OGA抑制剂化合物的制作方法

oga抑制剂化合物
技术领域：
：[0001]本发明涉及具有式(i)所示结构的o-glcnac水解酶(oga)抑制剂[0002][0003]其中这些基团是如在说明书中所定义的。本发明还涉及包含此类化合物的药物组合物、用于制备此类化合物和组合物的方法、以及此类化合物和组合物用于预防和治疗其中oga的抑制是有益的障碍的用途，这些障碍是例如tau病变，特别是阿尔茨海默氏病或进行性核上性麻痹；和伴有tau病理学的神经退行性疾病，特别是由c9orf72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆。
背景技术：
：：[0004]o-glcn酰化是蛋白质的可逆修饰，其中n-乙酰基-d-葡糖胺残基被转移至丝氨酸残基和苏氨酸残基的羟基基团，产生o-glcn酰化蛋白。已经在真核生物的胞质溶胶和细胞核中鉴定了超过1000种这样的靶蛋白。该修饰被认为调节大范围的细胞过程，包括转录、细胞骨架过程、细胞周期、蛋白酶体降解和受体信号传导。[0005]o-glcnac转移酶(ogt)和o-glcnac水解酶(oga)是描述的向靶蛋白添加(ogt)或从靶蛋白去除(oga)o-glcnac的仅有的两种蛋白质。oga最初于1994年从脾脏制剂中纯化，1998年鉴定为由脑膜瘤表达的抗原，并且称为mgea5，由作为细胞胞质区室中的单体的916个氨基酸(102915道尔顿)组成。它与er相关的和高尔基体相关的糖基化过程(其对于蛋白质的运输和分泌是重要的)不同，并且不同于oga具有酸性ph最佳值，而oga在中性ph下显示出最高活性。[0006]具有双天冬氨酸催化中心的oga催化结构域位于该酶的n-末端部分，该酶的侧翼是两个柔性结构域。c-末端部分由其前面是茎结构域的推定的hat(组蛋白乙酰转移酶结构域)组成。尚未证明hat结构域具有催化活性。[0007]o-glcn酰化蛋白以及ogt和oga本身在脑和神经元中特别丰富，表明这种修饰在中枢神经系统中起重要作用。实际上，研究证实o-glcn酰化代表了促进神经元通讯、记忆形成和神经退行性疾病的关键调节机制。此外，已经显示ogt对于几种动物模型中的胚胎发生是必需的，并且ogt无效小鼠是胚胎致死的。oga对于哺乳动物的发育也是必不可少的。两项独立研究表明，oga纯合无效小鼠在出生后存活不过24-48小时。oga缺失导致幼崽中糖原动员的缺陷，并且它在源自纯合敲除胚胎的mef中导致基因组不稳定性相关的细胞周期停滞。杂合动物存活至成年期，但它们在转录和代谢方面均表现出改变。[0008]已知o-glcnac循环中的扰动影响慢性代谢疾病，例如糖尿病以及癌症。oga杂合性抑制了apc-/+小鼠癌症模型中的肠道肿瘤发生，并且oga基因(mgea5)是一种有记录的人糖尿病易感基因位点。[0009]此外，o-glcnac修饰已经在几种参与神经退行性疾病的发展和进展的蛋白质上被鉴定，并且已表明o-glcnac水平的变化与tau在阿尔茨海默氏病中形成神经原纤维缠结(nft)蛋白的相关性。此外，已经描述了帕金森病中α-突触核蛋白的o-glcn酰化。[0010]在中枢神经系统中已经描述了六种tau剪接变体。tau在17号染色体上编码，并且其中在中枢神经系统中表达的最长剪接变体由441个氨基酸组成。这些同种型的不同之处在于两个n-末端插入物(外显子2和3)和位于微管结合结构域内的外显子10。在tau病变中外显子10是值得考虑的目标，因为它具有多个突变，使得tau易于聚集，如下所述。tau蛋白结合并稳定神经元微管细胞骨架，这对于调节细胞器沿轴突区室的细胞内运输是重要的。因此，tau在轴突的形成和维持其完整性中起重要作用。此外，还提出了树突棘生理学中的作用。[0011]tau聚集是多种所谓的tau病变的潜在原因之一，例如psp(进行性核上性麻痹)、唐氏综合征(ds)、ftld(额颞叶痴呆)、ftdp-17(伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆)、皮克氏病(pick’sdisease，pd)、cbd(皮质基底节变性)、嗜银颗粒疾病(agryophilicgraindisease，agd)和ad(阿尔茨海默氏病)。此外，tau病理学伴随着其他神经退行性疾病，例如由c9orf72突变引起的肌萎缩侧索硬化(als)或ftld。在这些疾病中，tau通过过度磷酸化进行翻译后修饰，这被认为是使tau从微管分离并使其易于聚集。tau的o-glcn酰化调节磷酸化的程度，因为携带o-glcnac残基的丝氨酸或苏氨酸残基不适于磷酸化。这有效地使得tau不易于从微管分离并且减少聚集成神经毒性缠结，这最终导致神经毒性和神经元细胞死亡。这种机制还可以减少神经元通过脑中相互连接的回路释放的tau聚集体的细胞间扩散，最近已经讨论这会加速tau相关性痴呆的病理学。实际上，从ad患者的脑中分离的过度磷酸化的tau显示出显著降低的o-glcn酰化水平。[0012]施用于jnpl3tau转基因小鼠的oga抑制剂成功地减少了nft形成和神经元损失而没有明显的副作用。该观察结果已在另一种tau病变啮齿动物模型中得到证实，其中可诱导ftd中发现的突变tau的表达(tg4510)。oga的小分子抑制剂的给药在减少tau聚集的形成和减弱皮质萎缩和脑室扩大方面是有效的。[0013]此外，淀粉样蛋白前体蛋白(app)的o-glcn酰化有利于通过非淀粉样蛋白生成途径加工以产生可溶性app片段并避免导致ad相关淀粉样蛋白-β(aβ)形成的切割。[0014]通过抑制oga维持tau的o-glcn酰化代表了减少上述神经退行性疾病中的tau-磷酸化和tau-聚集从而减弱或阻止神经退行性tau病变-疾病的进展的潜在方法。[0015]wo2012/117219(萨米特公开有限公司(summitcorp.plc.)，公开于2012年9月7日)，描述了n-[[5-(羟基甲基)吡咯烷-2-基]甲基]烷基酰胺和n-烷基-2-[5-(羟基甲基)吡咯烷-2-基]乙酰胺衍生物作为oga抑制剂。[0016]wo2014/159234(默克专利有限公司(merckpatentgmbh)，公开于2014年10月2日)主要披露了在位置1处被乙酰胺基-噻唑基甲基或乙酰胺基噁唑基甲基取代基取代的4-苯基或苄基哌啶和哌嗪化合物，以及化合物n-[5-[(3-苯基-1-哌啶基)甲基]噻唑-2-基]乙酰胺；[0017]wo2016/0300443(神经内科公司(asceneurons.a.)，2016年3月3日公开)、wo2017/144633和wo2017/0114639(神经内科公司，2017年8月31日公开)披露了1,4-双取代的哌啶或哌嗪作为oga抑制剂；[0018]wo2017/144637(神经内科公司，2017年8月31日公开)披露了，更特别地，4-取代的1-[1-(1,3-苯并二氧杂环戊烯-5-基)乙基]-哌嗪；1-[1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)乙基]-；1-[1-(2,3-二氢苯并呋喃-6-基)乙基]-；和1-[1-(2,3-二氢-1,4-苯并二噁英-6-基)乙基]-哌嗪衍生物作为oga抑制剂；[0019]wo2017/106254(默沙东公司(mercksharp&dohmecorp.)描述了取代的n-[5-[(4-亚甲基-1-哌啶基)甲基]噻唑-2-基]乙酰胺化合物作为oga抑制剂。[0020]仍然需要具有有利的特性平衡的oga抑制剂化合物，例如具有改善的效力、良好的生物利用度、药代动力学、和脑渗透和/或更好的毒性谱。因此，本发明的目的是提供克服这些问题中的至少一些问题的化合物。技术实现要素：[0021]本发明涉及具有式(i)的化合物[0022][0023]及其互变异构体和立体异构形式，其中[0024]ra是选自下组的杂芳基基团，该组由以下组成：吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、哒嗪-3-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基和吡嗪-2-基，其各自可任选地被1个、2个或3个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下组成：卤代；氰基；任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；-c(o)nraraa；nraraa；和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷氧基；其中ra和raa各自独立地选自由以下组成的组：氢和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；[0025]la选自下组，该组由以下组成：共价键、-ch2-、-o-、-och2-、-ch2o-、-nh-、-n(ch3)-、-nhch2-和-ch2nh-；[0026]x表示0或1；[0027]r是h或ch3；并且[0028]rb是选自下组的芳香族杂双环基团，该组由以下组成：(b-1)至(b-12)[0029][0030][0031]其中[0032]x1a和x1b各自独立地表示ch或n；并且y1表示o或s，条件是x1a和x1b中的至少一个是ch，并且当y1是s时，x1a或x1b是n；[0033]x2表示ch或n；y2表示o或s；[0034]x3和x4各自独立地选自n和cf；条件是[0035]当x3是n时，x4是cf；当x3是cf时，x4是n；[0036]y3-y5中的一个或两个是杂原子，每个独立地选自下组，该组由以下组成：＝n-、>nh、>n(c1-4烷基)、s和o，条件是[0037]如果存在，y3-y5中最多一个可以是o或s；并且其余的y3-y5各自独立地选自下组，该组由以下组成：ch和c(c1-4烷基)；[0038]x5表示ch或n；[0039]y6或y7之一是＝n-，并且另一个是>nh或>nch3；[0040]x6、x7和x8各自独立地表示ch或n，条件是它们中最多一个可以是n，并且条件是当b是chr附接点时，x7是c；[0041]y8和y9各自独立地选自下组，该组由以下组成：o、s、nh和nch3；[0042]x9和x10各自独立地表示ch或n，条件是它们中至少一个是ch；[0043]当存在时，a和b表示芳香族杂双环基团rb与chr的附接点；[0044]r1、r2和r3各自选自c1-4烷基；[0045]r4和r5各自选自下组，该组由以下组成：h和c1-4烷基；[0046]y10表示o或s；[0047]n表示1或2；[0048]rc选自由以下组成的组：氟、甲基、羟基、甲氧基、三氟甲基和二氟甲基；[0049]rd选自由以下组成的组：氢、氟、甲基、羟基、甲氧基、三氟甲基和二氟甲基；并且[0050]y表示0、1或2；[0051]条件是[0052]a)当存在于与哌啶二基环或吡咯烷二基环的氮原子相邻的碳原子处时，rc不是羟基或甲氧基；[0053]b)当rc存在于与c-rd相邻的碳原子处时，rc或rd不能同时选自羟基或甲氧基；[0054]c)当la是-o-、-och2-、-ch2o-、-nh-、-n(ch3)-、-nh(ch2)-或-(ch2)nh-时，rd不是羟基或甲氧基；[0055]及其药学上可接受的盐和溶剂化物。[0056]本发明例证了包含药学上可接受的载体以及上述化合物中的任一种的药物组合物。本发明例证了通过混合上述化合物中的任一种与药学上可接受的载体而制备的药物组合物。本发明例证了用于制备药物组合物的方法，该方法包括将上述化合物中的任一种与药学上可接受的载体混合。[0057]本发明例示了预防或治疗由o-glcnac水解酶(oga)的抑制介导的障碍的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的上述化合物或药物组合物中的任一种。[0058]本发明进一步例示了抑制oga的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用预防或治疗有效量的上述化合物或药物组合物中的任一种。[0059]本发明的一个实例是预防或治疗选自tau病变的障碍的方法，特别是选自下组的tau病变，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、和嗜银颗粒疾病；或伴有tau病理学的神经退行性疾病，特别是选自由c9orf72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆的神经退行性疾病，该方法包括向对其有需要的受试者施用预防或治疗有效量的上述化合物或药物组合物中的任一种。[0060]本发明的另一个实例是上述化合物中的任一种用于在对其有需要的受试者中预防或治疗tau病变，特别是选自下组的tau病变，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、和嗜银颗粒疾病；或伴有tau病理学的神经退行性疾病，特别是选自由c9orf72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆的神经退行性疾病。具体实施方式[0061]本发明涉及如上文所定义的具有式(i)的化合物及其药学上可接受的加成盐和溶剂化物。具有式(i)的化合物是o-glcnac水解酶(oga)的抑制剂，并且可用于预防或治疗tau病变，特别是选自下组的tau病变，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、和嗜银颗粒疾病；或者可用于预防或治疗伴有tau病理学的神经退行性疾病，特别是选自由c9orf72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆的神经退行性疾病。[0062]在一个特定的实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中[0063]ra是选自下组的杂芳基基团，该组由以下组成：吡啶-2-基、吡啶-4-基和嘧啶-4-基，其各自可任选地被1个、2个或3个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下组成：卤代；氰基，任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；-c(o)nraraa；nraraa；和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷氧基；其中ra和raa各自独立地选自由以下组成的组：氢和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；[0064]及其药学上可接受的盐和溶剂化物。[0065]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中[0066]ra是选自下组的杂芳基基团，该组由以下组成：吡啶-4-基和嘧啶-4-基，其各自可任选地被1个、2个或3个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下组成：卤代；氰基，任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；-c(o)nraraa；nraraa；和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷氧基；其中ra和raa各自独立地选自由以下组成的组：氢和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；[0067]及其药学上可接受的盐和溶剂化物。[0068]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中[0069]ra是选自下组的杂芳基基团，该组由以下组成：吡啶-2-基、吡啶-4-基和嘧啶-4-基，其各自可任选地被1个、2个或3个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下组成：卤代；任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷氧基；[0070]及其药学上可接受的盐和溶剂化物。[0071]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中[0072]ra是选自下组的杂芳基基团，该组由以下组成：吡啶-2-基和吡啶-4-基，特别是吡啶-4-基，其各自可任选地被1个、2个或3个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下组成：卤代；任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷氧基；[0073]及其药学上可接受的盐和溶剂化物。[0074]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中[0075]ra是选自下组的杂芳基基团，该组由以下组成：吡啶-4-基和嘧啶-4-基，其各自可任选地被1个或2个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下组成：任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷氧基；[0076]及其药学上可接受的盐和溶剂化物。[0077]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中la选自由以下组成的组：-ch2-、-o-、-och2-、-ch2o-、-nh-、-n(ch3)-、-nhch2-和-ch2nh-。[0078]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中la选自由以下组成的组：共价键、-ch2-、-o-、-och2--ch2o-、-nh-、-nhch2-和-ch2nh-。[0079]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中la选自由以下组成的组：共价键、-ch2-、-o-、-och2-和-nhch2-。[0080]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中la选自由以下组成的组：共价键、-ch2-、-o-、-och2-和-ch2o-。[0081]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中la自由以下组成的组：共价键、-ch2-、-o-和-och2-。[0082]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中la选自由以下组成的组：-ch2-、-o-、-och2-和-nhch2-。[0083]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中la选自由以下组成的组：-ch2-、-o-和-och2-。[0084]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中y是0。[0085]在实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中rd是h。[0086]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中rb选自由以下组成的组：(b-1)、(b-2)、(b-3)、(b-4)、(b-5)、(b-6)、(b-8)、(b-9)和(b-10)。[0087]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中rb选自由以下组成的组：(b-1)、(b-2)、(b-3)、(b-4)、(b-5)和(b-9)。[0088]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中rb选自由以下组成的组：(b-1)、(b-2)、(b-5)和(b-9)。[0089]在另一个实施例中，本发明涉及具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中rb选自由以下组成的组：(b-5)、(b-9)和(b-12)，特别是(b-5)和(b-9)。[0090]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中[0091]ra是选自下组的杂芳基基团，该组由以下组成：吡啶-2-基、吡啶-4-基和嘧啶-4-基，其各自可任选地被1个、2个或3个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下组成：卤代；任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷氧基；[0092]la选自下组，该组由以下组成：共价键、-ch2-、-o-、-och2-、-ch2o-、-nh-、-nhch2-和-ch2nh-；[0093]x表示0或1；[0094]r是h或ch3；并且[0095]rb选自下组，该组由以下组成：(b-1)、(b-2)、(b-3)、(b-4)、(b-5)、(b-6)、(b-8)、(b-9)和(b-10)；其中[0096]x1a和x1b各自独立地表示ch或n；并且y1表示o或s，条件是x1a和x1b中的至少一个是ch，并且当y1是s时，x1a或x1b是n；[0097]x2表示ch或n；y2表示o或s；[0098]x3是n，并且x4是cf；[0099]y3-y5中的一个或两个各自独立地表示＝n-、>nh或s，条件是当存在时，y3-y5中的最多一个可以是s；并且其余的y3-y5各自独立地选自下组，该组由以下组成：ch和c(c1-4烷基)；[0100]x5表示ch或n；[0101]y6或y7之一是＝n-，并且另一个是>nh或>nch3；[0102]x6、x7和x8各自独立地表示ch或n，条件是它们中最多一个可以是n，并且条件是当b是chr附接点时，x7是c；[0103]y8和y9各自是o或s；[0104]n是1；[0105]rd是h；并且[0106]y是0；[0107]及其药学上可接受的盐和溶剂化物。[0108]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中[0109]ra是选自下组的杂芳基基团，该组由以下组成：吡啶-4-基和嘧啶-4-基，其各自可任选地被1个、2个或3个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下组成：卤代；任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷氧基；[0110]la选自下组，该组由以下组成：共价键、-ch2-、-o-、-och2-、和-ch2o-；[0111]x表示0或1；[0112]r是h或ch3；并且[0113]rb选自下组，该组由以下组成：(b-1)、(b-2)、(b-3)、(b-4)、(b-5)、(b-6)、(b-8)、(b-9)和(b-10)；其中[0114]x1a和x1b各自独立地表示ch或n；并且y1表示o或s，条件是x1a和x1b中的至少一个是ch，并且当y1是s时，x1a或x1b是n；[0115]x2表示ch或n；y2表示o或s；[0116]x3是n，并且x4是cf；[0117]y3-y5中的一个或两个各自独立地表示＝n-或s，条件是当存在时，y3-y5中的最多一个可以是s；并且其余的y3-y5各自独立地选自下组，该组由以下组成：ch和c(c1-4烷基)；[0118]x5表示ch或n；[0119]y6或y7之一是＝n-，并且另一个是>nh或>nch3；[0120]x6、x7和x8各自独立地表示ch或n，条件是它们中最多一个可以是n，并且条件是当b是chr附接点时，x7是c；[0121]y8和y9各自是o；[0122]n是1；[0123]rd是h；并且[0124]y是0；[0125]及其药学上可接受的盐和溶剂化物。[0126]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中[0127]ra是选自下组的杂芳基基团，该组由以下组成：吡啶-4-基和嘧啶-4-基，其各自可任选地被1个、2个或3个各自独立地选自下组的取代基取代，该组由以下组成：卤代；任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷基；和任选地被1个、2个或3个独立选择的卤代取代基取代的c1-4烷氧基；[0128]la选自下组，该组由以下组成：共价键、-ch2-、-o-、和-och2-；[0129]x表示0或1；[0130]r是h或ch3；并且[0131]rb选自下组，该组由以下组成：(b-1)、(b-2)、(b-3)、(b-4)、(b-5)、(b-6)、(b-8)、(b-9)和(b-10)；其中[0132]x1a和x1b各自独立地表示ch或n；并且y1表示o或s，条件是x1a和x1b中的至少一个是ch，并且当y1是s时，x1a或x1b是n；[0133]x2表示ch或n；y2表示o或s；[0134]x3是n，并且x4是cf；[0135]y3-y5中的一个或两个各自独立地表示＝n-或s，条件是当存在时，y3-y5中的最多一个可以是s；并且其余的y3-y5各自独立地选自下组，该组由以下组成：ch和c(c1-4烷基)；[0136]x5表示ch或n；[0137]y6或y7之一是＝n-，并且另一个是>nh或>nch3；[0138]x6、x7和x8各自独立地表示ch或n，条件是它们中最多一个可以是n，并且条件是当b是chr附接点时，x7是c；[0139]y8和y9各自是o；[0140]n是1；[0141]rd是h；并且[0142]y是0；[0143]及其药学上可接受的盐和溶剂化物。[0144]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中rb选自由以下组成的组：[0145][0146]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中rb选自由以下组成的组：[0147][0148][0149]在又另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中rb选自由以下组成的组：[0150][0151]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中rb选自由以下组成的组：[0152][0153]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中rb选自由以下组成的组：[0154][0155]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中rb选自由以下组成的组：[0156][0157]在另一个实施例中，本发明涉及如在本文中提及的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中[0158]ra是被1个或2个各自独立地选自c1-4烷基的取代基取代的吡啶-4-基；[0159]la选自下组，该组由以下组成：共价键、-ch2-、-o-、-och2-、和-ch2o-，特别是选自-ch2-、-o-、-och2-、和-ch2o-；[0160]x表示0或1；[0161]r是ch3；并且[0162]rb是[0163]及其药学上可接受的盐和溶剂化物。[0164]定义[0165]“卤代”应当表示氟、氯以及溴；“c1-4烷基”应当表示分别具有1个、2个、3个或4个碳原子的直链或支链饱和烷基基团，例如甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、丁基、1-甲基-丙基、2-甲基-1-丙基、1,1-二甲基乙基等；“c1-4烷氧基”应当表示醚基团，其中c1-4烷基如前所定义。当提及la时，应从左到右读取定义，其中接头的左侧部分结合至ra，并且接头的右侧部分结合至吡咯烷二基环或哌啶二基环。因此，当la是例如-o-ch2-时，则ra-la-是ra-o-ch2-。当rc存在不止一次时，在可能的情况下，它可以结合在吡咯烷二基环或哌啶二基环的相同碳原子处，并且每种情况可以不同。[0166]一般而言，每当术语“取代”用于本发明时，除非另外指示或上下文中是明确的，否则意在指示在使用“取代”的表述中指示的原子或基团上的一个或多个氢(特别是1至3个氢、优选地1个或2个氢、更优选地1个氢)被来自所指示基团的取代基的选择项替换，条件是未超过正常的化合价，并且该取代导致了化学稳定的化合物(即，足够稳健以承受从反应混合物分离至有用程度的纯度并且配制成治疗剂的化合物)。[0167]如本文所用的术语“受试者”是指动物，优选地是哺乳动物，最优选地是人类，该受试者是或已经成为治疗、观察或实验的对象。因此，如本文所用，术语“受试者”涵盖患者、以及具有发展如本文所定义的疾病或病症风险的无症状或症前个体。[0168]如本文所用的术语“治疗有效量”意指由研究员、兽医、医师或其他临床医生寻找的，在组织系统、动物或人类中引起生物学或医学应答的活性化合物或药物试剂的量，该应答包括正在被治疗的疾病或障碍的症状的减轻。如本文所用的术语“预防有效量”意指显著降低要预防的疾病或障碍发作可能性的活性化合物或药物试剂的量。[0169]如本文所用，术语“组合物”旨在涵盖包含处于特定量的特定成分的产品，以及直接或间接地源于处于特定量的特定成分的组合的任何产品。[0170]在上下文中，术语“具有式(i)的化合物”意指包括其加成盐、溶剂化物以及立体异构体。[0171]在上下文中，术语“立体异构体”或“立体化学异构形式”可互换地使用。[0172]本发明包括呈纯立体异构体形式或呈两种或更多种立体异构体的混合物的具有式(i)的化合物的所有立体异构体。[0173]对映异构体为彼此不可重叠的镜像的立体异构体。对映异构体对的1:1混合物是外消旋体或外消旋混合物。非对映体(或非对映异构体)为不是对映异构体的立体异构体，即它们并非为镜像关系。如果化合物含有双键，则这些取代基可以呈e或z构型。如果化合物含有双取代的环烷基基团，则这些取代基可以呈顺式或反式构型。因此，本发明包括对映异构体、非对映体、外消旋体、e异构体、z异构体、顺式异构体、反式异构体及其混合物。[0174]绝对构型是根据卡恩-英戈尔德-普雷洛格(cahn-ingold-prelog)系统指定的。不对称原子处的构型由r或s规定。绝对构型未知的已拆分的化合物可以根据它们旋转平面偏振光的方向而由(+)或(-)指定。[0175]当鉴定特定的立体异构体时，这意指所述立体异构体基本上不含其他异构体，即与小于50％、优选地小于20％、更优选地小于10％、甚至更优选地小于5％，特别是小于2％并且最优选地小于1％的其他立体异构体相关联。因此，当具有式(i)的化合物例如被指定为(r)时，这意指该化合物基本上不含(s)异构体；当具有式(i)的化合物例如被指定为e时，这意指该化合物基本上不含z异构体；当具有式(i)的化合物例如被指定为顺式时，这意指该化合物基本上不含反式异构体。[0176]用于在医学中使用，本发明的化合物的加成盐是指无毒性“药学上可接受的加成盐”。然而，其他盐可以适用于制备根据本发明的化合物或其药学上可接受的加成盐。化合物的合适的药学上可接受的加成盐包括可以例如通过将化合物的溶液与药学上可接受的酸的溶液混合而形成的酸加成盐，该药学上可接受的酸如盐酸、硫酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸。此外，在本发明的化合物携带酸性部分时，其合适的药学上可接受的加成盐可以包括碱金属盐，例如钠盐或钾盐；碱土金属盐，例如钙盐或镁盐；以及与合适的有机配体形成的盐，例如季铵盐。[0177]可以在药学上可接受的加成盐的制备中使用的代表性酸包括但不限于以下：乙酸、2,2-二氯乙酸、酰化氨基酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、l-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、(+)-樟脑酸、樟脑磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基-乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、d-葡糖酸、d-葡萄糖醛酸、l-谷氨酸、β-氧代-戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、(+)-l-乳酸、(±)-dl-乳酸、乳糖酸、马来酸、(-)-l-苹果酸、丙二酸、(±)-dl-扁桃酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、磷酸、l-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、单宁酸、(+)-l-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟甲基磺酸以及十一碳烯酸。可以用于制备药学上可接受的加成盐的代表性碱包括但不限于以下：氨、l-精氨酸、苯乙苄胺、苯乍生、氢氧化钙、胆碱、二甲基乙醇胺、二乙醇胺、二乙胺、2-(二乙氨基)-乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-甲基-葡糖胺、海巴明、1h-咪唑、l-赖氨酸、氢氧化镁、4-(2-羟乙基)-吗啉、哌嗪、氢氧化钾、1-(2-羟乙基)吡咯烷、仲胺、氢氧化钠、三乙醇胺、缓血酸胺以及氢氧化锌。[0178]化合物的名称根据由化学文摘社(chemicalabstractsservice)(cas)商定的命名规则或者根据由国际纯粹与应用化学联合会(internationalunionofpureandappliedchemistry)(iupac)商定的命名规则来产生。