新型抗CCR8抗体

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技术领域：
：】本发明涉及新型抗ccr8抗体及含有该抗体的医药组合物。
背景技术：
：：以肿瘤微环境内的调节性t细胞(treg细胞)当媒介的免疫抑制作为代表的强力的负调节机制，对于肿瘤的治疗是重大的障碍(非专利文献1)。例如，浸润于肿瘤的cd4阳性treg细胞，有强力阻碍抗肿瘤免疫反应的可能性，可能对于有效的癌症治疗造成很大的障碍。cd4阳性foxp3阳性treg细胞当媒介的肿瘤免疫抑制，已被动物肿瘤模型所充分证实，通过除去包含肿瘤内的全身性treg细胞而获得抗肿瘤效果，但另一方面，亦有报告指出在除去50％左右的肿瘤内浸润treg细胞时则未见有效果(非专利文献2)。另有报告指出，关于人类，在以肺、乳房及卵巢肿瘤为代表的各种癌症病患的肿瘤内，有检测出全cd4阳性t细胞群中的cd4阳性cd25阳性treg细胞比(包含treg细胞的细胞群)的增大，并且，存在比与病患生存率呈现负相关(非专利文献3至8)。使用抗cd25抗体而从肿瘤内除去cd4阳性cd25阳性treg细胞，从而确认到抗肿瘤效果。但是，由于cd25亦会表现于cd4阳性cd25阳性treg细胞及另经活化的效应t细胞(effectorcell)的细胞表面，故难言是特异性地除去treg细胞。此外，对于小鼠，通过给药抗cd25抗体而得的抗肿瘤效果是有限定性的，只有于肿瘤移植前给药抗体才会显示治疗效果，各种肿瘤模型皆已证明在将肿瘤植入小鼠后才给药抗体的情况下几乎无治疗效果。于移植后第1天才开始给药抗cd25抗体的情况下，抗肿瘤效果减弱，于移植后第2天以后才开始给药的情况下，几乎未见到抗肿瘤效果(非专利文献9)。至今，以除去treg细胞为目的，虽实施了对于小鼠给药抗cd25抗体的药效试验，但几乎无报告显示有抗肿瘤效果，非常难以确认由移植后给药抗体所导致的除去treg细胞的抗肿瘤治疗效果(非专利文献10)。ccr8是亦被称为cy6、ckr-l1或ter1的在胸腺或脾脏等表达的g蛋白共轭型七次穿膜型的cc趋化因子受体蛋白质，其基因于人类染色体中存在于3p21。人类ccr8由355个氨基酸所构成(非专利文献11)。己知ccl1为对于ccr8的内因性配位基(非专利文献12)。人类ccr8cdna由genbankaccno.nm_005201.3表示的碱基序列所构成，小鼠ccr8cdna由genbankaccno.nm_007720.2表示的碱基序列所构成。ccr8亦特异性地表达于肿瘤内浸润treg细胞，在将乳癌细胞移植至ccr8缺损小鼠及野生型小鼠时，显示出：相较于野生型小鼠，ccr8缺失小鼠中的乳癌的增殖及转移受到抑制(专利文献1及非专利文献13)。再者，已揭示通过对于癌症模型动物给药抗ccr8抗体而显示抗肿瘤效果(专利文献2及3)。专利文献4揭示有用于治疗过敏性疾病及hiv感染的抗ccr8抗体。该文献已揭示414b、414c、414e、433h、459m、464a、464b、433b及455al表示的抗ccr8抗体。这些之中，bd生物科学公司(bdbioscience)有销售433h的抗ccr8抗体。但是，未揭示该抗体的cdr序列。此外，未揭示抗ccr8抗体具有抗肿瘤活性而有用于治疗癌症。于非专利文献14揭示3b10、2d10及5b11表示的抗ccr8抗体。此外，biolegend公司有销售产品编号l263g8的抗ccr8抗体。r&d公司有销售产品编号191704的抗ccr8抗体。但是，未揭示该抗体的cdr序列。另外，未揭示抗ccr8抗体具有抗肿瘤活性而有用于治疗癌症。专利文献5及非专利文献15至19记载ccr8会参与癌症的病态。[先前技术文献][专利文献][专利文献1]美国专利第10087259号说明书[专利文献2]国际公开第2018/181425号[专利文献3]国际公开第2018/112032号[专利文献4]国际公开第2007/044756号[专利文献5]国际公开第2017/198631号[非专利文献][非专利文献1]nat.rev.immunol.,2006年,第6卷,第4号,p.295-307[非专利文献2]eur.j.immunol.,2010年,第40卷,p.3325-3335[非专利文献3]j.clin.oncol.,2006年,第24卷,p.5373-5380[非专利文献4]nat.med.,2004年,第10卷,p.942-949[非专利文献5]j.clin.oncol.,2007年,第25卷,p.2586-2593[非专利文献6]cancer,2006年,第107卷,p.2866-2872[非专利文献7]eur.j.cancer,2008年,第44卷,p.1875-1882[非专利文献8]cell.mol.immunol.2011年,第8卷,p.59-66[非专利文献9]cancerres.,1999年,第59卷,第13号,p.3128-33[非专利文献10]cancerres.,2010年,第70卷,第7号,p.2665-74[非专利文献11]j.immunol.,1996年,第157卷,第7号,p.2759-63[非专利文献12]j.biol.chem.,1997年,第272卷,第28号,p.17251-4[非专利文献13]cancerres.,2016年,第76卷,第4号,supp.1,p4-04-11[非专利文献14]j.exp.med.,2004年,第200卷,第10号,p1231-1241[非专利文献15]immunity,2016年,第45卷,p1122-1134[非专利文献16]immunity,2016年,第45卷,p1135-1147[非专利文献17]proc.natl.acad.sci.usa,2018年,第115卷,第45号,p10672-10681[非专利文献18]targetingofccr8inducesantitumoractivityasamonotherapythatisfurtherenhancedincombinationwithalisteria-basedimmunotherapy,asco2018,danielovillarreal,etal.https://www.advaxis.com/wp-content/uploads/2018/04/keystoneposterccr8-combo-posterfinal.pdf[非专利文献19]cancerres.,2018年,第78卷,第18号,p5340-5348技术实现要素：[发明要解决的课题]本发明的目的为提供新型抗ccr8抗体或其抗体片段。再者，提供可作为癌症治疗药而利用的新型抗ccr8抗体或其抗体片段。[解决课题的方法]本发明人等经过深入研究，结果发现一种单克隆抗体，其特异性结合于人类ccr8，并阻碍ccr8与ccr8配体的结合。此外，发现可将识别人类ccr8的氨基酸序列第17位的酪氨酸的单克隆抗体或其抗体片段用于阻碍ccr8与ccr8配体的结合。再者，发现本发明的单克隆抗体具有抗肿瘤活性，可用于治疗癌症。另外，发现识别人类ccr8的氨基酸序列第17位的酪氨酸的单克隆抗体或其抗体片段具有抗肿瘤活性，可用于治疗癌症。亦即，本发明的单克隆抗体或其抗体片段可用于阻碍ccr8与ccr8配体的结合。