一种中药水提物增强双歧杆菌活菌数的方法及其产品的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物工程技术领域，设及一种中药水提物增强双歧杆菌活菌数的方法 及其产品。
【背景技术】
[0002] 双歧杆菌作为人体内的正常生理菌和最重要的益生菌，为人体肠道健康提供独特 的保护作用。在迄今为止，已有大量的文献表明，双歧杆菌具有维持肠道微生态平衡、营养 与促机体生长作用、免疫增强抗衰老作用、降低血脂和胆固醇作用、改善糖尿病症状和抗肿 瘤作用等。双歧杆菌是严格兼性厌氧菌，在生产上需要一定的厌氧条件，同时对营养要求非 常苛刻，有时候需要在培养基中加入牛肉汤，猪肝汤等才能进一步提高活菌数或延长活菌 存活时间，在一定意义上限制了双歧杆菌活菌产品的保存和大规模的生产。且增加了产品 在胆藏过程中染菌的风险。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种利用中药水提物增加双歧杆 菌活菌数的中药增强型TPY培养基。
[0004] 本发明的另一目的是提供一种中药水提物增强双歧杆菌活菌数的方法。
[0005] 本发明的又一目的是提供按照该方法制备的口服液产品或菌粉产品。
[0006] 本发明的目的可通过W下技术方案实现：
[0007] -种利用中药水提物增加双歧杆菌活菌数的中药增强型TPY培养基，所述的中药 增强型TPY培养基是在常规TPY双歧杆菌培养基中加入相当于常规TPY双歧杆菌培养基体积 1%~5% (V/V)的中药水提液混合而成;所述的中药水提液选自北沙参、太子参、黄巧、虫草 花、党参、白术、百合中的一种的水提液或多种的水提液的混合物。
[000引作为本发明的优选方式，所述的中药水提液优选北沙参、太子参、黄巧、虫草花、党 参、白术、百合中的任意一种的水提液。
[0009] 作为本发明的优选方式，所述的中药水提液选自北沙参水提液和太子参水提液的 混合物、北沙参水提液和黄巧水提液的混合物、太子参水提液和黄巧水提液的混合物、太子 参水提液、北沙参水提液和黄巧水提液的混合物、太子参水提液和虫草花水提液的混合 物、北沙参水提液和和虫草花水提液的混合物、黄巧水提液和虫草花水提液的混合物、太子 参水提液、北沙参水提液、黄巧水提液和虫草花水提液的混合物。
[0010] 作为本发明进一步的优选方式，所述的中药水提液选自北沙参水提液和太子参水 提液1:1~2体积比混合的混合物、北沙参水提液和黄巧水提液1:1~3体积比混合的混合 物、太子参水提液和黄巧水提液1~2:1~3体积比混合的混合物、太子参水提液和虫草花水 提液1~2:1~2体积比混合的混合物、北沙参水提液和和虫草花水提液1:1~2体积比混合 的混合物、黄巧水提液和虫草花水提液1~3:1~2体积比混合的混合物。
[0011] 作为本发明的更进一步优选方试，所述的中药水提液为北沙参水提液、太子参水 提液、黄巧水提液按照1:1~2:1~3体积比混合而成，或者为北沙参水提液:太子参水提液： 黄巧水提液:虫草花水提液体积比按照1:1~2:1~3:1~2混合而成。
[0012] 所述的北沙参、太子参、黄巧、虫草花、党参、白术或百合的水提液通过W下方法制 备得到：取药材，按照l:l〇(g/ml)的料液比加入去离子水冷浸1~化，加热回流1~化，取滤 液，向药渣中按照1:5~10(g/ml)的料液比加入去离子水，加热回流化~化，合并两次滤液， 趁热过滤，加热浓缩，使药材与浓缩液的质量体积比为1:1，121°C高压灭菌40~50min。
[0013] 所述的虫草花水提液通过W下方法制备得到：取虫草花药材，按照l:30(g/ml)的 料液比加入去离子水，90°C热浸25~30min，在水浴上90°C提取1~化，取滤液，加热浓缩，使 药材与浓缩液的质量体积比为1:1，121°C高压灭菌40~50min。
[0014] 双歧杆菌常规TPY培养基组方:大豆蛋白腺5g、膜腺5g、酵母粉lOg、葡萄糖lOg、 吐溫-SOlmLa-半脫氨酸0.5g、无机盐液40mL(每IL中CaCl2含量为0.2g，K2HP〇4为l.Og， MgS〇4 ? 7此0为0.48g，KH2P〇4为l.Og，化肥〇3为lO.Og，化Cl为2.0g)、此0加至lL，pH 7.0。121 °[高压灭菌20min。
[0015] 本发明所述的中药增强型TPY培养基在增加双歧杆菌活菌数中的应用。
[0016] -种利用中药水提物增加双歧杆菌活菌数的方法，取双歧杆菌种子液按照0.5~ 5% (V/V)接种量，接入常规TPY培养基，35~38°C静置培养8小时活化，活化后的双歧杆菌W 0.1~1%体积比接入到中药增强的TPY培养基中，35-38°C厌氧或兼性厌氧培养12-1化的发 酵产物。
[0017] 本发明所述的方法优选将发酵产物无菌灌装成口服液，或离屯、集菌后冷冻干燥成 菌粉。
