一种针对食源性肥胖的减肥药物及制备方法与流程

本发明涉及减肥药领域，具体涉及一种针对食源性肥胖的减肥药物及制备方法。

背景技术：

超重和肥胖是体内脂肪积聚过多而呈现的一种状态，已被视为公共卫生问题。超重和肥胖不仅会导致包括ⅱ型糖尿病、冠心病、高血压、骨关节炎，也是造成一些慢性疾病甚至心理疾病的重要因素。引起肥胖的因素有很多，遗传因素、肠道菌群失调、摄入过多高热量的食物、药物(如激素)、疾病等。其中高热量的食物摄入，即食源性肥胖是最常见的，导致很多人想通过节食达到减轻体重的目的。节食可以达到减轻体重的目的，但是失去了享受美食的乐趣，很难长时间坚持，一旦不控制饮食，容易反弹。也有人通过运动、手术、药物等方法减肥，运动减肥跟节食一样，一旦停止容易反弹；手术减肥存在并发症危险，主要是术后的出血、穿孔和消化道瘘，远期出现贫血和低钙血症这些营养不良的表现；药物减肥是目前最常用的手段，主要通过抑制食欲或增加水的排出量或增加胃肠蠕动、加速排泄或增加热量消耗四种途径起到减肥的效果，采用药物减肥虽然疗效显著，但存在副作用大或者效果不稳定的问题。因此，寻找一种有效、无副作用的、天然的绿色减肥产品，将为超重和肥胖患者带来希望。

青仁黑豆是豆科植物野生大豆(glycinesojasieb.zucc.)的黑色种子，仁为青色，故名青仁黑豆，《本草纲目》、《食疗本草》、《延年秘录》等均记载青仁黑豆有养血平肝，解表清热，滋养止汗，补肾补阴、活血化淤的功能。青仁黑豆营养丰富，蛋白含量高达37％，含有人体必需的氨基酸及亚麻酸、矿物质、多糖、黄酮等多种成分，但对青仁黑豆皮的研究甚少。sun-hwakwon等人在jmedfood10(3)2007,552–556中发表了“anti-obesityandhypolipidemiceffectsofblacksoybeananthocyanins”，文章中报道过黑豆(glycinemaxl.)皮提取的花色素苷有减缓体重增加(抗肥胖)和降血脂的功效。该文献中将分离的种皮用盐酸酸化的甲醇提取，浓缩后用己烷和乙醚(6:1)的混合物洗涤两次，最后浓缩干燥得到粗制的花青素提取物。然而，由于该文献用的是甲醇加盐酸提取黑豆皮提取物，提取过程中如处理不当，甲醇有残留，服用后会对视神经有不可逆转的毒性；而且甲醇提取的黑豆皮提取物是总的成分，里面会含有很多除花色素苷以外的其他成分，比如大豆异黄酮等植物类激素，所以长时间服用会有副作用；另外，由于黑豆皮提取物的组分和重量配比并不明确，所以该提取物只能减缓体重增加，无法实现肥胖人减肥的功效。

技术实现要素：

本发明的第一个目的在于提供一种针对食源性肥胖的减肥药物，以解决现有包括黑豆皮提取物在内的大部分减肥药物长时间服用后有副作用，减肥效果不好的技术难题。

为实现上述目的，本发明是采用如下技术方案实现的：

鉴于黑豆皮提取物具有抗肥胖的功效，所以本发明以青仁黑豆皮作为原料，对青仁黑豆皮提取物进一步研究，结果意外的发现通过控制青仁黑豆皮提取物中的白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷的重量比后，抗肥胖效果明显增加且无任何副作用，而且通过调整控制各有效成分的配比，可制备具有减肥功效，且减肥效果好的药物。

本发明提供的一种针对食源性肥胖的减肥药物，其活性成分包含白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷，所述白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷的重量比例为：1.6～2.4:1.5～2.5:4～6:8～12:1。

作为本发明的优选，所述白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷的重量比例为：2:2:5:10:1。

本发明的第二个目的在于提供一种针对食源性肥胖的减肥药物的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)利用盐酸酸化的乙醇对青仁黑豆皮进行提取，提取液进行减压回收乙醇，得到浓缩液a；