再者，本发明的单克隆抗体或其抗体片段可作为中和抗体使用。本发明关于以下事项。(1)一种单克隆抗体或其抗体片段，其是结合于ccr8的单克隆抗体或其抗体片段，其识别序列编号1表示的氨基酸序列第17位的酪氨酸。(2)如(1)所述的抗体或其抗体片段，其为中和抗体。(3)如(1)或(2)所述的抗体或其抗体片段，其更进一步识别序列编号1表示的氨基酸序列第94位至107位中的1个以上的氨基酸。(4)如(1)至(3)中任一项所述的抗体或其抗体片段，其更进一步识别序列编号1表示的氨基酸序列第172位至202位中的1个以上的氨基酸。(5)如(1)至(4)中任一项所述的抗体或其抗体片段，其识别序列编号1表示的氨基酸序列第20位的异亮氨酸、第22位的丝氨酸、第35位的赖氨酸(lysine)、第181位的亮氨酸、第183位的半胱氨酸及第188位的天冬酰胺(asparagine)中的1个以上的氨基酸。(6)如(1)至(5)中任一项所述的抗体或其抗体片段，其为人源化单克隆抗体或其抗体片段。(7)一种单克隆抗体或其抗体片段，其为结合于ccr8的单克隆抗体或其抗体片段，其包含下述1)、2)、3)、4)、5)或6)：1)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由可于序列编号2的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号3的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号4的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由可于序列编号5的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号6的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号7的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3；2)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由可于序列编号2的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号3的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号4的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由可于序列编号8的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号6的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号7的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3；3)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由可于序列编号2的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号9的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号10的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由可于序列编号8的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号6的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号11的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3；(此处，也可具有1种以上的下述的任一种取代：a)以苏氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第2位的丝氨酸，b)以苏氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第3位的丝氨酸，c)以苏氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第5位的丝氨酸，d)以天冬酰胺(asparagine)取代序列编号10的氨基酸序列第2位的谷氨酰胺(glutamine)，e)以丝氨酸取代序列编号8的氨基酸序列第1位的苏氨酸，f)以缬氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第14位的丙氨酸，g)以精氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第18位的赖氨酸，h)以谷氨酸(glutamicacid)取代序列编号6的氨基酸序列第19位的天冬氨酸(asparticacid)，i)以谷氨酰胺取代序列编号11的氨基酸序列第5位的天冬酰胺，j)以苯基丙氨酸取代序列编号11的氨基酸序列第12位的酪氨酸)；4)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由可于序列编号2的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号3的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号10的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由可于序列编号12的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号6的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号13的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3；5)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由可于序列编号14的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号15的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号16的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由可于序列编号17的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号18的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号19的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