[0001]本发明涉及保藏号为dsm24514的两歧双歧杆菌(bifidobacteriumbifidum)菌株syn-hi-001的非存活细菌，或其一个或多个片段，用于治疗，特别是用于治疗胃肠道病症，例如肠易激综合症。此外，本发明涉及一种组合物，其包含所述非存活细菌作为活性成分，用于治疗，特别是用于治疗胃肠道病症。此外，本发明涉及制备保藏号为dsm24514的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌或其一个或多个片段的方法，以及通过本发明的方法获得的细菌用于治疗，特别是用于治疗胃肠道病症的用途。
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：：[0002]在本说明书中，引用了许多文献，包括专利申请和制造商的手册。这些文献的公开内容完整地通过引用并入作为参考，但不应视为与本发明的可专利性有关。更具体地，所有引用的文献通过引用的方式被并入，如同每个单独文献被具体地和单独地指出通过引用并入一样。[0003]胃肠道病症通常与胃肠道功能损伤有关和/或与不良胃肠道炎症活动有关，并且广泛流行。例如，肠易激综合症(ibs)(ema/chmp/60337/2013)是这些疾病中最常见的疾病之一，估计在欧洲人口中流行率高达20％。ibs的特征是功能性胃肠道症状反复发作，无可证实的器质性疾病。ibs的常见症状包括腹痛，肠胃气胀，腹胀，腹泻和/或便秘。ibs患者的生活质量明显受损，并且已发现这甚至比患有其他慢性疾病的患者还要糟(chang等，2004)。[0004]根据欧洲药品管理局(ema)的建议，可以通过romeiii标准来诊断ibs，该标准目前被广泛接受为定义ibs的科学标准。当前的罗马iii标准将ibs人群定义为：最近3个月每月至少3天出现腹痛或不适，且症状出现在至少6个月前，并伴有以下2条或多条标准：(1)排便后症状改善，(2)发作时伴有排便频率改变或(3)大便性状改变(ema/chmp/60337/2013；rome，2006)。[0005]导致ibs患者症状特征多样的病因仍未完全理解，并且由于ibs人群的病理学异质性，仍缺乏有效的标准疗法。目前，ibs的治疗主要集中于患者的主要症状。但是，大多数药物的疗效不高，通常缺乏高质量的证据(camilleri和ford，2017)。[0006]结肠活检研究一致表明，ibs患者的肠道屏障功能发生改变，与健康受试者相比，观察到通透性显著更高(piche等，2009；vivinus-nébot等，2012)。因此，一种假设是，由于肠屏障通透性的这种增加，发生兼性病原细菌的易位，继而导致了ibs症状，例如腹痛，尿急，便秘和腹泻。为了增强粘液屏障活性并恢复肠道屏障，已建议使用粘膜屏障保护剂(如明胶单宁酸盐)作为重新建立生理肠道稳态的潜在方法(lopetuso等人，2015)。[0007]体外研究表明，特定的益生菌菌株能够增强肠道屏障功能，从而解释了为什么某些细菌有助于ibs的治疗(resta-lenert等，2006；eun等，2011)。基于这些发现，益生菌在ibs的治疗中变得越来越重要。ep-b1-2481299描述了一种两歧双歧杆菌的特定菌株，当将该双歧杆菌配制成益生菌制剂时，已经发现可以显著地改善ibs的症状：腹痛/不适，胃肠气胀/腹胀，尿急和消化障碍。[0008]但是，各种菌株的作用方式和功效是高度菌株特异性的，甚至亲缘关系密切的菌株在功效上也可存在显著差异(brenner和chey，2009；layer等，2011)。该菌株特异性已在植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)mf1928和植物乳杆菌lp299v对ibs症状的功效的研究中得到证明。尽管植物乳杆菌lp299v菌株可显著地改善ibs症状(ducrotté等人，2012)，但密切相关的菌株植物乳杆菌mf1298导致ibs患者的症状显著恶化(farup等人，2012)。因此，尽管它们之间有密切的亲缘关系，但两种菌株在功效上却有很大不同。此外，发现许多其他菌株在肠易激综合症的治疗上根本无效(bausserman和michail，2005；niv等，2005；kim等，2005；sen等，2002)。此外，尽管使用益生菌来增强胃肠道健康已经提出了多年并且被普遍认为是安全的，但是已经表明，患有严重疾病的患者通过口服益生菌可能具有更大的严重并发症风险。besselink等人，2008年报道了一项对预测的严重急性胰腺炎的患者进行的临床试验，该研究表明，与安慰剂相比，多物种活益生菌制剂作为预防措施使用时与死亡风险增加相关。[0009]因此，尽管当前正投入大量的努力来获得对胃肠道病症的更透彻理解和开发合适的治疗方法，但是仍然需要提供有效且安全的替代方法来替代当前可用的方法。[0010]该需求通过提供权利要求书中表征的实施方案而得以满足。[0011]发明描述[0012]因此，本发明涉及，保藏在dsm24514保藏号下的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌，或其一个或多个片段，用于治疗(即用作药物/用于治疗疾病)。特别地，本发明还涉及这些非存活细菌或其一个或多个片段，用于治疗胃肠道病症，例如ibs。[0013]本发明进一步涉及包含所述非存活细菌或其一个或多个片段的组合物，用于治疗，特别是用于治疗胃肠道病症，例如ibs。特别地，本发明涉及包含所述非存活细菌或其一个或多个片段作为活性成分的组合物，用于治疗，优选用于治疗胃肠道病症(例如ibs)。此外，本发明涉及制备保藏号为dsm24514的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌或其一个或多个片段的方法，并且涉及通过本发明的方法获得的细菌或其一个或多个片段用于治疗，特别是用于治疗胃肠道病症，例如ibs。本发明还涉及一种治疗胃肠道病症例如ibs的方法，其中该方法包括给有需要的受试者施用以保藏号dsm24514保藏的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌或其一个或多个片段。此外，本发明还涉及以保藏号dsm24514保藏的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌或其一个或多个片段在制备用于治疗胃肠道病症例如ibs的药物中的用途。[0014]根据本发明，非存活细菌是两歧双歧杆菌。双歧杆菌属于放线菌的双歧杆菌科(bifidobacteriaceae)，是革兰氏阳性、非运动性、经常分支的厌氧细菌。它们是包括人类在内的哺乳动物的胃肠道，阴道和口中普遍存在的居住者。而且，它们是构成哺乳动物结肠菌群的主要细菌属之一。该具体的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001于2011年1月26日保藏在德国微生物和培养物保藏中心dsmz(deutschesammlungvonmikroorganismenundzellkulturengmbh(dsmz)，inhoffenstr.7b，38124不伦瑞克，德国)，保藏号为dsm24514。[0015]根据本发明，该细菌可以是其任何生命周期形式，例如营养形式或静止形式，只要它们是非存活的。[0016]本文所用的术语“非存活细菌”是指已失活的细菌，即已死亡的细菌。非存活细菌没有新陈代谢，也不再具有复制能力。细菌是否能够复制可以由本领域技术人员无需过度劳动予以确定，例如通过将细菌铺在琼脂平板上，并分析它们是否能够在适于使所述菌株的存活细菌生长并形成菌落的条件下在所述平板上生长并形成菌落。在这些条件下缺乏菌落形成表明，细菌是非存活的。[0017]根据本发明，术语“非存活细菌”包括完整的非存活细菌以及不再完整的细菌。不再完整的非存活细菌的非限制性实例包括但不限于，显示出细菌细胞壁破坏的细菌。[0018]本发明进一步涉及两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的这些非存活细菌的“一个或多个片段”。这样的片段(一个或多个)可以例如包括构成两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的细菌的大多数分子，但是也可以限于所述细菌的特定组分，例如细菌的细胞壁和/或细胞膜。