卵圆形或椭圆形至椭圆-倒披针形，叶尖锐或钝；梨果，果皮紫黑色，果肉暗红色，种子肾形，棕褐色，复伞房花序，花序柄上有绒毛，小花，花药为背着药，粉红色；花瓣白色，花萼片，离萼，绿色杯状；雌蕊子房上位，绵毛状，5月开花，6月-7月结果。黑果腺肋花楸原产于北美东北部，波罗的海沿岸至太平洋沿岸均有分布。
黑果腺肋花楸果实具有非凡的保健作用。果实及其提取物对心脏病、高血压等心脑血管疾病具有特殊的疗效，在欧美地区广泛应用于医药和功能食品工业。果实中多酚是已知植物中含量最高的。多酚是改善毛细血管和血管的结构与机能的非常重要的物质，还有助于刺激和改善循环系统。果实提取物对治疗辐射病和重金属中毒症有很好的疗效。本发明克服了传统制备方法操作繁琐、分离周期长等缺点，并具有分离效率高，产品纯度好、适于工业化生产的一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法及其所得的黑果腺肋花楸果多酚提取物，解决了现有技术中黑果腺肋花楸果多酚的提取方法存在收率低和纯度较低的问题。
本发明的一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法，其主要是通过以下技术方案加以实现的：包括以下步骤：1)取黑果腺肋花楸果，浸泡，清洗，置于80-90℃的热水中，热烫20-30min，备用；2)将步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果添加到乙醇溶液中，加入碳酸钠和表面活性剂，在40-50℃下，提取1-4h，过滤，得滤液；乙醇溶液的体积浓度为10-30％，乙醇溶液的用量为步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果重量的5-20倍，碳酸钠的重量与黑果腺肋花楸果的干基重量之比为1:5-1:15，表面活性剂的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.1-0.2％；3)向步骤2)所得的滤液中添加有机溶剂，搅拌，混合5-15min，滤液与有机溶剂的体积比为1:2-1:10，过滤，得清液；4)脱色，纯化，干燥，得黑果腺肋花楸果多酚提取物。
本发明的黑果腺肋花楸果经过浸泡和清洗之后，采用热水热烫，灭活了酚氧化酶，防止细胞破碎后，酚氧化酶与酚接触，引起酚氧化；本发明在提取过程中加入了碳酸钠，能够溶解细胞壁中的黑果腺肋花楸果酸成分，易于酚类的释放，提高了收率；同时，黑果腺肋花楸果酸转化为黑果腺肋花楸果酸钠，增加了体系的粘性，减少了多酚的氧化；另外，还加入了表面活性剂，显著增大了多酚的溶解度，增强了提取液的流动性，减少了溶剂用量和设备投资，乳化体系更稳定，提取收率更高；乙醇溶液为乙醇的水溶液，乙醇溶液的体积浓度为乙醇占整个乙醇溶液的体积分数。本发明的黑果腺肋花楸果多酚的提取方法工艺流程短，不需要使用生物酶，也不需要调节ph值，操作方便，条件温和，便于控制，成本低，易于工业化生产，所得黑果腺肋花楸果多酚提取物的收率高，达2.5-4.5％，纯度高，多酚纯度为91-94％。
作为一种优选的实施方案，所述步骤2)中，表面活性剂为月桂醇聚氧乙烯醚、鲸蜡醇聚氧乙烯醚、油醇聚氧乙烯醚、吐温表面活性剂中的任意一种，或者吐温表面活性剂与司盘表面活性剂组成的第一复合表面活性剂，或者吐温表面活性剂与月桂醇硫酸钠组成的第二复合表面活性剂，或者吐温表面活性剂、司盘表面活性剂以及月桂醇硫酸钠组成的第三复合表面活性剂；所述吐温表面活性剂为吐温20、吐温40、吐温60、吐温80，所述司盘表面活性剂为司盘20、司盘80。本发明的表面活性剂可以是单一表面活性剂，也可以是吐温表面活性剂与司盘表面活性剂组成的复合表面活性剂，还可以是吐温表面活性剂与月桂醇硫酸钠组成的复合表面活性剂，或者是吐温表面活性剂、司盘表面活性剂以及月桂醇硫酸钠组成的复合表面活性剂；复合表面活性剂的使用，使乳化体系更加稳定，提取收率更高，产品纯度更好。
作为一种优选的实施方案，所述第一复合表面活性剂中吐温表面活性剂与司盘表面活性剂的重量之比为7-9:1，所述第二复合表面活性剂中吐温表面活性剂与月桂醇硫酸钠的重量之比为7-9:1-2，
所述第三复合表面活性剂中吐温表面活性剂、司盘表面活性剂和月桂醇硫酸钠的重量之比为7-9:1:1-2。调整复合表面活性剂的配比，使复合表面活性剂结构更加优化，进一步提高了复合表面活性剂的性能，增加了多酚的溶解度，提高了乳化体系的稳定性，增加了产品的收率和纯度。
作为一种优选的实施方案，所述步骤3)中，有机溶剂为乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯中的任意一种或几种。有机溶剂的选择有很多种，使用乙醇的效果最好，本发明中有机溶剂的用量少，产生的废液少，生产便捷。