3；或6)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由可于序列编号20的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号21的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号22的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由可于序列编号23的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr1，由可于序列编号24的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr2，及由可于序列编号25的氨基酸序列中有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加的氨基酸序列构成的cdr3。(8)如(7)所述的抗体或其抗体片段，其包含下述1)、2)、3)、4)、5)或6)：1)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由序列编号2的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号3的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号4的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由序列编号5的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号6的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号7的氨基酸序列构成的cdr3，(此处，也可具有1种以上的下述的任一种取代：a)以赖氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第10位的天冬酰胺，b)以谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸或精氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第11位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号3的氨基酸序列第4位的天冬酰胺，d)以异亮氨酸取代序列编号3的氨基酸序列第5位的亮氨酸，e)以异亮氨酸取代序列编号4的氨基酸序列第4位的亮氨酸，f)以苯基丙氨酸取代序列编号4的氨基酸序列第6位的酪氨酸，g)以苏氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第16位的丝氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第19位的天冬氨酸)；2)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由序列编号2的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号3的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号4的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由序列编号8的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号6的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号7的氨基酸序列构成的cdr3；3)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由序列编号2的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号9的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号10的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由序列编号8的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号6的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号11的氨基酸序列构成的cdr3；4)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由序列编号2的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号3的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号10的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由序列编号12的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号6的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号13的氨基酸序列构成的cdr3；5)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由序列编号14的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号15的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号16的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由序列编号17的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号18的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号19的氨基酸序列构成的cdr3；或6)下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由序列编号20的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号21的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号22的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由序列编号23的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号24的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号25的氨基酸序列构成的cdr3。