一种抗炎多肽纳米药物及制备方法与流程

本发明涉及一种靶向微酸性和氧化应激的炎症微环境发挥抗炎作用的纳米药物，具体是一类通过响应于病灶局部低ph或活性氧微环境实现炎症性肠病、腹膜炎、动脉粥样硬化等急、慢性炎症相关疾病的靶向抗炎多肽纳米药物的组成、制备方法及其在防治炎症性肠病、腹膜炎、动脉粥样硬化等急、慢性炎症相关疾病的应用。

背景技术：

炎症是由有害刺激和条件引起的适应性反应，例如感染和组织损伤。持续性炎症已成为多种疾病的关键病理基础，包括关节炎、炎症性肠病、动脉粥样硬化、肥胖和糖尿病等。几十年来，医学治疗试图通过拮抗负责引起炎症反应的酶、受体、基因或细胞因子的药物来抑制炎症反应。例如，非甾体类抗炎药(nsaids)阻断环氧合酶1(cox-1)和cox-2依赖性前列腺素的产生，是有效的镇痛药和退热药，而抗组胺药可阻断组胺受体，从而缓解过敏性炎症反应。合成的糖皮质激素干扰促炎基因表达，以抑制关节炎和哮喘等疾病中的细胞介导的免疫力。英夫利昔单抗和卡那津单抗分别中和促炎细胞因子tnf-α和il-1β。因此，干扰炎症反应的治疗药物代表了当今临床医学中一些最常用的药物，并且在急性和慢性炎性疾病(如关节炎)防治中有一定疗效。然而，这些药物通常会引起显著的副作用，比如导致骨质疏松、胃肠道出血、肝功能受损、心血管疾病等。而生物制剂的非特异性分布经常导致多种副作用。服用英夫利昔单抗的患者中，近25％经历过至少一种严重的不良反应，如肺炎和癌症。英夫利昔单抗还会出现无应答反应的情况。因此，开发特异、有效和安全的抗炎制剂具有重要意义。

近年来，炎症的消退被认为是一种主动和严格的调节过程，是由特定的抗炎介质控制，能够抑制炎性细胞因子的表达和清除凋亡细胞和微生物。膜联蛋白a1的活性n-末端肽ac2-26和组织保护性多肽ara290等抗炎多肽可以抑制炎症反应的各个方面，如炎性细胞粘附和迁移，从而减少中性粒细胞和单核细胞/巨噬细胞的浸润。与传统疗法相比，例如美沙拉嗪、阿司匹林和地塞米松等，用抗炎多肽治疗由于其可以模仿或诱导介导炎症消退的自然途径而具有很少的副作用。不过，多肽药物存在半衰期短、稳定性差、无法口服给药等问题，限制了其进一步的临床应用。

氧化应激以过量产生的活性氧(ros)为特征，与炎症的发生密切相关。已有研究报道患有炎症性肠病的患者粘膜ros浓度比正常人高10-100倍。此外，以硫酸葡聚糖诱导的结肠炎的小鼠结肠中的ros水平也显着高于正常小鼠。这也与在动物模型和患者中用抗氧化剂治疗可有效减轻克罗恩病和结肠炎的结果一致。ros主要由吞噬细胞分泌，吞噬细胞随后在炎症部位累积。ros的快速产生是上皮细胞和吞噬细胞对致病性和共生细菌的细胞反应的基本特征。另一方面，与正常组织相比，炎症局部往往具有较低的ph。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的是提供一种抗炎多肽纳米药物的组成及制备方法；采用具有ph或氧化应激响应性的纳米载体，实现抗炎多肽药物在炎性疾病部位的靶向和病灶微环境响应性释药；同时响应性纳米载体可以提高多肽药物的稳定性，尤其是活性氧响应性纳米载体能够保护其中负载的多肽药物在胃肠道不受酶解或水解。本发明还以炎症性肠病和动脉粥样硬化为模型，验证其在防治急、慢性炎症性疾病中的作用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是，一种抗炎多肽纳米药物，包括抗炎多肽、ph或活性氧响应性材料、磷脂和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，其中所述抗炎多肽与ph或活性氧响应性材料的质量比为0.01:1到2:1之间，聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺与ph或活性氧响应性材料的质量比为0.02:1到2.5：1之间，聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺与磷脂的质量比为0.01:1到1:0.01之间，所述纳米药物的粒径在20到900nm之间。

上述抗炎多肽选自膜联蛋白a1的活性n-末端肽ac2-26和组织保护性多肽ara290。

上述ph响应性载体材料选自缩醛化α-环糊精、缩醛化β-环糊精、缩醛化γ-环糊精或缩醛化葡聚糖。

上述活性氧响应性载体材料选自4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的α-环糊精、4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精、4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的γ-环糊精、4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的葡聚糖、4-氨甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的α-环糊精、4-氨甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精、4-氨甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的γ-环糊精或4-氨甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的葡聚糖。