优选地，所述片段(一个或多个)包含两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的细菌的细胞壁的至少一个或多个分子。更优选地，所述片段(一个或多个)包含存在于两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的细菌中的细胞壁分子的至少60％，例如，至少70％，更优选至少80％，例如至少90％，更优选至少95％，例如至少98％，最优选至少99％。[0019]根据本发明，提供了非存活细菌或其一个或多个片段用于治疗(即，用作药物)。为此，它们可以以允许将其施用于患者并发挥其治疗潜力的任何合适形式提供。例如，可以将非存活细菌或其一个或多个片段配制成如下文详述的组合物，包括药物、化妆品、益生元或食品组合物。[0020]在本发明的上下文中，令人惊讶地发现，热灭活的两歧双歧杆菌syn-hi-001细菌有效地改善了ibs症状。如所附实施例所示，进行了一项随机，双盲，多中心和安慰剂对照研究，该研究提供了令人信服的证据，证明热灭活两歧双歧杆菌syn-hi-001细菌在ibs中具有强有益作用。使用热灭活的两歧双歧杆菌syn-hi-001细菌，对于主要终点，与安慰剂的19.4％应答率相比，达到了33.5％的显著更高的应答率。研究的主要终点是根据ema当前指南建议的复合应答率，定义为：在至少50％的治疗期中，30％改善腹部疼痛以及症状缓解参数的三个最佳类别(腹部疼痛/不适、排便习惯和其他ibs症状)中的至少一个。此外，在治疗结束时，热灭活的两歧双歧杆菌syn-hi-001细菌显著地改善了各单个ibs症状(“主观总体症状评估”(sga)，腹痛，胃肠气胀/腹胀，综合评分1-4，排便相关的不适和疼痛)以及与健康相关的生活质量。尤其是，症状缓解应答率(足够缓解3)有60.18％极其高，在双歧杆菌组中是高度显著的(p＝0.0009)。[0021]就发明人所知，迄今为止，与安慰剂相比，没有热灭活的细菌菌株已经被证实显著地改善ibs症状或其他胃肠道病症。tsuchiya等(2004年)，例如，发现与基线相比，摄入非存活细菌细胞后，ibs症状,疼痛，排便习惯和腹胀没有改善；而对于活益生菌，与基线和非存活细胞相比，这些症状明显改善。其他小组研究了活细胞相比非存活细胞在急性腹泻中的功效，发现活细菌对于治疗功效是重要的(isolauri等，1991；mitra等，1990)。因此，反复发现灭活会影响细菌的功效，这种影响可能是由于菌株对灭活过程的特异性敏感性所造成的。现在，本文提出的研究提供了第一个证据，证明在ibs患者中，两歧双歧杆菌syn-hi-001的热灭活细菌与安慰剂相比可提供显著的结果。因此，本发明首次提供了一种非存活细菌菌株，其在ibs的治疗中具有被证明的体内功效。与基于存活细菌的已确立的用于治疗胃肠道病症的益生菌组合物不同，本发明的这些非存活细菌还提供了降低的与不良副作用相关的风险，这种风险在先前已经报道过，例如，在besselink等人，2008年中针对重病患者报道的。因此，本发明的非存活细菌及其片段提供了一种用于治疗胃肠道病症的有前途和安全的新工具。[0022]如上所述，本发明特别涉及以保藏号dsm24514保藏的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌或其一个或多个片段，用于治疗胃肠道病症。由于受试者中胃肠道病症的存在常与所述受试者的生活质量下降有关，因此本发明还涉及所述非存活细菌或其片段用于改善由胃肠道病症引起或与之相关的生活质量下降的用途。[0023]根据本发明治疗的“胃肠道病症”优选选自肠易激综合症(ibs)，炎性肠病(ibd)，克罗恩氏病，溃疡性结肠炎，贮袋炎(pouchitis)，感染后结肠炎，腹泻(包括艰难梭状芽胞杆菌相关腹泻)，便秘，消化不良和/或相关的消化不良症状，胃轻瘫，肠假性梗阻，排便障碍(obstructeddefecation)，胃肠气胀，腹胀，粪便嵌塞，腹痛，腹部不适，与排便有关的疼痛，排便次数减少/增加，和稀便形式。更优选地，该疾病选自ibs，ibd，克罗恩氏病，溃疡性结肠炎，贮袋炎，感染后结肠炎，腹泻(包括艰难梭菌相关腹泻)，便秘，消化不良和/或相关的消化不良症状，胃轻瘫和肠假性阻塞。甚至更优选地，胃肠道病症选自ibs，ibd，克罗恩病，溃疡性结肠炎，贮袋炎，感染后结肠炎和腹泻病。最优选地，所述疾病是ibs。[0024]本发明进一步涉及包含以保藏号dsm24514保藏的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌或其一个或多个片段的组合物。根据本发明使用的术语“组合物”涉及包含至少本发明的非存活细菌或其一个或多个片段作为活性成分的组合物。特别优选地，组合物中包含的所有两歧双歧杆菌细菌的至少85％，更优选至少90％，例如至少95％，甚至更优选至少98％，甚至更优选至少99％是，以保藏号dsm24514保藏的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌。特别优选地，组合物中包含的所有两歧双歧杆菌细菌的至少99.5％，更优选至少99.9％，最优选100％是，以保藏号dsm24514保藏的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌[0025]组合物可以任选地包含其它分子。这样的其它分子本身可以是活性成分，或者可以是惰性的，并且可以被包括在内以实现多种功能，例如，用于稳定本发明的非存活细菌或其一个或多个片段，或用于延迟，调节和/或激活其功能，或作为可为所述组合物所应用的患者提供额外(健康)益处的化合物。此类其它分子的非限制性实例包括药学上可接受和/或可摄入的载体，佐剂，其他非存活细菌成分，其他药理活性剂，蛋白质和/或肽，特别是富含谷氨酰胺/谷氨酸的蛋白质和/或肽，脂质，碳水化合物，维生素，矿物质和/或微量元素。[0026]术语“药学上可接受的载体”涉及任何类型的无毒固体、半固体或液体填充剂，稀释剂，包囊材料或制剂助剂。这样的载体溶媒的例子包括水，盐水，林格氏溶液和右旋糖溶液。非水性溶媒如不挥发性油和油酸乙酯以及脂质体也可用于本发明。载体适宜地包含少量的添加剂，例如增强等渗性和化学稳定性的物质。这样的材料在使用的剂量和浓度下对受体无毒，包括缓冲剂，例如磷酸盐，柠檬酸盐，琥珀酸盐，乙酸和其他有机酸或其盐；抗氧化剂，如抗坏血酸；低分子量(少于约十个残基)(多肽)肽，例如聚精氨酸或三肽；蛋白质，例如血清白蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸，谷氨酸，天冬氨酸或精氨酸；单糖，二糖和其他碳水化合物，包括纤维素或其衍生物，葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂，如edta；糖醇，例如甘露醇或山梨糖醇；抗衡离子，例如钠；和/或非离子表面活性剂，例如聚山梨酯，泊洛沙姆或peg。根据本发明的特别优选的载体包括磷酸盐缓冲盐溶液，水，乳剂，例如油/水乳剂，各种类型的润湿剂，无菌溶液和有机溶剂，包括dmso。[0027]如本文所用，术语“可摄入的载体”涉及适合于口服施用组合物并帮助摄取组合物的成分的载体。本领域技术人员无需过多劳动即可以选择合适的载体，这取决于所施用的组合物的形式。为了提供一些非限制性实例：纤维素可用作片剂或胶囊剂形式的载体材料；麦芽糖糊精可以用于粉末形式，或者乳制品可以用于以食品形式施用，如下文详述。[0028]如本文所用，术语“佐剂”涉及修饰其他化合物(例如为本发明的非存活细菌或其一个或多个片段)的作用的化合物，所述佐剂化合物当单独给予时几乎没有(即使有的话)直接作用。通常添加佐剂以促进对活性成分的更早、更有效的应答和/或更持久的应答，从而允许使用较低的剂量。佐剂的非限制性实例包括例如氢氧化铝和磷酸铝，有机化合物角鲨烯，以及目前正在测试或已经合格的佐剂化合物，例如qs21，氢氧化铝及其衍生物，油浸(oilimmersions)，脂质a及其衍生物(例如，单磷酰脂质a(mpl)，cpgmotiv，胞壁酰二肽(mdp)，弗氏完全佐剂(fca)，弗氏不完全佐剂(fia)或mf59c(参见,例如和vanmechelen,使用含mpl和qs-21佐剂系统的疫苗的最新临床经验。