[0179]最终化合物的制备[0180]根据本发明的这些化合物通常可以通过一系列步骤进行制备，其中的每个步骤是本领域技术人员所已知的。特别地，这些化合物可以根据以下合成方法进行制备。[0181]具有式(i)的化合物能以对映异构体的可以遵循领域已知的拆分程序与彼此分离的外消旋混合物形式合成。具有式(i)的外消旋化合物可以通过与合适的手性酸反应而转化为相应的非对映盐形式。所述非对映盐形式随后例如通过选择性或分步结晶而分离，并且对映异构体通过碱由其释放。分离具有式(i)的化合物的对映异构形式的替代性方式涉及使用手性固定相的液相色谱法。所述纯立体化学异构形式还可以来源于适当起始材料的相应的纯立体化学异构形式，条件是反应立体定向地发生。[0182]实验程序1[0183]根据反应方案(1)，可以切割具有式(iia)、(iib)或(iic)的中间体化合物中的保护基团来制备具有式(i-a)、(i-b)或(i-c)的最终化合物。在反应方案(1)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，并且pg是氮官能团的合适保护基，例如像2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基(sem)、叔丁氧基羰基(boc)、乙氧基羰基、苄基、苄氧基羰基(cbz)。用于除去此类保护基团的合适的方法是本领域技术人员公知的，并且包括但不限于：sem脱保护：在反应惰性溶剂(例如像，二氯甲烷)中用质子酸(例如像，三氟乙酸)处理；boc脱保护：在反应惰性溶剂(例如像二氯甲烷)中用质子酸(例如像三氟乙酸)处理；乙氧基羰基脱保护：在反应惰性溶剂(例如像，湿的四氢呋喃)中用强碱(例如像，氢氧化钠)处理；苄基脱保护：在合适的催化剂(例如像，钯碳)的存在下，在反应惰性溶剂(例如像，乙醇)中进行催化氢化；苄氧基羰基脱保护：在合适的催化剂(例如像，钯碳)的存在下，在反应惰性溶剂(例如像，乙醇)中进行催化氢化。在反应方案(1)中，所有变量都如在式(i)中所定义的。为简单起见，仅显示了在咪唑环上的两种可能的n-取代的区域异构体之一。[0184][0185]反应方案1[0186]实验程序2[0187]根据反应方案(2)，可以通过使具有式(iii)的中间体化合物与具有式(iv)的化合物反应来制备具有式(i-d)的最终化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像二氯甲烷或1,2-二氯甲烷，金属氢化物(例如像三乙酰氧基硼氢化钠，氰基硼氢化钠或硼氢化钠)中进行，并且可能需要存在合适的碱(例如像三乙胺或二异丙基乙胺和/或路易斯酸，例如像四异丙氧基钛或四氯化钛)，在热条件下(例如0℃至140℃，更特别在0℃或在室温，或在140℃)进行例如1小时或24小时。在反应方案(2)中，所有变量都如在式(i)中所定义的。[0188][0189]反应方案2[0190]实验程序3[0191]另外，根据反应方案(3)，可以通过使具有式(iii)的中间体化合物与具有式(v)的化合物进行反应，随后使形成的亚胺衍生物与具有式(vi)的中间体化合物进行反应来制备具有式(i-d)的最终化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像，无水二氯甲烷)中，在路易斯酸(例如像，四异丙醇钛或四氯化钛)中，在热条件(如0℃至室温)下进行例如1小时或24小时。在反应方案(3)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，并且其中卤代是氯、溴或碘。[0192][0193]反应方案3[0194]实验程序4[0195]另外，根据反应方案(4)，可以通过使具有式(iii)的中间体化合物与具有式(vii)的化合物反应来制备具有式(i-d)的最终化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像乙腈)，合适的碱(例如像三乙胺或二异丙基乙胺)中，在热条件下(例如0℃至75℃，更特别在0℃，或在室温或在75℃)进行例如1小时或24小时。在反应方案(4)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，并且其中卤代是氯、溴或碘。[0196][0197]反应方案4[0198]实验程序5[0199]另外，根据反应方案(5)，通过使具有式(viii-a)的中间体化合物与具有式(ix-a)的化合物反应，可以制备具有式(i)的最终化合物(其中la是-nh-ch2-，在本文中称为(i-e))。反应在钯催化剂(例如像，三(二亚苄基丙酮)二钯(0))，配体(例如像，2-二环己基膦基-2'-(n,n-二甲基氨基)联苯)，碱(例如像，叔丁醇钠)，合适的反应惰性溶剂(例如像，无水1,4-二噁烷)的存在下，在热条件(例如在约100℃)下进行例如4小时或24小时。在反应方案(5a)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，且其中卤代是氯、溴或碘。[0200][0201]反应方案5a[0202]根据反应方案(5b)，可以通过具有式(viii-b)的羟基化合物与具有式(ix-b)的羟基衍生物进行“光延反应”来制备具有式(i)的最终化合物，其中la是-o-ch2-，在本文中称为(i-f)。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像，甲苯)，膦(如三苯基膦)，合适的偶联剂(例如像，diad(cas：2446-83-5))中，在热条件(例如像，在约70℃)下进行例如17小时。在反应方案(5b)中，所有变量都如在式(i)中所定义的。[0203][0204]反应方案5b[0205]实验程序6[0206]根据反应方案(6)，可以通过具有式(iii)的中间体化合物与具有式(xa)、(xb)或(xc)的化合物进行反应，随后使形成的亚胺衍生物与具有式(vi)的中间体化合物进行反应来制备具有式(iia)、(iib)或(iic)的中间体化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像，无水二氯甲烷)中，在路易斯酸(例如像，四异丙醇钛或四氯化钛)中，在热条件(如0℃至室温)下进行例如1小时或24小时。在反应方案(6)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，并且其中卤代是氯、溴或碘。为简单起见，仅显示了在咪唑环上的两种可能的n-取代的区域异构体之一。[0207][0208]反应方案6[0209]实验程序7[0210]根据反应方案(7)，可以切割具有式(xi)的中间体化合物中保护基团来制备具有式(iii)的中间体化合物。在反应方案(7)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，并且pg是氮官能团的合适的保护基团，例如像，叔丁氧基羰基(boc)、乙氧基羰基、苄基、苄氧基羰基(cbz)。用于除去此类保护基团的合适的方法是本领域技术人员公知的，并且包括但不限于：boc脱保护：在反应惰性溶剂(例如像二氯甲烷)中用质子酸(例如像三氟乙酸)处理，或在反应惰性溶剂(例如甲醇)中用酸性树脂(例如像15氢形式)处理；乙氧基羰基脱保护：在反应惰性溶剂(例如像，湿的四氢呋喃)中用强碱(例如像，氢氧化钠)处理；苄基脱保护：在合适的催化剂(例如像，钯碳)的存在下，在反应惰性溶剂(例如像，乙醇)中进行催化氢化；苄氧基羰基脱保护：在合适的催化剂(例如像，钯碳)的存在下，在反应惰性溶剂(例如像，乙醇)中进行催化氢化。[0211][0212]反应方案7[0213]实验程序8[0214]根据反应方案(8)，可以通过使具有式(ix)的卤代化合物与具有式(xii-a)的有机锌化合物进行“根岸偶联(negishicoupling)”反应来制备具有式(xi)的中间体化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像，四氢呋喃)和合适的催化剂(例如像，pd(oac)2)，合适的过渡金属的配体(例如像，2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基联苯[cas：787618-22-8])中，在热条件(例如像，室温)下进行例如1小时。在反应方案(8)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，la是键或ch2，并且卤代优选地是溴或碘。pg如在式(xi)中所定义。[0215][0216]反应方案8[0217]实验程序9[0218]根据反应方案(9)，可以通过使具有式(xiii)的卤代化合物与锌反应来制备具有式(xii)的中间体化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像，四氢呋喃)和合适的盐(例如像，氯化锂)中，在热条件(例如像，40℃)下，例如在连续流动反应器中进行。在反应方案(9)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，la是键或ch2，并且卤代优选地是碘。pg如在式(xi)中所定义。[0219][0220]反应方案9[0221]实验程序10[0222]根据反应方案(10)，可以通过使具有式(xiv)的烯烃化合物进行氢化反应来制备式(xi-a)的中间体化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像，甲醇)和合适的催化剂(例如像，钯碳)和氢中，在热条件(例如像，室温)下进行例如3小时。在反应方案(10)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，并且pg如在式(xi)中所定义。[0223][0224]反应方案10[0225]实验程序11[0226]根据反应方案(11)，可以通过使具有式(xv)的烯烃化合物与具有式(ix)的卤代衍生物进行“铃木偶联”反应来制备具有式(xiv)的中间体化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像，1,4-二噁烷)和合适的催化剂(例如像，四(三苯基膦)钯(0))，合适的碱(例如像，nahco3(水性饱和溶液))中，在热条件(例如像，130℃)下，在微波辐射下进行例如30min。在反应方案(11)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，卤代优选地是溴或碘，la是键，并且pg如在式(xi)中所定义。[0227][0228]反应方案11[0229]实验程序12[0230]根据反应方案(12)，可以通过使具有式(xvi)的羟基化合物与具有式(ix)的卤代衍生物进行反应来制备具有式(xi-b)的中间体化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像，二甲基甲酰胺或二甲亚砜)和合适的碱(例如像，氢化钠或叔丁醇钾)中，在热条件(例如像，50℃)下进行例如48小时。在反应方案(12)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，la’是键或ch2，并且卤代优选地是氯、溴或氟。pg如在式(xi)中所定义。[0231][0232]反应方案12[0233]实验程序13[0234]可替代地，根据反应方案(13)，可以通过使具有式(xvi)的羟基化合物与具有式(ix-a)的羟基衍生物进行“光延反应”来制备具有式(xi-c)的中间体化合物。反应在合适的反应惰性溶剂(例如像，甲苯)，膦(如三苯基膦)，合适的偶联剂(例如像，diad(cas：2446-83-5))中，在热条件(例如像，70℃)下进行例如17小时。在反应方案(13)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，la是键或ch2，并且卤代优选地是氯、溴或氟。pg如在式(xi)中所定义。[0235][0236]反应方案13[0237]实验程序14[0238]根据反应方案(14)，可以脱保护具有式(xvii)的中间体化合物中的醇基来制备具有式(viii-b)的中间体化合物。反应在氟化物源(例如像，四丁基氟化铵)的存在下，在合适的反应惰性溶剂(例如像，无水四氢呋喃)中，在热条件(例如像，室温)下进行例如16小时。在反应方案(14)中，所有变量都如在式(i)中所定义的，并且pg1选自由以下组成的组：三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、或叔丁基二苯基甲硅烷基。[0239][0240]反应方案14[0241]具有式(iv)、(v)、(vi),(vii)、(viii-a),(viii-b)、(ix),(ix-a)、(xa),(xb)、(xc)、(xv)、(xvi)和(xvii)的中间体是可商购的，或者可以通过本领域技术人员已知的程序制备。[0242]药理学[0243]本发明的化合物及其药学上可接受的组合物抑制o-glcnac水解酶(oga)并且因此可以用于治疗或预防涉及tau病理学(也称为tau病变)的疾病，以及具有tau包涵体的疾病。此类疾病包括但不限于：阿尔茨海默氏病、肌萎缩侧索硬化和帕金森综合征-痴呆复合征、嗜银颗粒疾病、慢性创伤性脑病、皮质基底节变性、弥散性神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、连锁于17号染色体的伴帕金森综合征的额颞痴呆(由mapt突变引起)、额颞叶变性(某些病例由c9orf72突变引起)、吉斯特曼-斯召斯列疾病(gerstmann--scheinkerdisease)、瓜德罗普岛帕金森综合征(guadeloupeanparkinsonism)、强直性肌营养不良、神经退行性病变伴有脑铁沉积、c型尼曼-皮克病(niemann-pickdisease,typec)、具有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元疾病、皮克氏病、脑炎后帕金森综合征、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮层下神经胶质增生、进行性核上性麻痹、slc9a6相关的精神发育迟滞、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆、以及具有球状胶质包涵体的白质tau病变。[0244]如本文所用，术语“治疗”旨在是指其中可能存在一种疾病的进展的减慢、中断、遏制或阻止或者症状的减轻的所有过程，但未必指示所有症状的全部消除。如本文所用，术语“预防”旨在是指其中可能存在一种疾病的发作的减慢、中断、遏制或阻止的所有过程。[0245]本发明还涉及根据通式(i)的化合物、其立体异构形式或其药学上可接受的酸或碱加成盐，用于治疗或预防选自下组的疾病或病症，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、肌萎缩侧索硬化和帕金森综合征-痴呆复合征、嗜银颗粒疾病、慢性创伤性脑病、皮质基底节变性、弥散性神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、连锁于17号染色体的伴帕金森综合征的额颞痴呆(由mapt突变引起)、额颞叶变性(某些病例由c9orf72突变引起)、吉斯特曼-斯召斯列疾病、瓜德罗普岛帕金森综合征、强直性肌营养不良、神经退行性病变伴有脑铁沉积、c型尼曼-皮克病、具有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元疾病、皮克氏病、脑炎后帕金森综合征、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮层下神经胶质增生、进行性核上性麻痹、slc9a6相关的精神发育迟滞、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆、以及具有球状胶质包涵体的白质tau病变。[0246]本发明还涉及根据通式(i)的化合物、其立体异构形式或其药学上可接受的酸或碱加成盐，用于治疗、预防、改善、控制选自下组的疾病或病症或者降低其风险，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、肌萎缩侧索硬化和帕金森综合征-痴呆复合征、嗜银颗粒疾病、慢性创伤性脑病、皮质基底节变性、弥散性神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、连锁于17号染色体的伴帕金森综合征的额颞痴呆(由mapt突变引起)、额颞叶变性(某些病例由c9orf72突变引起)、吉斯特曼-斯召斯列疾病、瓜德罗普岛帕金森综合征、强直性肌营养不良、神经退行性病变伴有脑铁沉积、c型尼曼-皮克病、具有神经原纤维缠结的非关岛运动神经元疾病、皮克氏病、脑炎后帕金森综合征、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮层下神经胶质增生、进行性核上性麻痹、slc9a6相关的精神发育迟滞、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结痴呆、以及具有球状胶质包涵体的白质tau病变。[0247]特别地，这些疾病或病症可特别选自tau病变，更特别是选自下组的tau病变，该组由以下组成：阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、和嗜银颗粒疾病；或者这些疾病或病症可特别是伴有tau病理学的神经退行性疾病，更特别是选自由c9orf72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆的神经退行性疾病。[0248]阿尔茨海默氏病和tau病变疾病的临床前状态：[0249]近年来，美国(us)国家老龄化研究所和国际工作组已经提出了更好地定义ad的临床前(无症状)阶段的指南(duboisb等人,lancetneurol.[柳叶刀神经病学],2014；13:614-629；sperling,ra等人,alzheimersdement.[阿尔茨海默氏病与痴呆],2011；7:280-292)。假设模型假定aβ累积和tau聚集在明显的临床损害发作前许多年开始。升高的淀粉样蛋白累积、tau聚集和ad发展的关键风险因素是年龄(即65岁或以上)、apoe基因型和家族史。大约三分之一的75岁以上的临床正常老年人表现出pet淀粉样蛋白和tau成像研究(后者目前不太先进)中aβ或tau累积的证据。此外，观察到csf测量中降低的aβ水平，而csf中未修饰的和磷酸化的tau的水平升高。在大型尸检研究中可以看到类似的发现，并且已经表明早在20岁及更年轻时就在脑中检测到tau聚集体。淀粉样蛋白阳性(aβ+)临床上正常的个体一致地展示出在其他生物标志物上的“ad样内表型”的证据，包括功能性磁共振成像(mri)和静息态连接两者中扰乱的功能性网络活性、氟脱氧葡萄糖18f(fdg)代谢减退、皮质变薄以及加速萎缩。累积的纵向数据也强烈地表明aβ+临床上正常的个体认知减退和进展为轻度认知损害(mci)和ad痴呆的风险增加。阿尔茨海默氏病的科学界达成共识，即这些aβ+临床上正常的个体代表ad病理学连续体中的早期阶段。因此，有人认为，如果在广泛的神经退行性病变已发生之前的疾病阶段开始，用降低aβ产生或tau聚集的治疗剂进行干预可能更有效。许多医药公司目前正在测试在前驱ad中的bace抑制作用。[0250]由于不断发展的生物标志物研究，现在可以在第一症状发生之前的临床前阶段识别出阿尔茨海默氏病。所有与临床前阿尔茨海默氏病相关的不同问题，如定义和词汇、限制、自然史、进展标志物和在无症状阶段检测疾病的伦理后果，都在alzheimer’s&dementia[阿尔茨海默氏病与痴呆]12(2016)292-323中进行了综述。[0251]在临床前阿尔茨海默氏病或tau病变中可以识别两类个体。在pet扫描中明显具有淀粉样蛋白β或tau聚集，或者在csfaβ、tau和磷酸化tau方面发生改变的认知上正常的个体被定义为处于“阿尔茨海默氏病的无症状风险状态(ar-ad)”或处于“tau病变的无症状状态”。据说患有家族性阿尔茨海默氏病的完全渗透性显性常染色体突变的个体患有“症前阿尔茨海默氏病”。已经针对多种形式的tau病变描述了tau蛋白内的显性常染色体突变。[0252]因此，在一个实施例中，本发明还涉及根据通式(i)的化合物，其立体异构形式或其药学上可接受的酸或碱加成盐，用于控制或降低临床前阿尔茨海默氏病、前驱性阿尔茨海默氏病、或在不同形式的tau病变中观察到的与tau相关的神经退行性病变的风险。[0253]如在上文已经提及的，术语“治疗”未必指示所有症状的全部消除，而是还可以指在上面提及的任何障碍中的对症治疗。鉴于具有式(i)的化合物的效用，提供治疗罹患任一种上文中提及的疾病的受试者如温血动物(包括人类)的方法，或防止受试者如温血动物(包括人类)罹患任一种上文中提及的疾病的方法。[0254]所述方法包括向受试者如温血动物(包括人类)施用，即，全身施用或局部施用，优选口服施用预防或治疗有效量的具有式(i)的化合物、其立体异构形式、其药学上可接受的加成盐或溶剂化物。[0255]因此，本发明还涉及用于预防和/或治疗任何上文中提及的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用预防或治疗有效量的根据本发明的化合物。[0256]本发明还涉及用于调节o-glcnac水解酶(oga)活性的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用预防或治疗有效量的根据本发明的和如权利要求书中所定义的化合物或根据本发明的和如权利要求书中所定义的药物组合物。[0257]治疗方法还可包括以每天一到四次摄入之间的方案施用活性成分。在这些治疗方法中，根据本发明的化合物优选地在施用之前进行配制。如在下文中所述的，合适的药物配制品通过已知程序使用熟知并且容易可得的成分来制备。[0258]可适合于治疗或预防上面提及的任何障碍或其症状的本发明的化合物可以单独施用或与一种或多种另外的治疗剂组合施用。联合疗法包括：含有具有式(i)的化合物以及一种或多种另外的治疗剂的单个药物剂量配制品的施用，以及具有式(i)的化合物和以其自身分开的药物剂量配制品存在的每种另外的治疗剂的施用。例如，可以向患者施用一起处于单个口服剂量组合物(如片剂或胶囊)中的具有式(i)的化合物和治疗剂，或可以将每种药剂以分开的口服剂量配制品施用。[0259]技术人员将熟悉本文提及的疾病或病症的替代性命名、疾病分类学以及分类系统。例如，美国精神病学协会(americanpsychiatricassociation)精神障碍诊断和统计手册(diagnostic&statisticalmanualofmentaldisorders，dsm-5tm)第五版采用神经认知障碍(ncd)(重度和轻度)，特别是由于阿尔茨海默氏病的神经认知障碍等术语。技术人员可以使用此类术语作为用于一些本文提及的疾病或病症的替代性命名。[0260]药物组合物[0261]本发明还提供了用于预防或治疗其中o-glcnac水解酶(oga)的抑制是有益的疾病的组合物，这些疾病如阿尔茨海默氏病、进行性核上性麻痹、唐氏综合征、额颞叶痴呆、伴有帕金森综合征-17的额颞痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、嗜银颗粒疾病、由c9orf72突变引起的肌萎缩侧索硬化或额颞叶痴呆，所述组合物包含治疗有效量的根据式(i)的化合物以及药学上可接受的载体或稀释剂。[0262]虽然活性成分可以单独施用，但优选地其作为药物组合物呈现。因此，本发明进一步提供了药物组合物，该药物组合物包含根据本发明的化合物以及药学上可接受的载体或稀释剂。载体或稀释剂必须在与组合物的其他成分相容的意义上是“可接受的”并且对其接受者是无害的。[0263]可以通过制药领域所熟知的任何方法来制备本发明的药物组合物。治疗有效量的呈碱形式或加成盐形式的作为活性成分的特定化合物与药学上可接受的载体组合成紧密混合物，该载体可以取决于施用所希望的制剂形式而采用多种多样的形式。这些药物组合物希望为适合于(优选适合于)全身性施用，如经口、经皮或肠胃外施用；或局部施用，如经由吸入、鼻喷雾、滴眼剂或经由霜剂、凝胶剂、洗发剂等施用。例如，在制备呈口服剂型的组合物中，可使用任何常见的药物介质，在口服液体制剂(如悬浮液、糖浆剂、酏剂和溶液)的情况下，如水、二醇类、油类、醇类等；或在粉剂、丸剂、胶囊和片剂的情况下，固体载体如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。片剂和胶囊由于其施用简易性而代表了最有利的口服单位剂型，在这种情况下显然使用固体药物载体。对于肠胃外组合物而言，载体通常将至少在很大程度上包含无菌水，但也可以包括其他成分例如以辅助溶解性。例如可制备可注射溶液，其中载体包含盐溶液、葡萄糖溶液或盐水和葡萄糖溶液的混合物。也可以制备可注射悬浮液，在这种情况下可以使用适当的液体载体、悬浮剂等。在适合于经皮施用的组合物中，载体任选地包含渗透增强剂和/或合适的可湿润剂，任选地与小比例的具有任何性质的合适的添加剂组合，这些添加剂不会对皮肤造成任何显著有害作用。所述添加剂可促进向皮肤施用和/或可有助于制备期望的组合物。这些组合物能够以不同方式，例如作为透皮贴剂、作为滴剂或作为软膏剂施用。[0264]尤其有利的是，将上述药物组合物以单位剂型配制，以实现施用的简易性和剂量的均匀性。如本说明书和权利要求书中所用的单位剂型在本文中是指适合作为单位剂量的物理离散单位，每一单位含有经计算以与所需的药物载体结合而产生所希望的治疗作用的预定量的活性成分。此类单位剂型的实例是片剂(包括刻痕或包衣片剂)、胶囊、丸剂、粉末包、糯米纸囊剂、可注射溶液或悬浮液、茶匙剂(teaspoonful)、汤匙剂(tablespoonful)等，以及分离的多个这些单位剂型。[0265]如本领域的技术人员所熟知的，施用的确切剂量和频率取决于所使用的具有式(i)的特定化合物，所治疗的特定病症，所治疗的病症的严重程度，特定患者的年龄、体重、性别、障碍程度以及总体身体健康状况，以及个体可以服用的其他药物。此外，显而易见的是，所述有效日用量可以降低或提高，这取决于所治疗的受试者的应答和/或取决于给出本发明的化合物处方的医生的评估。[0266]取决于施用模式，该药物组合物将包含按重量计从0.05％至99％，优选地按重量计从0.1％至70％，更优选地按重量计从0.1％至50％的活性成分，以及按重量计从1％至99.95％，优选地按重量计从30％至99.9％，更优选地按重量计从50％至99.9％的药学上可接受的载体，所有的百分数都基于该组合物的总重量。[0267]本发明的化合物可以用于全身性施用，如口服、经皮或肠胃外施用；或局部施用，如经由吸入、鼻喷雾、滴眼剂或经由霜剂、凝胶剂、洗发剂等施用。化合物优选地口服施用。如本领域的技术人员所熟知的，施用的确切剂量和频率取决于所使用的根据式(i)的特定化合物，所治疗的特定病症，所治疗的病症的严重程度，特定患者的年龄、体重、性别、障碍程度以及总体身体健康状况，以及个体可以服用的其他药物。此外，显而易见的是，所述有效日用量可以降低或提高，这取决于所治疗的受试者的应答和/或取决于给出本发明的化合物处方的医生的评估。[0268]可以与载体材料组合以产生单一剂型的具有式(i)的化合物的量将取决于治疗的疾病、哺乳动物种类以及特定施用模式而变化。然而，作为一般指导，本发明的化合物的合适单位剂量可以例如优选地含有0.1mg至约1000mg之间的活性化合物。优选的单位剂量是在1mg至大约500mg之间。更优选的单位剂量是在1mg至大约300mg之间。甚至更优选的单位剂量是在1mg至大约100mg之间。这样的单位剂量可以每天超过一次地施用，例如一天2、3、4、5或6次，但是优选地每天1次或2次，这样使得对于一个70kg的成人每次施用的总剂量是每kg受试者体重在0.001至大约15mg的范围中。优选的剂量是每次施用每kg受试者体重0.01至约1.5mg，并且此类疗法可以持续多个星期或月，并且在一些情况中，持续多年。然而，应当理解，任何特定患者的具体剂量水平取决于各种因素，包括采用的特定化合物的活性；所治疗的个体的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；施用时间和途径；排泄速率；先前施用的其他药物；及进行医疗的特定疾病的严重性，如本领域技术人员所理解的。[0269]典型剂量可以是一天服用一次或一天多次的一片1mg至约100mg片剂或1mg至约300mg，或者一天服用一次的、并且含有在比例上含量较高的活性成分的一粒延时释放(time-release)的胶囊或片剂。延时释放效应可以通过在不同的ph值下溶解的胶囊材料、通过经渗透压造成的缓慢释放的胶囊、或者通过控制释放的任何其他已知手段来获得。[0270]如本领域技术人员将理解的，在一些情况下有必要使用这些范围外的剂量。此外，应当注意临床医生或治疗医师结合个体患者应答将知道如何以及何时开始、中断、调节或终止治疗。[0271]本发明还提供了试剂盒，其包含根据本发明的化合物、处方信息(也称为“说明书”)、泡罩包装或瓶、以及容器。此外，本发明提供了试剂盒，其包含根据本发明的药物组合物、处方信息(也称为“说明书”)、泡罩包装或瓶、以及容器。处方信息优选包括关于施用根据本发明的化合物或药物组合物而给患者的建议或指导。特别地，处方信息包括如下给患者的建议或指导：关于根据本发明的所述化合物或药物组合物的施用，关于如何使用根据本发明的化合物或药物组合物，以预防和/或治疗对其有需要的受试者的tau病变。因此，在一个实施例中，本发明提供了套装试剂盒，其包含具有式(i)的化合物或其立体异构体，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或包含所述化合物的药物组合物，以及用于预防或治疗tau病变的说明书。本文提及的试剂盒特别地可以是适于商业销售的药物包装。[0272]对于以上提供的组合物、方法以及试剂盒，本领域技术人员将理解，用于各个的优选化合物是根据以上优选提到的那些化合物。用于组合物、方法和试剂盒的其他优选化合物是在以下非限制性实例中提供的那些化合物。[0273]实验部分[0274]在下文中,术语“mp”意指熔点,“min”意指分钟，“acn”、“mecn”或“ch3cn”意指乙腈，“aq.”意指水性的，“dmf”意指二甲基甲酰胺，“r.t.”或“rt”意指室温，“rac”或“rs”意指外消旋，“sat.”意指饱和的，“sfc”意指超临界流体色谱法，“sfc-ms”意指超临界流体色谱法/质谱法，“lc-ms”意指液相色谱法/质谱法，“hplc”意指高效液相色谱法，“iproh”意指异丙醇，“rp”意指反相，“t”意指保留时间(以分钟计)，“[m+h]+”意指化合物的游离碱的质子化质量，“wt”意指重量，“thf”意指四氢呋喃，“etoac”意指乙酸乙酯，“dcm”意指二氯甲烷，“dipea”意指n,n-二异丙基乙胺，“meoh”意指甲醇，“sat”意指饱和的，“soltn”或“sol.”意指溶液，“etoh”意指乙醇，并且“nmp”意指n-甲基吡咯烷酮，“pd(pph3)4”意指四(三苯基膦)钯(0)，“pd(pph3)2cl2”意指双(三苯基膦)二氯化钯(ii)，“pd(t-bu3p)2”意指双(二-叔-丁基膦)钯(0)，“pdcl2(dppf)”意指[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(ii)；“davephos”意指2-二环己基膦基-2’-(n,n-二甲基氨基)联苯基，“tbuxphos”意指2-二-叔丁基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯基并且“pd2(dba)3”意指三(二亚苄基丙酮)二钯(0)。[0275]无论何时在本文中表明符号“rs”，它都是指该化合物是在指定中心的一种外消旋混合物，除非另外指明。当将该一种或多种混合物分离时，已经将在一些化合物中心的立体化学构型指定为“r”或“s”；对于一些化合物，尽管该化合物本身已经作为单一的立体异构体被分离并且是对映异构体纯的/非对映体纯的，但是当绝对立体化学未确定时，已经将在指定中心的立体化学构型指定为“r*”或“s*”。通过由超临界流体色谱法(sfc)分析外消旋混合物，随后sfc比较该一种或多种分离的对映异构体，来确定在本文中报道的化合物的对映异构体过量。[0276]使用供应商提供的标准反应器在vapourtecr2+r4单元中进行流动化学反应。[0277]微波辅助的反应是在单模式反应器中进行的：在initiatortmsixtyexp微波反应器(拜泰齐公司(biotageab))或在多模式反应器中进行：microsynthlabstation(迈尔斯通公司(milestone,inc.))。[0278]使用试剂级溶剂，在硅胶60f254板(默克公司(merck))上进行薄层色谱法(tlc)。使用标准技术，在硅胶上进行开口柱色谱法，粒度网目＝230-400(默克公司)。[0279]使用易连接筒柱，在不规则硅胶(粒度15μm-40μm)上(正相一次性快速柱)，在以下不同的快速系统上运行自动快速柱色谱法：在来自阿尔钦仪器公司(armeninstrument)的spot或laflash系统、或来自因特奇美拉公司(interchim)的430evo系统、或来自安捷伦公司(agilent)的971-fp系统、或来自拜泰齐公司的isolera1sv系统。[0280]中间体i-1a、1b、1c、1d和1e的制备[0281][0282]将4-氯-2,6-二甲基吡啶(cas：3512-75-2，2g，14.1mmol)、叔丁基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸酯(cas：1251537-34-4；4.8g，15.5mmol)和pd(pph3)4(cas：14221-01-3；0.98g，0.85mmol)在nahco3(3ml)和1,4-二噁烷(24ml)的饱和溶液的脱氧混合物中的混合物在密封管中在130℃在n2下搅拌30min。然后，将混合物用水处理并用dcm萃取。