(9)如(8)所述的抗体或其抗体片段，其包含下述轻链可变区及重链可变区，该轻链可变区含有由序列编号2的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号3的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号4的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由序列编号5的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号6的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号7的氨基酸序列构成的cdr3；并且，具有1种以上的下述的任一种取代：a)以赖氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第10位的天冬酰胺，b)以谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸或精氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第11位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号3的氨基酸序列第4位的天冬酰胺，d)以异亮氨酸取代序列编号3的氨基酸序列第5位的亮氨酸，e)以异亮氨酸取代序列编号4的氨基酸序列第4位的亮氨酸，f)以苯基丙氨酸取代序列编号4的氨基酸序列第6位的酪氨酸，g)以苏氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第16位的丝氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第19位的天冬氨酸。(10)如(9)所述的抗体或其抗体片段，其具有1种以上的下述的任一种取代：a)以赖氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第10位的天冬酰胺，b)以亮氨酸或精氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第11位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号3的氨基酸序列第4位的天冬酰胺。(11)如(9)或(10)所述的抗体或其抗体片段，其中，序列编号3的氨基酸序列第4位的天冬酰胺被谷氨酰胺取代，再者，也可具有以下的任1种取代：a)以赖氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第10位的天冬酰胺，b)以亮氨酸或精氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第11位的甘氨酸。(12)如(11)所述的抗体或其抗体片段，其中，序列编号3的氨基酸序列第4位的天冬酰胺被谷氨酰胺取代，再者，序列编号2的氨基酸序列第11位的甘氨酸被精氨酸取代。(13)如(8)所述的抗体或其抗体片段，其包含下述轻链可变区及重链可变区，其中，该轻链可变区含有由序列编号2的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号9的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号10的氨基酸序列构成的cdr3，该重链可变区含有由序列编号8的氨基酸序列构成的cdr1、由序列编号6的氨基酸序列构成的cdr2、及由序列编号11的氨基酸序列构成的cdr3；并且，具有1种以上的下述的任一种取代：a)以苏氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第2位的丝氨酸，b)以苏氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第3位的丝氨酸，c)以苏氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第5位的丝氨酸，d)以天冬酰胺取代序列编号10的氨基酸序列第2位的谷氨酰胺，e)以丝氨酸取代序列编号8的氨基酸序列第1位的苏氨酸，f)以缬氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第14位的丙氨酸，g)以精氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第18位的赖氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第19位的天冬氨酸，i)以谷氨酰胺取代序列编号11的氨基酸序列第5位的天冬酰胺，j)以苯基丙氨酸取代序列编号11的氨基酸序列第12位的酪氨酸。(14)如(7)至(13)中任1项所述的抗体或抗体片段，其为人源化单克隆抗体或其抗体片段。(15)如(14)所述的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其包含下述轻链可变区及重链可变区；其中，该轻链可变区由序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列，或者，与序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成；该重链可变区由序列编号41或46的氨基酸序列，或者，与序列编号41或46的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成。(16)如(14)或(15)所述的作为抗体的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其包含下述1)、2)、3)、4)、5)、6)、7)、8)、9)、10)、11)或12)：1)具有序列编号40的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，2)具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，3)具有序列编号43的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，4)具有序列编号44的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，5)具有序列编号45的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，6)具有序列编号47的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