(2)浓缩液a用石油醚萃取，得到浓缩液b；

(3)浓缩液b通过大孔树脂初步纯化，水洗后用乙醇洗脱，乙醇洗脱液减压浓缩，低温干燥得到初步纯化的提取物c；

(4)称取提取物c用柱色谱进行分离，洗脱液为氯仿：无水乙醇：乙酸＝9:1:0.1，按200ml每份收集流出液，并对收集的流出液按照1、2、3、4、5…..n的规则进行编号，收集编号为5-9，13-20，22-30，35-40的组分，分别浓缩干燥得到粉末d、e、f、g；用d、e、f、g按比例2:3:2:1组合，即可得到具有减肥功效的药物；其中，主要成分为白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素和天竺葵素-3-o-芸香糖苷。

本发明的减肥药物也可以直接购买纯度大于99％的白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷，然后按照上述原料配比混均，之后与其它辅料混合制备成所需的制剂，所述制剂可以是颗粒剂、片剂和胶囊等，也可以为其它本领域常规使用的剂型。但考虑上述纯品原料难获取，而且即便可以从现有天然产物中提取，但提取工艺过程复杂，且成本高，所以本发明在制备上述减肥药物时优选青仁黑豆皮作为原料，利用乙醇提取，便可直接获得上述五种有效成分，之后通过控制分离得到的物质的量，便可控制上述五种有效成分的配比，大大简化制备过程，降低制备成本。

本发明提供的技术方案中，所述白藜芦醇(resveratrol)的分子式为：c14h12o3；分子量：228.24；结构式如下式(1)所示：

所述氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷(delphinidin-3-o-glucosidechloride)的分子式为：c21h21clo12；分子量：500.84；结构式如下式(2)所示：

所述氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷(cyanidin-3-o-glucosidechloride)的分子式为：c21h21o11cl；分子量：484.8；结构式如下式(3)所示：

所述儿茶素(catechin)的分子式为：c15h14o6；分子量：290.27；结构式如下式(4)所示：

所述天竺葵素-3-o-芸香糖苷(pelargonidin-3-o-rutinosdechloride)的分子式为：c27h31o14cl；分子量：615.0；结构式如下式(5)所示：

本发明的优点和有益效果：

(1)经动物体内实验表明，本发明提供的减肥药物主要利用青仁黑豆皮提取物中的有效成分，通过合理控制青仁黑豆皮提取物中白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷的重量比以及各有效成分的含量，能有效的减轻食源性引起的肥胖，明显减少体内脂肪的蓄积，达到很好的减肥效果(正常饮食的情况下也能减轻体重)，同时还能降低肥胖小鼠血液中的胆固醇和甘油三酯，降低肝脏中蓄积的脂肪，与现有黑豆皮提取物抗肥胖的功效(正常饮食的情况下减缓体重增长)相比，本发明取得了预料不到的技术效果，具有显著进步。

(2)本发明提供的减肥药物可用于治疗食源性肥胖，其与针灸、运动等减肥方式相比，简单；与其他减肥药相比，本发明服用量小，用药过程中不影响美食的摄取，而且由于该药物的有效成分均是青仁黑豆皮的乙醇提取物，提取过程中通过工艺的调整，可合理控制有效成分的总含量以及各有效成分的配比，避免副作用大的物质混入其中，用药安全且无任何副作用。

(3)本发明提供的制备方法是以青仁黑豆皮为原料进行提取，青仁黑豆皮资源丰富，易得，且提取分离工艺简单，而且该提取物还可与常规的赋形剂或辅料制成片剂、胶囊、颗粒剂、口服液等剂型，方便服用。

附图说明

图1动物药效试验1给小鼠灌胃各样品后小鼠体重随时间的变化图；

图2动物药效试验1小鼠肝脏组织he染色照片；

图3动物药效试验2给小鼠灌胃各样品后小鼠体重随时间的变化图；

其中，图2中a、b、c和d分别是a组、b组、c组和d组小鼠在灌胃相应样品5周后处死的肝脏组织切片的he染色照片。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