expertrevvaccines,2011年4月；10(4)：471-86；alvingcr.,脂多糖，脂质a和含脂质a的脂质体作为免疫佐剂，immunobiology,1993apr；187(3-5)：430-46；petrovsky和aguilar,(2004),“疫苗佐剂：当前状态和未来趋势”,immunolcellbiol.82(5)：488–96；weiner等人(1997),含有cpg基序的免疫刺激性寡脱氧核苷酸可有效用作肿瘤抗原免疫的免疫佐剂,pnas94(20)：10833–7；yoo等人,胞壁酰二肽衍生物的佐剂活性增强汉坦病毒灭活疫苗的免疫原性,vaccine,1998jan-feb；16(2-3)：216-24；steiner等(1960)弗氏佐剂及其组分的局部和全身作用,archivesofpathology70：424-434；us6,299,884b，us6,451,325)。[0029]如本文所用，术语“其他非存活细菌组分”涉及非存活细菌或其片段，其中所述细菌不是以保藏号dsm24514保藏的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌。此类非存活细菌的非限制性实例包括乳杆菌属(lactobacillus)，双歧杆菌属(bifidobacterium)，酵母属(saccharomyces)，链球菌属(streptococcus)，肠球菌属(enterococcus)和/或芽孢杆菌属(bacillus)的细菌菌株。[0030]如本文所用，术语“药理活性剂”涉及具有药理活性同时对患者是药学可耐受的化学或生物化合物。非限制性实例包括比沙可啶(bisacodyl)，洛哌丁胺(loperamide)，氨基水杨酸酯(aminosalicylate)，柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)，5-氨基水杨酸(5-aminosalicylicacid)，4-氨基水杨酸(4-aminosalicylicacid)，二苄肼(benzalazine)，二盐酸盐，奥沙拉嗪(olsalazine)，巴沙拉嗪(balsalazide)和次水杨酸铋(bismuthsubsalicylate)。特别地，药理活性剂可以选自已知可用于治疗胃肠道病症的药物。此类药理活性剂的实例是本领域已知的，并在药物注册(例如德国的药典“roteliste”)中记录并持续更新。[0031]如本文所用，术语“肽”描述了由不超过30个氨基酸组成的分子，而“蛋白质”由30个以上的氨基酸组成。肽和蛋白质可以进一步形成二聚体，三聚体和高级寡聚体，即由一个以上可以相同或不同的分子组成。因此，相应的高级结构被称为同二聚体或异二聚体，同三聚体或异三聚体等。术语“肽”和“蛋白质”(其中“蛋白质”与“多肽”可互换使用)也指天然修饰的肽/蛋白质，其中例如通过糖基化，乙酰化，磷酸化等，进行所述修饰。这样的修饰是本领域熟知的。优选，使用富含谷氨酰胺/谷氨酸的蛋白质和/或肽，因为谷氨酰胺/谷氨酸有助于建立肠道细胞和重建受损的肠粘膜。富含谷氨酰胺/谷氨酸的蛋白质和/或肽包括但不限于奶蛋白，大豆蛋白和小麦蛋白。[0032]如本文所用，术语“脂质”根据相关
技术领域：
：定义。适合作为其它化合物的脂质的非限制性实例包括但不限于橄榄油，大豆油，菜籽油和鱼油。[0033]“碳水化合物”是仅由碳、氢和氧组成的有机化合物。适合作为其它化合物的碳水化合物的非限制性实例包括纤维素，乳糖，麦芽糖糊精，菊粉，右旋糖，甘露醇，低聚果糖，mannit，麦芽糖，糊精，山梨糖醇和果糖。[0034]根据本发明，“维生素”包括水溶性以及水不溶性维生素。适合作为其它化合物的维生素的非限制性例子包括维生素a(例如视黄醇，视黄醛和类胡萝卜素，包括β-胡萝卜素)，维生素b1(硫胺素)，维生素b2(核黄素)，维生素b3(例如烟酸，烟酰胺，尼克酰胺)，维生素b5(泛酸)，维生素b6(例如吡哆醇，吡哆胺，吡哆醛)，维生素b7(生物素)，维生素b9(例如叶酸，亚叶酸)，维生素b12(例如氰钴胺，羟基钴胺素，甲基钴胺素)，维生素c(抗坏血酸)，维生素d(例如麦角钙化醇，胆钙化醇)，维生素e(例如生育酚，生育三烯酚)和维生素k(例如叶绿醌，甲基萘醌类)。[0035]特别优选的维生素是b族维生素，例如维生素b1(硫胺素)，维生素b2(核黄素)，维生素b3(例如烟酸，烟酰胺，尼克酰胺)，维生素b5(泛酸)，维生素b6(例如吡哆醇，吡哆胺，吡哆醛)，维生素b7(生物素)，维生素b9(例如叶酸，亚叶酸)和维生素b12(例如氰钴胺，羟基钴胺素，甲基钴胺素)。[0036]适合作为其它化合物的矿矿物质的非限制性实例包括镁，钙，锌，硒，铁，铜，锰，铬，钼，钾，钒，硼和钛。特别优选的矿物质是镁和钙。[0037]如本文所用，术语“痕量元素”涉及，对于生物体，优选地人类生物的生长，发育和/或生理仅非常少量地需要的化学元素。适合作为其它化合物的微量元素的非限制性实例包括碘，铜或铁。[0038]非存活细菌或其片段与此类其他分子之间的合适比例可以由本领域技术人员无需过度劳动地确定。[0039]例如，15-40g，优选18-35g，更优选20-30g，甚至更优选22-28g，最优选25g非存活细菌(或其片段)，可以与50-100g，优选60-90g，更优选65-85g，甚至更优选70-80g，最优选75g的一种或多种碳水化合物(优选一种或多种益生元或麦芽糖糊精)、一种或多种药学上可接受的化合物或其混合物混合。所述混合物可任选地进一步混合30-70g，优选地35-65g，更优选地40-60g，甚至更优选地45-55g，并且最优选地50g的一种或多种药学上可接受和/或可摄入的载体、一种或多种佐剂、一种或多种其他非存活细菌成分、一种或多种其他药理活性剂、一种或多种蛋白质和/或肽、一种或多种脂质、一种或多种其他碳水化合物、一种或多种维生素、一种或多种矿物质、一种或多种痕量元素、或这些分子的任何混合物。[0040]在一个更优选的实例中，以上述优选量，将非存活细菌(或其片段)与一种或多种碳水化合物，优选一种或多种益生元混合。所述混合物可任选地进一步以上述优选量与一种或多种药学上可接受的载体，一种或多种其他碳水化合物，一种或多种维生素，一种或多种矿物质，一种或多种痕量元素混合、或与这些分子的任何混合物混合。[0041]在又一个更优选的实施方案中，以上述优选量将非存活细菌(或其片段)与一种或多种碳水化合物，优选一种或多种益生元或麦芽糖糊精混合，并进一步以上述优选量与一种或多种药学上可接受的载体、一种或多种其他碳水化合物、一种或多种维生素、一种或多种矿物质、一种或多种痕量元素、或这些分子的任何混合物混合。[0042]在一个甚至更优选的实施方案中，将非存活细菌(或其片段)与麦芽糖糊精和药学上可接受的载体，优选纤维素，以上述优选量混合。最优选地，将非存活细菌(或其片段)与麦芽糖糊精和纤维素以约1：3：2(基于重量)的比例混合，例如将25g的非存活细菌(或其片段)与75g的麦芽糖糊精和50g的纤维素混合。[0043]根据本发明，特别优选的是，本发明的组合物包含以保藏号dsm24514保藏的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌，或其一个或多个片段，作为唯一的活性剂。进一步特别优选地，本发明的组合物除了以保藏号dsm24514保藏的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌或者其一个或多个片段之外，不包含其他细菌成分。[0044]本发明的组合物可以是任何类型的组合物，例如药物组合物，益生元组合物或食品组合物。特别优选地，该组合物是药物组合物或食品组合物。[0045]对于益生元组合物，所述组合物还包含“益生元化合物”。如本文所用，术语“益生元化合物”涉及非消化性化合物，其在被受试者摄取后由于选择性刺激一种或多种存在于所述受试者肠道中的有益细菌的生长和/或活化，而给所述受试者带来益处。因此，益生元化合物能够使细菌菌群重新平衡。优选地，除本发明的非存活细菌或其一个或多个片段之外，本发明的益生元组合物还包含菊粉和/或低聚果糖作为益生元化合物。[0046]菊粉是一种化学上属于果聚糖家族的可溶性化合物，即由果糖(最多100个果糖分子)的线性链与末端葡萄糖残基形成的多糖。在本领域中已经确定，菊粉的摄取导致肠道中存在的双歧杆菌和乳杆菌增加。乳杆菌产生的乳酶对于正确消化和结肠健康很重要。同时，观察到肠道中有害细菌数量的大大减少。[0047]低聚果糖是较短的寡糖果聚糖(最多10个果糖分子)，抵抗唾液和肠道消化酶的水解。在结肠中，它们被厌氧细菌发酵，从而增加了胃肠道的整体健康。