上述磷脂选自卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、1,2-二油酰基磷脂酰胆碱或二硬脂酰磷脂酰胆碱。

上述聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺中聚乙二醇的分子量为1000da、2000da、5000da或10000da。

本发明还提供一种抗炎多肽纳米药物的制备方法，包括以下步骤：首先将磷脂和聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺溶于水中得到水相，将抗炎多肽溶于去离子水中，并将其加入到溶解有ph或活性氧响应性载体材料的有机溶剂中得到有机相；然后将有机相缓慢滴加于预加热后冷却的水相中，滴加完成后，在10-50℃下磁力搅拌1-12h，通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到抗炎多肽纳米药物。

具体地，上述有机溶剂选自甲醇或混合溶剂甲醇/乙醇、甲醇/乙腈、甲醇/四氢呋喃、甲醇/二甲基甲酰胺、甲醇/二甲基乙酰胺、甲醇/二甲基亚砜或甲醇/n-甲基吡咯烷酮。

具体地，上述聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺在水相中的浓度为0.01-100mg/ml；所述水相和有机相的体积比为10：1到1：10之间。

本发明中抗炎多肽纳米药物在制备预防或治疗急或/和慢性炎症相关疾病的药物中的应用。所述炎症包括炎症性肠炎、腹膜炎、动脉粥样硬化。

本发明的给药方式包括口服、静脉注射、皮下注射、肌内注射，及以上方式之任意组合。

本发明所具有的有益技术效果如下：

(1)本发明所述的抗炎多肽易于合成、且具有良好的体内外安全性。

(2)本发明所使用的ph或活性氧响应性载体材料的合成工艺相对简单、易于规模化制备、且成本较低；合成所需的原材料和溶剂均有市售产品，其价格相对低廉，故易于实现所述抗炎多肽纳米药物的产业化。

(3)本发明所选用的响应性载体材料、磷脂和聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺均有较好的体内外生物相容性，且其水解或代谢产物基本无毒，因此保证了最终纳米药物的体内安全性。

(4)本发明采用的纳米沉淀/自组装法简单易行、易于放大，且使用的水溶性溶剂容易去除，保证了最终纳米药物应用的安全性。

(5)本发明所制备的纳米药物的大小可以通过制备工艺参数来调控。

(6)本发明所采用的纳米药物的制备方法能够实现抗炎多肽的有效负载。

(7)本发明所制备的ph响应性纳米药物在正常生理ph条件下稳定，在微酸性或酸性环境下可以选择性释药；除了用于胃部药物释放，该类ph响应性抗炎多肽纳米药物可以通过静脉注射、皮下注射、肌内注射等不同方式给药。

(8)本发明所制备的活性氧响应性纳米药物在胃酸环境中能够稳定存在，不被破坏，适用于口服给药，同时也可以通过其他不同注射方式给药。

(9)本发明所制备的纳米药物中抗炎肽均匀分布于纳米载体中，其中，活性氧响应性纳米药物口服后，易于在炎症性肠病的病灶部位实现高效靶向富集。

(10)本发明所制备的纳米药物对炎症性肠病和动脉粥样硬化的治疗效果明显优于游离药物和对照的非响应性纳米药物。

附图说明

图1为ac2-26/4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精纳米药物的透射电镜图。

图2为不同纳米药物的活性氧响应性释放行为。其中，a图表示ac2-26/4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精纳米药物(即aon)在含有或不含1.0mmh2o2的pbs(ph7.4)中的释放曲线。b图表示aon中ac2-26在模型胃肠道条件下的活性氧响应性释放曲线。

图3为ac2-26/4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精纳米药物(ac2-26/ox-bcdnp)口服后靶向富集于炎症性肠病损伤结肠部位。其中cy7.5-aon为cy7.5标记的aon。

图4为负载ac2-26的活性氧响应性纳米药物(ac2-26/ox-bcdnp)有效缓解小鼠急性结肠炎症状的h&e染色切片，其效果优于对照的非响应性纳米药物(rap/plganp)。

图5为负载ac2-26的活性氧响应性纳米药物(ac2-26/ox-bcdnp)有效缓解急性结肠炎小鼠体重下降。

图6为负载ac2-26的活性氧响应性纳米药物(ac2-26/ox-bcdnp)有效缓解急性结肠炎小鼠疾病活动指数增长。

图7为负载ac2-26的活性氧响应性纳米药物(ac2-26/ox-bcdnp)有效缓解小鼠慢性结肠炎症状的h&e染色切片，其效果优于对照游离药物(freeac2-26)和对照非响应性纳米药物(ac2-26/plganp)。