实施例1

一种具有减肥功效的青仁黑豆皮提取物的提取方法，具体包括以下步骤：

(1)利用0.1％盐酸酸化的体积百分比为80％的乙醇对青仁黑豆皮进行提取(料液比为1kg:15l)，提取两次，合并提取液，进行减压回收乙醇，得到浓缩液a；

(2)浓缩液a用石油醚萃取除脂，得到浓缩液b；

(3)浓缩液b通过d101大孔树脂初步纯化，水洗后用4倍柱体积的体积百分比为30％的乙醇洗脱，30％乙醇洗脱液减压浓缩后，低温干燥得到初步纯化的提取物c；

(4)称取提取物c(20g)用柱色谱(内径7cm)进行分离(洗脱液为：氯仿：无水乙醇：乙酸＝9:1:0.1，填料为200-300目硅胶)，按200ml每份收集流出液，并对收集的流出液按照1、2、3、4、5…..n的规则进行编号，收集编号为5-9，13-20，22-30，35-40的组分，分别浓缩干燥得到粉末d、e、f、g；用d、e、f、g按比例2:3:2:1组合(白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷的重量比例约为：2.2:2.3:5.1:9.8:1)即可。

实施例2

胶囊剂制备：

以实施例1提取的青仁黑豆皮提取物为活性物质，制备减肥胶囊的重量配比如下：

按上述重量配比称取本发明的青仁黑豆皮提取物120g，淀粉120g，糊精156g，硬脂酸镁4g混合，用75％的乙醇润湿、制粒，干燥，整粒，灌装胶囊，每粒胶囊装0.4g，每粒胶囊含本发明的青仁黑豆皮提取物0.12g。

实施例3

分别称取纯度大于99％的白藜芦醇200mg、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷200mg、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷500mg、儿茶素1000mg、天竺葵素-3-o-芸香糖苷100mg，将上述原料混均。

实施例4

分别称取纯度大于99％的白藜芦醇160mg、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷240mg、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷600mg、儿茶素900mg、天竺葵素-3-o-芸香糖苷100mg，将上述原料混均。

实施例5

分别称取纯度大于99％的白藜芦醇240mg、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷150mg、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷410mg、儿茶素1100mg、天竺葵素-3-o-芸香糖苷100mg，将上述原料混均。

实施例6

分别称取纯度大于99％的白藜芦醇90mg、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷105mg、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷255mg、儿茶素545mg、天竺葵素-3-o-芸香糖苷50mg，将上述原料混均。

对比例1

分别称取纯度大于99％的白藜芦醇90mg、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷105mg、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷255mg、天竺葵素-3-o-芸香糖苷50mg，将上述原料混均。

对比例2

分别称取纯度大于99％的氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷105mg、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷255mg、儿茶素545mg、天竺葵素-3-o-芸香糖苷50mg，将上述原料混均。

对比例3

分别称取纯度大于99％的白藜芦醇90mg、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷105mg、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷255mg、儿茶素545mg，将上述原料混均。

对比例4

分别称取纯度大于99％的白藜芦醇90mg、儿茶素545mg、天竺葵素-3-o-芸香糖苷50mg，将上述原料混均。

动物药效试验1：

4周龄雄性c57bl/6j小鼠20只，饲养于动物房，每隔12小时正常光照12小时，喂食高脂饲料(配方：酪蛋白22.8％，糊精17％，dl-甲硫酸铵0.2％，矿物质4％，碳酸氢钠10.5％，维生素1％，重酒酸胆碱0.2％，蔗糖17.5％，豆油2.5％，氢化椰子油33.35％，柠檬酸钾0.4％)。三个月后，当小鼠平均体重超过30g时，分成4笼(分别标记为a、b、c、d)，a组每天灌胃0.5ml生理盐水，b组每天每只小鼠按2mg/kg灌胃0.5ml本发明实施例1配成的药液(白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷的比值为：2.2:2.3:5.1:9.8:1)，c组每天每只小鼠按200mg/kg灌胃黑豆粉(豆粉用水制成悬浮液)，d组每天每只小鼠按10mg/kg灌胃黑豆皮提取物(提取物用生理盐水制成悬浮液，所述提取物的制备方法参照jmedfood10(3)2007,552–556中发表了“anti-obesityandhypolipidemiceffectsofblacksoybeananthocyanins”)。灌胃5周后，称量体重，对小鼠灌胃5周前后进行体重比较，a组体重平均增加了6.1g，b组体重平均减少了1.57g，c组体重平均增加了5.59g，d组体重平均增加了0.16g(结果见图1)。每周的饲料消耗量没有显著的差异性；对实验小鼠的肝脏做病理切片，显示b组小鼠肝细胞内的脂肪粒明显比对照组少，并且优于c和d组(结果见图2)。