[0048]本发明的组合物也可以是食品组合物的形式。如本文所用，术语“食品组合物”涉及适合人类或动物食用的任何食物。这样的“食品组合物”的非限制性实例因此包括例如，动物食品，例如挤出和制粒的动物食品，或粗混杂食品(coarsemixedfood)、以及供人食用的食品，包括固体和液体食品，例如饮料，包括饮用水和乳制品，如下文更详细描述。因此，该术语包括但不限于食品，膳食补充剂或营养补充剂。[0049]如本文所用，术语“膳食补充剂”是指，旨在口服摄入时补充人或动物膳食的制成品，并且通常以丸剂，胶囊剂，片剂或液体的形式提供，以单剂量或多剂量单位包装。膳食补充剂通常不提供大量的卡路里，但可包含其他微量营养素，例如维生素或矿物质。根据本发明，术语“营养补充剂”是指包含膳食补充剂和卡路里来源的组合物。例如，营养补充剂可以是膳食替代物或补充物，例如，营养或能量棒，营养饮料或浓缩物。[0050]优选地，食品组合物是乳制品(milkproduct)。乳制品的非限制性实例包括酸化的乳，基于乳的甜点，人源化的乳，乳粉，浓缩乳，淋酱(dressing)，乳饮料，以及发酵乳制品，诸如酸奶，包括冷冻酸奶，酸奶制剂，如酸奶饮料，发酵奶油，酸乳酒，酸奶油，法式酸奶(creamfraiche)，干酪和涂抹型干酪。如本文所用，术语“乳制品”包括动物来源的产品(即，乳产品)或植物来源的产品(即，非乳产品)。动物来源的乳制品包括由例如从牛，绵羊，山羊或水牛等获得的奶制备的产品。植物来源的乳制品包括植物来源的发酵产品，例如由豆浆，米浆，杏仁奶，椰奶或谷物乳(例如，燕麦制成的乳)制备的产品。[0051]根据本发明，组合物可以是固体或液体形式，并且可以通过常规方法配制。例如，药物组合物的配制方法已在本领域中进行了描述，例如“remington:thescienceandpracticeofpharmacy”,pharmaceuticalpress,第22版。通常，通过使组合物的组分与所需的其它化合物均匀且紧密地接触来制备组合物。然后，如果需要，将产品成型为所需的制剂。[0052]取决于组合物的类型，可以将组合物配制成各种形式。例如，可以将药物组合物以及益生元组合物配制成口服，肠胃外，例如肌内，静脉内，皮下，皮内，动脉内，心内，直肠，鼻腔，局部，气雾剂或阴道施用的剂型。口服施用的剂型是特别优选的。对于口服施用，组合物将通过口摄入，特别是通过吞咽而施用。因此组合物可以施用以通过口腔进入胃肠道。口服施用的优选形式的非限制性实例包括包衣和未包衣的片剂，软明胶胶囊，硬明胶胶囊，锭剂，糖锭剂，扁囊剂，糯米纸囊剂，胶囊剂，溶液剂，乳剂，混悬剂，糖浆剂，酏剂，用于重构的粉剂和颗粒剂，可分散的粉剂和颗粒剂(例如无菌包装的粉剂或颗粒剂)，药用口香糖，咀嚼片和泡腾片，其中可包含调味剂或着色剂，用于立即的、延迟的、修饰的、持续的、脉冲的或控释的应用。该组合物也可以掺入食品中，以提供食品组合物。[0053]片剂可包含赋形剂例如微晶纤维素，乳糖，柠檬酸钠，碳酸钙，磷酸氢钙和甘氨酸，崩解剂例如淀粉(优选玉米，马铃薯或木薯淀粉)，羟基乙酸淀粉钠，交联羧甲基纤维素钠和某些复杂的硅酸盐，以及制粒剂粘合剂例如聚乙烯吡咯烷酮，羟丙基甲基纤维素(hpmc)，羟丙基纤维素(hpc)，蔗糖，明胶和阿拉伯胶。另外，可以包括润滑剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸，甘油山俞酸酯和滑石粉。相似类型的固体组合物也可以用作明胶胶囊中的填充剂。在这方面，优选的赋形剂包括乳糖，淀粉，纤维素或高分子量聚乙二醇。对于水性悬浮液和/或酏剂，可以将本发明的非存活细菌或其一个或多个片段，与各种甜味剂或调味剂、着色剂或色素组合、与乳化剂和/或悬浮剂组合、以及与稀释剂如水，乙醇，丙二醇和甘油及其组合进行组合。[0054]如上所述，本发明的非存活细菌(或其片段)或组合物用于治疗，更具体地讲，用于治疗胃肠道病症。因此，根据本发明，使用治疗有效量的保藏号为dsm24514的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌或其一个或多个片段。可以理解的是，观察到改变所需的治疗时间长度、以及在治疗后发生反应的间隔时间，取决于具体的医学用途。特定的量和时间可以通过本领域技术人员熟知的常规实验来确定。[0055]例如，对于药物组合物，剂量方案通常由主治医生确定并且取决于临床因素。如医学领域众所周知的，任何一名患者的剂量取决于许多因素，包括患者的体型，体表面积，年龄，所要施用的特定化合物，性别，施用时间和途径，总体健康状况，以及并行施用的其他药物。对于给定情况的治疗有效量将容易地通过常规实验确定，并且在普通临床医生或医师的技能和判断之内。对人(约70kg体重)的口服施用，建议的但非限制性的剂量可以是每单位剂量0.05至2000mg，优选0.1mg至1000mg的活性成分。单位剂量可以每天例如施用1至3次。单位剂量也可以每周施用1至14次，例如每天施用1-2次。类似的量和施用间隔也适用于其他类型的组合物，例如益生元或食品组合物。[0056]应当理解，可能有必要根据患者/受试者的年龄和体重以及所治疗病况的严重程度对剂量进行常规改变。确切的剂量以及施用途径最终将由主治医师或兽医决定。通常，用于治疗性施用的药物组合物的组分必须是无菌的。[0057]根据本发明，特别优选以每天至少约102个非存活细胞的量口服施用非存活细菌。更优选地，以每天至少约103，例如至少约104，例如至少约105，例如至少约106，例如至少约107，或例如至少约108个非存活细胞的量，口服施用非存活细菌，且最优选至少约109个非存活细胞的每日量。特别优选在整个治疗期间观察到两次施用之间的施用间隔为约24小时，更优选精确地为24小时。[0058]进一步优选的是，非存活细菌以每天两个单位剂型口服施用，例如每天两片或两个胶囊。优选地，剂型的每个单位包含至少约5×101个非存活细胞，更优选至少约5×102个，例如至少约5×103个，例如至少约5×104个，例如至少约5×105个，例如至少约5×106个，例如至少约5×107个非存活细胞，并且最优选地，剂型的每个单位包含至少约5×108个非存活细胞。因此，通过每天施用两个单位的剂型，可以每天施用至少约102至109个非存活细胞的上述优选总量。进一步特别优选的是，非存活细菌的日用量，例如，每天两片或两个胶囊，一次施用，优选总是大约在同一时间施用，最优选与餐食一起施用。换言之，当每日总量以两片或两粒胶囊的形式施用时，优选同时服用两片/粒。[0059]最优选地，以上述优选量治疗的胃肠道病症是ibs。[0060]根据本发明的益生元化合物的优选量包括，每1g非存活细胞和/或其片段，更优选每108个非存活细胞(或其片段)，至少1g，优选至少2g，更优选至少3g，甚至更优选至少4g，最优选至少5g益生元化合物。[0061]本发明的非存活细菌(或其片段)或组合物可以单一疗法施用(例如，不并行给予任何其他治疗剂，或不并行给予任何其他将针对待用本发明的非存活细菌(或其片段)或组合物治疗或预防的相同疾病的治疗剂)。然而，本发明的非存活细菌(或其片段)或组合物也可以与一种或多种其他治疗剂组合施用。如果本发明的非存活细菌(或其片段)或组合物与针对相同疾病或病症具有活性的第二治疗剂联合使用，则每种物质的剂量可与相应的物质单独使用时不同，特别是每种物质可以使用较低的剂量。本发明的非存活细菌(或其片段)或组合物与一种或多种其他治疗剂的组合可包括同时/伴随施用本发明的非存活细菌(或其片段)或组合物和其他治疗剂(一种或多种)(在单一药物制剂中或在分开的药物制剂中)，或顺序/分开施用本发明的非存活细菌(或其片段)或组合物和其他治疗剂(一种或多种)。如果顺序施用，则可以首先施用本发明的非存活细菌(或其片段)或组合物、或一种或多种其他治疗剂。如果同时施用，则一种或多种其他治疗剂可以与本发明的非存活细菌(或其片段)或组合物包括在同一药物制剂中，或者可以在两种或更多种不同的(单独的)药物制剂中施用。[0062]根据本发明待治疗的受试者或患者可以是动物(例如，非人类动物)。优选地，受试者/患者是哺乳动物。更优选地，受试者/患者是人类(例如，男性或女性)或非人类哺乳动物(例如，豚鼠，仓鼠，大鼠，小鼠，兔子，狗，猫，马，猴子，猿，狨，狒狒，大猩猩，黑猩猩，猩猩，长臂猿，绵羊，牛或猪)。最优选地，根据本发明待治疗的受试者/患者是人。[0063]进一步优选的是，本发明非存活细菌或其一个或多个片段或组合物施用于，或将要施用于，免疫受损的受试者。