作为一种优选的实施方案，所述步骤4)中，脱色为活性炭脱色，活性炭用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.3-1％，脱色温度为5-30℃，脱色时间为20-40min。控制活性炭的使用量、脱色温度和脱色时间，可以提高脱色效果，提高脱色效率，提高产品质量。
作为一种优选的实施方案，所述步骤4)中，纯化为采用xda-7大孔树脂纯化，纯化条件：上样流速为0.8-1bv/h，洗脱剂是体积浓度为55-65％的乙醇溶液，洗脱流速为1.5-2.5bv/h，洗脱剂用量为5-6bv。本发明采用xda-7大孔树脂在层析柱中进行纯化，控制层析柱的上样流速、洗脱剂、洗脱流速和洗脱剂用量，从而更好的纯化黑果腺肋花楸果多酚，提高生产效率。这里的乙醇溶液也是乙醇的水溶液。
作为一种优选的实施方案，所述步骤4)中，干燥为冷冻干燥。这种低温冷冻干燥，有利于充分保留黑果腺肋花楸果多酚中的活性成分，提高其有利利用价值。本发明在步骤2)过滤后的滤渣中，还可以添加等重量的纯水，搅拌，洗涤，过滤，并将滤液合并，以用于步骤3)。
作为一种优选的实施方案，所述步骤1)中，黑果腺肋花楸果的浸泡时间为1-3h。本发明的黑果腺肋花楸果最好是一年内采集的干基黑果腺肋花楸果，在去除沉淀物及其它附着物之后，用自来水反复清洗干净；清洗之后黑果腺肋花楸果，在水中浸泡，再次洗涤，去除无机盐成分，倒掉浸泡水，加新鲜水重复浸泡1次，以得到低盐的黑果腺肋花楸果样品。
本发明的一种黑果腺肋花楸果多酚提取物，其主要是通过以下技术方案加以实现的：所述黑果腺肋花楸果多酚提取物是根据上面任意一项所述的黑果腺肋花楸果多酚的提取方法而得到的。
黑果腺肋花楸果富含黑果腺肋花楸果花青素、多糖、酚类等多种活性物质，黑果腺肋花楸果多酚是从黑果腺肋花楸果中提取出的一类多羟基酚类化合物，也被认为是间苯三酚的衍生物，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗心血管疾病、抗糖尿病综合症等广泛的生物活性，未来将在海洋药物、功能食品和日化领域得到广泛应用。本发明的黑果腺肋花楸果多酚提取物的收率高，达2.5-4.5％，纯度高，多酚纯度为91-94％，应用范围广。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的黑果腺肋花楸果经过浸泡和清洗之后，采用热水热烫，灭活了酚氧化酶，防止细胞破碎后，酚氧化酶与酚接触，引起酚氧化；本发明在提取过程中加入了碳酸钠，能够溶解细胞壁中的黑果腺肋花楸果酸成分，易于酚类的释放，提高了收率；同时，黑果腺肋花楸果酸转化为黑果腺肋花楸果酸钠，增加了体系的粘性，减少了多酚的氧化；另外，还加入了表面活性剂，显著增大了多酚的溶解度，增强了提取液的流动性，减少了溶剂用量和设备投资，乳化体系更稳定，提取收率更高；本发明的黑果腺肋花楸果多酚的提取方法工艺流程短，不需要使用生物酶，也不需要调节ph值，操作方便，条件温和，便于控制，成本低，易于工业化生产，所得黑果腺肋花楸果多酚提取物的收率高，达2.5-4.5％，纯度高，多酚纯度为91-94％。
本发明的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。虽然以下描述了本发明的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。
本发明的一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法，包括以下步骤：
1)取黑果腺肋花楸果，浸泡，清洗，置于80-90℃的热水中，热烫20-30min，备用；
2)将步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果添加到乙醇溶液中，加入碳酸钠和表面活性剂，在40-50℃下，提取1-4h，过滤，得滤液；乙醇溶液的体积浓度为10-30％，乙醇溶液的用量为步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果重量的5-20倍，碳酸钠的重量与黑果腺肋花楸果的干基重量之比为1:5-1:15，表面活性剂的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.1-0.2％；
3)向步骤2)所得的滤液中添加有机溶剂，搅拌，混合5-15min，滤液与有机溶剂的体积比为1:2-1:10，过滤，得清液；
4)脱色，纯化，干燥，得黑果腺肋花楸果多酚提取物。