，7)具有序列编号40的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区，8)具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区，9)具有序列编号43的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区，10)具有序列编号44的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区，11)具有序列编号45的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区，或12)具有序列编号47的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区；并且，可具有1种以上的下述的任一种取代：a)以赖氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第33位的天冬酰胺，b)以谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸或精氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第34位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第58位的天冬酰胺，d)以异亮氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第59位的亮氨酸，e)以异亮氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第97位的亮氨酸，f)以苯基丙氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第99位的酪氨酸，g)以苏氨酸取代序列编号41或46的氨基酸序列第65位的丝氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号41或46的氨基酸序列第68位的天冬氨酸。(17)如(16)所述的作为抗体的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其具有1种以上的下述的任一种取代：a)以赖氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第33位的天冬酰胺，b)以谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸或精氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第34位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第58位的天冬酰胺，d)以异亮氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第59位的亮氨酸，e)以异亮氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第97位的亮氨酸，f)以苯基丙氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第99位的酪氨酸，g)以苏氨酸取代序列编号41或46的氨基酸序列第65位的丝氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号41或46的氨基酸序列第68位的天冬氨酸。(18)如(17)所述的作为抗体的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其包含：具有序列编号40或42的氨基酸序列的轻链可变区，及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区；并且，具有1种以上的下述的任一种取代：a)以赖氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第33位的天冬酰胺，b)以谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸或精氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第34位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号40或42的氨基酸序列第58位的天冬酰胺，d)以异亮氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第59位的亮氨酸，e)以异亮氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第97位的亮氨酸，f)以苯基丙氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第99位的酪氨酸，g)以苏氨酸取代序列编号41的氨基酸序列第65位的丝氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号41的氨基酸序列第68位的天冬氨酸。(19)如(17)或(18)所述的作为抗体的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其包含：具有序列编号40或42的氨基酸序列的轻链可变区，以及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区；并且，该轻链可变区及重链可变区具有1种以上的下述的任1种取代：a)以赖氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第33位的天冬酰胺，b)以亮氨酸或精氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第34位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号40或42的氨基酸序列第58位的天冬酰胺。(20)如(17)至(19)中任1项所述的作为抗体的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其包含：具有序列编号40或42的氨基酸序列的轻链可变区，以及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区；并且，以谷氨酰胺取代序列编号40或42的氨基酸序列第58位的天冬酰胺；再者，也可具有以下的任1种取代：a)以赖氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第33位的天冬酰胺，b)以亮氨酸或精氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第34位的甘氨酸。