“免疫受损的”受试者是免疫系统功能不完全的任何受试者。例如，所述受试者的免疫系统可能不能抵抗感染性疾病和/或癌症。这样的受试者也被称为患有“免疫缺陷”。受试者可以天生患有免疫缺陷(原发性免疫缺陷)，或者可以由于例如hiv感染，老年或环境因素(例如营养不良)而获得免疫缺陷(继发性免疫缺陷)。此外，某些药物，例如类固醇(常处方用药在器官移植手术中作为抗排斥措施、以及用于免疫系统过度活跃的患者，例如在自身免疫疾病中)，可能会导致免疫抑制。优选地，免疫受损的受试者是人。更优选地，免疫受损的受试者是具有原发性免疫缺陷的人，(优选由于hiv感染)具有继发性免疫缺陷的人，或者其免疫系统被医学抑制的人。[0064]本发明进一步涉及制备保藏号为dsm24514的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌或其一个或多个片段的方法，所述方法包括：(a)提供保藏号为dsm24514的两歧双歧杆菌菌株的细菌；(b)使步骤(a)中提供的细菌失活以获得两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌，或其一个或多个片段。[0065]根据本发明的该方法，在第一步中提供保藏号为dsm24514的两歧双歧杆菌菌株的细菌。为了提供足够量的这些细菌，可以在步骤(a)之前通过本领域已知的方法对其进行培养和扩增。例如如在“益生菌和健康声明”，wolfgangkneifel，sepposalminen，johnwiley&sons，1.版(2011年1月7日)中所述。例如，两歧双歧杆菌syn-hi-001的活细胞可以在富含蛋白质的液体生长培养基中生长。通常，根据步骤(a)用于生长和/或发酵两歧双歧杆菌菌株的合适培养基至少包含水，葡萄糖，酵母提取物和矿物质。通常使用的标准培养基是补充有0.05％l-半胱氨酸盐酸盐的mrs肉汤(cmrs)(difco，底特律，美国密西根州)。本领域技术人员充分意识到以下事实：也可以将其他培养基用于细菌生物的生长，发酵和预培养。通常，用细菌菌株的至少一个细胞接种至少200ml，优选至少300ml，更优选至少400ml，甚至更优选至少500ml，最优选至少600ml体积的标准培养基，并且培养物在厌氧条件下过夜生长，例如在37℃和220rpm下生长。额外的发酵步骤，例如在更大体积中的发酵，也可以进行。[0066]在第二步骤(步骤(b))中，然后使细菌失活以获得非存活细菌。使细菌失活的手段和方法在本领域中是熟知的，包括但不限于，通过暴露于热，压力，超声处理，辐照(例如紫外线)，干燥，脉冲电场(pef)，超临界co2和/或ph值变化而失活。优选地，失活是热失活。失活可以直接在发酵容器中或在分开的容器中进行。步骤(b)可以进行一次，也可以重复认为需要的频数。可以在将制剂进一步使用之前，通过将等份的灭活细菌制剂铺在培养基上并在标准条件下培养，来测试成功的灭活。[0067]在步骤(b)中失活之后，所得组合物可以原样使用或可以进一步加工。进一步加工包括一个或多个其他方法步骤，例如用于收获和/或纯化非存活细菌或其特定片段。用于此类收获和/或纯化步骤的手段和方法在本领域中是熟知的，包括例如离心，例如使用盘式离心机或分离器(例如，由geawestfaliaseparatorgroupgmbh(德国奥尔德)提供)进行离心。然后可以使用标准手段和方法将细胞稳定化，冷冻干燥，碾磨和筛分。所有上述方法在本领域中是已知的，并且已经描述在，例如，“益生菌和健康声明”，wolfgangkneifel，sepposalminen，johnwiley&sons；1.版本(2011年1月7日)；“食品中的微生物建模”，stanleybrul，suzannevangerwen，marcelzwietering；1.版(2007年)；和“益生菌：基本原理，治疗和技术方面”，j.paulosousaesilva和anac.freitas；1.版(2014)。[0068]本发明方法可以包括将保藏号dsm24514的两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌片段化的另一步骤，以获得一个或多个细菌片段。该步骤也可以与步骤(b)，即细菌失活步骤，结合。例如，步骤(b)中的失活可以在足够严格的条件下进行并施加足够长的时间以导致细菌的破坏。这样的方法包括，例如，以下任一：在例如乙醇/水或丙醇/水混合物(或适合提取极性和非极性物质的任何其他提取溶液或溶剂混合物)中煮沸细菌，对细菌进行冻融处理(例如多次冻融循环)，对细菌进行超声处理，用去污剂处理细菌，例如十二烷基硫酸钠(sds)、辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(例如nonidetp-40或igepalca-630)、tritonx-100、正十二烷基-β-d-麦芽吡喃糖苷(ddm)、洋地黄皂苷、聚山梨酯20(例如tween20)、聚山梨酯80(例如tween80)、3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸(chaps)、尿素、胆酸盐、月桂酰肌氨酸钠(sarkosyl)、或其任何组合。破坏细菌后，如果需要，可以在额外步骤(c)中分离目标片段。例如，细胞壁(级分)和/或细胞膜(级分)可以与细菌细胞的其余部分例如细胞质和细胞质组分分离，分离可以通过各种方法，包括但不限于过滤，优选使用孔径为约0.5μm至约2μm，更优选为约1μm的过滤器进行过滤，以及离心，来进行。[0069]在一个示例性实施方案中，可以采用以下方法：将保藏号为dsm24514的两歧双歧杆菌菌株的活细菌在富含蛋白质的液体生长培养基中生长，在发酵容器中加热灭活，离心，然后冷冻-干燥，研磨和筛分。此外，干燥的粉末灭活细菌然后可以与赋形剂混合，并以大约0.5x109非存活细菌的量，填充到胶囊中，例如未包衣的纤维素胶囊中。[0070]然后可以将通过本发明的方法获得或可获得的非存活细菌用于治疗，特别是用于治疗胃肠道病症，如上所述。[0071]如本文所使用的，术语“可选的”，“可选地”和“可以”表示，所指示的特征可以存在但是也可以不存在。每当使用术语“可选”，“可选地”或“可以”时，本发明特别涉及两种可能性，即，存在相应的特征，或者不存在相应的特征。例如，如果指示组合物的组分“可以”存在，则本发明特别涉及两种可能性，即存在相应的组分(包含在组合物中)、或组合物不存在相应的组分。[0072]如本文所用，除非明确指出或与上下文矛盾，否则术语“一”，“一个”和“该”可以与“一个或多个”和“至少一个”互换使用。因此，例如，包含“一个”特定化合物的组合物，例如载体可被解释为是指包含“一个或多个”所述特定化合物，例如一个或多个载体的组合物。[0073]如本文所用，术语“约”优选是指所指示的数值的±10％，更优选地是所指示的数值的±5％，特别是所指示的确切数值。如果术语“约”与范围的端点结合使用，则其优选地是指从其指示数值的下限-10％到其指示数值的上限+10％的范围，更优选为从下限-5％到上限+5％的范围，甚至更优选由下限和上限的确切数值所定义的范围。如果术语“约”与开放式范围的端点结合使用，则它优选是指从下限-10％或从上限+10％开始的相应范围，更优选从下限-5％或上限+5％开始的范围，甚至更优选由相应端点的确切数值定义的该开放式范围。如果术语“约”与整数定量的参数结合使用，则对应于所示数值的±10％或±5％的数字应取整到最接近的整数(使用平局决胜规则，“四舍五入”)。[0074]如本文所用，除非另外明确指出或与上下文矛盾，否则术语“包含”(或“包括”，“含”，“含有”)具有“包含，尤其是”的含义，即“包含……，以及其他可选元素”。除此之外，该术语还包括“基本上由...组成”和“由...组成”的较窄含义。例如，术语“包含b和c的a”具有“尤其包含b和c的a”的含义，其中a可以包含其他可选元素(例如，“包含b，c和d的a”也可以被涵盖在该术语中)，该术语还包括“基本上由b和c组成的a”的含义和“由b和c组成的a”的含义(即，a中不包含b和c以外的其他成分)。[0075]除非另有明确说明，否则本文提及的所有特性和参数(包括例如以“mg/ml”，“％(w/v)”(即mg/100μl)或“％(v/v)”表示的任何量/浓度、以及任何ph值)优选在标准的环境温度和压力条件下，特别是在25℃(298.15k)的温度和101.325kpa(1atm的绝对压力)下确定。