优选地，所述步骤2)中，表面活性剂为月桂醇聚氧乙烯醚、鲸蜡醇聚氧乙烯醚、油醇聚氧乙烯醚、吐温表面活性剂中的任意一种，或者吐温表面活性剂与司盘表面活性剂组成的第一复合表面活性剂，或者吐温表面活性剂与月桂醇硫酸钠组成的第二复合表面活性剂，或者吐温表面活性剂、司盘表面活性剂以及月桂醇硫酸钠组成的第三复合表面活性剂；所述吐温表面活性剂为吐温20、吐温40、吐温60、吐温80，所述司盘表面活性剂为司盘20、司盘80。
进一步地，所述第一复合表面活性剂中吐温表面活性剂与司盘表面活性剂的重量之比为7-9:1，所述第二复合表面活性剂中吐温表面活性剂与月桂醇硫酸钠的重量之比为7-9:1-2，所述第三复合表面活性剂中吐温表面活性剂、司盘表面活性剂和月桂醇硫酸钠的重量之比为7-9:1:1-2。
具体地，所述步骤3)中，有机溶剂为乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯中的任意一种或几种。
再次优选地，所述步骤4)中，脱色为活性炭脱色，活性炭用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.3-1％，脱色温度为5-30℃，脱色时间为20-40min。
再进一步地，所述步骤4)中，纯化为采用xda-7大孔树脂纯化，纯化条件：上样流速为0.8-1bv/h，洗脱剂是体积浓度为55-65％的乙醇溶液，洗脱流速为1.5-2.5bv/h，洗脱剂用量为5-6bv。
更具体地，所述步骤4)中，干燥为冷冻干燥。
更优选地，所述步骤1)中，黑果腺肋花楸果的浸泡时间为1-3h。
本发明的一种黑果腺肋花楸果多酚提取物，所述黑果腺肋花楸果多酚提取物是根据上面任意一项所述的黑果腺肋花楸果多酚的提取方法而得到的。
实施例1
本发明的一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法，包括以下步骤：
1)取黑果腺肋花楸果，反复清洗干净后，浸泡2h，清洗，置于80℃的热水中，热烫20min，备用；
2)将步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果添加到乙醇溶液中，加入碳酸钠和表面活性剂——月桂醇聚氧乙烯醚，在40℃下，提取1h，过滤，得滤液；其中，乙醇溶液的体积浓度为10％，乙醇溶液的用量为步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果重量的5倍，碳酸钠的重量与黑果腺肋花楸果的干基重量之比为1:15，月桂醇聚氧乙烯醚的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.1％；
3)向步骤2)所得的滤液中添加有机溶剂，搅拌，混合5min，滤液与有机溶剂的体积比为1:2，过滤，得清液；
4)活性炭脱色，沉淀除糖、采用xda-7大孔树脂纯化黑果腺肋花楸果多酚，冷冻干燥，得黑果腺肋花楸果多酚提取物；其中，活性炭的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.3％，脱色温度30℃，脱色40min，过滤，得澄清滤液；纯化条件：上样流速为0.8bv/h，洗脱剂是体积浓度为55％的乙醇溶液，洗脱流速为1.5bv/h，洗脱剂用量为5bv。
实施例2
本发明的一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法，包括以下步骤：
1)取黑果腺肋花楸果，反复清洗干净后，浸泡3h，清洗，置于90℃的热水中，热烫30min，备用；
2)将步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果添加到乙醇溶液中，加入碳酸钠和表面活性剂——吐温40，在50℃下，提取4h，过滤，得滤液；其中，乙醇溶液的体积浓度为20％，乙醇溶液的用量为步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果重量的20倍，碳酸钠的重量与黑果腺肋花楸果的干基重量之比为1:5，吐温40的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.2％；
3)向步骤2)所得的滤液中添加甲醇，搅拌，混合10min，滤液与甲醇的体积比为1:10，过滤，得清液；
4)活性炭脱色，沉淀除糖、采用xda-7大孔树脂纯化黑果腺肋花楸果多酚，冷冻干燥，得黑果腺肋花楸果多酚提取物；其中，活性炭的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的1％，脱色温度5℃，脱色30min，过滤，得澄清滤液；纯化条件：上样流速为1bv/h，洗脱剂是体积浓度为65％的乙醇溶液，洗脱流速为2.5bv/h，洗脱剂用量为6bv。