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并且将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；etoac在庚烷中，0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以得到呈无色油状物的中间体1a(3.8g，93％)。[0283][0284]遵循与用于合成中间体1a所述的程序类似的程序制备中间体1b，使用4-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶(cas：1083169-00-9)作为起始材料。[0285][0286]在n2下将反式-双(二环己胺)乙酸钯(ii)(dapcy，cas：628339-96-8；0.114g，0.20mmol)添加至2-氯-4-碘-6-三氟甲基吡啶(cas：205444-22-0；3g，9.76mmol)、叔丁基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸酯(cas：1251537-34-4；3.62g，11.71mmol)和k3po4(6.21g，29.27mmol)在etoh(24ml)中的搅拌混合物中。将混合物在rt搅拌18h，然后通过过滤。用etoac洗涤垫，并在真空中蒸发滤液。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；etoac在庚烷中，梯度从0/100至20/80)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以得到呈无色油状物的中间体1c(3.8g，93％)。[0287][0288]在n2下将pd(oac)2(cas：3375-31-3；0.105g，0.47mmol)和三环己基磷鎓四氟硼酸盐(cas：58656-04-5；0.345g，0.94mmol)添加至中间体1c(3.4g，9.37mmol)、三甲基硼氧六环(cas：823-96-1；2.36ml，16.87mmol)和k2co3(2.59g，18.74mmol)在脱氧的1,4-二噁烷(35ml)中的搅拌混合物中。将混合物在100℃搅拌2h。冷却至rt后，将混合物用h2o洗涤并且用dcm萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；etoac在庚烷中，梯度从0/100至15/85)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生静置时结晶的呈淡黄色油状物的中间体1d(2.8g，87％)。[0289][0290]将甲醇钠在meoh中的25％溶液(2.14ml，9.37mmol)添加至中间体1c(3.4g，9.37mmol)在meoh(50ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h。然后添加水并且将所希望的产物用dcm萃取。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并且将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；dcm在庚烷中，梯度从20/80至100/0)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈无色油状物的中间体1e(3.1g，92％)。[0291]中间体i-2a、2ar、2as、2b、2c和2d的制备[0292][0293]将中间体1a(3.8g，13.18mmol)在etoh(250ml)中的溶液在h-cube中氢化(pd/c10％，rt，完全h2，1ml/min)。在真空中蒸发溶剂，以产生呈无色油状物的中间体2a，其无需进一步纯化即可用于下一步骤(2.7g，71％)。[0294][0295]将pd/c(10％纯度，1.18g，1.11mmol)添加至中间体1a(3.20g，11.1mmol)在etoh(64.1ml)中的搅拌溶液中。在室温将反应混合物氢化(大气压)16h。将混合物通过垫过滤并且用meoh洗涤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(sio2，庚烷中的etoac，梯度从100:0至20:80)纯化，以得到中间体2a(3.10g，96％)。通过手性sfc(固定相：chiralpakic5μm250*30mm，流动相：65％co2，35％i-proh(0.3％i-prnh2))进行第二纯化，以得到中间体2ar(1.3g，40％)和中间体2as(1.44g，45％)。[0296][0297]遵循与用于合成中间体2a所述的程序类似的程序制备中间体2b，使用中间体1b作为起始材料。[0298][0299]遵循与用于合成中间体2a所述的程序类似的程序制备中间体2c，使用中间体1d作为起始材料。[0300][0301]遵循与用于合成中间体2a所述的程序类似的程序制备中间体2d，使用中间体1e作为起始材料。[0302]中间体i-3a、i-3ar、3b、3c和3d的制备[0303][0304]将15氢形式的强酸性阳离子交换树脂(cas：39389-20-3；4meq/g，9.3g)添加到中间体2a(2.7g，9.30mmol)在meoh(47ml)中的溶液中。将混合物在rt在固相反应器中振荡16h。用meoh(丢弃滤液)洗涤树脂，然后用7nnh3在meoh中的溶液洗涤。在真空中浓缩滤液，以产生呈橙色油状物的中间体3a(1.2g，68％)。[0305][0306]将中间体2ar(1.30g，4.48mmol)在meoh(34.4ml)中的溶液添加至包含15氢形式(cas：39389-20-3；4.76g，22.4mmol)的密闭反应器中。将反应混合物在室温在固相反应器中振荡16h。将树脂用meoh(将此级分丢弃)洗涤。添加nh3(在meoh中7n)(34ml)，并将混合物在固相反应器中振荡2h。将树脂过滤，并用nh3(在meoh中7n)洗涤(3x34ml；振荡30min)。将滤液在真空中浓缩，以得到中间体3ar(820mg，96％)。[0307][0308]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体3b，使用中间体2b作为起始材料。将中间体3b通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)纯化。[0309][0310]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体3c，使用中间体2c作为起始材料。将中间体3c通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)纯化。[0311][0312]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体3d，使用中间体2d作为起始材料。将中间体3b通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)纯化。[0313]中间体i-4a、4b、4c、4d和4e的制备[0314][0315]在0℃将氢化钠(cas：7646-69-7；在矿物油中的60％分散液，0.30g，7.45mmol)添加至1-boc-3-羟基哌啶(cas：85275-45-2；1.5g，7.45mmol)在dmf(6ml)中的搅拌溶液中，并将混合物搅拌30min。使混合物温热至rt，并滴加2,6-二甲基-4-氯吡啶(cas：3512-75-2；0.95mlg，7.45mmol)在dmf(1ml)中的溶液。将混合物在rt搅拌16h，并且然后在60℃下搅拌6h。冷却至rt后，添加水，并且用etoac萃取混合物。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(二氧化硅；etoac在庚烷中，梯度从0/100至30/70)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈无色油状物的中间体4a(0.42g，18％)。[0316][0317]在-40℃将氢化钠(cas：7646-69-7；在矿物油中的60％分散液，0.50g，12.42mmol)添加至1-boc-3-羟基哌啶(cas：85275-45-2；2.5g，12.42mmol)在dmf(14ml)中的搅拌溶液中。将混合物在-40℃搅拌30min，然后滴加2-氯-4-碘-6-三氟甲基吡啶(cas：205444-22-0；3.82g，12.42mmol)在dmf(4ml)中的溶液。使混合物温热至rt，然后搅拌16h。然后将混合物用etoac稀释并用水和盐水洗涤。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(二氧化硅；etoac在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈浅黄色油状物的中间体4d(2.8g，59％)。[0318][0319]遵循与用于合成中间体1d所述的程序类似的程序制备中间体4c，使用中间体4b作为起始材料。[0320][0321]在0℃将氢化钠(cas：7646-69-7；在矿物油中的60％分散液，0.32g，8.01mmol)添加至(3r)-1-(boc)-3-羟基吡咯烷(cas：109431-87-0；1.5g，8.01mmol)在dmf(6.4ml)中的搅拌溶液中，并将混合物搅拌30min。然后将混合物温热至rt，并滴加4-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶(cas：1083169-00-9；1.48ml，8.01mmol)的溶液。将混合物在60℃搅拌16h。冷却至rt后，添加水，并且用etoac萃取混合物。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(二氧化硅；etoac在庚烷中，梯度从0/100至30/70)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈无色油状物的中间体4d(1.67g，67％)。[0322][0323]遵循与用于合成中间体4a所述的程序类似的程序制备中间体4c，使用4-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶(cas：1083169-00-9)作为起始材料。[0324]中间体i-5a、5b、5c和5d的制备[0325][0326]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体5a，使用中间体4a作为起始材料。[0327][0328]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体5b，使用中间体4c作为起始材料。[0329][0330]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体5c，使用中间体4d作为起始材料。[0331][0332]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体5d，使用中间体4e作为起始材料。[0333]中间体i-6a、6b和6c的制备[0334][0335]在40℃以流速1ml/min将(3s)-1-boc-3-碘甲基哌啶(cas：384829-99-6；35g，107.6mmol)在0.5mlicl的thf溶液(192.5ml，96.3mmol)中的溶液泵送通过含有活化zn(9.35g，143.0mmol)的柱。在n2气氛下收集得到的溶液以产生呈透明浅棕色溶液的中间体6a，将其不经进一步操作而使用。[0336]对于上述反应，zn如下活化：将tmscl(2.5ml)和1-溴-2-氯乙烷(0.3ml)在thf(10ml)中的溶液以1ml/min的流速通过含有zn的柱。[0337][0338]在40℃以流速1ml/min将(3r)-1-boc-3-碘甲基吡咯烷(cas：1187932-69-9；10.1g，32.4mmol)在thf(65ml)中的溶液泵送通过含有活化zn(30g，458.8mmol)的柱。在n2气氛下收集得到的溶液以产出呈透明溶液的中间体6b，将其不经进一步操作而使用。[0339]对于上述反应，zn如下活化：将tmscl(2ml)和1-溴-2-氯乙烷(1.2ml)在thf(20ml)中的溶液以1ml/min的流速通过含有zn的柱。[0340][0341]遵循与用于合成中间体6b所述的程序类似的程序制备中间体6c，使用(3s)-1-boc-3-碘甲基吡咯烷(cas：224168-68-7)作为起始材料。[0342]中间体i-7a、7b、7c、7d、7e、7f、7g、7h、7i、7j和7k的制备[0343][0344]将n,n,n’,n’-四甲基乙二胺(cas：110-18-9；11.97ml，79.8mmol)、4-溴-2,6-二甲基吡啶(cas：5093-70-9；13.50g，72.55mmol)和pd(pph3)2cl2(1.02g，1.45mmol)添加至中间体6a在thf中的在配备有顶置式搅拌器和温度探头的400ml反应器中的0.38m搅拌溶液(210ml，79.8mmol)中。将混合物用n2脱气，然后在65℃(内部温度)下搅拌16h。冷却至20℃后，添加32％nh3溶液(50ml)和饱和nh4cl溶液(50ml)的混合物。将混合物用水(100ml)和etoac(200ml)稀释，并通过垫过滤。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(mgso4)，过滤并将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；etoac在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈橙色油状物的中间体7a(18.5g，84％产率)。[0345][0346]在n2下在rt将中间体6a在thf中的0.36m溶液(42ml，15.12mmol)添加至4-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶(cas：1083169-00-9；2.98g，14.75mmol)和pd(t-bu3p)2(0.22g，0.31mmol)的搅拌混合物中。将混合物在回流下搅拌16h。冷却至rt后，添加32％nh3溶液(50ml)和饱和nh4cl溶液(50ml)的混合物(1:1)。将混合物用etoac(200ml)萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；etoac在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈无色油状物的中间体7b(4.34g，91％)。[0347][0348]遵循与用于合成中间体7b所述的程序类似的程序制备中间体7c，使用2-氯-4-碘-6-三氟甲基吡啶(cas：205444-22-0)作为起始材料并且在rt搅拌反应混合物1h。[0349][0350]遵循与用于合成中间体7b所述的程序类似的程序制备中间体7d，使用2-氯-4-碘-6-三氟甲氧基吡啶(cas：1221171-96-5；根据eur.j.org.chem.[欧洲有机化学杂志]2010,6043-6066制备)作为起始材料并且在65℃搅拌反应混合物3h。[0351][0352]遵循与用于合成中间体1d所述的程序类似的程序制备中间体7e，使用中间体7c作为起始材料。[0353][0354]遵循与用于合成中间体1d所述的程序类似的程序制备中间体7f，使用中间体7d作为起始材料。[0355][0356]在rt在n2下，将中间体6b(34ml，10.88mmol)、n,n,n’,n’-四甲基乙二胺(cas：110-18-9；1.63ml，10.88mmol)和pd(pph3)2cl2(0.42g，0.59mmol)的0.32m溶液添加至搅拌的4-溴-2,6-二甲基吡啶(cas：5093-70-9；1.84g，9.89mmol)中。将混合物在60℃搅拌1h。冷却至rt后，添加32％nh3溶液和nh4cl饱和溶液的1:1混合物。将混合物用etoac萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(mgso4)，过滤并将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅，etoac在庚烷中，梯度从30/70至80/20)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈油状物的中间体7g(2.5g，87％产率)。[0357][0358]在rt在n2下，将n,n,n’,n’-四甲基乙二胺(cas：110-18-9；4.40ml，29.3mmol)、4-溴-2,6-二甲基嘧啶(cas：5093-70-9；4.20g，26.4mmol)和pd(pph3)2cl2(0.45g，0.64mmol)添加至中间体6c在thf中的0.35m搅拌溶液(83ml，29.4mmol)中。将混合物在回流下搅拌16h。冷却至rt后，添加32％nh3溶液和nh4cl饱和溶液的1:1混合物。将混合物用etoac萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅，etoac在庚烷中，梯度从0/100至100/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈橙色油状物的中间体7h(9.07g，92％产率)。[0359][0360]遵循与用于合成中间体7h所述的程序类似的程序制备中间体7i，使用中间体6c和4-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶(cas：1083169-00-9)作为起始材料。[0361][0362]在rt在n2下将中间体6b的0.42m溶液(34ml，14.3mmol)添加至2-氯-4-碘-6-三氟甲基吡啶(cas：205444-22-0；4.0g，13.01mmol)和pd(t-bu3p)2(0.33g，0.65mmol)的搅拌混合物中。将混合物在rt搅拌1h，然后添加32％nh3溶液和nh4cl饱和溶液的1:1混合物。将混合物用etoac萃取。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并且将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅，etoac在庚烷中，梯度从0/100至20/80)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈淡黄色油状物的中间体7j(2.50g，39％)。[0363][0364]遵循与用于合成中间体1d所述的程序类似的程序制备中间体7k，使用中间体7j作为起始材料。[0365]中间体i-8a、8b、8c、8d、8e、8f、8g和8h的制备[0366][0367]在n2下在0℃，将在1,4-二噁烷中的4mhcl溶液(cas：7647-01-0；148.4ml，593.71mmol)添加至中间体7a在2-甲基四氢呋喃(180.7ml)中的搅拌溶液中。将混合物在0℃搅拌30min，然后温热至20℃。在20℃1h后，将混合物温热至50℃并再搅拌2h。将形成的固体滤出，用2-甲基四氢呋喃洗涤，并在真空下于50℃干燥16h，以产生呈浅黄色固体的中间体8a·2hcl(15.8，96％)。[0368][0369]在0℃将hcl(在1,4-二噁烷中4m，5.5ml，22.0mmol)添加至中间体7a(670mg，2.20mmol)，并将反应混合物温热至室温。将反应混合物搅拌3天并在真空中浓缩至干。将残余物通过离子交换色谱法(isolutescx-2，meoh，然后是nh3在meoh中的7n溶液)纯化，以得到中间体8a(425mg，99％)。[0370][0371]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体8a，使用中间体7b作为起始材料。[0372][0373]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体8a，使用中间体7d作为起始材料。[0374][0375]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体8d，使用中间体7f作为起始材料。[0376][0377]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体8e，使用中间体7g作为起始材料。[0378][0379]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体8f，使用中间体7h作为起始材料。[0380][0381]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体8g，使用中间体7i作为起始材料。[0382][0383]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体8h，使用中间体7k作为起始材料。[0384]中间体i-9a、9b、9c、9d、9e和9f的制备[0385][0386]在0℃将氢化钠(cas：7646-69-7；在矿物油中的60％分散液，0.46g，11.61mmol)添加至(3s)-1-boc-3-羟甲基哌啶(cas：140695-84-7；2.5g，11.61mmol)在dmf(10.3ml)中的搅拌溶液中。将混合物在0℃搅拌30min，然后滴加4-氯-2,6-二甲基吡啶(cas：3512-75-2；1.48ml，11.61mmol)在dmf(1.3ml)中的溶液。将混合物在60℃搅拌16h，然后蒸发溶剂。将残余物用水稀释并用etoac萃取。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至30/70)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈无色油状物的中间体9a(2.37g，64％)。[0387][0388]遵循与用于合成中间体9a所述的程序类似的程序制备中间体9b，使用(3r)-1-boc-3-羟甲基哌啶(cas：116574-71-1)作为起始材料。[0389][0390]遵循与用于合成中间体9a所述的程序类似的程序制备中间体9c，使用4-氯-2,6-嘧啶(cas：4472-45-1)作为起始材料。[0391][0392]在0℃在n2下，将氢化钠(cas：7646-69-7；在矿物油中的60％分散液，0.24g，9.96mmol)添加至(3r)-1-boc-3-羟甲基吡咯烷(cas：138108-72-2；1.0g，4.97mmol)在dmf(10ml)中的搅拌溶液中。将混合物在0℃搅拌30min，然后滴加4-氯-2,6-二甲基吡啶(cas：3512-75-2；0.70ml，5.46mmol)。将混合物在0℃搅拌1h，然后在80℃搅拌20h。冷却至rt后，添加nh4cl饱和溶液，并将混合物用etoac萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从50/50至100/0)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈油状物的中间体9d(1.4g，92％)。[0393][0394]遵循与用于合成中间体9d所述的程序类似的程序制备中间体9e，使用(3s)-1-boc-3-羟甲基吡咯烷(cas：199174-24-8)作为起始材料。[0395][0396]遵循与用于合成中间体9a所述的程序类似的程序制备中间体9f，使用4-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶(cas：1083169-00-9)作为起始材料。[0397]中间体i-10a、10b、10c、10d、10e和10f的制备[0398][0399]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体10a，使用中间体9a作为起始材料。[0400][0401]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体10b，使用中间体9b作为起始材料。[0402][0403]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体10c，使用中间体9c作为起始材料。[0404][0405]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体10d，使用中间体9d作为起始材料。[0406][0407]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体10e，使用中间体9e作为起始材料。[0408][0409]遵循与用于合成中间体3a所述的程序类似的程序制备中间体10f，使用中间体9f作为起始材料。[0410]中间体31的制备[0411][0412]将中间体6c的溶液(在thf中的0.1m溶液，66ml，6.6mmol)添加至4-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶(cas：1083169-00-9；1.21g，6.00mmol)和pd(t-bu3p)2(140mg，0.27mmol)的溶液中。将反应混合物在室温搅拌16h。将混合物用nh4cl(饱和水溶液)处理，并用etoac萃取。将有机层干燥(na2so4)，过滤并将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从100:0至80:20)纯化，以得到中间体31(1g，54％)。[0413]中间体32的制备[0414][0415]将15氢形式(cas：39389-20-3；4.11mmol/g)添加至中间体31(1.00g，3.26mmol)在meoh(16.6ml)中的溶液中。将反应混合物振荡18h。除去溶剂。将树脂用meoh洗涤几次，然后将nh3(在meoh中7n)添加至树脂并振荡1h。除去溶剂，并用nh3(在meoh中7n)洗涤树脂几次。在真空中蒸发溶剂，以得到中间体32(600mg，89％)。[0416]中间体33的制备[0417][0418]在密封管中并且在n2气氛下，将pd(pph3)4(1.04g，0.90mmol)添加至4-氯-2,6-二甲基嘧啶(cas：4472-45-1；2.14g，14.9mmol)和5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2h-吡啶-1-甲酸叔丁酯(cas：885693-20-9；5.09g，16.5mmol)在1,4-二噁烷(10ml)中的搅拌溶液中。在微波辐射下，将反应混合物在130℃下搅拌30min。将混合物用水处理并用etoac萃取。将合并的有机萃取物干燥(na2so4)，过滤并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从100/0至0/100)纯化，以得到中间体33(4.12g，95％)。[0419]中间体34的制备[0420][0421]在n2气氛下将pd/c(10％纯度，1.51g，1.42mmol)添加至中间体33(4.1g，14.2mmol)在etoh(82ml)中的搅拌溶液中。在室温将反应混合物氢化(大气压)16h。将混合物通过垫过滤并且用meoh洗涤。将滤液在真空中浓缩，以得到中间体34(3.98g，96％)。[0422]中间体35的制备[0423][0424]将中间体34(3.96g，13.6mmol)在meoh(105ml)中的溶液添加至包含15氢形式(cas：39389-20-3；14.5g，67.9mmol)的密闭反应器中。将反应混合物在室温在固相反应器中振荡16h。将树脂用meoh(将此级分丢弃)洗涤。添加nh3(在meoh中7n)(39ml)，并将混合物在固相反应器中振荡2h。将树脂滤出，并用nh3(在meoh中7n)洗涤两次(3x39ml；振荡30min)。将滤液合并并且在真空中浓缩，以得到中间体35(2.3g，88％)。[0425]中间体36的制备[0426][0427]遵循与用于合成中间体33所述的程序类似的程序制备中间体36，使用4-氯-2,6-二甲基吡啶-3-胺(cas：37652-11-2)和5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2h-吡啶-1-甲酸叔丁酯(cas：885693-20-9)作为起始材料。[0428]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在dcm中，梯度从0/100至50/50)纯化，以得到呈油状物的中间体36(2.38g，95％)。[0429]中间体37的制备[0430][0431]遵循与用于合成中间体34所述的程序类似的程序制备中间体37，使用中间体36作为起始材料。[0432]中间体38的制备[0433][0434]将四氟硼酸亚硝基酯(2.29g，19.6mmol)分批添加至中间体37(2.00g，6.55mmol)在无水dcm(20ml)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌18h。将反应过滤。丢弃滤液，同时将沉淀物溶解在meoh中，并通过isolutescx2柱。将柱用meoh洗涤，并且将产物用在meoh中的nh3洗脱。收集所希望的级分，并且在真空中浓缩溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2，meoh在dcm中，梯度从0/100至20/80)纯化。通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/mecn，梯度从95/5至70/30)进行第二纯化，以得到中间体38(310mg，23％)。[0435]中间体39的制备[0436][0437]在密封管中并且在n2气氛下将中间体6c(在thf中0.38m，11ml，4.18mmol)，然后将tmeda(0.63ml)和pd(pph3)2cl2(68mg，96.9μmol)添加至2-溴-3,5-二氟吡啶[660425-16-1](0.76g，3.92mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16h。将反应用nh4cl(饱和)和nh3(26％水溶液)的1:1溶液淬灭，并用etoac萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从0/100至30/70)纯化，以得到中间体39(715mg，61％)。[0438]中间体40的制备[0439][0440]在固相反应中，将中间体38(1.17g，3.91mmol)在meoh(19.6ml)中的溶液滴加至15氢形式(cas：39389-20-3；3.93g，18.5mmol)。一旦停止释放co2，将反应混合物在室温振荡2天。将树脂用meoh(丢弃级分)和nh3(在meoh中7n)洗涤。将滤液在真空中浓缩，以得到中间体40(0.698g，90％)。[0441]中间体41的制备[0442][0443]遵循类似于针对中间体39所述的程序，从4-氯-2,6-二甲基嘧啶(cas：4472-45-1)开始制备中间体41。[0444]中间体42的制备[0445][0446]遵循类似于针对中间体40所述的程序，从中间体41开始制备中间体42。[0447]中间体43的制备[0448][0449]将(r)-叔-丁基3-羟基吡咯烷-1-甲酸酯(cas：109431-87-0；1.50g，8.01mmol)在dmf(3.2ml)中在室温搅拌。添加nah(在矿物油中的60％分散液，320mg，8.01mmol)。滴加4-氯-2,6-二甲基吡啶(cas：3512-75-2；1.02ml，8.01mmol)在dmf(3.22ml)中的溶液。将反应混合物在60℃搅拌过夜。在真空中蒸发混合物。将残余物用水稀释并用etoac萃取。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从0/100至90/10)纯化，以得到中间体43(1.20g，51％)。[0450]中间体44的制备[0451][0452]将中间体43(1.20g，4.10mmol)在meoh(31.6ml)中的溶液添加至包含15氢形式(cas：39389-20-3；4.37g，20.5mmol)的密闭反应器中。将反应混合物在室温在固相反应器中振荡16h。将树脂用meoh(将此级分丢弃)洗涤。添加nh3(在meoh中7n)(31.7ml)，并将混合物在固相反应器中振荡2h。将树脂滤出，并用nh3(在meoh中7n)洗涤(2x31ml；振荡30min)。将滤液合并并且在真空中浓缩，以得到中间体44(710mg，90％)。[0453]中间体45的制备[0454][0455]在室温将nah(在矿物油中的60％分散液，221mg，5.51mmol)添加至(s)-1-boc-3-羟基哌啶(cas：143900-44-1；1.01g，5.01mmol)在dmf(31ml)中的搅拌溶液中。将混合物搅拌15min，并添加2,6-二甲基-吡啶-4-基甲基氯化物(cas：120739-87-9；1.00g，5.01mmol，78％纯度)。将反应混合物在室温搅拌16h。添加nh4cl(饱和水溶液)，并将混合物用etoac萃取。