[0076]如本文所用，并且除非上下文矛盾，否则术语“治疗”(疾病或病症)是指治愈，缓解，减轻或预防疾病或病症的一种或多种症状或临床相关表现，或减轻，逆转或消除疾病或病症，或预防疾病或病症的发作，或预防，减缓或延迟疾病或病症的进展。例如，在未鉴定出相应疾病或病症的症状或临床相关表现的受试者或患者中的“治疗”是预防或预防性治疗，而在已经鉴定出相应疾病或病症的症状或临床相关表现的受试者或患者中的“治疗”可以是例如治愈性或缓解性治疗。这些治疗形式中的每一种都可以被认为是本发明的不同方面。[0077]疾病或病症的“治疗”可以例如导致疾病或病症的进展停止(例如，症状没有恶化)或疾病或病症的进展延迟(如果进展的停止只是暂时性的)。病症或疾病的“治疗”还可以导致患有病症或疾病的受试者/患者的部分反应(例如，症状的改善)或完全反应(例如，症状的消失)。因此，病症或疾病的“治疗”还可以指病症或疾病的改善，这可以例如导致病症或疾病的进展停止或病症或疾病的进展延迟。这样的部分或完全反应后可以出现复发。应当理解，受试者/患者可经历对治疗的广泛反应(例如，如上文所述的示例性反应)。疾病或病症的治疗尤其可以包括，治愈性治疗(优选导致完全反应并最终导致疾病或病症的治愈)、缓解性治疗(包括症状缓解)、或预防性治疗(包括预防)疾病或病症。[0078]除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。如有冲突，应以专利说明书及其定义为准。[0079]应当理解，本发明具体涉及本文所述的特征和实施方案的每种和所有组合，包括一般和/或优选特征/实施方案的任何组合。[0080]类似地，并且在独立权利要求和/或从属权利要求不列举替代方案的那些情况下，应理解，如果从属权利要求引用多个在先权利要求，则认为所涵盖的主题的任何组合均被明确公开。例如，在独立权利要求1的情况下，从属权利要求2引用权利要求1，而从属权利要求3引用权利要求2和1，因此得出权利要求3和1的主题的组合被清楚明确地公开，权利要求3、2和1的主题的组合也被清楚明确地公开。在存在引用权利要求1-3之任一项的再一从属权利要求4的情况下，可以得出，清楚且明确地公开了如下主题的组合：权利要求4和1，权利要求4、2和1，权利要求4、3和1，以及权利要求4、3、2和1的主题的组合。[0081]以上考虑因素作必要修正后适用于所有权利要求。作为一个非限制性示例，鉴于权利要求的结构，权利要求18、16和2的组合被清楚且明确地考虑。这同样适用于例如，权利要求18、16和12的组合或权利要求18、16和5的组合，等等。附图说明[0082]图1：研究设计。一项为期12周的研究，包括导入期、治疗期和洗脱期，并进行了5次医师访视。[0083]图2：通过研究的患者流程图。verum＝热灭活两歧双歧杆菌syn-hi-001。[0084]图3：“意向性治疗”(itt)和“按方案”(pp)人群在治疗期间的综合反应者(足够缓解的反应者与疼痛反应者相结合)。[0085]图4：在两个治疗间隔中，综合反应者(足够缓解的反应者与疼痛反应者)的进程。在两个治疗间隔期间，两歧双歧杆菌syn-hi-001的反应者明显更多。[0086]图5：治疗期间的足够缓解反应者。[0087]图6：每周比较两歧双歧杆菌syn-hi-001和安慰剂对症状缓解的作用(以1-7级记录)。从治疗的第二周到治疗结束，双歧杆菌组相比于安慰剂组有显著改善。[0088]图7：“意向性治疗”(itt)和“按方案”(pp)人群在治疗结束时ibs-sss改善≥50％的患者。[0089]图8：在“意向性治疗”(itt)和“按方案”(pp)人群中，对于从基线到治疗结束的平均评分变化而言，与安慰剂相比，两歧双歧杆菌syn-hi-001显著地降低了ib-sss总评分(0-500)。[0090]图9：按每日为基础评估ibs症状，对于从基线到治疗(“意向性治疗”,itt)结束的平均评分变化而言，与安慰剂相比，两歧双歧杆菌syn-hi-001显著地减少了bis症状。综合评分1-4＝四个单独症状评分(sga，疼痛，气胀/腹胀，尿急)的算术平均值。[0091]图10：对于从基线到治疗(“意向性治疗”,itt)结束的平均评分变化而言，与安慰剂相比，两歧双歧杆菌syn-hi-001对每周评估的ibs症状有显著降低。[0092]图11：对于从基线到治疗(“意向性治疗”,itt)结束的平均评分变化而言，与安慰剂相比，两歧双歧杆菌syn-hi-001显著地增加sf-12总得分和精神健康总得分。[0093]下列实施例举例说明本发明：[0094]实施例1：双盲、多中心、随机化、安慰剂对照研究，评估热灭活的两歧双歧杆菌syn-hi-001在肠易激综合征患者中的疗效[0095]1.1研究人群[0096]从主要研究者并通过广告招募患者。研究方案已提交汉堡医师协会伦理委员会谘询意见。根据罗马iii标准，包括了年龄在18至65岁之间的ibs患者。排除具有以下情况的个体：炎性器质性胃肠道疾病，全身性疾病，癌症，自身免疫性疾病，糖尿病，已知的乳糖不耐受或免疫缺陷，腹部手术(阑尾切除术，疝气手术，胆囊切除术，或剖腹产术除外)，55岁以上患者在最近五年中乙状结肠镜检查或结肠镜检查无阴性诊断结果，被诊断患有甲状腺功能亢进症，在研究开始前使用抗精神病药至少3个月或在至少一个月内使用全身性皮质类固醇，重大精神病症，乳糜泻、或妊娠。[0097]1.2研究设计[0098]本研究是一项前瞻性，多中心，随机，双盲，安慰剂对照，两臂干预研究。在整个研究中，患者每天使用患者日记记录其总体ibs症状以及各单独ibs症状。此外，患者还在医师诊所被询问了总体症状和各单独症状(第2-5次访视)和生活质量(第2-4次访视)。在筛选时，在两周导入期后(随机化)，在治疗4周后(对照访视)，在8周后(治疗结束)，和在再两周的洗脱期后(研究结束)，进行医师访视(图1)。[0099]获得患者书面知情同意后，患者有资格在访视1(第0天)进行筛选检查，其中包括完整的病史和体格检查。在中央实验室采集了血液样本进行分析，包括对妇女的妊娠试验。指导患者在整个研究过程中保持饮食和生活方式习惯。分发了患者日记。[0100]在第二次访视(第14天)时，医师对日记进行了审查。在导入期在两天上至少记录了在11分的数值评分量表(nrs)上≥4的疼痛评分且符合所有其他纳入标准且未违反任何排除标准的患者，被1:1随机化分组，以接受热灭活两歧双歧杆菌syn-hi-001或安慰剂。根据计算机生成的区块随机分组表(区块大小为4)，将患者分配到这些处理组。区块大小未传达给研究人员，且患者和诊所工作人员均不知晓所述分配。在8周的干预期，患者每天服用两粒包含热灭活细菌的胶囊或相同外观的安慰剂。[0101]在治疗期中间(第3次访视，第42天)，研究人员与患者讨论了疾病的进程，并收集并审查了治疗日记的第一部分。在治疗期结束时(第4次访视，第70天)，研究人员检查并收集了剩余的治疗日记。[0102]在无处理的洗脱期(第5次访视，第84天)之后，研究人员收集了洗脱日记以及未使用的研究产品和空罐，以确认是否一致。此外，进行了全面的身体检查并采集了血液样本。允许使用比沙可啶和洛哌丁胺作为急救药物(rescuemedication)。不允许使用可能影响研究产品功效的益生菌或其他药物。[0103]1.3研究产品的准备[0104]在保藏号dsm24514下保藏的两歧双歧杆菌菌株的活细胞在富含蛋白质的液体生长培养基中生长，在发酵容器中热灭活，离心，然后冷冻干燥，研磨和筛分。此外，将干燥的粉末灭活细菌与赋形剂混合，并以约0.5x109细胞(两歧双歧杆菌菌株syn-hi-001的非存活细菌)的量填充到未包衣的纤维素胶囊中。安慰剂胶囊外观相同，并含有麦芽糖糊精。[0105]1.4终点定义[0106]前瞻性定义的主要疗效变量是，在11分的nrs上疼痛改善≥30％和在7分的likert量表上达到最佳3种缓解类别之一的组合，其中以上两项标准均在8周治疗的至少4周中被满足，以作为治疗应答者的合格标准。要求患者回答每日问题“如果您在过去24小时内经历了腹痛，您如何评价这种疼痛？”可能的答案范围从0(无痛)到10(可想象的最大疼痛)。[0107]每周用7分likert量表(总体改善评估量表)捕获症状缓解。在患者日记中8周治疗期内每周都要评估此量表。要求患者回答每周问题，“与服用研究药物之前的通常感觉相比，您如何评价过去7天内症状(腹部疼痛/不适，排便习惯和其他ibs症状)的缓解情况？”