[0018] 本发明所述的方法优选将所述的发酵产物经过8000~1000化pm离屯、浓缩，得菌 泥，按菌泥:冻干保护剂=10~20:1(VA)向菌泥中加入冻干保护剂，充分混合均匀后置于 真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥制得的菌粉，粉碎，过40目筛得中药增强双歧杆菌菌 粉;其中冻干保护剂保护剂配方为Vc 1~%，谷氨酸钢1~%，脱脂乳12~20wt %，乳 糖8~15wt%，溶剂为去离子水。
[0019] 本发明所述的双歧杆菌选自长双歧杆菌，青春双歧杆菌，两歧双歧杆菌，婴儿双歧 杆菌中的任意一种。
[0020] 按照本发明所述的方法制备得到的中药增强双歧杆菌口服液或中药增强双歧杆 菌菌粉。
[0021] 有益效果：
[0022] 本发明加了中药的TPY培养基能够取代牛肉汤、猪肝汤等物质，比一般TPY培养基 明显增加双歧杆菌的活菌数，并且有利于双歧杆菌活菌的存活和提高稳定性。其次牛肉汤 和猪肝汤操作麻烦，本身的营养过于丰富，不利于发酵产品的胆存。而上述所加的中药大部 分是药食同源的物质，本身具有一定的保健作用，具有补中益气的作用，不仅能够促进双歧 杆菌的生长，提高活菌数，还能发挥中药本身的药效协同提高双歧杆菌的益生保健和增强 免疫功能。
【附图说明】
[0023] 图1、中药增强培养双歧杆菌电泳图，从左到右分别为TPY培养基组，TPY培养基组 加牛肉汤和猪肝汤组，加太子参、北沙参和黄巧组，加黄巧组，加太子参组，加北沙参组。
【具体实施方式】
[0024] 实施例1
[0025] (1)中药水提液的制备:取太子参药材或药材粉末500g，加化去离子水冷浸化，加 热回流化，取滤液，药渣再加2.化去离子水加热回流化，合并两次滤液，趁热过滤，加热浓缩 至500ml(即相对于生药量为lg/ml)，12rC高压灭菌40min。北沙参、黄巧水提液的制备方法 同上述太子参。
[00%] (2)双歧杆菌TPY常规培养基的制备方法:大豆蛋白腺5g、膜腺5g、酵母粉lOg、葡萄 糖lOg、吐溫-SOlmLa-半脫氨酸0.5g、无机盐液40mL(每IL中CaCh含量为0.2g，K2HP〇4为 1.0g，MgS04?7H20为0.48g，K此P04为1.0g，化HC03为10.0g，化Cl为2.0g)、此0 1L，pH7.0。 12rC高压灭菌20min。
[0027] (3)将太子参、北沙参、黄巧中药水提液分别离屯、，离屯、转速eOOOrpm，离屯、时间 lOmin。按体积比，分别取离屯、后的北沙参水提液20ml、太子参水提液20ml和黄巧水提液 20ml单独或不同组合混合加入到IL高压灭菌的TPY常规培养基中，混匀。按照接种量0.5% 体积比接入长双歧杆菌于TPY常规培养基，37°C静置培养8小时活化，活化后的青春双歧杆 菌将WO. 1%体积比接入到中药增强的TPY培养基中，37°C静置培养1地，培养液尽量充满培 养瓶，减少氧气含量。培养时间按照不同体积通过测定OD值确定培养终点。
[0028] (4)在酶标仪或分光光度计上测得0D600数值，测定单独、不同组合中药增强培养 基培养的双歧杆菌的0D600数值，并且活菌采用不同稀释度，在TPY常规培养基加牛肉汤和 猪肝汤及琼脂的平板上厌氧培养，计算同步0D600测量值与活菌数的线性关系，从而通过OD 值直接换算出活菌数。结果，TPY培养基中添加了单味中药、两两组合或者S者混合的中药 组方的双歧杆菌OD值和活菌数见表1。
[0029] 表1添加太子参、北沙参、黄巧培养的双歧杆菌活菌数
[0030]
[0031] (5)将已经测定确定最佳组合的中药增强双歧杆菌大批培养发酵，发酵液自动灌 装成100mL，250ml，500ml等不同体积的口服液，或者经过8000巧m离屯、浓缩发酵液，得菌泥。 冷冻干燥，按菌泥:冻干保护剂=15:1 (V/V)加入冻干保护剂，充分混合均匀。冻干保护剂配 方为￥。1.5巧*%，谷氨酸钢1.5巧*%，脱脂乳16巧*%，乳糖10巧*%，溶剂为去离子水.然后将 上述样品置于真空冷冻干燥机中，预冻至一40°C，启动真空，在0.1 mmHg的真空条件下进行 真空冷冻干燥。待样品完全干燥后，释放真空，取出制得的菌粉，粉碎，过40目筛得中药增强 双歧杆菌菌粉。口服液或菌粉可W直接口服使用，或加入牛奶中口服使用。
[0032] 实施例2
[0033] (1)中药水提液的制备:取虫草花500g，W料液比1:30(g/ml)加入90°C热水，在水 浴上90°C提取化，过滤除渣，加热浓缩至500ml(即相对于生药量为lg/ml)，12rC高压灭菌 40min〇
[0034] (2)双歧杆菌TPY常规培养基的配制同实例1所述。
[00巧](3)将上述浓缩的中药水提液离屯、，离屯、转速6000巧m，离屯、时间lOmin。按体积比， 取虫草花浓缩液20ml单独加入到IL高压过的TPY常规培养基中，混匀。按照接种量0.5%体 积比接入青春双歧杆菌于TPY常规培养基，37°C静置培养8小时活化，活化后的长双歧杆菌 将WO. 1%体积比接入到虫草花增强的TPY培养基中，37°C静置培养1地，培养液尽量充满培 养瓶，减少氧气含量。培养时间