将有机层用盐水洗涤(两次)，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化，以得到中间体45(1.19g，74％)。[0456]中间体46的制备[0457][0458]遵循与用于合成中间体44所述的程序类似的程序制备中间体46，使用中间体46作为起始材料。[0459]中间体47的制备[0460][0461]遵循与针对中间体45所述的程序类似的程序制备中间体47，使用(r)-1-boc-3-羟基哌啶(cas：143900-43-0)和2,6-二甲基-吡啶-4-基甲基氯化物(cas：120739-87-9)作为起始材料。[0462]中间体48的制备[0463][0464]遵循与用于合成中间体44所述的程序类似的程序制备中间体48，使用中间体47作为起始材料。[0465]中间体49的制备[0466][0467]遵循与针对中间体45所述的程序类似的程序制备中间体49，使用(r)-1-boc-3-羟基吡咯烷(cas：109431-87-0)和2,6-二甲基-吡啶-4-基甲基氯化物(cas：120739-87-9)作为起始材料。[0468]中间体50的制备[0469][0470]遵循与用于合成中间体44所述的程序类似的程序制备中间体50，使用中间体49作为起始材料。[0471]中间体51的制备[0472][0473]在0℃在n2气氛下，将nah(在矿物油中的60％分散液，238mg，5.96mmol)添加至(r)-3-羟甲基-吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(cas：138108-72-2；1.00g，4.97mmol)在dmf(10ml)的溶液中。将混合物在0℃搅拌15min，并滴加4-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶(cas：1083169-00-9；1.15g，5.47mmol)。将反应混合物在0℃搅拌1h，然后在70℃搅拌20h。将反应用nh4cl(饱和水溶液)淬灭，并用庚烷萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化，以得到中间体51(970mg，61％)。[0474]中间体52的制备[0475][0476]遵循与用于合成中间体44所述的程序类似的程序制备中间体52，使用中间体51作为起始材料。[0477]中间体53的制备[0478][0479]在n2气氛下将pd2dba3(187mg，0.20mmol)、davephos(166mg，0.41mmol)和naot-bu(1.57g，16.3mmol)添加至在密封管中的4-溴-2,6-二甲基吡啶(cas：5093-70-9；1.52g，8.17mmol)在无水1,4-二噁烷(40ml)中的溶液中。在室温添加叔丁基3-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸酯(cas：162167-97-7；2.10g，9.80mmol)，并将反应混合物在100℃搅拌16h。将混合物用etoac和nh4cl(饱和水溶液，0.5ml)稀释。将混合物经垫过滤，并且将滤液在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，meoh在dcm中，梯度从0/100至50/50)纯化，以得到中间体53(2.26g，82％)。[0480]中间体54的制备[0481][0482]在0℃，将hcl(在1,4-二噁烷中4m，25.6ml，103mmol)滴加到中间体53(2.23g，6.84mmol)在meoh(15.8ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌16h并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过反相([25mmnh4hco3]/[mecn/meoh(1/1)，梯度从95/5至63/37)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩。添加mecn(3x10ml)，并将溶剂在真空中浓缩，以得到中间体53(1.3g，87％)。[0483]中间体55的制备[0484][0485]在密封管中并在n2气氛下在室温将naot-bu(119mg，1.24mmol)添加至pd2dba3(22.7mg，24.7μmol)和tbuxphos(31.5mg，74.2μmol)在1,4-二噁烷(15ml)中的搅拌悬浮液中。将反应混合物在95℃搅拌5min，然后在95℃在n2气氛下添加(s)-(+)-3-氨基-1-boc-哌啶[625471-18-3](129mg，0.64mmol)和4-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶[1083169-00-9](100mg，0.49mmol)在1,4-二噁烷(5ml)中的混合物。将反应混合物在100℃下搅拌30min。将混合物用nahco3(饱和水溶液)稀释，并用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从5/95至100/0)纯化，以得到中间体55(130mg，82％)。[0486]中间体56的制备[0487][0488]在0℃，将hcl(在1,4-二噁烷中4m，0.50ml，2.00mmol)滴加到中间体55(130mg，0.40mmol)中。将反应混合物在室温搅拌16h并且将溶剂在真空中蒸发。将残余物溶解在meoh(1ml)中，并添加a26氢氧化物形式(cas：39339-85-0；505mg，1.62mmol)。将混合物在室温搅拌直至ph是7。将树脂通过过滤除去，并将溶剂在真空中蒸发，以得到中间体56(85mg，95％)。[0489]中间体57的制备[0490][0491]将(s)-(+)-3-氨基-1-boc-哌啶(cas：625471-18-3；117mg，0.58mmol)和2-甲氧基-6-甲基吡啶-4-甲醛(cas：951795-43-0；100mg，0.58mmol)溶解在acn(3ml)中。将反应混合物在室温搅拌30min，并且添加三乙酰氧基硼氢化钠(371mg，1.75mmol)。将所得的混合物在室温搅拌16h。将混合物用nahco3(饱和水溶液)和dcm稀释。将水层用dcm萃取(两次)。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化，以得到中间体57(161mg，77％)。[0492]中间体58的制备[0493][0494]在室温在n2气氛下，将tfa(0.5ml，3.23mmol)滴加到中间体57(1.00g，2.81mmol)和dipea(0.64ml，3.65mmol)在dcm(13ml)中的搅拌混合物中。将反应混合物搅拌16h。将该反应用hcl(1m)淬灭，并且用dcm萃取。将有机层用nahco3(饱和水溶液)以及盐水洗涤，干燥(mgso4)，过滤并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从0/100至30/70)纯化，以得到中间体58(1.1g，87％)。[0495]中间体59的制备[0496][0497]在n2气氛下，将中间体58(900mg，1.99mmol)和甲基硼酸[13061-96-6](304mg，4.98mmol)添加至na2co3(633mg，5.98mmol)在1,4-二噁烷(4.98ml)和h2o(1.25ml)中的搅拌溶液中。添加pdcl2(dppf)·dcm(81.3mg，99.6μmol)并且将反应混合物在105℃搅拌16h。在n2气氛下，添加另外量的甲基硼酸(1.25当量)、pdcl2(dppf)·dcm(0.025当量)和na2co3(1.5当量)。将反应混合物在105℃搅拌16h。将混合物用nahco3稀释并且用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从0/100至20/80)纯化，以得到中间体59(690mg，80％)。[0498]中间体60的制备[0499][0500]在0℃，将hcl(在1,4-二噁烷中4m，2.00ml，8.00mmol)滴加到中间体59(690mg，1.60mmol)中。将反应混合物在室温搅拌16h并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，meoh:在dcm中的nh3，梯度从0/100到10/90)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩，以得到中间体60(317mg，59％)。[0501]中间体61的制备[0502][0503]将(s)-(+)-3-氨基-1-boc-哌啶(cas：625471-18-3；449mg，2.24mmol)和2,6-二甲基-4-吡啶甲醛(cas：18206-06-9；303mg，2.24mmol)溶解在dcm(10ml)中。将反应混合物在室温搅拌30min，并添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.43g，6.73mmol)。将所得的混合物在室温搅拌16h。添加nahco3(饱和水溶液)和dcm。将水层用dcm萃取(两次)。将合并的有机萃取物干燥(mgso4)，过滤并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化，以得到中间体61(577mg，79％)。[0504]中间体62的制备[0505][0506]在0℃，将hcl(在1,4-二噁烷中4m，2.26ml，9.03mmol)滴加到中间体61(577mg，1.81mmol)中。将反应混合物在室温搅拌16h并且在真空中去除溶剂。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，meoh:在dcm中的nh3，梯度从0/100到10/90)纯化，以得到中间体62(320mg，80％)。[0507]中间体i-11a、11b和11c的制备[0508][0509]在0℃将氢化钠(cas：7646-69-7；在矿物油中的60％分散液，3.80g，94.97mmol)分批添加至6-溴-2-甲基-1h-咪唑[4,5-b]吡啶(cas：42869-47-6；10.0g，47.16mmol)在dmf(100ml)中的搅拌溶液中。将混合物在0℃搅拌30min，然后滴加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物(cas：76513-69-4；19.20ml，108.47mmol)。将混合物在rt搅拌16h，然后将其用饱和nh4cl溶液稀释并用etoac萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈淡棕色固体的中间体11a(8.07g，50％)。[0510][0511]遵循与用于合成中间体1a所述的程序类似的程序制备中间体11b，使用中间体5-氯-2-甲基-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶(cas：40851-92-1)作为起始材料。将中间体11b通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100至5/95)纯化。[0512][0513]将k2co3(3.05g，433.1mmol)和碘甲烷(cas：74-88-4；0.5ml，8.03mmol)添加至6-溴-2甲基-1h-咪唑并[4,5-b]吡啶(cas：42869-47-6，1.35g，6.37mmol)在丙酮(32ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h，然后添加水和etoac。将有机层分离、干燥(na2so4)、过滤并在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈棕色固体的中间体11c(0.835g，58％)。[0514]中间体i-12a和12b的制备[0515][0516]在rt在n2下，将pd(pph3)4(cas：14221-01-3；1.36g，1.18mmol)添加至中间体11a(8.07g，23.57mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(cas：75927-49-0；6.00ml，35.36mmol)在k2co3饱和溶液(36.3ml)和1,4-二噁烷(36.3ml)的混合物中的搅拌混合物中。将混合物在95℃搅拌16h。然后添加k2co3的饱和溶液，并将混合物用etoac萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100至4/96)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生静置时固化的呈橙色油状物的中间体12a(2.07g，28％)。[0517][0518]在密封管中在n2下，将三丁基(乙烯基)锡(cas：123-91-1；0.82ml，2.83mmol)、2,4-二-叔-丁基-4-甲基苯酚(cas：128-37-0；0.24g，1.10mmol)和pd(pph3)4(cas：14221-01-3；0.14g，0.12mmol)添加至中间体11b(0.36g，1.20mmol)在1,4-二噁烷(3.8ml)中的搅拌混合物中。将混合物在100℃搅拌16h。冷却至rt后，将混合物滤出并将固体用etoac洗涤。将滤液在真空中蒸发，并将粗产物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100至5/95)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生中间体12b(0.25g，72％)。[0519]中间体i-13a的制备[0520][0521]在0℃在n2下，将lialh4(cas：16853-85-3；在thf中1m，2.8ml，2.77mmol)滴加至5-乙氧基羰基-2-甲基苯并咪唑(cas：717-37-3；根据eur.j.med.chem.[欧洲药物化学杂志]2009,1500-1508制备，0.47g，2.31mmol)在thf(14ml)中的搅拌溶液中。将混合物在0℃搅拌5min，并且然后在rt搅拌2h。然后将混合物冷却至0℃，并添加更多lialh4(1.4ml，1.39mmol)。将混合物在0℃搅拌5min，然后在rt搅拌另外2h。然后添加罗谢尔盐在冰中的饱和溶液，并将混合物用etoac萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(mgso4)，过滤并在真空中除去溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈白色固体的中间体13a(0.80g，21％)。[0522]中间体i-14a、14b、14c和14d的制备[0523][0524]将苏丹iii(cas：85-86-9；痕量)添加至中间体12a(4.3g，7.86mmol)在acn(195.5ml)和水(9.8ml)的混合物中的搅拌溶液中。将溶液冷却至0℃，并且将o3/o2的混合物通过烧瓶，直到红色消散。将反应用n2吹扫10min。然后，将反应用硫代硫酸钠饱和溶液稀释，并用etoac萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中除去溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至60/40)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈白色固体的中间体14a(2.39g，55％)。[0525][0526]在密封管中在n2下将高碘酸钠(cas：7790-28-5；1.12g，5.25mmol)、四氧化锇(在tbuoh中2.5％cas：20816-12-0；0.18ml，0.013mmol)和2,6-二甲基吡啶(cas：108-48-5；0.27ml，2.30mmol)添加至中间体12b(4.3g，7.86mmol)在1,4-二噁烷(8.0ml)和水(2.66ml)的混合物中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌17h。然后，将反应用水稀释并用etoac萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(mgso4)，过滤并在真空中除去溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈黄色油状物的中间体14b(0.13g，52％)。[0527][0528]在密封管中在n2下将mno2(0.50g，4.90mmol)添加至中间体13a(0.080g，0.49mmol)在1,4-二噁烷(3ml)中的搅拌悬浮液中。将混合物在80℃搅拌16h。冷却至rt后，将混合物通过垫过滤，并将垫用dcm洗涤。将滤液在真空中浓缩，以产生呈白色固体的中间体14c(0.047g，59％)。[0529][0530]在密封管中在n2下将三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(cas：97674-02-7；0.74ml，2.19mmol)和pd(pph3)2cl2(0.14g，0.19mmol)添加至中间体11c(0.46g，2.03mmol)在甲苯(10ml)中的搅拌混合物中。将混合物在80℃搅拌16h。冷却至rt后，添加1mhcl溶液(4ml)，并将混合物在80℃再搅拌5h。冷却至rt后，将混合物倒入饱和nahco3溶液和冰的搅拌混合物中，并用dcm萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(mgso4)，过滤并将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到5/95)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈淡橙色固体的中间体14d(0.24g，63％)。[0531]中间体i-15a、15b和15c的制备[0532][0533]将6-氯-1h-吡唑并[4,3-b]吡啶(cas：63725-51-9；0.35g，2.25mmol)添加至四氟硼酸三甲基氧鎓(cas：420-37-1；1.35g，9.13mmol)和dipea(1.93ml，11.23mmol)在dcm(13.8ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌72h，并用nahco3饱和溶液淬灭，并用dcm萃取。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并且将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从20/80至100/0)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈白色固体的中间体15a(0.27g，65％)。[0534][0535]遵循与用于合成中间体15a所述的程序类似的程序制备中间体15b，使用6-氯-1h-吡唑并[4,3-c]吡啶(cas：1206979-33-0)作为起始材料。[0536][0537]在rt在n2下将hatu(cas：148893-10-1；2.70g，7.10mmol)、n,o-二甲基羟胺盐酸盐(cas：6638-79-5，067g，6.87mmol)和et3n(2.50ml，17.99mmol)添加至2-甲基吲唑-6-甲酸(cas：103141-74-8；1g，5.68mmol)在dmf(28ml)中的搅拌悬浮液中。将混合物在rt搅拌16h，然后添加水。将混合物用etoac萃取，并且将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(na2so4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100至10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生静置时固化的呈橙色油状物的中间体15c(0.405g，33％)。[0538]中间体i-16a、16b、16c、16d和16e的制备[0539][0540]在密封管中在n2下将pd(pph3)4(0.183g，0.16mmol)添加至三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(cas：97674-02-7；0.80ml，2.37mmol)和中间体15a(0.27g，1.58mmol)在甲苯(8.2ml)中的搅拌悬浮液中。将混合物在100℃搅拌16h。冷却至rt后，添加2mhcl溶液(2.37ml)，并将混合物在80℃搅拌1h。冷却至rt后，将混合物用饱和nahco3溶液中和，并用dcm和iproh的4:1混合物萃取。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并且将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到5/95)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈棕色油状物的中间体16a(0.097g，28％)。[0541][0542]遵循与用于合成中间体16a所述的程序类似的程序制备中间体16b，使用中间体15b作为起始材料。[0543][0544]遵循与用于合成中间体16a所述的程序类似的程序制备中间体16c，使用6-溴-2-甲基-2h-吡唑并[4,3-b]吡啶(cas：1897500-19-4)作为起始材料。[0545][0546]遵循与用于合成中间体16a所述的程序类似的程序制备中间体16d，使用5-溴-2-甲基-2h-吲唑(cas：465529-56-0)作为起始材料。[0547][0548]在-78℃在n2下将氢化二异丁基铝(在thf中的1m溶液，2.5ml，2.5mmol)滴加至中间体15c(0.4g，1.82mmol)在2-甲基四氢呋喃(9.5ml)中的搅拌溶液中。将混合物在-78℃搅拌3h，然后用etoac稀释。然后添加硫酸钠十水合物，并将混合物搅拌30min。将混合物通过垫过滤，并将垫用etoac洗涤。将滤液干燥(na2so4)，并将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的中间体16e(0.181g，62％)。[0549]中间体i-17a、17b和17c的制备[0550][0551]将原乙酸三乙酯(cas：78-39-7；4.82ml，26.48mmol)添加至2-氨基-6-溴吡啶-3-醇(cas：934758-27-7；4.17g，22.06mmol)和p-甲苯磺酸一水合物(cas：104-15-4；0.21g，1.10mmol)在甲苯(24.2ml)中的搅拌混合物中。将混合物在130℃搅拌1h，然后将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的中间体17a(0.27g，65％)。[0552][0553]遵循与用于合成中间体17a所述的程序类似的程序制备中间体17b，使用原异丁酸三乙酯(cas：52698-46-1)作为起始材料。[0554][0555]遵循与用于合成中间体17a所述的程序类似的程序制备中间体17c，使用2-氨基-4-溴-5氟苯(cas：1016234-89-1)作为起始材料。[0556]中间体i-18a、18b、18c、18d和18e的制备[0557][0558]在rt在n2下，将pd(pph3)4(0.86g，0.75mmol)添加至中间体17a(3.18g，14.93mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(cas：75927-49-0；3.80ml，22.39mmol)在k2co3饱和溶液(17.86ml)和1,4-二噁烷(17.86ml)的混合物中的搅拌混合物中。将混合物在95℃搅拌16h。然后添加水并且将混合物用etoac萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在dcm中，从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分，并在真空中浓缩，并将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至50/50)再次纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈浅黄色固体的中间体18a(1.39g，58％)。[0559][0560]遵循与用于合成中间体18a所述的程序类似的程序制备中间体18b，使用中间体17b作为起始材料。[0561][0562]遵循与用于合成中间体18a所述的程序类似的程序制备中间体18c，使用中间体17c作为起始材料。[0563][0564]在密封管中在n2下将三丁基(乙烯基)锡(cas：123-91-1；1.0ml，3.42mmol)、2,4-二-叔-丁基-4-甲基苯酚(cas：128-37-0；0.054g，0.25mmol)和pd(pph3)4(0.138g，0.12mmol)添加至6-溴-2-甲基噁唑并[5,4-b]吡啶(0.54g，2.54mmol)在1,4-二噁烷(13ml)中的搅拌混合物中。将混合物在100℃搅拌18h。冷却至rt后，将混合物通过垫过滤，并将垫用etoac洗涤。将滤液在真空中蒸发，并将粗产物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生中间体18d(0.405g，99％)。[0565][0566]遵循与用于合成中间体18d所述的程序类似的程序制备中间体18e，使用6-溴-2-甲基噁唑并[4,5-b]吡啶(cas：494747-09-0)作为起始材料。[0567]中间体i-19a、19b、19c、19d和19e的制备[0568][0569]将苏丹iii(cas：85-86-9；痕量)添加至中间体18a(1.39g，8.68mmol)在acn(114.2ml)和水(5.7ml)的混合物中的搅拌溶液中。将溶液冷却至0℃，并且将o3/o2的混合物通过烧瓶，直到红色消散。将反应用n2吹扫10min。然后，将反应用etoac和thf的混合物稀释，并用na2co3的饱和溶液萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中除去溶剂，以产生呈米色固体的中间体19a(1.0g，71％)。[0570][0571]遵循与用于合成中间体19a所述的程序类似的程序制备中间体19b，使用中间体18b作为起始材料。[0572][0573]遵循与用于合成中间体19a所述的程序类似的程序制备中间体19c，使用中间体18c作为起始材料。将中间体19c通过快速柱色谱法(sio2；etoac在dcm中，梯度从0/100至20/80)纯化。[0574][0575]在n2下，将高碘酸钠(cas：7790-28-5；1.19g，5.58mmol)和四氧化锇(cas：20816-12-0；在tbuoh中2.5％，0.18ml，0.013mmol)添加至中间体18d(0.40g，2.48mmol)在1,4-二噁烷(17.5ml)和水(7.5ml)的混合物中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌2h，然后添加饱和na2s2o3溶液。将混合物用etoac萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中除去溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈白色固体的中间体19d(0.30g，75％)。[0576][0577]遵循与用于合成中间体19b所述的程序类似的程序制备中间体19e，使用中间体1e作为起始材料。[0578]中间体i-20a的制备[0579][0580]在密封管中在n2下将三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(cas：97674-02-7；1.8ml，5.33mmol)和pdcl2(pph3)2(0.34g，0.49mmol)添加至6-溴呋喃并[3,2-b]吡啶(cas：935330-61-7，0.96g，4.87mmol)在甲苯(25ml)中的搅拌混合物中。将混合物在80℃搅拌16h。冷却至rt后，添加1mhcl溶液(9.5ml)，并将混合物在80℃再搅拌5h。冷却至rt后，将混合物倒入饱和nahco3溶液和冰的搅拌混合物中，并用dcm萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(mgso4)，过滤并将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在dcm中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈淡橙色固体的中间体20a(0.24g，63％)。[0581]中间体i-21a和21b的制备[0582][0583]在n2下将乙酸酐(cas：108-24-7；13.2g，129.8mmol)添加至甲基6-氨基-5-溴代吡啶-2-甲酸酯(cas：178876-82-9；30g，129.8mmol)在甲苯(600ml)中的搅拌混合物中。将混合物在100℃搅拌36h，然后将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在石油醚中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈白色固体的中间体21a(14.0g，40％)。[0584][0585]遵循与用于合成中间体20a所述的程序类似的程序制备中间体21b，使用2-氨基-3-溴-5-氟吡啶作为起始材料。[0586]中间体i-22a的制备[0587][0588]在n2下，将五硫化二磷(cas：1314-80-3；13.7g，61.5mmol)添加至中间体21a(14.0g，51.3mmol)在thf(200ml)中的悬浮液中。将混合物在25℃搅拌16h，然后在70℃搅拌48h。然后将溶剂在真空中蒸发，并将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在石油醚中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的中间体22a(7.5g，69％)。[0589]中间体i-23a的制备[0590][0591]将nabh4(6.81ml，180.0mmol)添加至中间体22a(7.55g，36.0mmol)在thf(60ml)中的搅拌悬浮液中。将混合物在25℃搅拌5h，然后添加饱和nh4cl溶液(100ml)。将混合物用dcm萃取，将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈黄色固体的中间体23a(3.1g，51％)。[0592]中间体i-24a的制备[0593][0594]将五硫化二磷(1.70g，7.67mmol)添加至中间体21b(1.38g，5.90mmol)在thf(32.2ml)中的悬浮液中。将混合物在rt搅拌16h，并添加另外量的五硫化二磷(0.39g，1.77mmol)。将混合物在rt再搅拌16h，然后添加cs2co3(3.08g，9.44mmol)。将混合物在70℃搅拌16h，然后添加另外量的cs2co3(3.08g，9.44mmol)。将混合物在70℃再搅拌16h，然后添加水。将混合物用etoac萃取，将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤，并将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至60/40)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈淡橙色固体的中间体24a(0.78g，78％)。[0595]中间体i-25a的制备[0596][0597]将m-氯过苯甲酸(cas：937-14-4；1.13g，6.42mmol)添加至中间体24a(0.72g，4.28mmol)在dcm(24ml)中的混合物中。将混合物在rt搅拌16h，然后添加更多的m-氯过苯甲酸(1.13g，6.42mmol)。将混合物在rt再搅拌3天，然后添加水，并将混合物用dcm萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将残余物吸收于dcm中，并将形成的固体滤出并丢弃。将滤液在真空中蒸发，并将残余物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈白色固体的中间体25a(0.51g，65％)。[0598]中间体i-26a的制备[0599][0600]将三甲基甲硅烷基氰化物(cas：7677-24-9；0.54ml，4.34mmol)添加至中间体25a(0.40g，2.17mmol)在acn(5.9ml)中的混合物中。将混合物在90℃搅拌16h。冷却至rt后，添加水，并将混合物用etoac萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；dcm)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈白色固体的中间体26a(0.22g，51％)。