(21)如(20)所述的作为抗体的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其包含：具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区、及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区；并且，以谷氨酰胺取代序列编号42的氨基酸序列第58位的天冬酰胺，以精氨酸取代序列编号42的氨基酸序列第34位的甘氨酸。(22)如(20)所述的作为抗体的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其包含：具有序列编号59的氨基酸序列的轻链可变区、及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区。(23)如(14)所述的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其包含下述轻链可变区及重链可变区；其中，该轻链可变区由序列编号54、55或56的氨基酸序列，或者，与序列编号54、55或56的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成；该重链可变区由序列编号57或58的氨基酸序列，或者，与序列编号57或58的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成。(24)如(14)或(23)所述的作为抗体的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其包含下述1)、2)、3)、4)、5)、6)：1)具有序列编号54的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号57的氨基酸序列的重链可变区，2)具有序列编号55的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号57的氨基酸序列的重链可变区，3)具有序列编号56的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号57的氨基酸序列的重链可变区，4)具有序列编号54的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号58的氨基酸序列的重链可变区，5)具有序列编号55的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号58的氨基酸序列的重链可变区，或6)具有序列编号56的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号58的氨基酸序列的重链可变区；并且，可具有1种以上的下述的任一种取代：a)以苏氨酸取代序列编号54、55或56的氨基酸序列第25位的丝氨酸，b)以苏氨酸取代序列编号54、55或56的氨基酸序列第26位的丝氨酸，c)以苏氨酸取代序列编号54、55或56的氨基酸序列第28位的丝氨酸，d)以天冬酰胺取代序列编号54、55或56的氨基酸序列第95位的谷氨酰胺，e)以丝氨酸取代序列编号57或58的氨基酸序列第31位的苏氨酸，f)以缬氨酸取代序列编号57或58的氨基酸序列第63位的丙氨酸，g)以精氨酸取代序列编号57或58的氨基酸序列第67位的赖氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号57或58的氨基酸序列第68位的天冬氨酸，i)以谷氨酰胺取代序列编号57或58的氨基酸序列第99位的天冬酰胺，j)以苯基丙氨酸取代序列编号57或58的氨基酸序列第105位的酪氨酸。(25)如(24)所述的作为抗体的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其包含：具有序列编号56的氨基酸序列的轻链可变区、及具有序列编号57的氨基酸序列的重链可变区；并且，也可具有1种以上的下述的任1种取代：a)以苏氨酸取代序列编号56的氨基酸序列第25位的丝氨酸，b)以苏氨酸取代序列编号56的氨基酸序列第26位的丝氨酸，c)以苏氨酸取代序列编号56的氨基酸序列第28位的丝氨酸，d)以天冬酰胺取代序列编号56的氨基酸序列第95位的谷氨酰胺，e)以丝氨酸取代序列编号57的氨基酸序列第31位的苏氨酸，f)以缬氨酸取代序列编号57的氨基酸序列第63位的丙氨酸，g)以精氨酸取代序列编号57的氨基酸序列第67位的赖氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号57的氨基酸序列第68位的天冬氨酸，i)以谷氨酰胺取代序列编号57的氨基酸序列第99位的天冬酰胺，j)以苯基丙氨酸取代序列编号57的氨基酸序列第105位的酪氨酸。(26)如(14)至(25)中任1项所述的作为抗体的人源化单克隆抗体或其抗体片段，其还包含：具有序列编号52的氨基酸序列的轻链恒定区、及具有序列编号53的氨基酸序列的重链恒定区，并且，于序列编号53的c末端可添加或不添加赖氨酸。(27)一种医药组合物，其含有(1)至(26)中任1项所述的抗体或其抗体片段。(28)一种医药组合物，其含有(1)至(26)中任1项所述的抗体或其抗体片段，用于阻碍ccr8与ccr8配体的任一者的结合。(29)一种医药组合物，其含有(1)至(26)中任1项所述的抗体或其抗体片段，该抗体或其抗体片段作为中和抗体使用。(30)一种医药组合物，其含有(1)至(26)中任1项所述的结合于ccr8的单克隆抗体或其抗体片段，用于识别序列编号1表示的氨基酸序列第17位的酪氨酸。(31)如(30)所述的医药组合物，其用于阻碍ccr8与ccr8配体的任一者的结合。(32)如(27)至(31)中任1项所述的医药组合物，其中，抗体具有adcc活性。(33)如(27)至(31)中任1项所述的医药组合物，其中，抗体为igg抗体。(34)如(27)至(33)中任1项所述的医药组合物，其用于治疗癌症。(35)一种多核苷酸，其编码(7)至(18)中任1项所述的抗体的轻链可变区或重链可变区。(36)一种表达载体，其含有(35)所述的多核苷酸。(51)一种结合于ccr8的单克隆抗体或其抗体片段，其识别由如(7)至(19)中任1项所述的抗体所识别的抗原上的部位。(52)如(51)所述的抗体或其抗体片段，其为中和抗体。(53)如(51)或(52)所述的抗体或抗体片段，其为人源化单克隆抗体或其抗体片段。(54)一种单克隆抗体或其抗体片段，其对于人类ccr8具有中和活性，并且，关于与人类ccr8的结合，其与如(7)至(26)中任1项所述的抗体竞合。(55)一种单克隆抗体或其抗体片段，其对于人类ccr8具有中和活性，并且，关于与人类ccr8的结合，其与包含具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区的抗体竞合。