实施例3
本发明的一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法，包括以下步骤：
1)取黑果腺肋花楸果，反复清洗干净后，浸泡1h，清洗，置于85℃的热水中，热烫25min，备用；
2)将步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果添加到乙醇溶液中，加入碳酸钠和表面活性剂——吐温60和司盘20，在45℃下，提取3h，过滤，得滤液；其中，乙醇溶液的体积浓度为30％，乙醇溶液的用量为步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果重量的10倍，碳酸钠的重量与黑果腺肋花楸果的干基重量之比为1:8，吐温40和司盘20的总用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.15％，吐温40和司盘20的重量比为7:1；
3)向步骤2)所得的滤液中添加乙酸乙酯，搅拌，混合15min，滤液与乙酸乙酯的体积比为1:8，过滤，得清液；
4)活性炭脱色，沉淀除糖、采用xda-7大孔树脂纯化黑果腺肋花楸果多酚，冷冻干燥，得黑果腺肋花楸果多酚提取物；其中，活性炭的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.5％，脱色温度10℃，脱色20min，过滤，得澄清滤液；纯化条件：上样流速为0.9bv/h，洗脱剂是体积浓度为60％的乙醇溶液，洗脱流速为2bv/h，洗脱剂用量为5.5bv。
实施例4
本发明的一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法，包括以下步骤：
1)取泡黑果腺肋花楸果，反复清洗干净后，浸泡2.5h，清洗，置于85℃的热水中，热烫28min，备用；
2)将步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果添加到乙醇溶液中，加入碳酸钠和表面活性剂——吐温80、司盘80和月桂醇硫酸钠，在50℃下，提取2h，过滤，得滤液；其中，乙醇溶液的体积浓度为15％，乙醇溶液的用量为步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果重量的15倍，碳酸钠的重量与黑果腺肋花楸果的干基重量之比为1:10，表面活性剂的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.1％，吐温80、司盘80和月桂醇硫酸钠的重量比为7:1:2；
3)向步骤2)所得的滤液中添加乙醇，搅拌，混合10min，滤液与乙醇的体积比为1:10，过滤，得清液；
4)活性炭脱色，沉淀除糖、采用xda-7大孔树脂纯化黑果腺肋花楸果多酚，冷冻干燥，得黑果腺肋花楸果多酚提取物；其中，活性炭的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.7％，脱色温度20℃，脱色30min，过滤，得澄清滤液；纯化条件：上样流速为0.95bv/h，洗脱剂是体积浓度为57％的乙醇溶液，洗脱流速为2.3bv/h，洗脱剂用量为5.8bv。
实施例5
本发明的一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法，包括以下步骤：
1)取黑果腺肋花楸果，反复清洗干净后，浸泡2.5h，清洗，置于85℃的热水中，热烫25min，备用；
2)将步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果添加到乙醇溶液中，加入碳酸钠和表面活性剂——吐温40和月桂醇硫酸钠，在45℃下，提取2h，过滤，得滤液；其中，乙醇溶液的体积浓度为15％，乙醇溶液的用量为步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果重量的15倍，碳酸钠的重量与黑果腺肋花楸果的干基重量之比为1:10，表面活性剂的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.1％，吐温40和月桂醇硫酸钠的重量比为9:2；
3)向步骤2)所得的滤液中添加乙醇，搅拌，混合10min，滤液与乙醇的体积比为1:10，过滤，得清液；