上述药效学实验结果说明：在不影响摄食的情况下，灌胃本发明的药物，对小鼠体重有明显的抑制作用，效果优于黑豆粉和黑豆皮提取物，提示本发明药物可能通过加速脂肪代谢，减少脂肪积蓄，从而最大幅度的减少肥胖的发生。

动物药效试验2：

c57bl/6j小鼠饲养方法如上述动物药效试验1中所述，饲养三个月后，当小鼠平均体重超过30g时，分成5笼(分别标记为a、b、c、d、e)，a组每天每只小鼠按2mg/kg灌胃0.5ml本发明实施例6配成的药液(白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷的比值为：1.8:2.1:5.1:10.9:1)，b组每天每只小鼠按2mg/kg灌胃0.5ml不含儿茶素的对比例1配成的药液，c组每天每只小鼠按2mg/kg灌胃不含白藜芦醇的对比例2配成的药液，d组每天每只小鼠按2mg/kg灌胃0.5ml不含天竺葵素-3-o-芸香糖苷的对比例3配成的药液，e每天每只小鼠按2mg/kg灌胃不含飞燕草素-3-o-葡萄糖苷和氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷的对比例4配成的药液，灌胃5周后，称量体重，对各组小鼠灌胃5周前后进行体重比较，a组平均体重减轻1.45g，b-e组体重有不同程度的增加(结果见图3)，显示只有按本发明配比的组方对食源性肥胖的减肥效果最好，上述任何一个有效成分量的减少或未添加均无法达到理想的减肥效果。

动物药效试验3：

c57bl/6j小鼠饲养方法如上述动物药效试验1中所述，饲养三个月后，当小鼠平均体重超过30g时，分成a、b、c三笼，a组每只每天按2mg/kg灌胃0.5ml本发明实施例4配成的药液(白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷的比值为：1.6:2.4:6:9:1)，b组每只每天按2mg/kg灌胃0.5ml本发明实施例3配成的药液，c组每只每天按10mg/kg灌胃0.5ml青仁黑豆皮提取物(由本发明中实施例1中提取的浓缩液a干燥得到的)，灌胃5周后，称量体重，对小鼠灌胃5周前后进行体重比较，结果显示a组平均体重减轻了1.37g，b组平均体重减轻了1.64g，c组体重没有减轻，反而增加了0.19g。说明按本发明提供的组方对食源性肥胖的减肥效果比单纯的从青仁黑豆皮中提取的混合物效果好。

体外细胞实验：

取生长状态良好的人正常肝细胞系hl-7702细胞(8×10⁴/ml)，接种于96孔板中，每孔100μl，培养基为：rpmi-1640培养基，含15％胎牛血清，1％双抗。于37℃，5％co2的培养箱中培养过夜，第二天加入100μl的药液(药液用培养基配置，各药液含有本发明组合物(实施例1，白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷的重量比例约为：2.2:2.3:5.1:9.8:1)的浓度分别为：125、250、500、1000、2000mg)，每个药液做3个复孔。培养48h后加每孔加5％的mtt20μl，4h后弃上清，加150μldmso，震荡3min，在492nm波长下测od值，结果发现加入不同浓度的本发明药物，各组od值平均值在0.7-0.8之间，没有显著性差异，说明本发明的药物对人正常肝细胞系hl-7702细胞没有毒性。

毒副作用研究：

取本发明的组合物(实施例1，白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷的重量比例约为：2.2:2.3:5.1:9.8:1)进行急性毒性试验，按日剂量900mg/kg给予c57bl/6j小鼠灌胃，连续5天，10只小鼠未出现死亡和明显的中毒现象，该剂量是上述动物药效学试验中的剂量2mg/kg的450倍，所以该药物是安全可靠的。

从动物药效学实验1可以看出，服用本发明的组合物(实施例1，白藜芦醇、氯化飞燕草素-3-o-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、儿茶素、天竺葵素-3-o-芸香糖苷的重量比例约为：2.2:2.3:5.1:9.8:1)后，小鼠体重不增加，并呈现缓慢下降的趋势，而参照文献(jmedfood10(3)2007,552–556中发表了“anti-obesityandhypolipidemiceffectsofblacksoybeananthocyanins”)的方法制备的黑豆皮提取物呈现先下降后上升，体重有反弹的趋势。另外，本发明在对小鼠进行药效试验、毒副作用试验时，未发现小鼠存在任何不良反应，因此足以证明该药物是无副作用。

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。