(56)一种单克隆抗体或其抗体片段，其识别与包含具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区的抗体的抗原表位(epitope)完全或部分相同的抗原表位。(57)一种单克隆抗体或其抗体片段，其对于人类ccr8具有中和活性，并且，关于与人类ccr8的结合，其与包含具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区、并以谷氨酰胺取代序列编号42的氨基酸序列第58位的天冬酰胺、且以精氨酸取代序列编号42的氨基酸序列第34位的甘氨酸的抗体竞合。(58)一种单克隆抗体或其抗体片段，其识别与包含具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区、并以谷氨酰胺取代序列编号42的氨基酸序列第58位的天冬酰胺、且以精氨酸取代序列编号42的氨基酸序列第34位的甘氨酸的抗体的抗原表位完全或部分相同的抗原表位。(59)如(54)至(58)中任1项所述的单克隆抗体或抗体片段，其识别序列编号1表示的氨基酸序列第17位的酪氨酸的抗体或其抗体片段。(60)如(59)所述的抗体或其抗体片段，其更进一步识别序列编号1表示的氨基酸序列第94位至第107位中的1个以上的氨基酸。(61)如(59)或(60)所述的抗体或其抗体片段，其更进一步识别序列编号1表示的氨基酸序列第172位至第202位中的1个以上的氨基酸。(62)如(59)至(61)中任1项所述的抗体或其抗体片段，其识别序列编号1表示的氨基酸序列第20位的异亮氨酸、第22位的丝氨酸、第35位的赖氨酸、第181位的亮氨酸、第183位的半胱氨酸及第188位的天冬酰胺中的1个以上的氨基酸。(63)如(54)至(62)中任1项所述的单克隆抗体或抗体片段，其为人源化单克隆抗体或其抗体片段。(64)一种医药组合物，其含有上述(54)至(63)中任1项所述的单克隆抗体或其抗体片段。(71)如(1)至(5)或(7)至(13)中任1项所述的抗体或其抗体片段，其由会产生抗体的杂交瘤产生，该杂交瘤以人类ccr8基因作为抗原而制作。(81)一种单克隆抗体或抗体片段，其是结合于人类ccr8的单克隆抗体或其抗体片段(以下的抗体除外)，并识别序列编号1表示的氨基酸序列第17位的酪氨酸：a)wo2007/044756所记载的414b、414c、414e、433h、459m、464a、464b、433b及455al表示的抗ccr8抗体，b)qu等的论文(j.exp.med.,(2004),200(10),1231-1241)所记载的3b10、2d10及5b11表示的抗ccr8抗体，c)biolegend公司的产品编号l263g8的抗ccr8抗体，d)r&d公司的产品编号191704的抗ccr8抗体。(91)一种阻碍ccr8与ccr8配体的任一者的结合的方法，其特征在于，使用(1)至(26)中任1项所述的抗体或其抗体片段。(92)一种癌症的治疗方法，其特征在于，给药(1)至(26)中任1项所述的抗体或其抗体片段。(93)一种识别序列编号1表示的氨基酸序列第17位的酪氨酸的方法，其中，使用(7)至(26)中任1项所述的结合于ccr8的单克隆抗体或其抗体片段。(94)一种(1)至(26)中任1项所述的抗体或其抗体片段用以制造阻碍ccr8与ccr8配体的任一者的结合的药剂的用途。(95)一种(1)至(26)中任1项所述的抗体或其抗体片段用以制造癌症的治疗剂的用途。(96)一种(1)至(26)中任1项所述的结合于ccr8的单克隆抗体或其抗体片段用以制造识别序列编号1表示的氨基酸序列第17位的酪氨酸的药剂的用途。(97)如(1)至(26)中任1项所述的抗体或其抗体片段，其用于阻碍ccr8与ccr8配体的任一者的结合。(98)如(1)至(26)中任1项所述的抗体或其抗体片段，其用于治疗癌症。(99)如(1)至(26)中任1项所述的结合于ccr8的单克隆抗体或其抗体片段，其用于识别序列编号1表示的氨基酸序列第17位的酪氨酸。[发明的效果]由于本发明的单克隆抗体或其抗体片段特异性结合于人类ccr8，因此，可用于检测生物试样中的人类ccr8。再者，由于本发明的单克隆抗体或其抗体片段具有选择性阻碍人类ccr8的活性，因此，含有本发明的单克隆抗体或其抗体片段的医药组合物在作为医药品时，尤其是在作为治疗或预防人类ccr8相关疾病的医药时为非常有用。【附图说明】图1是将人类ccr8、人类ccr4及相当于人类ccr8的细胞外区域的n末端区域、loop1区域、loop2区域或loop3区域，与经取代为各自对应的人类ccr4的n末端区域、loop1区域、loop2区域或loop3区域的各嵌合体的氨基酸序列加以比较。图2是10a11、27g1、1h4、19d7、8f7及2c7的轻链可变区的kabatnumbering及比对(alignment)结果。图3是10a11、27g1、1h4、19d7、8f7及2c7的重链可变区的kabatnumbering及比对结果。图4是10a11的轻链可变区、igkv4-1、igkv3-20、igkv1-39、igkv2-40、igkv2-28及igkv1-16的kabatnumbering及比对结果。图5是10a11的重链可变区、ighv3-15t94r及ighv3-73的kabatnumbering及比对结果。图6是19d7的轻链可变区、igkv3-15、igkv2-18及igkv3-20的kabatnumbering及比对结果。图7是19d7的重链可变区、ighv3-15t94r及ighv3-73的kabatnumbering及比对结果。图8是针对经移植有源自大肠癌的ct26细胞的人类ccr8敲入小鼠，通过测定移植后的肿瘤体积，来评估抗人类ccr8抗体的抗肿瘤活性。显著水平**根据welch’sttest而**表示p<0.01，***表示p<0.001。【具体实施方式】于本说明书中使用的用语，除非特别提及，不然即为于该领域通常使用的意思。于本发明中，可利用于该领域公知的抗体制作手法。可列举例如immunochemistryinpractice(blackwellscientificpubliations)中记载的方法等。此外，可利用该领域公知的基因操作手法。可列举例如molecularcloning,alaboratorymanual,forthedition,coldspringharborlaboratorypress(2012)、currentprotocolsessentiallaboratorytechniques,currentprotocols(2012)中记载的方法等。人类ccr8的氨基酸序列，表示于uniprotkb/swiss-prot：p51685(序列编号1)。人类ccr8的膜外区域对应于由第1至35位氨基酸构成的n末端区域、由第94至107位氨基酸构成的loop1区域、由第172至202位氨基酸构成的loop2区域、由第264至280位氨基酸构成的loop3区域。人类ccr8的氨基酸序列中的第17位为酪氨酸，小鼠ccr8的氨基酸序列中的第17位为缺失。本发明的单克隆抗体或其抗体片段如实施例3的表2所示，对于小鼠ccr8不具有结合活性。关于针对小鼠ccr8的单克隆抗体，biolegend公司有销售抗体sa214g2。