[0601]中间体i-27a的制备[0602][0603]将hatu(cas：148893-10-1；2.36g，6.20mmol)和dipea(2.88ml，16.53mmol)和n,o-二甲基羟胺盐酸盐(cas：6638-79-5；0.613g，6.29mmol)添加至2-甲基-1,3-苯并噻唑-6-甲酸(cas：6941-28-2；1g，5.18mmol)在dmf(25.9ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h，然后添加盐水。将混合物用etoac萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中蒸发溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生静置时固化的呈无色油状物的中间体27a(1.3g，96％)。[0604]中间体i-28a、28b和28c的制备[0605][0606]将mno2(cas：1313-13-9；7.48g，86.0mmol)添加至中间体23a(7.55g，36.0mmol)在1,4-二噁烷(50ml)中的搅拌悬浮液中。将混合物在80℃搅拌16h，然后通过垫过滤。将滤液在真空中蒸发，并将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在石油醚中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的中间体28a(2.0g，65％)。[0607][0608]将甲基溴化镁(在thf/甲苯中1.4m，0.85ml，1.19mmol)添加至中间体26a(0.12g，0.60mmol)在甲苯(5ml)中的混合物中。将混合物在rt搅拌16h，然后添加饱和nh4cl溶液。将混合物用etoac萃取，将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤，并将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100至2/98)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈黄色固体的中间体28b(0.020g，16％)。[0609][0610]在n2下在-30℃，将氢化二异丁基铝(在dcm中1m，2.86ml，2.86mmol)滴加到中间体27a(0.5g，1.90mmol)在dcm(1.2ml)中的搅拌溶液中。将混合物在-30℃搅拌2h，然后添加硫酸钠十水合物，并将混合物搅拌30min。将混合物通过垫过滤，并将垫用dcm洗涤。将该滤液在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈淡黄色固体的中间体28c(0.24g，71％)。[0611]中间体i-29a的制备[0612][0613]在密封管中在n2下将三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(cas：97674-02-7；1.8ml，5.33mmol)和pd(pph3)2cl2(0.34g，0.49mmol)添加至6-溴呋喃并[3,2-b]吡啶(cas：935330-61-7，0.96g，4.87mmol)在甲苯(25ml)中的搅拌混合物中。将混合物在80℃搅拌16h。冷却至rt后，添加1mhcl溶液(9.5ml)，并将混合物在80℃再搅拌5h。冷却至rt后，将混合物倒入饱和nahco3溶液和冰的搅拌混合物中，并用dcm萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，干燥(mgso4)，过滤并将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在dcm中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈淡橙色固体的中间体29a(0.24g，63％)。[0614]中间体63的制备[0615][0616]在0℃在圆底烧瓶中并且在n2气氛下，将甲基溴化镁(在thf/甲苯中1.4m，3.6ml，5.04mmol)滴加到中间体27a(991mg，4.19mmol)在2-methf(20ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在0℃搅拌5min并在室温搅拌2h。将混合物用nh4cl(饱和水溶液)处理，并用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从0/100至100/0)纯化，以得到中间体63(672mg，84％)。[0617]中间体64和11a的制备[0618][0619]在0℃将nah(在矿物油中的60％分散液，1.14g，28.5mmol)分批添加至6-溴-2-甲基-1h-咪唑并[4,5-b]吡啶[42869-47-6](3.00g，14.1mmol)在dmf(30ml)中的溶液中。将混合物在室温搅拌30min，并在0℃添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物(cas：76513-69-4；4.51ml，25.5mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。将反应用nh4cl稀释，并用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中7n)在dcm中，梯度从0/100到2/98)纯化，以得到中间体64(873.3mg，18％)和中间体11a(219mg，4％)以及2种产物的混合物(2.11g)。[0620]中间体65的制备[0621][0622]在密封管中并且在n2气氛下将三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(cas：97674-02-7；0.43ml，1.26mmol)，然后将pdcl2(pph3)2(76.3mg，0.11mmol)添加至中间体64(412mg，1.20mmol)在甲苯(5ml)中的搅拌脱氧溶液中。将反应混合物在80℃搅拌16h。然后添加hcl(1m溶液，2.4ml)，并将混合物在80℃搅拌6h。将混合物添加至nahco3(饱和水溶液)和冰的搅拌溶液中，并用etoac萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100至10/90的梯度)纯化，以得到中间体65(56.7mg，27％)。[0623]中间体66的制备[0624][0625]在0℃将nabh4(270mg，7.14mmol)添加至中间体i-28b(375mg，1.78mmol)在etoh(8.3ml)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌10min。添加水并且将混合物用dcm萃取。将合并的有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，以得到中间体66(335mg)，将其用于下一步骤。[0626]中间体67的制备[0627][0628]在0℃将socl2(0.46ml，6.31mmol)添加至中间体66(335mg，粗品)在dcm(11ml)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌12h。添加水并且将混合物用dcm萃取。将合并的有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发。将残余物与甲苯共蒸发(两次)，并在真空下干燥，以得到中间体67(356mg)，将其原样用于下一步骤。[0629]中间体68的制备[0630][0631]将乙酸酐(0.35ml，3.72mmol)添加至2,5-二溴-4-氟苯胺(cas：172377-05-8；1.00g，3.72mmol)在甲苯(5.6ml)中的溶液中。将反应混合物在100℃搅拌2天。冷却混合物，并且将固体滤出，并用et2o洗涤，以得到中间体68(0.97g，84％)。[0632]中间体69的制备[0633][0634]将p2s5(0.90g，4.06mmol)添加至中间体68(0.97g，3.12mmol)在thf(17ml)中的悬浮液中。将反应混合物在室温搅拌16h，并添加cs2co3(1.63g，4.99mmol)。将混合物在70℃搅拌16h。添加水和naoh(2n，水性)，并将混合物用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从0/100至80/20)纯化，以得到中间体69(620mg，61％)。[0635]中间体70的制备[0636][0637]将中间体69(620mg，1.90mmol)添加至nah(在矿物油中的60％分散液，91.0mg，2.28mmol)在甲苯(8.5ml)中的悬浮液中。将反应混合物在室温搅拌2h，并添加dmf(1.7ml)。将反应混合物在110℃搅拌16h。添加盐水，并且将混合物用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤并将溶剂在真空中蒸发，以得到中间体70(430mg，92％)。[0638]中间体71的制备[0639][0640]在密封管中并且在n2气氛下将三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(cas：97674-02-7；0.68ml，2.00mmol)，然后将pd(pph3)2cl2(117mg，0.17mmol)添加至中间体70(410mg，1.67)在甲苯(8.2ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在80℃搅拌16h，然后添加hcl(1n)。将混合物在70℃搅拌1h。添加nahco3(饱和水溶液)，并将混合物用etoac萃取。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在dcm中，梯度从0/100至30/70)纯化，以得到中间体71(326mg，94％)。[0641]中间体72的制备[0642][0643]在0℃将nabh4(163mg，4.30mmol)添加至中间体71(225mg，1.08mmol)在etoh(5.0ml)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌10min。将混合物用水稀释并用dcm(3xx80ml)萃取。将合并的有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，以得到中间体72(160mg，70％)。[0644]中间体73的制备[0645][0646]在0℃将socl2(0.19ml，2.65mmol)添加至中间体72(140mg，0.66mmol)在dcm(4.45ml)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌12h。将混合物用水(10ml)稀释，并用dcm(3x10ml)萃取。将合并的有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发，以得到中间体73(170mg)，将其原样用于下一步骤。[0647]中间体74的制备[0648][0649]在密封管中并在n2气氛下将三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(cas：97674-02-7；0.89ml，2.62mmol)和pd(pph3)2cl2(153mg，0.22mmol)添加至6-溴-2-甲基噻唑并[5,4-b]吡啶(cas：886372-92-5；500mg，2.18mmol)在甲苯(10.7ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在80℃搅拌16h。添加hcl(1n)，并将混合物在70℃再搅拌2h。添加nahco3(饱和水溶液)，并将混合物用etoac萃取。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在dcm中，梯度从0/100至30/70)纯化，以得到中间体74(230mg，55％)。[0650]中间体75的制备[0651][0652]将溴(0.51ml，9.92mmol)添加至6-氟-2-甲基-3h-咪唑并[4,5-b]吡啶(cas：954218-00-9；1.00g，6.62mmol)和乙酸钠(1.36g，16.5mmol)在乙酸(10ml)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌16h，并且在50℃搅拌4h。添加另外量的溴(0.85ml，16.5mmol)和乙酸钠(1.35g，16.5mmol)，并将反应混合物在室温搅拌16h，并在50℃搅拌4h。添加另外量的溴(0.51ml，9.92mmol)，并将反应混合物在室温再搅拌16h。添加na2s2o3，并将混合物用etoac萃取。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物与另一级分(0.33mmol)合并，并通过快速柱色谱法(sio2，meoh在dcm中，梯度从0/100至6/94)纯化，以得到中间体75(0.52g，33％)。[0653]中间体76的制备[0654][0655]向中间体75(346mg，1.50mmol)和dmap(36.8mg，0.30mmol)在thf(5.77ml)中的悬浮液中滴加双(叔丁基)二碳酸酯(cas：24424-58-3；657mg，3.00mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。添加nh4cl(饱和水溶液)，并将混合物用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤并在真空中浓缩，以得到中间体76(516mg，89％，86％纯度)，将其原样用于下一步骤。[0656]中间体77的制备[0657][0658]在密封管中并且在n2气氛下将三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(cas：97674-02-7；0.48ml，1.41mmol)和pd(pph3)2cl2(82.3mg，0.12mmol)添加至中间体76(450mg，1.17mmol)在甲苯(9.0ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在80℃搅拌48h。添加hcl(在h2o中1m，7.5ml，7.5mmol)，并将混合物在室温搅拌16h。添加nahco3(饱和水溶液)，并将混合物用etoac萃取。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，meoh在dcm中，梯度从0/100至10/90)纯化，以得到中间体77(190mg，84％)。[0659]中间体78的制备[0660][0661]向中间体77(122mg，0.63mmol)和dmap(15.4mg，0.13mmol)在thf(2.4ml)中的悬浮液中滴加双(叔丁基)二碳酸酯(275mg，1.26mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h。添加nh4cl(饱和水溶液)，并将混合物用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从0/100至40/60)纯化，以得到中间体78(176mg，95％)。[0662]中间体79的制备[0663][0664]在n2气氛下在0℃将甲醇钠(2.84μl，12.4μmol)添加至中间体78(150mg，0.51mmol)在meoh(2.0ml)中的搅拌悬浮液中。在该温度下分批添加nabh4(19.3mg，0.51mmol)。将混合物搅拌45min。添加水，并且将混合物用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物溶解在thf(2ml)中，并在0℃添加et3n(70μl，0.5mmol)和双(叔丁基)二碳酸酯(cas：24424-58-3；120mg，0.55mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h，并用水淬灭。将混合物用dcm萃取。将合并的有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发，以得到中间体79(140mg，93％)。[0665]中间体80的制备[0666][0667]在0℃将socl2(84μl，1.15mmol)滴加到中间体79(85.0mg，0.29mmol)和et3n(0.32ml，2.30mmol)在dcm(1.9ml)中的混合物中。将反应混合物在室温搅拌12h。将反应冷却至0℃，并小心添加水。将混合物用dcm萃取。将合并的有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发，以得到中间体80，将其原样用于下一步骤。[0668]中间体85的制备[0669][0670]在0℃并且在n2气氛下将甲基溴化镁(在thf和甲苯中1.4m，1.31ml，1.83mmol)添加至中间体28a(200mg，1.12mmol)在无水thf(11.2ml)中的溶液中。将反应混合物从0℃至室温搅拌2h，用nh4cl(饱和水溶液)稀释，并用et2o萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(sio2，etoac在庚烷中，梯度从20/80至100/0)纯化，以得到呈黄色固体的中间体85(176mg，81％)。[0671]中间体86的制备[0672][0673]在0℃将socl2(88.6μl，1.18mmol)添加至中间体85在无水dcm(9.1ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物从0℃至室温搅拌2h，将溶剂在真空中蒸发，以产生中间体86，将其原样用于下一步骤。[0674]中间体87的制备[0675][0676]在室温将中间体i-28a(376mg，2.11mmol)和ti(oi-pr)4(cas：546-68-9；1.87ml，6.33mmol)添加至3-((叔丁基二甲基硅烷氧基)甲基)哌啶[876147-50-1](508mg，2.22mmol)在无水thf(5.41ml)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌18h。将混合物蒸馏并在真空中干燥。添加无水thf(5.41ml)，并将反应冷却至0℃。滴加甲基溴化镁(在thf中1.4m，7.53ml，10.6mmol)。将反应混合物在0℃搅拌15min并在室温搅拌15h。添加nh4cl(饱和水溶液)，并将混合物用dcm萃取(3次)。将合并的有机萃取物干燥(mgso4)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，庚烷/etoac，95:5至0:100)纯化，以得到中间体87(635mg，74％)。[0677]中间体88的制备[0678][0679]在室温，将tbaf(875mg，3.13mmol)添加至中间体i-87(635mg，1.57mmol)在thf(25ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌3h。将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，dcm:meoh(10:1)/dcm，梯度从0:100到10:90)纯化，以得到中间体88(312mg，68％)。[0680]中间体89的制备[0681][0682]在n2气氛下搅拌中间体i-88(312mg，1.07mmol)、邻苯二甲酰亚胺(173mg，1.18mmol)和三苯基膦(421mg，1.61mmol)在无水thf(12.7ml)中的溶液。添加diad(318mg，1.61mmol)，并将反应混合物在室温搅拌过夜。将混合物用水稀释并用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，庚烷/etoac，梯度从100/0至0/100)纯化，以得到中间体89(434mg，96％)。[0683]中间体90的制备[0684][0685]将一水合肼(75.3μl，1.55mmol)添加至中间体i-89(434mg，1.03mmol)在etoh(12ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在80℃搅拌2h，然后在室温搅拌15h。将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物溶解在dcm中并过滤。将该滤液在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，meoh:在dcm中的nh3，梯度从0:100至10:90)纯化，以得到中间体90(137mg，46％)。[0686]中间体i-30a、30b、30c、30d、30e、30f、30g、30h和30i的制备[0687][0688]在rt在n2下将异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.23ml，0.79mmol)添加至中间体3a(0.1g，0.53mmol)和中间体14a在dcm(1.81ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h。然后将混合物冷却至0℃，并添加甲基溴化镁(在thf/甲苯中1.4m，1.88ml，2.63mmol)。将混合物在0℃搅拌15min，然后温热至rt，并且再搅拌2h。然后添加饱和nh4cl溶液和dcm，并将混合物通过垫过滤。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤，并在真空中除去溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；etoac在dcm中，梯度从0/100至50/50)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈淡黄色油状物的中间体30a(0.214g，68％)。[0689][0690]遵循与用于合成中间体30a所述的程序类似的程序制备中间体30b，使用中间体3b和14a作为起始材料。[0691][0692]遵循与用于合成中间体30a所述的程序类似的程序制备中间体30c，使用中间体3c和14a作为起始材料。[0693][0694]遵循与用于合成中间体30a所述的程序类似的程序制备中间体30d，使用中间体3d和14a作为起始材料。[0695][0696]在rt在n2下将异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.205ml，0.69mmol)添加至中间体5b(0.12g，0.46mmol)和中间体14a在dcm(1.81ml)中的搅拌溶液中。将混合物在80℃搅拌16h。然后将混合物冷却至rt，并添加甲基溴化镁(在thf/甲苯中1.4m，1.65ml，2.31mmol)。将混合物在rt搅拌16h，然后添加饱和nahco3溶液。将混合物用dcm萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中除去溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈无色油状物的中间体30e(0.132g，52％)。[0697][0698]遵循与用于合成中间体30a所述的程序类似的程序制备中间体30f，使用中间体8a和14a作为起始材料。[0699][0700]遵循与用于合成中间体30a所述的程序类似的程序制备中间体30g，使用中间体8e和14a作为起始材料。[0701][0702]在n2下在rt将异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.205ml，0.69mmol)和中间体14b(0.135g，0.47mmol)添加至中间体8a(0.063g，0.31mmol)在dcm(1ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h。然后在真空中蒸发溶剂，并将残余物溶解在dcm(1ml)中。将混合物冷却至0℃，并添加甲基溴化镁(在thf/甲苯中1.4m，1.11ml，1.55mmol)。将混合物在0℃搅拌15min，并且在rt搅拌1.5h，然后添加饱和nh4cl溶液，并将混合物用dcm萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中蒸发溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100至5/95)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈黄色油状物的中间体30h(0.132g，52％)。[0703]中间体91的制备[0704][0705]在n2气氛下将中间体14a(109mg，0.37mmol)和ti(oi-pr)4(151μl，0.51mmol)添加至中间体32(70.0mg，0.34mmol)在dcm(2ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌16h。将混合物冷却至0℃，并且添加thf(1ml)，然后滴加memgbr(在thf/甲苯中1.4m，1.2ml，1.70mmol)。将反应混合物在该温度下搅拌25min，并在室温搅拌2h。将混合物用nh4cl(饱和水溶液)和水处理，并用dcm萃取。将有机层干燥(na2so4)，过滤并将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，氨基官能化的，meoh在dcm中，梯度从0/100至4/96)纯化。将残余物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从47/53至30/70)纯化，以得到中间体91(84mg，50％)。[0706]中间体92的制备[0707][0708]遵循与用于中间体91所述的程序类似的程序制备中间体92，使用中间体14a和中间体8f作为起始材料。[0709]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中7m)/dcm，梯度从0/100至10/90)纯化，以得到中间体92(170mg，67％)。[0710]中间体93的制备[0711][0712]在室温并且在n2气氛下，将中间体14a(80mg，0.33mmol)、中间体8h(105mg，0.36mmol)和ti(o-ipr)4(145μl，0.49mmol)溶解在dcm(1.13ml)中。将反应混合物在该温度下搅拌16h。然后将其冷却至0℃，并滴加memgbr(在thf/甲苯中1.4m，1.17ml，1.64mmol)。将混合物在该温度下搅拌15min，并在室温搅拌1h。将混合物用nh4cl(饱和水溶液)处理，并用dcm稀释。将混合物通过硅藻土垫过滤。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac/meoh，从100:0至90:10的梯度)至10/90)纯化，得到中间体93(110mg，63％)。[0713]中间体94的制备[0714][0715]在室温将中间体86(112mg，0.53mmol)添加至中间体60(146mg，0.44mmol)在acn(5ml)中的溶液中。将反应混合物在75℃搅拌48小时。在真空中除去溶剂，并将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，庚烷中的etoac，梯度从20/80至100/0)纯化，以得到呈黄色油状物的中间体94(54.7mg，24％)。[0716]中间体95的制备[0717][0718]将在ch3cn(500ml)中的2,4-二溴-噻唑([cas4175-77-3]，50g，205.83mmol)、n-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-2,4-二甲氧基-苯甲胺([cas20781-23-1]，65.33g，205,83mmol)和na2co3(65.51g，618mmol)加热36小时。将混合物浓缩并且溶解于etoac(1000ml)中。将混合物用水(50ml)和盐水洗涤，经mgso4干燥，并且浓缩，以给出粗产物，将其通过硅胶柱色谱法(石油醚/etoac，从100/0至70/30)纯化，以给出呈黄色固体的中间体95(70g，70％)。[0719]中间体96的制备[0720][0721]向中间体95(15g，31.29mmol)在无水thf(20ml)中溶液中以温度不超过-70℃的速度滴加lda(34.42ml，34.42mmol)。将所得的溶液在-78℃搅拌30min。然后将dmf(2.52g，34.42mmol)作为在thf(20ml)中的溶液逐滴添加，并且允许混合物温热至室温。将该反应用饱和的nh4cl(30ml)淬灭。将混合物用etoac(2x50ml)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤、经mgso4干燥、并且浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(石油醚/etoac，从100/0至80/20)纯化，以产生呈浅黄色固体的中间体96(8g，45％)。[0722]中间体97的制备[0723][0724]在rt下将中间体96(2006.23mg，3.95mmol)添加至来自wo2018/109202的中间体(3r)-34(729mg，3.57mmol)。30min后，在rt将三乙酰氧基硼氢化钠(1512.43mg，7.14mmol)添加至混合物，并且将rm在rt搅拌48h。将粗品用nh3/h2o淬灭，并用etoac萃取。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并且将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过自动快速色谱法(二氧化硅，10％meoh在dcm中0/100至5/95)纯化。收集所希望的级分，在真空下浓缩以产生呈粘性固体的中间体97(1.1g，44％)。[0725]中间体98的制备[0726][0727]在rt，氮气氛下，将中间体97(1050mg，1.51mmol)在tfa(26.25ml)中的混合物搅拌1.5h。蒸发溶剂并且将混合物吸收于水中，用k2co3碱化，并且用dcm萃取。将有机层经mgso4干燥并且浓缩。将残余物在柱上用硅胶，洗脱液：dcm/meoh(100/0至90/10)纯化。将纯级分蒸发，产生呈白色固体的中间体98(521mg，87％)。[0728]中间体99的制备[0729][0730]在搅拌下，将乙酸酐(7.75mg，0.076mmol)滴加到中间体98(20mg，0.051mmol)在1,4-二噁烷(15ml)中的溶液中。添加完成后，将该反应在60℃加热2h，然后在110℃加热4h。将rm蒸发，吸收于水/0.5gnahco3/dcm中。将有机层分离，经mgso4干燥并浓缩。将残余物在柱上用硅胶，洗脱液：dcm/meoh(100/0至95/5)纯化。将纯级分浓缩，产生呈淡黄色泡沫的中间体99(135mg，41％)。[0731][3h]-配体的制备用于占用研究[0732][0733]如下将来自wo2018/109202的化合物28用[3h]进行标记：[0734]将中间体99(4.10mg，9.38μmol)和负载在碳上的钯(10％，14.4mg)悬浮在dmf(0.2ml)中并添加dipea(12μl，70.6μmol)。在rt，将悬浮液脱气三次并且在氚气气氛下搅拌(4.2ci，525mbar初始压力)2h47min(终止压力是311mbar，未观察到更多气体消耗)。将溶剂真空去除，将不稳定的氚通过添加meoh(0.3ml)、搅拌该溶液、并且再次真空去除溶剂交换。将该过程重复两次。最后，将良好干燥的固体用etoh(5ml)萃取并且将悬浮液通过0.2μm尼龙膜(macherey-nagel聚酰胺注射器式滤器xtrapa-20/25)过滤，获得了澄清溶液。[0735]粗材料的放射化学纯度(rcp)测定为56％，使用了以下hplc系统：沃特斯(waters)atlantist3，5μm，4.6x250mm；溶剂a：水+0.05％tfa，b：乙腈+0.05％tfa；0min0％b；10min30％b；10.2-14.5min95％b；15min0％b；254nm；1.0ml/min；30℃。[0736]将粗品通过hplc：沃特斯atlantist3，5μm，10x250mm；溶剂a：水+0.1％tfa；b：乙腈+0.1％tfa；0min0％b，15min45％b；4.7ml/min；25℃纯化。靶化合物在9.5min洗脱，并且将其通过固相萃取与hplc溶剂混合物分离。因此，将hplc溶液用nahco3水溶液中和并且将这些级分的体积在旋转蒸发器中部分减少。然后将该产物用以etoh(5ml)洗脱的phenomenexstratax筒柱(33μmpolymeric反相，100mg，3ml；8b-s100-eb)萃取。该萃取的产物示出rcp>99％并且该比活性(sa)测定为10.7ci/mmol(396gbq/mmol，通过ms测定)。将[3h]-配体的在0.25mletoh(1mci/ml)中的250μci(9.25mbq)和在5mletoh中的38.8mci的两个批分离。