图8负载ara290的基于4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰β-环糊精的活性氧响应性纳米药物(ara290/nps)的透射电镜图。

图9基于载脂蛋白e基因敲除小鼠的动脉粥样硬化模型的疗效评价。其中，model组为未经干预模型小鼠，ara290组为经游离ara290干预的模型小鼠，nps组为经空白纳米载体(即4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰β-环糊精的活性氧响应性纳米粒)干预的模型小鼠，ara290/nps组为经活性氧响应性纳米药物(ara290/nps)干预的模型小鼠。**表示p<0.01。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的发明内容作进一步的详细描述。应理解，本发明的实施例只用于说明本发明而非限制本发明，在不脱离本发明技术思想的情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出的各种替换和变更，均应包括在本发明的范围内。

下面结合非限定性的实施例对本发明做详细说明。

实施例1

首先将2mg卵磷脂和15mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于2ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。50mg缩醛化α-环糊精溶于4ml甲醇中。1mgac2-26溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌3h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的ph响应性纳米药物。纳米药物的粒径在100-200nm之间。

实施例2

首先将1mg卵磷脂和5mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da))在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于2ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。30mg缩醛化β-环糊精溶于3ml甲醇/乙腈中。1mgac2-26溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，35℃继续搅拌4h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的ph响应性纳米药物。纳米药物的粒径在20-150nm之间。

实施例3

首先将0.5mg卵磷脂和5mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于2ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。40mg缩醛化γ-环糊精溶于5ml甲醇/四氢呋喃中。1mgac2-26溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，45℃继续搅拌1h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的ph响应性纳米药物。纳米药物的粒径在50-250nm之间。

实施例4

首先将1mg卵磷脂和8mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da))在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于2ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。100mg缩醛化葡聚糖(分子量为5000da)溶于4ml甲醇/二甲亚砜中。1mgara290溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，55℃继续搅拌5h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的ph响应性纳米药物。纳米药物的粒径在400-600nm之间。

实施例5

首先将1mg卵磷脂和10mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于2ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。50mg缩醛化葡聚糖(分子量为10000da)溶于4ml甲醇/二甲亚砜中。2mgara290溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，15℃继续搅拌5h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的ph响应性纳米药物。纳米药物的粒径在500-900nm之间。

实施例6

首先将1mg卵磷脂和100mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于1ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。40mg缩醛化β-环糊精溶于10ml甲醇中。10mgac2-26溶解在200μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，45℃继续搅拌1h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的ph响应性纳米药物。纳米药物的粒径在100-300nm之间。

实施例7

首先将100mg二硬脂酰磷脂酰胆碱和1mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于100ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。50mg缩醛化β-环糊精溶于10ml甲醇/n-甲基吡咯烷酮中。20mgac2-26溶解在0.5ml去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，45℃继续搅拌3h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的ph响应性纳米药物。纳米药物的粒径在20-150nm之间。

实施例8

首先将3mg二硬脂酰磷脂酰胆碱和10mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于100ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。30mg缩醛化β-环糊精溶于20ml甲醇中。60mgac2-26溶解在2ml去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，45℃继续搅拌6h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的ph响应性纳米药物。纳米药物的粒径在100-200nm之间。

实施例9

首先将0.5mg卵磷脂和10mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于5ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。50mg4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的α-环糊精溶于1ml甲醇中。1mgac2-26溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌2h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在200-400nm之间。

实施例10

首先将1mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和15mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为1000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于5ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。40mg4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精溶于1ml甲醇/乙腈中。1mgac2-26溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌2h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在100-300nm之间。

实施例11

首先将1mg二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱和20mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为5000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于5ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。60mg4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的葡聚糖溶于2ml甲醇/二甲基甲酰胺中。1mgac2-26溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌2h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在200-400nm之间。

实施例12

首先将2mg1,2-二油酰基磷脂酰胆碱和10mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为10000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于5ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。100mg4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的γ-环糊精溶于2ml甲醇/四氢呋喃中。1mgac2-26溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌2h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在100-300nm之间。

实施例13

首先将5mg二硬脂酰磷脂酰胆碱和20mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为5000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于10ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。100mg4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的α-环糊精溶于2ml甲醇/二甲亚砜中。1mgac2-26溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌2h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在50-300nm之间。

实施例14

首先将2mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和10mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于5ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。100mg4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精溶于2ml甲醇/二甲亚砜中。1mgac2-26溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌4h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在100-400nm之间。

实施例15

首先将1mg卵磷脂和50mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于5ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。30mg4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的α-环糊精溶于1ml甲醇/乙腈中。1mgac2-26溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌2h以挥发去除有机溶剂。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在500-900nm之间。