可能的答案范围从1(非常缓解)，2(相当缓解)，3(有些缓解)，4(未改变)，5(有些恶化)，6(相当恶化)到7(非常恶化)。[0108]次要功效变量包括“主观总体症状评估”(sga)以及各单个ibs症状，例如“腹痛”，“气胀/腹胀”和“尿急”，在相同的7分likert量表上记录(腹痛在上述的11分nrs上评估)。另外，将各单个症状评分合并为综合症状评分，为sga和三个单独症状评分的算术平均值。此外，每天在日记中报告和评估排便次数的减少和/或增加，大便形式(通过bristol大便形式量表评估)，排便不完全的感觉，以及其他药物的摄入。[0109]在治疗的开始，中期和结束以及研究结束时(访视2-5)，医生通过ibs严重度评分系统(ibs-sss)向患者询问其ibs症状的严重性。该分数基于5个0到100的视觉模拟评分量表(vas)，包含过去10天如下症状的严重程度：“腹痛严重程度”，“腹痛频率”(最近10天内出现疼痛的天数)”，“腹胀严重程度”，“排便满意度”和“ibs干扰日常活动”。与健康相关的生活质量通过在治疗前，治疗中期和治疗结束时使用sf-12问卷进行评估(访视2、3和4)。[0110]在整个研究过程中记录不良事件，并在第3、4和5次医师访视时对研究治疗的耐受性进行了全面评估。对耐受性的评估为5分制，其中使用问题：“如果您考虑研究治疗的副作用，您如何评价整体耐受性？”可能的答案范围从1(非常好)，2(好)，3(一般)，4(不令人满意)到5(差)。每次医师访视时都检查生命体征，并在筛选访视时和研究结束时检查实验室值。[0111]1.5统计方法[0112]1.5.1样本量计算[0113]样本量的计算是基于安慰剂和治疗组对主要终点的估计反应以及ibs亚组之间主要症状评分的估计差异。用80％的效能，计算出350名可评估患者的样本量。以随机分组后估计15-20％的脱落率(drop-outrate)，计划了412名随机分组的患者，并招募了507名患者，以考虑研究开始前可能的退出。[0114]1.5.2统计分析[0115]本研究的主要目的是证明以下假设：与安慰剂组相比，双歧杆菌组中足够缓解反应者3和疼痛反应者的联合反应者比率显著更高。主要终点定义为在11分的nrs(疼痛反应者)上疼痛改善≥30％和在7分likert量表(足够缓解反应者3)上达到最佳3种缓解类别之一的组合，其中这两个标准必须在8周治疗中有至少4周被满足，才有资格成为治疗反应者。由研究中心分层的cochrane-mantel-haenszel检验用于比较治疗组，p<0.05被认为具有统计学显著性。[0116]主要分析基于意向性治疗人群，其中包括所有成功随机分组的患者。缺少数据的周将自动计为无反应。仅对主要功效变量提供基线条目的患者在主要功效标准的评估中被视为“无反应者”。为了支持目的，进行了附加的按方案(pp)分析。[0117]根据可用数据对次要终点进行描述性分析。为了检测治疗差异，对连续变量采用wilcoxon秩和检验，对二元变量采用fishers精确检验。所有p值都是双侧的。次要功效变量包括基于治疗期间症状缓解的50％规则的反应者(治疗期内至少8周中有4周改善，并且改善定义为自基线降低至少1分)。[0118]使用meddra，使用在研究开始时的当前版本，对不良事件(ae)进行编码，该版本在整个研究过程中都使用。编码基于德语版本，相应的英语版本用于最终分析。根据meddra词典的首选语(pt)将ae列表化。表格将包括受影响的患者以及事件的绝对和相对频率。[0119]使用windows的sas版本9.5(sasinstituteinc.,cary,nc,usa)执行所有统计分析。[0120]1.6结果[0121]1.6.1受试者[0122]在筛选的507位患者中，有443位患者被成功随机分组以接受安慰剂(n＝222)或热灭活两歧双歧杆菌syn-hi-001(n＝221)。对所有随机分组的患者进行意向性治疗(itt)和不良事件的分析(n＝443)。对总共377名患者(187名安慰剂和190名两歧双歧杆菌syn-hi-001)进行了按方案的分析(图2)。[0123]1.6.2基线特征[0124]在两个治疗组之间，基线特征和人口统计学是平衡良好的。24.2％被归类为便秘为主的ibs(ibs-c)，40.0％为腹泻为主的ibs(ibs-d)，7.7％为混合性ibs(ibs-m)和28.2％为未分亚型的ibs(ibs-u)，双歧杆菌和安慰剂组之间无显著差异。[0125]平均而言，患者为41.3岁，女性为69.3％，平均身高为171.9cm，平均体重为73.0kg，平均bmi为24.6，两个治疗组之间无显著差异(表1)。[0126]表1：“意向性治疗”(itt)人群的人口统计学特征[0127][0128]1.6.3主要终点：综合反应者(足够的缓解反应者3结合疼痛反应者)[0129]主要终点为综合反应者，定义为在8个治疗周中的至少4个治疗周中(50％规则)，疼痛改善30％和达到最佳3种缓解类别之一的组合。基于此定义，双歧杆菌组(74/221)的患者中有33.5％达到了综合应答，而安慰剂组(43/222)中为19.4％。这相当于该研究产品的成功率高1.7倍(95％ci：1.3–2.4)。由研究中心分层的cochrane-mantel-haenszel检验证明了统计学显著性差异(p＝0.00071)。按方案分析证实了此阳性结果。用热灭活两歧双歧杆菌syn-hi-001治疗的患者获得了36.8％的综合反应，而使用安慰剂治疗时为19.8％(mantel-haenszel检验，p＝0.0004)。这些结果具有高度显著性，表明热灭活两歧双歧杆菌syn-hi-001明显优于安慰剂(图3)。[0130]在两个治疗区间(第1-4周和第5-8周)中对综合反应者的进程进行分析表明，两歧双歧杆菌syn-hi-001治疗在第一个和第二个治疗区间中均显著地优于安慰剂。在第1-4周中双歧杆菌的31.7％相比安慰剂组的19.8％(p＝0.0047)，以及在第5-8周中双歧杆菌的39.4％相比安慰剂组的29.7％(p＝0.0361)，在50％时间中满足了缓解标准(图4)。[0131]1.6.4次要终点[0132]1.6.4.1其他联合反应者和足够缓解/症状缓解[0133]次要终点包括综合反应的“更严格”定义：在8个治疗周的至少4周中，疼痛改善30％和达到最佳2种缓解类别之一的组合。即使使用该“更严格”定义的足够缓解反应者，双歧杆菌组的综合反应(15.8％)仍显著地高于安慰剂(7.7％)(p＝0.0079)，该结果在按方案分析中得到了证实(两歧双歧杆菌syn-hi-001：17.9％vs.安慰剂：7.5％；p＝0.0031)。[0134]单独分析足够缓解反应者(不与其他反应者组合)，得出两歧双歧杆菌syn-hi-001治疗带来显著益处。双歧杆菌组(即verum组)中足够缓解3反应率(在8个治疗周中至少有4周，最佳3种缓解类别)为60.18％，而安慰剂组仅为44.14％(p＝0.0009)。此外，与安慰剂组(11.26％)相比，verum组(20.36％)中足够缓解2反应率(在至少8个治疗周中的至少4周中，最佳2种缓解类别)(p＝0.0093)(图5)。[0135]另一个次要终点是症状缓解的改善(平均评分降低)，在8周治疗期间在患者日记中每周评估一次。每周进行的症状缓解评估显示，从治疗的第二周(第2周)到治疗结束(第8周)，每一周双歧杆菌组患者都有明显的获益。在治疗结束时，verum组症状缓解的平均评分为3.08，而安慰剂组为3.44(p＝0.006)(图6)。[0136]1.6.4.2肠易激综合症-严重程度评分系统(ibs-sss)[0137]在基线(第2次访视)，治疗4周后(第3次访视)，第8周治疗结束后(第4次访视)和第10周研究结束时(第5次访视)，进行ibs-sss评估，总分介于0-500之间。在治疗结束时(第8周)，与安慰剂组(28.8％)相比，verum组(41.2％)中显著更多的患者的ibs-sss可以改善≥50％(p＝0.0072)。通过按方案的分析证实了该结果(两歧双歧杆菌syn-hi-001：37.4％vs.安慰剂：25.1％；p＝0.0109)(图7)。[0138]关于从基线到治疗结束时ibs-sss总得分的降低，本研究表明两歧双歧杆菌syn-hi-001与安慰剂相比具有统计学上显著的优越性，其中verum组为-101.07的总得分改善；而安慰剂组为-71.24(p＝0.0013)。再次，通过按方案的分析证实了该结果(两歧双歧杆菌syn-hi-001：-102.11vs.安慰剂：-73.51；p＝0.0048)(图8)。