[0737]最终化合物的制备[0738]最终化合物1的制备[0739][0740]将三氟乙酸(0.49ml，6.42mmol)添加至中间体30a(0.214g，0.36mmol)在dcm中的搅拌溶液中。将混合物在室温搅拌16h，然后在真空中蒸发。将残余物用饱和na2co3溶液稀释，并用etoac萃取。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并且将溶剂在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并且用etoac萃取。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并且将溶剂在真空中蒸发。将残余物溶解在meoh中，并通过离子交换色谱法(scx2柱；meoh和nh3在meoh中的7n溶液)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生呈浆液的化合物1，其在静置时结晶呈白色固体(0.080g，64％)。[0741]最终化合物2的制备[0742][0743]遵循与用于合成化合物1所述的程序类似的程序制备化合物2，使用中间体30b作为起始材料(0.065g，0.13mmol)。将化合物2通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的0％nh4hco30.25％溶液，100％ch3cn)纯化以产生呈白色固体的化合物2(0.024g，50％)。[0744]最终化合物3的制备[0745][0746]遵循与用于合成化合物1所述的程序类似的程序制备化合物3，使用中间体30c作为起始材料(0.055g，0.10mmol)。将化合物2通过反相hplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的0％nh4hco30.25％溶液，100％ch3cn)纯化以产生呈白色固体的化合物3(0.012g，29％)。[0747]最终化合物4a和4b的制备[0748][0749]遵循与用于合成化合物1所述的程序类似的程序制备化合物4a和4b，使用中间体30d作为起始材料(0.060g，0.11mmol)。将含有化合物4a和4b的混合物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的0％nh4hco30.25％溶液，100％ch3cn)分离，以产生呈白色固体的化合物4a(0.009g，20％)和化合物4b(0.012g，26％)。[0750]最终化合物5的制备[0751][0752]遵循与用于合成化合物1所述的程序类似的程序制备化合物5，使用中间体30e作为起始材料(0.132g，0.24mmol)。将化合物5通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100至10/90)纯化，以产生呈无色油状物的化合物5(0.075g，74％)。[0753]最终化合物6a和6b的制备[0754][0755]遵循与用于合成化合物1所述的程序类似的程序制备化合物6a和6b，使用中间体30f作为起始材料(0.77g，0.11mmol)。将化合物6a和6b的混合物通过离子交换色谱法(scx2柱；meoh和nh3在meoh中的7n溶液)纯化。通过手性sfc(固定相：chiralpakic5μm250x21.2mm，流动相：60％co2，40％(iproh/dcm80/20(0.3％iprnh2)))获得化合物6a和6b。将含有化合物6a的级分在真空中蒸发并通过反相hplc(固定相：c18xbridge50x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的84％nh4hco30.25％溶液，16％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)进一步纯化，以产生呈白色固体的6a(0.073g，13％)。将含有化合物6b的级分在真空中蒸发并通过反相hplc(固定相：c18xbridge50x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的84％nh4hco30.25％溶液，16％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)进一步纯化，以产生呈淡黄色粘性固体的6b(0.062g，11％)。[0756]最终化合物7的制备[0757][0758]遵循与用于合成化合物1所述的程序类似的程序制备化合物7，使用中间体30g作为起始材料(0.181g，0.25mmol)。将化合物7通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到6/94)，并通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)纯化，以产生呈淡黄色泡沫的化合物7(0.058g，67％)。[0759]最终化合物8的制备[0760][0761]遵循与用于合成化合物1所述的程序类似的程序制备化合物8，使用中间体30h作为起始材料(0.095g，0.19mmol)。将化合物8通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到5/95)，通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)纯化并与dipe研磨，以产生呈米色粘性固体的化合物8(0.037g，52％)。[0762]最终化合物9的制备[0763][0764]将中间体14a(0.079g，0.27mmol)添加至中间体8a(0.085g，0.31mmol)和et3n(0.17ml，1.23mmol)在dcm(2ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌30min，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(cas:56553-60-7，0.179g，0.85mmol)。将混合物在rt搅拌16h，然后添加饱和nahco3溶液。将混合物用dcm萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中除去溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈黄色油状物的化合物9(0.111g，85％)。[0765]最终化合物10的制备[0766][0767]在n2下，将中间体8a(0.070g，0.26mmol)和et3n(0.145ml，1.04mmol)在dcm(1.3ml)中的溶液添加至密封管的中间体14c(0.085g，0.31mmol)。将混合物在rt搅拌30min，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(cas:56553-60-7，0.179g，0.85mmol)。将混合物在rt搅拌16h，然后添加饱和nahco3溶液。将混合物用dcm萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中蒸发溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100至5/95)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈淡黄色固体的化合物10(0.062g，70％)。[0768]最终化合物11的制备[0769][0770]在密封管中在n2下将et3n(0.125ml，0.90mmol)、中间体14d(0.075g，0.40mmol)、异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.110ml，0.37mmol)和氰基硼氢化钠(cas：25895-60-7；0.050g，0.80mmol)添加至中间体8a(0.110g，0.40mmol)在1,2-二氯乙烷(1.5ml)中的溶液。将混合物在80℃搅拌2天，然后添加饱和nahco3溶液。将混合物用dcm萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中蒸发溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(氨基官能化的sio2；etoac在庚烷中，梯度从0/100至100/0)，通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100至5/95)，并通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco3的0.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco3的0.25％溶液，40％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并用dcm萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并在真空中蒸发溶剂，以产生呈无色油状物的化合物11(0.016g，11％)。[0771]最终化合物12a、12b和12c的制备[0772][0773]将dipea(0.226ml，1.31mmol)添加至中间体16a(0.097g，0.44mmol)和中间体8a(0.158g，0.57mmol)在dcm(1.34ml)中的搅拌悬浮液中。将混合物在rt搅拌5min，然后添加异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.311g，1.09mmol)和氰基硼氢化钠(cas：25895-60-7；0.068g，1.09mmol)。将混合物在80℃再搅拌1.5h，然后在真空中蒸发溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，0/100到10/90)，并通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)纯化，以产生呈黄色油状物的化合物12a(0.036g，23％)。将0.03g化合物12ab样品通过非手性sfc(固定相：chiralcelod-h5μm，250x21.2mm，流动相：85％co2，15％(etoh(0.3％iprnh2))进一步纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生化合物12a(0.006g，4％)和化合物12b(0.015g，9％)。[0774]最终化合物13的制备[0775][0776]遵循与用于合成化合物12a所述的程序类似的程序制备化合物13，使用中间体16b作为起始材料(0.089g，0.51mmol)。将化合物13通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到10/90)，通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)并通过离子交换色谱法(scx2柱；meoh和nh3在meoh中的7n溶液)纯化，以产生呈白色固体的化合物13(0.037g，52％)。[0777]最终化合物14的制备[0778][0779]遵循与用于合成化合物12a所述的程序类似的程序制备化合物14，使用中间体16c作为起始材料(0.089g，0.51mmol)并且使用et3n(0.150ml，1.08mmol)代替dipea。将化合物14通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，0/100到10/90)，通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，并将残余物溶于meoh(1ml)，并添加hcl在1,4-二噁烷中的4m溶液(0.5ml，2.0mmol)。将混合物在rt搅拌5min，然后在真空中蒸发溶剂，以产生呈白色固体的化合物14(0.065g，41％)。[0780]最终化合物15的制备[0781][0782]遵循与用于合成化合物12a所述的程序类似的程序制备化合物15，使用中间体16d作为起始材料(0.089g，0.51mmol)并且使用et3n(0.150ml，1.08mmol)代替dipea。将化合物15通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，0/100到10/90)，并通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的75％nh4hco30.25％溶液，25％ch3cn到在水中的57％nh4hco30.25％溶液，43％ch3cn)纯化，以产生呈淡黄色油状物的化合物15(0.027g，23％)。[0783]最终化合物16的制备[0784][0785]遵循与用于合成化合物12a所述的程序类似的程序制备化合物16，使用2-乙酰基-2-甲基-2h-吲唑作为起始材料(cas：1159511-29-1；0.125g，0.72mmol)并且使用et3n(0.30ml，2.16mmol)代替dipea。将化合物16通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的0.7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到100/0)，通过反相hplc(固定相：c18xbridge50x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的90％nh4hco30.25％溶液，10％ch3cn到在水中的66％nh4hco30.25％溶液，34％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，并将残余物溶于meoh(4ml)，并在密封管中加入hcl在1,4-二噁烷中的4m溶液(0.2ml，2.39mmol)。将混合物在rt搅拌1h，然后在真空中蒸发溶剂，以产生呈黄色固体的化合物16(0.030g，10％)。[0786]最终化合物17的制备[0787][0788]将中间体16e(0.085g，0.53mmol)添加至中间体8a(0.147g，0.53mmol)和et3n(0.226ml，1.62mmol)在无水meoh(1.75ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h，三乙酰氧基硼氢化钠(cas：56553-60-7；0.168g，0.80mmol)，并将混合物在rt搅拌另外1d。然后在真空中蒸发溶剂，并将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的0.7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到100/0)，并通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％10mmnh4hco3ph9溶液，20％ch3cn到在水中的0％10mmnh4hco3ph9溶液，100％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生化合物17的游离碱(0.092g，50％)。将化合物17的游离碱的样品(0.078g，0.22mmol)溶解在meoh(1.09ml)中，并在密封管中加入hcl的37％溶液(0.056ml，0.67mmol)。将混合物在rt搅拌1h，然后在真空中蒸发溶剂，以产生呈浅黄色固体的化合物17(0.093g，99％)。[0789]最终化合物18的制备[0790][0791]在rt在n2下将中间体19a(0.094g，0.58mmol)和异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.213ml，0.73mmol)添加至中间体3b(0.10g，0.48mmol)在dcm(2ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h，冷却至0℃，然后添加甲基溴化镁(在thf/甲苯中1.4m，1.73ml，2.42mmol)。将混合物在0℃搅拌1h，然后添加饱和nh4cl溶液和dcm。将混合物通过垫过滤。将滤液用dcm稀释，并将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤，并在真空中溶剂蒸发溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在etoac中，梯度从0/100至10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的47％nh4hco30.25％溶液，53％ch3cn到在水中的30％nh4hco30.25％溶液，70％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，并将残余物溶于etoac，并用水萃取。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤，在真空中蒸发溶剂，以产生呈无色膜状物的化合物18(0.074g，42％)。[0792]最终化合物19的制备[0793][0794]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物19，使用中间体3c作为起始材料(0.080g，0.49mmol)。将化合物19通过快速柱色谱法(sio2；meoh在etoac中，梯度从0/100到10/90)，并通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：从在水中的47％nh4hco30.25％溶液，53％ch3cn到在水中的30％nh4hco30.25％溶液，70％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生呈无色油状物的化合物19(0.090g，54％)。[0795]最终化合物20的制备[0796][0797]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物20，使用中间体3d作为起始材料(0.075g，0.46mmol)。将化合物19通过快速柱色谱法(sio2；meoh在etoac中，梯度从0/100到10/90)，并通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：从在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn到在水中的43％nh4hco30.25％溶液，57％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并且在真空中蒸发有机溶剂。添加etoac，并将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤，在真空中蒸发溶剂，以产生呈无色膜状物的化合物20(0.073g，45％)。[0798]最终化合物21ab和21a的制备[0799][0800]在rt在n2下将中间体19a(0.082g，0.50mmol)和异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.213ml，0.73mmol)添加至中间体3b(0.10g，0.48mmol)在dcm(1.5ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h，冷却至0℃，然后添加甲基溴化镁(在thf/甲苯中1.4m，1.72ml，2.40mmol)。将混合物在0℃搅拌5min，然后在rt搅拌2h。然后添加饱和nh4cl溶液，并将混合物用dcm萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中蒸发溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的75％nh4hco30.25％溶液，25％ch3cn到在水中的57％nh4hco30.25％溶液，43％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，并将残余物溶于etoac，并用饱和nahco3溶液萃取。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发溶剂，以产生呈棕色油状物的化合物21ab(非对映异构体的混合物38/62，0.020g，11％)和化合物21a(0.01g，6％)。[0801]最终化合物22的制备[0802][0803]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物22，使用中间体8a作为起始材料(0.090g，0.44mmol)。将化合物22通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100至5/95)纯化，以产生呈无色膜状物的化合物22(0.072g，45％)。[0804]最终化合物23a和23b的制备[0805][0806]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物23a和23b，使用中间体8b作为起始材料(0.10g，0.45mmol)。将化合物23a和23b的混合物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将化合物23a和23b通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn到在水中的43％nh4hco30.25％溶液，57％ch3cn)分离。收集所希望的级分，并将溶剂在真空中蒸发以在真空下于50℃干燥16h后产生化合物23a(0.039g，22％)，和呈无色油状物的化合物23b(0.008g，5％)。[0807]最终化合物24ab、24a和24b的制备[0808][0809]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物24ab、24a和24b，使用中间体8c作为起始材料(0.10g，0.45mmol)。将化合物24ab通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn到在水中的43％nh4hco30.25％溶液，57％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈无色油状物的化合物23ab(非对映异构体的混合物40/60，0.029g，18％)、化合物24a(0.010g，6％)和化合物24b(0.035g，22％)。[0810]最终化合物25ab和25a的制备[0811][0812]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物25ab和25a，使用中间体8d作为起始材料(0.10g，0.45mmol)。将化合物24ab通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的54％nh4hco30.25％溶液，46％ch3cn到在水中的36％nh4hco30.25％溶液，63％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈黄色油状物的化合物25ab(0.022g，14％)和化合物25a(0.013g，8％)。[0813]最终化合物26的制备[0814][0815]在rt在n2下将中间体19a(0.170g，1.051mmol)和异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.467ml，1.58mmol)添加至中间体8e(0.10g，0.48mmol)在dcm(4ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h，冷却至0℃，然后添加甲基溴化镁(在thf/甲苯中1.4m，1.72ml，2.40mmol)。将混合物在0℃下搅拌1h。然后添加饱和的nahco3溶液和dcm，并将混合物通过垫过滤。将滤液用dcm萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中蒸发溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发，并将残余物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100至8/95)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生呈无色油状物的化合物26(0.022g，6％)。[0816]最终化合物27a和27b的制备[0817][0818]遵循与用于合成化合物26所述的程序类似的程序制备化合物27a和27a，使用中间体8g作为起始材料(0.469g，2.47mmol)。将化合物27a和27b的混合物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在etoac中，梯度从20/80到0/100)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过制备型lc(不规则裸二氧化硅；0.8％nh4oh和在92％dcm中的8％meoh)纯化，并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将化合物27a和27b通过手性sfc(固定相：chiralpakic5μm250x30mm，流动相：60％co2，40％(etoh(0.3％iprnh2))分离。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈黄色膜状物的化合物27a(0.048g，6％)和化合物27b(0.051g，6％)。[0819]最终化合物28的制备[0820][0821]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物28，使用中间体8f作为起始材料(0.275g，1.33mmol)。将化合物28通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到5/95)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。收集所希望的级分并在真空中浓缩，将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的75％nh4hco30.25％溶液，25％ch3cn到在水中的57％nh4hco30.25％溶液，43％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发，并将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到2/98)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生呈无色油状物的化合物28(0.60g，15％)[0822]最终化合物29的制备[0823][0824]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物29，使用中间体8h作为起始材料(0.10g，0.41mmol)。将化合物29通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的67％nh4hco30.25％溶液，33％ch3cn到在水中的50％nh4hco30.25％溶液，50％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈白色固体的化合物29(0.050g，30％)。[0825]最终化合物30的制备[0826][0827]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物30，使用中间体8a(0.09g，0.44mmol)和19a(0.10g，0.62mmol)作为起始材料。将化合物30通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中在dcm中，梯度从0/100到5/95)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的90％nh4hco30.25％溶液，10％ch3cn到在水中的65％nh4hco30.25％溶液，45％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈无色粘性固体的化合物30(0.091g，56％)。[0828]最终化合物31的制备[0829][0830]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物31，使用中间体8e(0.10g，0.53mmol)和19b(0.120g，0.63mmol)作为起始材料。将化合物31通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中在dcm中，梯度从0/100到30/70)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的67％nh4hco30.25％溶液，33％ch3cn到在水中的50％nh4hco30.25％溶液，50％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈黄色油状物的化合物31(0.080g，40％)。[0831]最终化合物32的制备[0832][0833]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物32，使用中间体3a(0.10g，0.53mmol)和19c(0.123g，0.63mmol)作为起始材料。将化合物32通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的75％nh4hco30.25％溶液，25％ch3cn到在水中的57％nh4hco30.25％溶液，43％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈无色油状物的化合物32(0.030g，16％)。[0834]最终化合物33ab、33a和33b的制备[0835][0836]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物33ab、33a和33b，使用中间体8e(0.067g，0.35mmol)和19c(0.060g，0.33mmol)作为起始材料。将化合物33ab通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将化合物33a和33b通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn到在水中的43％nh4hco30.25％溶液，57％ch3cn)分离。收集所希望的级分并在真空中蒸发溶剂，并将残余物溶于etoac，并用饱和nahco3溶液洗涤。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并在真空中蒸发溶剂，以产生呈无色油状物的化合物33a(0.032g，26％)和化合物33b(0.014g，22％)。[0837]最终化合物34的制备[0838][0839]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物34，使用中间体10a(0.10g，0.45mmol)和19c(0.085g，0.48mmol)作为起始材料。将化合物34通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生呈无色油状物的化合物34(0.055g，30％)。[0840]最终化合物35的制备[0841][0842]遵循与用于合成化合物18所述的程序类似的程序制备化合物34，使用中间体10b(0.10g，0.45mmol)和19c(0.085g，0.48mmol)作为起始材料。将化合物35通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生呈无色油状物的化合物35(0.083g，46％)。[0843]最终化合物36的制备[0844][0845]将中间体19d(0.085g，0.53mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(cas：56553-60-7，0.168g，0.79mmol)添加至中间体8a(0.090g，0.44mmol)在dcm(9.4ml)中的搅拌混合物中。将混合物在rt搅拌16h，然后添加饱和nahco3溶液。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中除去。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100至10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈无色油状物的化合物36(0.48g，31％)。