实施例16

首先将1mg卵磷脂和10mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于2ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。20mg4-氨甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的α-环糊精溶于10ml甲醇/乙醇中。40mgara290溶解在1ml去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌8h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在300-600nm之间。

实施例17

首先将1mg卵磷脂和10mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于2ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。30mg4-氨甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精溶于1ml甲醇/乙醇中。1mgara290溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌3h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在200-400nm之间。

实施例18

首先将1mg卵磷脂和10mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于2ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。20mg4-氨甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的γ-环糊精溶于5ml甲醇/乙醇中。5mgara290溶解在0.5ml去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，45℃继续搅拌3h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在200-500nm之间。

实施例19

首先将2mg卵磷脂和15mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于1.5ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。50mg4-氨甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的葡聚糖(分子量为1000da)溶于3ml甲醇/乙醇中。1mgara290溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌5h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在100-300nm之间。

实施例20

首先将2mg卵磷脂和10mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于1.5ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。50mg4-氨甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的葡聚糖(分子量为5000da)溶于4ml甲醇/二甲基甲酰胺中。1mgara290溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌6h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在600-900nm之间。

实施例21

首先将1mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和10mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于1ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。30mg4-氨甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的葡聚糖(分子量为10000da)溶于3ml甲醇/二甲基乙酰胺中。1mgara290溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌8h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在300-500nm之间。

实施例22

首先将2mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和12mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(其中聚乙二醇的分子量为2000da)在65℃恒温磁力搅拌条件下溶解于2ml去离子水中，待固体物质完全溶解，放置冷却至室温。60mg4-氨甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精溶于5ml甲醇/二甲基乙酰胺中。1mgara290溶解在100μl去离子水中，加入到上述有机相中。然后在搅拌下，将有机相缓慢滴加于水相之中(1ml/min)。滴加完成后，25℃继续搅拌10h。通过离心分离，用去离子水洗涤，冷冻干燥后即可得到本发明所述的活性氧响应性纳米药物。纳米药物的粒径在400-600nm之间。

以上制备的纳米药物，通过图1到图9进行了验证实验。

图1为ac2-26/4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精纳米药物的透射电镜图。

图2为不同纳米药物的活性氧响应性释放行为。其中，a图表示ac2-26/4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精纳米药物(即aon)在含有或不含1.0mmh2o2的pbs(ph7.4)中的释放曲线。b图表示aon中ac2-26在模型胃肠道条件下的活性氧响应性释放曲线。该结果表明所制备的抗炎多肽纳米药物具有炎症微环境响应性。

图3为离体荧光成像结果，表明ac2-26/4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰的β-环糊精纳米药物(ac2-26/ox-bcdnp)口服后靶向富集于炎症性肠病损伤结肠部位，证明抗炎多肽纳米药物具有结肠炎症部位靶向性。

图4为急性结肠炎小鼠h&e染色切片，结果表明负载ac2-26的活性氧响应性纳米药物(ac2-26/ox-bcdnp)能有效缓解小鼠急性结肠炎症状，其效果优于对照的非响应性纳米药物(rap/plganp)。

图5为负载ac2-26的活性氧响应性纳米药物(ac2-26/ox-bcdnp)有效缓解急性结肠炎小鼠体重下降。

图6为负载ac2-26的活性氧响应性纳米药物(ac2-26/ox-bcdnp)有效缓解急性结肠炎小鼠疾病活动指数增长。

图7为慢性结肠炎小鼠的h&e染色切片，结果表明负载ac2-26的活性氧响应性纳米药物(ac2-26/ox-bcdnp)能有效缓解小鼠慢性结肠炎症状，其效果优于对照游离药物(freeac2-26)和对照非响应性纳米药物(ac2-26/plganp)。

图8负载ara290的基于4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰β-环糊精的活性氧响应性纳米药物(ara290/nps)的透射电镜图。

图9基于载脂蛋白e基因敲除小鼠的动脉粥样硬化模型的疗效评价。其中，model组为未经干预模型小鼠，ara290组为经游离ara290干预的模型小鼠，nps组为经空白纳米载体(即4-羟甲基苯硼酸频哪醇酯修饰β-环糊精的活性氧响应性纳米粒)干预的模型小鼠，ara290/nps组为经活性氧响应性纳米药物(ara290/nps)干预的模型小鼠。结果表明载ara290的抗炎多肽纳米药物能有效减少主动脉粥样硬化斑块的产生，效果优于游离ara290和空白纳米载体。

本发明所述的抗炎多肽是对腹膜炎、炎症性肠病、动脉粥样硬化等急、慢性炎症发挥治疗作用的一大类活性物质。在上述实施例中，所采用的药物为ac2-26和ara290。但是这些药物并不限制本发明的保护范围，本领域普通技术人员可选择合适的抗炎多肽。

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