每个得分范围在0-100之间的3个分量表(排便满意度，疼痛天数，和对日常生活的影响)，表明了两歧双歧杆菌syn-hi-001优异的显著性差异，从而加强了在基于症状的评分中正面的治疗效果证据。与安慰剂组的-16.62相比，verum组的排便满意度提高到-23.72(p＝0.0208)。与安慰剂组的-14.35相比，verum组的疼痛天数改善到-22.71(p＝0.0080)。与安慰剂组的-14.15相比，verum组中对日常生活的影响改善到-20.05(p＝0.0122)。ibssss腹痛的其余两个参数，严重性和腹胀严重程度，在双歧杆菌syn-hi-001组中显示出数值上更大的降低。[0139]1.6.4.3受试者对ibs症状的总体评估(sga)、各单独症状和综合评分1-4[0140]每天在患者日记中以7分likert量表评估了次要终点“sga”，“腹痛”，“气胀/腹胀”和“尿急”(仅腹痛在11分nrs上记录)。两歧双歧杆菌syn-hi-001显示从基线到治疗结束如下得分的显著降低：sga为-0.76分，而安慰剂组为-0.54分(p＝0.0192)；腹痛为-1.29分，而安慰剂组为-0.93分(p＝0.0112)；气胀/腹胀为-0.69分，而安慰剂组为-0.50分(p＝0.0456)。针对ibs症状(sga，腹痛，气胀/腹胀和尿急)计算出综合评分1-4。两歧双歧杆菌syn-hi-001组的患者比安慰剂组显著地受益于治疗(从基线到治疗结束的改变，verum：-1.21分；安慰剂：-0.89分；p＝0.0256)(图9)。[0141]此外，每周在7分likert量表上在患者日记中评估了症状，“不适”和“排便相关疼痛”。同样，两歧双歧杆菌syn-hi-001显示从基线到治疗结束的显著降低。不适感降低了-1.35分，而安慰剂组则降低了-0.92分(p＝0.0015)；排便相关疼痛降低了-0.88分vs.安慰剂组的0.46分(p＝0.0231)(图10)。[0142]1.6.4.4与健康相关的生活质量(sf-12)[0143]sf-12总分的评估显示，两歧双歧杆菌syn-hi-001组的生活质量显著地提高。从基线到治疗结束，双歧杆菌组的sf-12总分改善了5.82，而安慰剂组提高了4.06(p＝0.0382)。从基线到治疗结束，双歧杆菌组的精神健康总分改善了3.31，而安慰剂组改善了1.66(p＝0.0309)。与安慰剂(0.8965)相比，verum组(2.51)的身体健康总分在数值上有更大的改善，但差异没有达到显著性。由于ibs患者在精神上而不是身体上受到影响，因此这一结果不足为奇(图11)。[0144]1.6.4.5亚组分析[0145]亚组分析显示以下症状的改善，这些症状是相应的ibs类型所特有的：[0146]1.排便频率(ibs-c)：[0147]在ibs-c患者中，从基线到治疗结束，排便频率的平均变化显示出对两歧双歧杆菌syn-hi-001有利的显著差异。使用两歧双歧杆菌syn-hi-001，观察到平均每周排便增加1.66，而安慰剂组中每周排便减少-1.01(p＝0.0220)。[0148]2.稀便形式(ibs-d)：[0149]在ibs-d患者亚组中，从基线至治疗结束，每天通过bsfs在患者日记中评估的大便稠度(从1＝便秘到7＝腹泻)，与安慰剂组(-0.48分)相比(倾向于粪便硬度更高)，在verum组中显著更多地改善(-0.68分)(p＝0.0939)。[0150]3.排便满意度(ibs-m和ibs-u)：[0151]在ibs-m和ibs-u亚组中，发现排便满意度的显著异，均有利于两歧双歧杆菌syn-hi-001组。在治疗结束时，在自基线的变化平均值上的差异(verum-安慰剂)，在ibs-m中为-27.41[95％ci：-49.26；-5.55]，在ibs-u亚组中为-13.71[95％ci：-24.66；-2.76]。[0152]1.6.4.6不良事件[0153]仅15例不良事件被报告与研究产品疑似相关，两歧双歧杆菌syn-hi-001中的7例，安慰剂组中的8例。在两歧双歧杆菌syn-hi-001与安慰剂的副作用谱中未检测到显著差异(表2)。[0154]表2：通过首选语(根据meddra)具有可疑关系的不良事件的发生率：[0155][0156]大多数不良事件在严重程度上为轻度至中度，对症治疗后消除。大多数事件与胃肠道症状有关，可以被认为是潜在疾病的伴随症状。[0157]仅两名患者报告了严重不良事件：急性冠状动脉综合征和股骨颈骨折，均被评定与治疗无关，均发生在安慰剂组中。这项研究没有死亡报告。[0158]在两个治疗组之间，用于ibs症状所采取的药物治疗没有显著差异，研究治疗的中断也没有显著差异。同样，实验室值也没有指示两歧双歧杆菌syn-hi-001有任何安全风险。对生命体征和体格检查的评估没有发现异常。在两歧双歧杆菌syn-hi-001组中有90.5％的患者在治疗结束时对耐受性的总体评估被评定为非常好或好，而在安慰剂组中为86.0％(占总研究人群的88.3％；差异不显著)。[0159]总体而言，本研究显示出良好的耐受性，并没有指示在ibs患者中使用热灭活两歧双歧杆菌syn-hi-001有任何安全风险。[0160]本文提供的研究首次显示了两歧双歧杆菌syn-hi-001菌株的非存活细菌具有适于治疗ibs的体内功效。与益生菌组合物，即基于活细菌的组合物不同，本发明的这些非存活细菌还提供了降低的与不良副作用相关的风险，这些风险在先前已经报道过，例如，在besselink等人，2008年针对重病患者进行过报道。因此，本发明的非存活细菌及其片段为治疗胃肠道病症提供了一种有前途和安全的新工具。[0161]参考文献[0162]alvingcr.(1993).lipopolysaccharide,lipida,andliposomescontaininglipidaasimmunologicadjuvants.immunobiology,187(3-5),430-446.[0163]bausserman,m.,&michail,s.(2005).theuseoflactobacillusgginirritablebowelsyndromeinchildren:adouble-blindrandomizedcontroltrial.thejournalofpediatrics,147(2),197-201.besselink,m.g.,etal.,probioticprophylaxisinpredictedsevereacutepancreatitis:arandomised,double-blind,placebo-controlledtrial.lancet,2008.371(9613):p.651-9.[0164]brenner,d.m.,&chey,w.d.(2009).bifidobacteriuminfantis35624:anovelprobioticforthetreatmentofirritablebowelsyndrome.reviewsingastroenterologicaldisorders,9(1),7-15.[0165]brul,stanley,suzannevangerwen,andmarcelzwietering,eds.modellingmicroorganismsinfood.elsevier,2007.[0166]camilleri,m.,&ford,a.c.(2017).pharmacotherapyforirritablebowelsyndrome.journalofclinicalmedicine,6(11),101.[0167]chang,l."epidemiologyandqualityoflifeinfunctionalgastrointestinaldisorders."alimentarypharmacology&therapeutics20.s7(2004):31-39.[0168]ducrotté,p.,sawant,p.,&jayanthi,v.(2012).clinicaltrial:lactobacillusplantarum299v(dsm9843)improvessymptomsofirritablebowelsyndrome.worldjournalofgastroenterology:wjg,18(30),40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