[0846]最终化合物37的制备[0847][0848]将中间体19e(0.041g，0.26mmol)和异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.108ml，0.365mmol)添加至中间体8a(0.05g，0.24mmol)在dcm(0.79ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h，然后添加氰基硼氢化钠(cas：25895-60-7；0.018g，0.29mmol)。将混合物在rt再搅拌16h，然后添加10％nh4cl溶液。将混合物用dcm萃取，将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤，并在真空中蒸发溶剂。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的54％10mmnh4hco3/nh4ohph＝9溶液，46％ch3cn至在水中的36％10mmnh4hco3/nh4ohph＝9溶液，64％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，并将残余物在饱和nahco3溶液和dcm之间分配。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并将溶剂在真空中蒸发，以产生呈白色固体的化合物37(0.018g，21％)。[0849]最终化合物38的制备[0850][0851]在n2下将异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.170ml，0.57mmol)，然后将氰基硼氢化钠(cas：25895-60-7；0.059g，0.94mmol)添加至密封管中的中间体8a(0.139g，0.68mmol)和中间体20a(0.104g，0.65mmol)在1,2-二氯乙烷(2.2ml))中的搅拌溶液中。将混合物在80℃搅拌21h，冷却至rt后，添加饱和nahco3溶液和dcm，并且将混合物通过垫过滤。将滤液用dcm萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中蒸发溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到5/95)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的67％nh4hco30.25％溶液，33％ch3cn到在水中的50％nh4hco30.25％溶液，50％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并用etoac萃取，将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并在真空中蒸发溶剂。并且将残余物用饱和nahco3溶液洗涤，以产生呈黄色油状物的化合物38(0.036g，14％)。[0852]最终化合物39的制备[0853][0854]在rt在n2下将中间体28a(0.121g，0.63mmol)和异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.231ml，0.79mmol)添加至中间体3a(0.10g，0.53mmol)在dcm(2.2ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌20h，冷却至0℃，然后添加甲基溴化镁(在thf/甲苯中1.4m，1.73ml，2.42mmol)。将混合物在0℃搅拌2h，然后添加饱和nh4cl溶液和dcm。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中蒸发溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的75％nh4hco30.25％溶液，25％ch3cn到在水中的57％nh4hco30.25％溶液，43％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并添加饱和nahco3溶液，并将混合物用dcm萃取。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并将溶剂在真空中蒸发，以产生呈白色固体的化合物39(0.040g，21％)。[0855]最终化合物40的制备[0856][0857]遵循与用于合成化合物39所述的程序类似的程序制备化合物40，使用中间体5a(0.100g，0.48mmol)和28a(0.103g，0.58mmol)作为起始材料。将化合物40通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的75％nh4hco30.25％溶液，25％ch3cn到在水中的57％nh4hco30.25％溶液，43％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈无色油状物的化合物40(0.009g，5％)。[0858]最终化合物41的制备[0859][0860]遵循与用于合成化合物39所述的程序类似的程序制备化合物41，使用中间体5d(0.100g，0.45mmol)和28a(0.84g，0.47mmol)作为起始材料。将化合物40通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生呈浅棕色油状物的化合物41(0.124g，69％)。[0861]最终化合物42a和42b的制备[0862][0863]遵循与用于合成化合物39所述的程序类似的程序制备化合物42a和42b，使用中间体8a(0.068g，0.33mmol)和28a(0.060g，0.33mmol)作为起始材料。将化合物42a和42b的混合物通过快速柱色谱法(sio2；meoh在dcm中，梯度从0/100到6/94)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将化合物41a和41b通过手性sfc(固定相：chiralpakic5μm250x30mm，流动相：60％co2，40％(etoh(0.3％iprnh2))分离。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈黄色膜状物的化合物42a(0.013g，10％)和化合物42b(0.010g，8％)。[0864]最终化合物43的制备[0865][0866]在rt在n2下将中间体28a(0.178g，0.53mmol)和异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.233ml，0.79mmol)添加至中间体8e(0.10g，0.53mmol)在dcm(2ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h，冷却至0℃，然后添加甲基溴化镁(在thf/甲苯中1.4m，1.72ml，2.40mmol)。将混合物在0℃搅拌1h。然后添加饱和的nahco3溶液和dcm，并将混合物通过垫过滤。将滤液用dcm萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中蒸发溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的80％nh4hco30.25％溶液，20％ch3cn到在水中的60％nh4hco30.25％溶液，40％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生呈无色油状物的化合物43(0.035g，18％)。[0867]最终化合物44的制备[0868][0869]遵循与用于合成化合物43所述的程序类似的程序制备化合物44，使用中间体8g(0.139g，0.67mmol)和28a(0.100g，0.56mmol)作为起始材料。将化合物43通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到5/95)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的67％nh4hco30.25％溶液，33％ch3cn到在水中的67％nh4hco30.25％溶液，33％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈油状物的化合物44(0.140g，63％)。[0870]最终化合物45ab和45a的制备[0871][0872]遵循与用于合成化合物39所述的程序类似的程序制备化合物45ab和45a，使用中间体10b作为起始材料(0.10g，0.45mmol)。将化合物45ab通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的67％nh4hco30.25％溶液，33％ch3cn到在水中的50％nh4hco30.25％溶液，50％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，以产生呈黄色油状物的化合物45ab(0.034g，19％)和化合物45a(0.029g，16％)。[0873]最终化合物46ab和46a的制备[0874][0875]遵循与用于合成化合物39所述的程序类似的程序制备化合物46ab和46a，使用中间体10a作为起始材料(0.10g，0.45mmol)。将化合物46ab通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的67％nh4hco30.25％溶液，33％ch3cn到在水中的50％nh4hco30.25％溶液，50％ch3cn)纯化。将所希望的级分收集，并且将这些溶剂在真空中蒸发。将残余物溶于etoac中，并用饱和nahco3溶液洗涤。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发溶剂，以产生呈黄色油状物的化合物46ab(0.035g，20％)和化合物46a(0.043g，24％)。[0876]最终化合物47的制备[0877][0878]在rt在n2下将中间体28a(0.118g，0.66mmol)和异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.294ml，0.99mmol)添加至中间体10d(0.150g，0.72mmol)在dcm(2ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h，冷却至0℃，然后添加甲基溴化镁(在thf/甲苯中1.4m，1.72ml，2.40mmol)。将混合物在0℃搅拌1h。然后添加meoh和dcm，并将混合物通过垫过滤。将滤液用饱和nh4cl溶液处理，并用dcm萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并在真空中蒸发将溶剂。将残余物通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0/100到08/92)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈油状物的化合物47(0.160g，63％)。[0879]最终化合物48的制备[0880][0881]遵循与用于合成化合物46所述的程序类似的程序制备化合物48，使用中间体10e(0.150g，0.73mmol)和中间体28a(0.117g，0.66mol)作为起始材料。将化合物48通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到08/92)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生呈油状物的化合物48(0.155g，61％)。[0882]最终化合物49ab、49a和49b的制备[0883][0884]遵循与用于合成化合物39所述的程序类似的程序制备化合物49ab、49a和49b，使用中间体10c(0.150g，0.68mmol)和28a(0.127g，0.71mmol)作为起始材料。将化合物40ab通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的75％nh4hco30.25％溶液，25％ch3cn到在水中的57％nh4hco30.25％溶液，43％ch3cn)纯化。收集所希望的级分，并在真空中蒸发溶剂，并将残余物溶于etoac中，并用nahco3饱和溶液萃取。将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发，以产生呈黄色油状物的化合物49ab(0.008g，3％)、呈灰色油状物的化合物49a(0.016g，6％)和呈黄色油状物的化合物49b(0.017，6％)。[0885]最终化合物50的制备[0886][0887]在rt在n2下将中间体28b(0.015g，0.071mmol)和异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.030ml，0.11mmol)添加至中间体8e(0.013g，0.068mmol)在thf(0.50ml)中的搅拌溶液中。将混合物在70℃搅拌16h，然后添加氰基硼氢化钠(cas：25895-60-7；0.018g，0.29mmol)。将混合物在rt再搅拌16h，然后添加水。将混合物用etoac萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中蒸发溶剂。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的75％nh4hco30.25％溶液，25％ch3cn到在水中的57％nh4hco30.25％溶液，43％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，以产生呈无色油状物的化合物50(0.010g，38％)。[0888]最终化合物51的制备[0889][0890]在rt将氰基硼氢化钠(cas：25895-60-7；0.054g，0.87mmol)添加至中间体8a(0.200g，0.72mmol)、中间体28c(0.138g，0.72mmol)、异丙醇钛(iv)(cas：546-68-9；0.214ml，0.72mmol)和et3n(0.300ml，2.16mmol)在dcm(2.37ml)中的溶液中。将混合物在80℃搅拌16h，然后添加水。将混合物用dcm萃取，将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤，并在真空中蒸发溶剂。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的54％nh4hco30.25％溶液，46％ch3cn到在水中的46％nh4hco30.25％溶液，54％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中蒸发，并将残余物溶于meoh中，并用hcl在iproh中的6m溶液处理。将混合物在rt搅拌2h，然后在真空中蒸发溶剂，以产生呈白色固体的化合物51(0.105g，32％)。[0891]最终化合物52的制备[0892][0893]将et3n(0.062ml，0.45mmol)添加至中间体8a(0.031g，0.11mmol)在dcm(1.7ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌10min，然后添加中间体28a(0.020g，0.11mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(cas：56553-60-7，0.071g，0.34mmol)。将混合物在rt搅拌18h，然后添加饱和nahco3溶液。将混合物用dcm萃取，并且将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且在真空中除去溶剂。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的75％nh4hco30.25％溶液，25％ch3cn到在水中的57％nh4hco30.25％溶液，43％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，以产生呈无色油状物的化合物52(0.015g，36％)。[0894]最终化合物53的制备[0895][0896]将三乙酰氧基硼氢化钠(cas：56553-60-7，0.2151g，1.02mmol)添加至中间体8a(0.187g，0.68mmol)、中间体28c(0.120g，0.68mmol)和et3n(0.282ml，2.03mmol)在meoh(2.19ml)中的搅拌溶液中。将混合物在rt搅拌16h，然后添加水。将混合物用etoac萃取，并且将有机层分离，干燥(na2so4)，过滤并在真空中除去溶剂。将残基通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到05/95)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的60％10mmnh4hco3/nh4ohph7.9溶液，40％ch3cn至在水中的43％10mmnh4hco3/nh4ohph7.9溶液，57％ch3cn)纯化。收集所希望的级分并在真空中浓缩，并将残余物溶于meoh中，并用hcl在iproh中的6m溶液处理。将混合物在rt搅拌2h，然后在真空中蒸发溶剂，以产生呈蓝色固体的化合物53(0.055g，19％)。[0897]最终化合物54的制备[0898][0899]遵循与用于合成化合物39所述的程序类似的程序制备化合物54，使用中间体10f作为起始材料(0.10g，0.42mmol)。将化合物54通过快速柱色谱法(sio2；nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中在dcm中，梯度从0/100到10/90)纯化并且收集所希望的级分并在真空中蒸发。将残余物通过反相hplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm，流动相：梯度从在水中的75％nh4hco30.25％溶液，25％ch3cn到在水中的57％nh4hco30.25％溶液，43％ch3cn)纯化。将所希望的级分收集，并且将这些溶剂在真空中蒸发。将残余物溶于dcm中，并用饱和nahco3溶液洗涤。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤并在真空中蒸发溶剂，以产生呈无色油状物的化合物54(0.050g，29％)。[0900]化合物55的制备[0901][0902]在室温将三乙酰氧基硼氢化钠(cas：56553-60-7；181mg，0.86mmol)添加至中间体i-8f·2hcl(150mg，0.57mmol)、中间体i-28c(101mg，0.57mmol)和et3n(0.24ml，1.71mmol)在meoh(1.85ml)中的搅拌混合物中。将反应混合物搅拌16h并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7m)在dcm中，梯度从0:100至10:90)纯化。将残余物通过rphplc纯化(固定相：c18xbridge30x100mm5um)，流动相：在水/acn中的10mmnh4co3hph7.9溶液(梯度从60:40至43:57)。将产物在meoh中搅拌并在室温用hcl(12m溶液，0.5ml，6.0mmol)处理10min。将混合物在真空中浓缩，并将产物在50℃在真空下干燥16h，以得到化合物55(106mg，44％)。[0903]化合物56和57的制备[0904][0905]在室温将ti(oi-pr)4(cas：546-68-9；281μl，0.95mmol)和氰基硼氢化钠(cas：25895-60-7；71.6mg，1.14mmol)依次添加至中间体i-8f·2hcl(250mg，0.95mmol)、中间体i-63(182mg，0.95mmol)和et3n(0.40ml，2.85ml)在dcm(3.12ml)中的混合物中。将反应混合物在密封管中在80℃搅拌16h。将反应用水淬灭，并用dcm萃取(3次)。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，(在dcm中的meoh中的10％7nnh3)在dcm中，梯度从0:100至50:50)纯化。将残余物再次通过rphplc(固定相：xbridgec1850x100mm，5μm，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从80:20到0:100)纯化，以得到级分a(28mg)和级分b(100mg)。[0906]将hcl(在h2o中37％，91μl，1.09mmol)添加至密封管中的级分b(100mg，0.27mmol)在meoh(0.67ml)中的搅拌混合物中。将反应混合物在室温搅拌1h并在真空中浓缩，以得到化合物56(118mg)。[0907]按照类似的程序，使用级分a(28mg)作为起始材料制备产物56。[0908]化合物58的制备[0909][0910]在密封管中并在n2气氛下将中间体i-8a(75mg，0.37mmol)在meoh(2ml)中的溶液，然后将ti(oi-pr)4(cas：546-68-9；180μl，0.61mmol)和氰基硼氢化钠(cas：25895-60-7(44mg，0.7mmol)添加至中间体i-65(57mg，0.33mmol)。将反应混合物在80℃搅拌60h。在真空中蒸发溶剂，并将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3在meoh中的7n溶液，在dcm中，梯度从0:100至10:90)纯化。通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从80:20到60:40)进行另一次纯化。将产物用水处理并用dcm萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤并在真空中蒸发溶剂，以得到化合物58(22mg，19％)。[0911]化合物59和60的制备[0912][0913]在室温和n2气氛下将氰基硼氢化钠(cas：25895-60-7(34.3mg，0.55mmol))添加至中间体i-71(100mg，0.48mmol)、中间体i-8e(86.6mg，0.46mmol)和ti(oi-pr)4(cas：546-68-9；200μl，0.68mmol)在thf(3.35ml)中的搅拌混合物中。将反应混合物在70℃搅拌16h，并用水稀释。将混合物用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，meoh在dcm中，梯度从0:100至30:70)纯化。通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7n)在dcm中，梯度从0:100至5:95的)进行第二纯化。合并所希望的级分并将其在真空中浓缩。将残余物通过rphplc(固定相：xbridgec1850x100mm，5μm，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从60:40至43:57)纯化，以得到级分a(38mg)和级分b(38mg)。[0914]将柠檬酸(37.1mg，0.19mmol)在1,4-二噁烷(0.62ml)中的溶液添加至级分b(37mg，96.5μmol)在et2o(1.83ml)中的溶液中。将混合物在室温搅拌3h。将沉淀过滤出并用et2o洗涤。将固体溶解在meoh中，添加et2o，并将混合物在真空中浓缩。将固体在50℃的干燥器中干燥16h，以得到呈白色固体的化合物60(47mg)。[0915]按照相同的程序，使用级分a作为起始材料制备化合物59。[0916]化合物61和62的制备[0917][0918]遵循与用于合成化合物59和60所述的程序类似的程序制备化合物61和62，使用中间体i-74和中间体i-8e作为起始材料。[0919]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，dcm/meoh，梯度从100:0至70:30)纯化。通过快速柱色谱法(sio2，dcm/nh3(在meoh中7n)，梯度从100:0至95:5)进行第二纯化。将所希望级分在真空中浓缩。将残余物通过rphplc(固定相：xbridgec1850x100mm，5μm，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从69:31至52:48)纯化，以得到级分a(42mg)和级分b(102mg)。[0920]将柠檬酸(41.9mg，0.22mmol)在1,4-二噁烷(0.70ml)中的溶液添加至级分a(40.0mg，0.11mmol)在et2o(2.07ml)中的溶液中。将混合物在室温搅拌3h。将沉淀过滤出并用et2o洗涤。将固体溶解在meoh中，添加et2o，并将混合物在真空中浓缩。将产物在50℃的干燥器中干燥4天，以得到呈白色固体的化合物61(56mg)。[0921]按照类似的程序，使用级分b作为起始材料制备化合物62。[0922]化合物63的制备[0923][0924]向中间体i-8h(100mg，0.53mmol)在dcm(31.5ml)中的溶液中添加中间体i-19a(93.7mg，0.58mmol)和ti(oi-pr)4(cas：546-68-9；0.23ml，0.79mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。然后将反应冷却至0℃，并滴加甲基溴化镁(3m，0.88ml，2.63mmol)。将反应混合物在0℃搅拌5min并在室温搅拌1h。添加nh4cl(饱和水溶液)，并将混合物用dcm萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7m)/dcm，梯度从0:100至3:97)纯化。将残余物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从67:33到50:50)纯化，以得到化合物63(21mg，11％)。[0925]化合物64的制备[0926][0927]遵循与用于合成化合物63所述的程序类似的程序制备化合物64，使用中间体i-19a和中间体i-32作为起始材料。[0928]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7m)/dcm，梯度从0:100至3:97)纯化。将残余物通过离子交换色谱法(使用isolutescx2柱，并用meoh、然后用nh3(在meoh中7m)洗脱)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩。将红色油状物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从67:33到50:50)纯化。收集所希望的级分，并且在真空中部分浓缩溶剂。将水相用etoac萃取。将有机相干燥(na2so4)，过滤，并在真空中蒸发溶剂，以得到化合物64(40mg，32％)。[0929]化合物65的制备[0930][0931]遵循与用于合成化合物63所述的程序类似的程序制备化合物65，使用中间体i-28a和中间体i-44作为起始材料。[0932]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7n)/dcm，梯度从0；100至10:90)纯化。将残余物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：(10mmnh4hco3/nh4ohph＝9的水溶液)/acn，梯度从80:20到60:40)纯化。将产物溶解于dcm中，并用nahco3(饱和水溶液)洗涤。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发，以得到化合物65(124mg，43％)。[0933]化合物66和67的制备[0934][0935]遵循与用于合成化合物63所述的程序类似的程序制备化合物66和67，使用中间体i-28a和中间体i-46作为起始材料。[0936]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7n)/dcm，梯度从0；100至10:90)纯化。将残余物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从80:20到0:100)纯化。将残余物溶于etoac中，并用nahco3(饱和水溶液)洗涤。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，以得到化合物67(26.2mg，15％)和化合物66(26.7mg，15％)。[0937]化合物68和69的制备[0938][0939]遵循与用于合成化合物63所述的程序类似的程序制备化合物68和69，使用中间体i-28a和中间体i-48作为起始材料。[0940]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7n)/dcm，梯度从0；100至10:90)纯化。将残余物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从80:20到0:100)纯化。将残余物溶于etoac中，并用nahco3(饱和水溶液)洗涤。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，以得到化合物69(12mg，7％)和化合物68(10mg，6％)。[0941]化合物70和71的制备[0942][0943]遵循与用于合成化合物63所述的程序类似的程序制备化合物70和71，使用中间体i-28a和中间体i-35作为起始材料。[0944]将粗产物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7n)/dcm，梯度从0:100至10:90)纯化。将残余物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从67:33到50:50)纯化，以得到化合物70和化合物71。将化合物分别溶解于etoac中，并用nahco3(饱和水溶液)洗涤。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，以得到化合物70(65mg，34％)和化合物71(18mg，9％)。[0945]化合物72的制备[0946][0947]遵循与用于合成化合物63所述的程序类似的程序制备化合物72，使用中间体i-28a和中间体i-42作为起始材料。[0948]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7n)/dcm，梯度从0:100至10:90)纯化，以得到化合物72(105mg，55％)。[0949]化合物73和74的制备[0950][0951]遵循与用于合成化合物63所述的程序类似的程序制备化合物73和74，使用中间体i-28a和中间体i-44作为起始材料。[0952]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7n)/dcm，梯度从0:100至10:90)纯化。通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：(10mmnh4hco3/nh4ohph＝9的水溶液)/acn，梯度从80:20到60:40)进行第二纯化。将产物溶解于dcm中，并用nahco3(饱和水溶液)洗涤。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发，以给出非对映异构体的混合物(112mg)。通过手性sfc(固定相：chiralpakig5μm250*20mm，流动相：55％co2，45％meoh(0.3％i-prnh2))进行纯化，并提供级分a和级分b。[0953]将级分a吸收在二乙醚中，并用hcl(在i-proh中的6n溶液)处理。在真空中蒸发溶剂，以得到呈白色固体的化合物73(53mg，15％)。[0954]将级分b进行相同处理，以得到化合物74(35mg，10％)。[0955]化合物75和76的制备[0956][0957]遵循与用于合成化合物63所述的程序类似的程序制备化合物75和76，使用中间体i-28a和中间体i-3a作为起始材料。[0958]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，dcm/meoh，梯度从100:0至90:10)纯化。通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从75:25到57:43％)进行第二纯化。添加nahco3(饱和水溶液)，并用将产物用dcm萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤并在真空中蒸发溶剂，以得到呈白色固体的化合物75(43.8mg，6％)和化合物76(51.8mg，7％)。[0959]化合物77和78的制备[0960][0961]遵循与用于合成化合物63所述的程序类似的程序制备化合物77和78，使用中间体i-28a和中间体i-38作为起始材料。