4)活性炭脱色，沉淀除糖、采用xda-7大孔树脂纯化黑果腺肋花楸果多酚，冷冻干燥，得黑果腺肋花楸果多酚提取物；其中，活性炭的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.5％，脱色温度20℃，脱色30min，过滤，得澄清滤液；纯化条件：上样流速为0.9bv/h，洗脱剂是体积浓度为60％的乙醇溶液，洗脱流速为2.0bv/h，洗脱剂用量为5.5bv。
对比例1
一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法，包括以下步骤：
1)取黑果腺肋花楸果，反复清洗干净后，浸泡2h，清洗，置于85℃的热水中，热烫20min，备用；
2)将步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果添加到乙醇溶液中，加入碳酸钠，在40℃下，提取1h，过滤，得滤液；其中，乙醇溶液的体积浓度为10％，乙醇溶液的用量为步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果重量的5倍，碳酸钠的重量与黑果腺肋花楸果的干基重量之比为1:15；
3)向步骤2)所得的滤液中添加乙醇，搅拌，混合10min，滤液与乙醇的体积比为1:2，过滤，得清液；
4)活性炭脱色，沉淀除糖、采用xda-7大孔树脂纯化黑果腺肋花楸果多酚，冷冻干燥，得黑果腺肋花楸果多酚提取物；其中，活性炭的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.3％，脱色温度30℃，脱色30min，过滤，得澄清滤液；纯化条件：上样流速为0.8bv/h，洗脱剂是体积浓度为55％的乙醇溶液，洗脱流速为1.5bv/h，洗脱剂用量为5bv。
对比例2
一种黑果腺肋花楸果多酚的提取方法，包括以下步骤：
1)取黑果腺肋花楸果，反复清洗干净后，浸泡2h，清洗，置于85℃的热水中，热烫20min，备用；
2)将步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果添加到乙醇溶液中，加入中性纤维素酶，在40℃下，提取1h，过滤，得滤液；其中，乙醇溶液的体积浓度为10％，乙醇溶液的用量为步骤1)处理后的黑果腺肋花楸果重量的5倍，中性纤维素酶的重量与黑果腺肋花楸果的干基重量的1％；
3)向步骤2)所得的滤液中添加乙醇，搅拌，混合10min，滤液与乙醇的体积比为1:2，过滤，得清液；
4)活性炭脱色，沉淀除糖、采用xda-7大孔树脂纯化黑果腺肋花楸果多酚，冷冻干燥，得黑果腺肋花楸果多酚提取物；其中，活性炭的用量为黑果腺肋花楸果干基重量的0.3％，脱色温度30℃，脱色30min，过滤，得澄清滤液；纯化条件：上样流速为0.8bv/h，洗脱剂是体积浓度为55％的乙醇溶液，洗脱流速为1.5bv/h，洗脱剂用量为5bv。
将本发明实施例1至实施例5所得的五份黑果腺肋花楸果多酚提取物以及对比例1和对比例2制备的两份对照样分别进行纯度分析，并计算其提取率；其中，提取率计算公式为：提取物的重量与黑果腺肋花楸果的干基重量之比，并以百分含量计；纯度分析采用folin-ciocalteu比色法，以没食子酸为标准品，测总酚含量，计算多酚纯度；实验结果如表1所示。
表1不同方法所得黑果腺肋花楸果多酚的提取率和纯度
由表1可以看出，本发明的方法所得的黑果腺肋花楸果多酚的提取率均在2.82-4.51％之间，这显著高于在提取的过程中没有使用表面活性剂的样品即对比例1，也明显高于提取过程中使用生物酶的样品即对比例2；本发明的方法所得的黑果腺肋花楸果多酚的纯度在91.12-94.23％之间，这明显高于在提取的过程中没有使用表面活性剂的样品即对比例1，也明显高于提取过程中使用生物酶的样品即对比例2。因此，本发明的方法所得的黑果腺肋花楸果多酚收率高，纯度高。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的黑果腺肋花楸果经过浸泡和清洗之后，采用热水热烫，灭活了酚氧化酶，防止细胞破碎后，酚氧化酶与酚接触，引起酚氧化；本发明在提取过程中加入了碳酸钠，能够溶解细胞壁中的黑果腺肋花楸果酸成分，易于酚类的释放，提高了收率；同时，黑果腺肋花楸果酸转化为黑果腺肋花楸果酸钠，增加了体系的粘性，减少了多酚的氧化；另外，还加入了表面活性剂，显著增大了多酚的溶解度，增强了提取液的流动性，减少了溶剂用量和设备投资，乳化体系更稳定，提取收率更高；本发明的黑果腺肋花楸果多酚的提取方法工艺流程短，不需要使用生物酶，也不需要调节ph值，操作方便，条件温和，便于控制，成本低，易于工业化生产，所得黑果腺肋花楸果多酚提取物的收率高，达2.5-4.5％，纯度高，多酚纯度为91-94％。
以上已经描述了本发明的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。