[0962]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，dcm/meoh，梯度从100:0至90:10)纯化。通过rphplc(固定相：c18xbridge30x100mm5μm)流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从90:10到60:40)进行第二纯化，以得到呈白色固体的化合物77(62mg，34％)和化合物78(70mg，38％)。[0963]化合物79的制备[0964][0965]在室温和n2气氛下将中间体i-40(96.1mg，0.49mmol)、中间体i-19a(94.3mg，0.58mmol)和ti(oi-pr)4(cas：546-68-9；0.21ml，0.73mmol)溶于dcm(2.0ml)中。将反应混合物搅拌16h，冷却至0℃，并滴加甲基溴化镁(在thf中1.4m，1.73ml，2.42mmol)。将反应混合物在该温度下搅拌15min，并在室温搅拌1h。将混合物用nh4cl(饱和水溶液)处理，用dcm稀释，并将混合物通过硅藻土垫过滤。将有机层分离，干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，etoac/meoh，梯度从100:0至90:10)纯化。将残余物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水(0.25％水溶液)/acn，梯度从90:10到65:35)纯化。使用scx-2柱(将其用meoh洗涤)纯化残余物，并将产物用nh3(在meoh中的7n)洗脱。将级分在真空中蒸发，并且减残余物在干燥器中于50℃干燥，以得到呈浅黄色固体的化合物82(20mg，21％)[0975]化合物83的制备[0976][0977]遵循与用于合成化合物82所述的程序类似的程序制备化合物83，使用中间体i-56和中间体i-86作为起始材料。[0978]将粗混合物反相([65mmnh4oac/acn(90:10)]/[acn/meoh(1:1)]，梯度从91:19到45:55)纯化，以得到呈白色固体的化合物83(45mg，28％)。[0979]化合物84的制备[0980][0981]遵循与用于合成化合物82所述的程序类似的程序制备化合物84，使用中间体i-86和中间体i-62作为起始材料。[0982]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，dcm/meoh，梯度从100:0至96:4)纯化。将残余物在et2o中研磨，以得到黄色油状物(100mg)。[0983]将残余物吸收于dcm中，并用hcl(在1,4-二噁烷中4n，1当量)处理。在真空中蒸发溶剂，并且将产物在dipe中研磨，以得到呈微粉色固体的化合物84(93mg，38％)。[0984]化合物85、86和87的制备[0985][0986]将k2co3(545mg，3.94mmol)添加至中间体i-67(33mg，1.45mmol)和中间体i-3ar(250mg，1.31mmol)在acn(8ml)中的溶液。将反应混合物在70℃搅拌20h。将反应用etoac稀释，通过过滤，用etoac洗涤，并将滤液在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7n)/dcm，梯度从0:100至5:95)纯化。通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从80:20到0:100)进行第二纯化，以得到化合物85(95mg，19％)。通过手性sfc(固定相：chiralcelod-h5μm250x21.2mm，流动相：75％co2，25％i-proh(0.3％i-prnh2))纯化，提供级分a(35mg)和级分b(36mg，7％)。[0987]将级分a(35mg)溶解在叔丁基甲基醚(2ml)中，并在搅拌下添加hcl(2m，0.14ml，0.27mmol)。将所得的沉淀物过滤并在50℃在真空下干燥，以得到呈二盐酸盐的化合物86(38mg)。[0988]对级分b(saalonso_3593)进行与级分a报道的处理类似的处理，以得到产物87。[0989]化合物88的制备[0990][0991]遵循与用于合成化合物85、86和87所述的程序类似的程序制备化合物88，使用中间体i-73和中间体i-44作为起始材料。[0992]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，dcm/nh3(在meoh中的7n)，梯度从100:0至98:2)纯化。通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从67:33到50:50)进行第二纯化。将水相用etoac萃取。将合并的有机萃取物干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，以得到呈黄色油状物的化合物88(114mg，38％)。[0993]化合物89的制备[0994][0995]将中间体i-3a(45.6mg，0.24mmol)和k2co3(90.3mg，0.65mmol)添加至中间体i-73(50.0mg，0.22mmol)在acn(1.74ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在80℃搅拌过夜。添加水并且将混合物用dcm萃取。将合并的有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7m)/dcm，梯度从0:100至10/90)纯化，以得到呈浅黄色油状物的化合物89(27mg，32％)。[0996]化合物90的制备[0997][0998]将hcl(在i-proh中6m，0.16ml，1.0mmol)添加至化合物89(14.0mg，36.5μmol)在et2o(0.1ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌4h。将溶剂在真空中浓缩。添加叔丁基甲基醚，并将混合物超声处理5min。将溶剂在真空中蒸发。重复该过程直至获得固体，将其在真空下干燥，以得到呈黄色固体的化合物90(16.4mg，98％)。[0999]化合物91的制备[1000][1001]遵循与用于合成化合物89所述的程序类似的程序制备化合物91，使用中间体i-67和中间体i-10a作为起始材料。[1002]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，dcm/meoh，梯度从100:0至95:5)纯化。通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从67:33到50:50)进行第二纯化。[1003]将残余物(65mg)溶于et2o(0.3ml)中，并添加hcl(在i-proh中7n)(0.3ml)。将混合物在室温搅拌16h。将溶剂在真空中浓缩。添加叔丁基甲基醚，并将混合物超声处理10min。将溶剂在真空中去除。重复该过程，直到获得固体，将其在50℃在真空下干燥。将残余物溶于meoh(1ml)中，并将混合物在真空中浓缩。添加叔丁基甲基醚，并将混合物超声处理10min。在真空中蒸发溶剂，并且将固体在干燥器中于50℃干燥，以得到呈白色固体的化合物91(45mg，30％)[1004]化合物92的制备[1005][1006]遵循与用于合成化合物89所述的程序类似的程序制备化合物92，使用中间体i-44和中间体i-67作为起始材料。[1007]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，dcm/nh3(在meoh中的7n)，梯度从100:0至95:5)纯化。通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从75:25到57:43)进行第二纯化，以得到油状物(65mg)。[1008]将残余物(56mg)溶于叔丁基甲基醚(2ml)中，并在搅拌下添加hcl(在et2o中2m，0.29ml，0.58mmol)。滤出沉淀物，并将产物在50℃的烘箱中在真空下干燥，以得到呈白色固体的化合物92(65mg)。[1009]化合物93和94的制备[1010][1011]将化合物50通过手性sfc(固定相：chiraceloj-h5μm250*30mm，流动相：82％co2，18％i-proh(0.3％i-prnh2))纯化，以得到级分a(44mg)和级分b(42mg)。[1012]将级分a(44mg，0.11mmol)溶解在et2o(2.38ml)中，并添加hcl(在et2o中2n，0.17ml，0.34mmol)。过滤沉淀物，以给出呈白色固体的化合物93(38.4mg，73％)。[1013]遵循与用于合成产物93所述的程序类似的程序获得产物94(39.2mg，79％)，使用级分b作为起始材料。[1014]化合物95和96的制备[1015][1016]将化合物43(364mg)通过手性sfc(固定相：chiralpakad-h5μm250*30mm，流动相：80％co2，20％etoh(0.3％i-prnh2))纯化，以得到级分a(141mg)和级分b(149mg)。[1017]将级分a(130mg，0.36mmol)溶解在叔丁基甲基醚(2ml)中，并在搅拌下添加hcl(在et2o中2m，2ml，4mmol)。过滤沉淀物，并将化合物在真空下于50℃的烘箱中干燥。将粗产物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从80:20到0:100)纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩。将所得的产物溶于叔丁基甲基醚(2ml)中，并在搅拌下添加hcl(在et2o中2m，2ml，4mmol)。将所得的沉淀物过滤并在50℃在真空下干燥，以得到化合物95(95mg，61％)。[1018]将级分b(120mg，0.33mmol)溶解在叔丁基甲基醚(2ml)中，并在搅拌下添加hcl(在et2o中2m，2ml，4mmol)。过滤沉淀物，并将化合物在50℃的烘箱中在真空下干燥，以得到化合物96(90mg，63％)。[1019]化合物97的制备[1020][1021]将化合物44(140mg)通过手性sfc(固定相：chiralpakad-h5μm250*30mm，流动相：80％co2，20％meoh(0.3％i-prnh2))纯化，以得到级分a(54mg)和级分b(49mg)。[1022]将级分b(49mg，0.13mmol)溶解在叔丁基甲基醚(2ml)中，并在搅拌下添加柠檬酸(49.2mg，0.26mmol)。将所得的沉淀物过滤并在50℃在真空下干燥48小时，以得到化合物97(55mg，56％)。[1023]化合物98的制备[1024][1025]将中间体i-73(65.0mg，0.27mmol)溶解在acn(2.2ml)中，并添加中间体i-10a(65.8mg，0.30mmol)和k2co3(113mg，0.82mmol)。将反应混合物在80℃搅拌16h。将混合物用水稀释并且用dcm进行萃取。将有机物干燥(na2so4)，过滤并在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7n)/dcm，梯度从0:100至10:90)纯化。将残余物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从53:46到36:64)纯化。将残余物溶于etoac中，并用nahco3(饱和水溶液)洗涤。将有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩。[1026]将残余物(25mg)溶于et2o(0.1ml)中，并添加hcl(在i-proh中7n)(0.1ml)。将混合物在室温搅拌16h，并将溶剂在真空中蒸发。添加叔丁基甲基醚，并将混合物超声处理10min。将溶剂在真空中浓缩。重复该过程直至获得固体，将其在真空下干燥，以得到呈膏状化合物98(35mg，26％)。[1027]化合物99、100和101的制备[1028][1029]遵循与用于合成化合物98所报道的程序类似的程序制备化合物99、100和101，使用中间体i-73和中间体i-46作为起始材料。[1030]将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7n)/dcm，梯度从0:100至10:90)纯化。将残余物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从80:20到0:100)纯化。将残余物溶解在etoac中，用nahco3(饱和水溶液)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，以得到呈白色固体的化合物99(92.6mg，38％)。[1031]通过手性sfc(固定相：chiralpakad-h5μm250*30mm，流动相：80％co2、20％i-proh(0.3％i-prnh2))进行纯化，以得到级分a(37mg)和级分b(37mg)。[1032]将产物分别溶解在et2o(0.2ml)中，并添加hcl(在i-proh中7n)(0.2ml)。将混合物在室温搅拌16h。在真空中蒸发溶剂，并添加叔丁基甲基醚。将混合物超声处理10min，并在真空中除去溶剂。重复该过程，直到获得固体，将其在50℃在真空下干燥5h，以得到呈固体的化合物100(42.3mg，15％)和化合物101(44.3mg，15％)。[1033]化合物102的制备[1034][1035]向中间体92(123mg，0.26mmol)在dcm(1ml)中的溶液中添加tfa(0.35ml，4.62mmol)。将反应混合物在室温搅拌18h。将反应在真空中浓缩至干。将残余物通过离子交换色谱法(使用isolutescx2柱，并用meoh、然后用nh3(在meoh中7m)洗脱)纯化。收集级分，并且在真空中蒸发溶剂。将残余物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从80:20到60:40)纯化。收集所希望的级分，并添加na2co3(饱和水溶液)。将产物用dcm萃取。在真空中蒸发溶剂，以得到化合物102(30mg，33％)。[1036]化合物103的制备[1037][1038]将tfa(0.24ml，3.18mmol)添加至中间体91(84.0mg，0.17mmol)在dcm(1.3ml)中的溶液中，并将反应混合物在室温搅拌18h。将反应在真空中浓缩。将粗混合物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从80:20到60:40))纯化。将残余物用水和nahco3(饱和水溶液)洗涤，并用etoac萃取。将有机层干燥(na2so4)，过滤，并在真空中蒸发溶剂，以得到化合物103(40mg，65％)。[1039]化合物104的制备[1040][1041]将tfa(0.78ml，10.2mmol)添加至中间体93(150mg，0.28mmol)在dcm(1.55ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温搅拌3天。在真空中蒸发溶剂，并将残余物溶于纯tfa(1ml)中。将混合物在室温搅拌16h。将溶剂在真空中蒸发。将残余物溶解在dcm中，并用na2co3(饱和水溶液)洗涤。将有机层干燥(na2so4)，过滤，并将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过rphplc((固定相：c18xbridge30x100mm5μm)，流动相：nh4hco3(0.25％水溶液)/acn，梯度从80:20到60:40))纯化。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩。用etoac萃取水相(3次)。将合并的有机层干燥(na2so4)，过滤并在真空中浓缩，以得到化合物104(58mg，51％)。[1042]化合物105和106的制备[1043][1044]在室温将中间体i-28a(120mg，0.67mmol)和ti(oi-pr)4(cas：546-68-9；0.70ml，2.36mmol)添加至中间体i-54(155mg，0.71mmol)在无水thf(2.22ml)中的溶液中。将反应混合物搅拌18h。将混合物蒸馏并在真空中干燥。添加无水thf(2.22ml)，并将混合物冷却至0℃。滴加甲基溴化镁(在thf中1.4m，2.41ml，3.37mmol)，并且将反应混合物在0℃搅拌15min，并且在室温搅拌15h。添加nh4cl(饱和水溶液，2ml)，并将混合物用dcm和meoh(9:1)萃取(3次)。将合并的有机层干燥(mgso4)，过滤并在真空中浓缩。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，nh3(在meoh中的7n)/dcm，梯度从0:100至10:90)纯化，以得到混合物化合物(60mg，23％)。通过反相([65mmnh4oac/acn(90:10)]/[acn/meoh(1:1)]，梯度从95:5至63:37)纯化混合物(170mg，0.43mmol)。收集所希望的级分并将其在真空中浓缩。通过反相([h2o(25mmnh4hco3)/[mecn/meoh(1:1)]，梯度从81:19到45:55)进行另一次纯化，以得到级分a(52mg，87％)和级分b(30mg，50％)。[1045]将产物分别吸收于dcm中，并用hcl(在1,4-二噁烷中4n，2当量)处理。在真空中蒸发溶剂，并将产物在et2o中研磨，以得到呈白色固体的化合物106(51mg)和化合物105(27mg)。[1046]化合物107的制备[1047][1048]在室温，将k2co3(44.7mg，0.32mmol)添加至中间体94(54.7mg，0.11mmol)在meoh(0.29ml)和h2o(0.11ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在60℃搅拌16h，然后在真空中蒸发有机溶剂。将混合物用etoac萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，dcm/meoh，梯度从100:0至90:10)纯化，以得到呈黄色油状物的化合物107(33.2mg，74％)。将残余物(33.2mg)吸收于dcm中，并用hcl(在1,4-二噁烷中4n，1当量)处理。在真空中蒸发溶剂，并且将产物在et2o中研磨，以得到呈白色固体的化合物107(14mg，29％)。[1049]化合物108的制备[1050][1051]将dipea(0.11ml，0.64mmol)添加至4-氯-2,6-二甲基嘧啶[4472-45-1](61.1mg，0.43mmol)、中间体90(137mg，0.47mmol)在1-丁醇(5ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在80℃搅拌20h，并且在110℃搅拌2h。将混合物用dcm稀释，并添加nahco3(饱和水溶液)。将有机相分离，干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过快速柱色谱法(sio2，dcm:meoh(10:1)/dcm，梯度从0:100到80:20)纯化。将残余物(97mg)溶解在dcm(5ml)中，并添加hcl(在1,4-二噁烷中4m，60.5μl，0.24mmol)。在真空中浓缩溶剂，并将产物在et2o中研磨。将固体通过过滤收集，并且干燥，以得到呈白色固体的化合物108(90mg，48％)。[1052]化合物109的制备[1053][1054]在密封管中并在n2气氛下在室温将naot-bu(31.0mg，0.32mmol)添加至pd2dba3(5.91mg，6.46μmol)和t-buxphos(8.22mg，19.4μmol)的1,4-二噁烷(15ml)中的搅拌悬浮液中。将反应混合物在95℃搅拌5min，然后在n2气氛下在95℃将中间体i-90(45.0mg，0.16mmol)和4-溴-2-甲氧基-6-甲基吡啶(cas：1083169-00-9；26.1mg，0.13mmol)在1,4二噁烷(5ml)中的混合物添加至反应混合物。将反应混合物在100℃搅拌1.5h。将混合物用nahco3(饱和水溶液)稀释，并用dcm萃取。将有机层干燥(mgso4)，过滤，并且将溶剂在真空中蒸发。将粗混合物通过反相([65mmnh4oac/acn(90:10)]/[acn:meoh(1:1)]，梯度从90:10到54:46)纯化。将残余物(18mg)吸收于dcm中，并用hcl(在1,4-二噁烷中4n，1当量)处理。在真空中蒸发溶剂，以得到呈白色固体的化合物109(16mg，26％)。[1055]以下化合物的制备遵循例示于实验部分的方法。在没有指明盐形式的情况下，该化合物作为游离碱获得。[1056]表1[1057][1058][1059][1060][1061][1062][1063][1064][1065][1066][1067][1068][1069][1070][1071][1072][1073][1074][1075][1076][1077][1078][1079]如本文提供的化合物中的盐化学计量或酸含量的值是以实验方式获得的那些。通过1hnmr综合分析和/或元素分析确定在本文中报道的盐酸的含量。[1080]分析部分[1081]熔点[1082]值是峰值，并且获得的值具有与这个分析方法通常相关的实验不确定性。[1083]dsc823e(a):对于多种化合物，用dsc823e(梅特勒-托利多(mettler-toledo))装置来确定熔点。使用10℃/分钟的温度梯度来测量熔点。最高温度是300℃。值是峰值(a)。[1084]lcms[1085]通用程序[1086]使用lc泵、二极管阵列(dad)或uv检测器以及如在对应的方法中所指定的柱进行高效液相色谱法(hplc)测量。如果必要的话，包括其他检测器(参见下文的方法表格)。[1087]将来自柱的流带至配置有大气压离子源的质谱仪(ms)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(mw)的离子和/或准确质量单一同位素分子量的离子在技术人员的知识内。利用适当的软件进行数据采集。[1088]通过其实验保留时间(rt)和离子描述化合物。如果未在数据表中不同地指定，那么报道的分子离子对应于[m+h]+(质子化的分子)和/或[m-h]-(去质子的分子)。在该化合物不是直接可电离的情况下，指定该加合物的类型(即[m+nh4]+、[m+hcoo]-、[m+ch3coo]-等)。对于具有多种同位素模式的分子(br、cl等)来说，报道的值是针对最低同位素质量获得的值。获得的所有结果具有通常与所使用的方法相关的实验不确定性。[1089]在下文中，“sqd”单四极检测器、“msd”质量选择检测器、“qtof”四极杆飞行时间、“rt”室温、“beh”桥接的乙基硅氧烷/二氧化硅杂合物、“hss”高强度二氧化硅、“csh”带电的表面杂化、“uplc”超高效液相色谱法、“dad”二极管阵列检测。[1090]表2.lc-ms方法(以ml/min表示流速；以℃表示柱温(t)；以min表示运行时间)。[1091][1092][1093][1094][1095]表3.分析数据-熔点(m.p.)和lcms：[m+h]+意指该化合物的游离碱的质子化质量，[m-h]-意指该化合物的游离碱的去质子质量或指定的加合物的类型([m+ch3coo]-)。rt意指保留时间(以min计)。对于一些化合物，确定准确质量。[1096][1097][1098][1099][1100][1101][1102][1103]n.d.意指未确定。[1104]旋光度[1105]在具有钠灯的铂金-埃尔默(perkin-elmer)341旋光计上测量旋光度并且报道如下：[α]°(λ，cg/100ml，溶剂，t℃)。[1106][α]λt＝(100α)/(lxc)：其中l是以dm计的路径长度，并且c是关于在温度t(℃)和波长λ(以nm计)下的样品的以g/100ml计的浓度。如果所使用的光波长是589nm(钠d线)，那么可以改为使用符号d。始终应给出旋转符号(+或-)。当使用这一方程式时，常常在旋转后的括号中提供浓度和溶剂。使用度报道旋转并且浓度不带单位地给出(将其假定为g/100ml)。[1107]表4旋光度数据[1108][1109]sfcms-方法[1110]用于sfc-ms方法的通用程序[1111]使用分析型超临界流体色谱法(sfc)系统来进行sfc测量，该系统由以下构成：用于递送二氧化碳(co2)和改性剂的二元泵、自动进样器、柱温箱、配备有经得起400巴的高压流动池的二极管阵列检测器。如果配置有质谱仪(ms)，来自该柱的流被引至该(ms)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(mw)的离子在技术人员的知识内。利用适当的软件进行数据采集。[1112]表5.分析型sfc-ms方法(以ml/min表示流速；以℃表示柱温(t)；以分钟表示运行时间，以巴表示背压(bpr))。[1113][1114][1115]表6.分析的sfc数据-rt意指保留时间(以分钟计)，[m+h]+意指该化合物的质子化质量，方法是指用于对映体纯的化合物的(sfc)ms分析的方法。[1116][1117][1118]nmr[1119]对于许多化合物，使用氯仿-d(氘代氯仿，cdcl3)或dmso-d6(氘代dmso，二甲基-d6亚砜)作为溶剂在brukerdpx-400光谱仪(在400mhz运行)上，在brukeravancei(在500mhz运行)上记录1hnmr光谱。化学位移(δ)被报告为相对于四甲基硅烷(tms)(用作内部标准)的百万分率(ppm)。[1120]表7.1hnmr结果[1121][1122][1123][1124][1125][1126][1127][1128]药理学实例[1129]1)oga-生化测定[1130]该测定基于重组人脑膜瘤表达的抗原5(mgea5)(也称为o-glcnac酶(oga))对荧光素单-β-d-n-乙酰基-葡糖胺(fm-glcnac)(mariappa等人,2015,biochemj[生物化学杂志]470:255)的水解的抑制。水解fm-glcnac(马克基因技术公司(markergenetechnologies)，目录号m1485)导致β-d-n-葡糖胺乙酸盐和荧光素的形成。后者的荧光可以在485nm的激发波长和538nm的发射波长下测量。酶活性的增加导致荧光信号的增加。在定向基因公司(origene)(目录号tp322411)购买全长oga酶。将酶在-20℃储存在25mmtris.hcl，ph7.3，100mm甘氨酸，10％甘油中。作为参考化合物测试thiametg和glcnacstatin(yuzwa等人,2008naturechemicalbiology[自然化学生物学]4:483；yuzwa等人.2012naturechemicalbiology[自然化学生物学]8:393)。该测定在补充有0.005％吐温-20的200mm柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液中进行。将35.6gna2hpo42h2o(西格玛公司(sigma)，#c0759)溶于1l水中，以得到200mm溶液。将19.2g柠檬酸(默克公司(merck)，#1.06580)溶解在1l水中，得到100mm溶液。用柠檬酸溶液将磷酸钠溶液的ph调节至7.2。用于终止反应的缓冲液由500mm碳酸盐缓冲液(ph11.0)组成。734mg[1131]将fm-glcnac溶于5.48mldmso中，以得到250mm溶液，并储存在-20℃。oga以2nm浓度使用，并且fm-glcnac以100um最终浓度使用。在测定缓冲液中制备稀释液。[1132]将50nl溶于dmso中的化合物分配到黑色proxiplatetm384plus测定板(珀金埃尔默公司(perkinelmer)，#6008269)上，随后添加3μlfl-oga酶混合物。将板在室温预孵育60min，然后添加2μlfm-glcnac底物混合物。最终的dmso浓度不超过1％。将板以1000rpm短暂离心1min，并在室温孵育6h。为了终止反应，添加5μlstop缓冲液并以1000rpm再次离心1min。在赛默科技公司(thermoscientific)fluoroskanascent或珀金埃尔默公司envision中定量荧光，激发波长为485nm，发射波长为538nm。[1133]对于分析，通过最小平方和方法拟合最佳拟合曲线。由此获得ic50值和希尔系数。高对照(无抑制剂)和低对照(标准抑制剂的饱和浓度)用于定义最小值和最大值。[1134]2)oga-细胞测定[1135]在杨森公司(janssen)建立了可诱导p301l突变型人tau(同种型2n4r)的hek293细胞。thiamet-g用于板验证(高对照)和作为参考化合物(参考ec50测定验证)。通过如前所述使用检测o-glcn酰化残基的单克隆抗体(ctd110.6；细胞信号传导公司(cellsignaling)，#9875)对o-glcn酰化蛋白进行免疫细胞化学(icc)检测来评估oga抑制(dorfmueller等人,2010chemistry&biology[化学与生物学],17:1250)。oga的抑制将导致o-glcn酰化蛋白水平的增加，导致实验中的信号增加。细胞核用hoechst染色以提供细胞培养物质量对照和粗略估计的即时化合物毒性(如果有的话)。icc图片用珀金埃尔默公司operaphenix平板显微镜成像，并用提供的软件珀金埃尔默公司harmony4.1进行定量。[1136]按照标准程序，将细胞在dmem高葡萄糖(西格玛公司，#d5796)中繁殖。细胞测定前2天将细胞分开，计数并接种于聚-d-赖氨酸(pdl)包被的96孔(葛莱娜公司(greiner)，#655946)平板(细胞密度为12,000个细胞/cm2(4,000个细胞/孔))的100μl测定培养基中(低葡萄糖培养基用于降低glcn酰化的基础水平)(park等人,2014thejournalofbiologicalchemistry[生物化学杂志]289:13519)。在化合物测试当天，从测定板中取出培养基并用90μl新鲜测定培养基补充。将10μl的10倍终浓度的化合物添加至孔中。在细胞孵育箱中孵育6小时之前不久将板离心。dmso浓度设定为0.2％。通过施加真空丢弃培养基。为了细胞染色，除去培养基，并且用100μld-pbs(西格玛公司，#d8537)洗涤细胞一次。从下一步开始，除非另有说明，否则测定体积总是50μl，并且在没有搅拌和室温进行孵育。将细胞在50μl4％多聚甲醛(pfa，阿法埃莎公司(alphaaesar)，#043368)pbs溶液中在室温固定15分钟。然后弃去pfapbs溶液并在10mmtris缓冲液(生命技术公司(lifetechnologies)，#15567-027)、150mmnacl(生命技术公司(lifetechnologies)，#24740-0110)，0.1％tritonx(阿法埃莎公司，#a16046)(ph7.5(icc缓冲液))中洗涤细胞一次，之后在相同缓冲液中透化10分钟。随后将样品在含有5％山羊血清(西格玛公司，#g9023)的icc中在室温封闭45-60分钟。然后将样品与第一抗体(来自商业提供者的1/1000，参见上文)在4℃孵育过夜，并且随后在icc缓冲液中洗涤3次，持续5分钟。将样品与第二荧光抗体(1/500稀释，生命技术公司，#a-21042)一起孵育，并用在icc(生命技术公司，#h3570)中终浓度为1μg/ml的hoechst33342进行细胞核染色1小时。在分析之前，将样品在icc碱缓冲液中手动洗涤2次，持续5分钟。[1137]使用珀金埃尔默公司phenixopera使用水20x物镜并每孔记录9个视野进行成像。在488nm处的强度读数用作[1138]孔中总蛋白质的o-glcn酰化水平的量度。为了评估化合物的潜在毒性，使用hoechst染色计数细胞核。使用参数非线性回归模型拟合计算ic50值。作为最大抑制，在每个平板上存在200um浓度的thiametg。另外，在每个板上计算thiametg的浓度应答。[1139]表8.生化测定和细胞测定中的结果。[1140][1141][1142][1143][1144][1145][1146]使用[3h]-配体的离体oga占用测定[1147]药物治疗和组织制备[1148]将雄性nmri或c57bl6j小鼠通过口服(p.o.)施用载体或化合物来处理。施用后24小时处死动物。立即从颅骨取出脑，分离出半球，用于离体oga占用测定的右半球在干冰冷却的2-甲基丁烷(-40℃)中快速冷冻。使用leicacm3050恒冷箱切片机(比利时徕卡公司(leica))切割二十μm厚的矢状切片，将其解冻安装在显微镜载玻片(superfrostplusslides，赛默飞世尔科技公司(thermofisherscientific))上，并在-20℃储存直到使用。解冻后，将切片在冷空气流下干燥。在孵育之前不洗涤切片。严格控制用3nm[3h]-配体进行的10分钟孵育。将(来自化合物处理和载体处理的动物的)所有脑切片进行平行地孵育。孵育后，将过量的[3h]-配体在冰冷的缓冲液(pbs1x和1％bsa)中洗涤2次10分钟，随后快速浸入蒸馏水中。然后将这些切片在冷空气流下干燥。[1149]定量放射自显影和数据分析[1150]使用具有m3视觉分析软件的β-成像仪(拜斯倍斯实验室(biospacelab)，巴黎)测量脑切片的前脑区域中的放射性。将特异性结合计算为在thiamet-g(10μm)处理的切片中测量的总结合和非特异性结合之间的差。将来自药物处理的动物的切片中的特异性结合标准化为来自载体处理的小鼠的切片中的结合，以计算通过药物的oga占用的百分比。[1151]当前第1页1 2 3 当前第1页1 2 3