该抗体具有小鼠ccr8的中和活性。本发明人等已确认该抗体对于人类ccr8未显示结合活性，不会识别人类ccr8的氨基酸序列第17位的酪氨酸。此外，亦确认该抗体会识别小鼠ccr8的氨基酸序列第27位的苯基丙氨酸，关于针对小鼠ccr8的中和活性的表达，该氨基酸为重要的氨基酸。小鼠ccr8的氨基酸序列第27位的氨基酸，在比对上为相当于人类ccr8的氨基酸序列第29位的氨基酸。人类ccr8的氨基酸序列第29位的氨基酸为亮氨酸。依据此差异，认为对于小鼠ccr8具有中和活性的单克隆抗体对于人类ccr8未显示结合活性。产生本发明的抗ccr8抗体的杂交瘤，可通过以人类ccr8蛋白质、编码人类ccr8全长的基因、人类ccr8表达细胞等作为免疫原而制作。以编码人类ccr8全长的基因作为免疫原时，例如，可通过使以该基因作为抗原而dna免疫的小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，而获得产生抗ccr8抗体的杂交瘤。关于本发明单克隆抗体或其抗体片段的1种态样，可列举本说明书所述的具有cdr或重链可变区/轻链可变区的单克隆抗体或该抗体的片段。该抗体或抗体片段可源自免疫球蛋白分子的任意等级(例如igg、ige、igm、igd或iga。优选为igg)或亚等级，可由包含例如小鼠、大鼠、鲨鱼、兔子、猪、仓鼠、骆驼、大羊驼、山羊或人类的任意种类而取得。该抗体或抗体片段优选为人源化单克隆抗体或人源化单克隆抗体的抗体片段。本说明书中，抗原表位是指通过以其抗原作为目标的抗体而结合的抗原的区域，抗原为蛋白质时，则包含直接与抗体接触的特定氨基酸。本发明不仅包含识别与本发明的单克隆抗体或其抗体片段为完全相同的抗原表位的单克隆抗体或其抗体片段，而且亦包含识别部分性相同的抗原表位的单克隆抗体或其抗体片段。本发明的单克隆抗体或其片段为会识别人类ccr8的氨基酸序列第17位的酪氨酸，且为结合于人类ccr8的单克隆抗体或其抗体片段。再者，上述的单克隆抗体或其抗体片段中，优选为以下的单克隆抗体或其抗体片段：一种结合于人类ccr8的单克隆抗体或其抗体片段，其识别相当于人类ccr8的loop1的该氨基酸序列第94位至107位中的1个以上的氨基酸；一种结合于人类ccr8的单克隆抗体或其抗体片段，其识别相当于人类ccr8的loop2的该氨基酸序列第172位至第202位中的1个以上的氨基酸；一种结合于人类ccr8的单克隆抗体或其抗体片段，其识别人类ccr8的氨基酸序列第20位的异亮氨酸、第22位的丝氨酸、第35位的赖氨酸、第181位的亮氨酸、第183位的半胱氨酸及第188位的天冬酰胺中的1个以上的氨基酸。此处，于上述的优选情况下，也可识别任意选自上述表示的抗原表位中的多个抗原表位。此外，本发明的单克隆抗体或其抗体片段也可更进一步识别人类ccr8的氨基酸序列中的上述氨基酸以外的氨基酸。本发明的单克隆抗体，只要是能识别人类ccr8的氨基酸序列第17位的酪氨酸者即可，并无特别限制，在1种态样中，本发明的单克隆抗体的cdr序列优选为具有以下的序列：(1)轻链cdr1：序列编号2、14或20，(2)轻链cdr2：序列编号3、9、15或21，(3)轻链cdr3：序列编号4、10、16或22，(4)重链cdr1：序列编号5、8、12、17或23，(5)重链cdr2：序列编号6、18或24，(6)重链cdr3：序列编号7、11、13、19或25。更优选为具有以下的序列：(1)轻链cdr1：序列编号2，(2)轻链cdr2：序列编号3或9，(3)轻链cdr3：序列编号4或10，(4)重链cdr1：序列编号5、8或12，(5)重链cdr2：序列编号6，(6)重链cdr3：序列编号7、11或13。最优选为具有以下的序列：(1)轻链cdr1：序列编号2，(2)轻链cdr2：序列编号3，(3)轻链cdr3：序列编号4，(4)重链cdr1：序列编号5，(5)重链cdr2：序列编号6，(6)重链cdr3：序列编号7。此外，于上述的各氨基酸序列(序列编号2至25)中，可有1或2个氨基酸缺失、取代、插入及/或添加。此处，于本发明的单克隆抗体的cdr序列中，可以谷氨酰胺或赖氨酸取代天冬酰胺，以谷氨酸取代天冬氨酸，以异亮氨酸取代亮氨酸，以苯基丙氨酸取代酪氨酸，以苏氨酸取代丝氨酸，以谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸或精氨酸取代甘氨酸。优选可具有1种以上的下述的任意取代：a)以赖氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第10位的天冬酰胺，b)以谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸或精氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第11位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号3的氨基酸序列第4位的天冬酰胺，d)以异亮氨酸取代序列编号3的氨基酸序列第5位的亮氨酸，e)以异亮氨酸取代序列编号4的氨基酸序列第4位的亮氨酸，f)以苯基丙氨酸取代序列编号4的氨基酸序列第6位的酪氨酸，g)以苏氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第16位的丝氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第19位的天冬氨酸。更优选可具有1种以上的下述的任意取代：a)以赖氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第10位的天冬酰胺，b)以亮氨酸或精氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第11位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号3的氨基酸序列第4位的天冬酰胺。进一步优选为以谷氨酰胺取代序列编号3的氨基酸序列第4位的天冬酰胺，再者，可具有1种以上的下述的任意取代：a)以赖氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第10位的天冬酰胺，b)以亮氨酸或精氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第11位的甘氨酸。此外，本发明的单克隆抗体在具有以下的序列时，(1)轻链cdr1：序列编号2，(2)轻链cdr2：序列编号9，(3)轻链cdr3：序列编号10，(4)重链cdr1：序列编号8，(5)重链cdr2：序列编号6，(6)重链cdr3：序列编号11，也可具有1种以上的下述的任意取代：a)以苏氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第2位的丝氨酸，b)以苏氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第3位的丝氨酸，c)以苏氨酸取代序列编号2的氨基酸序列第5位的丝氨酸，d)以天冬酰胺取代序列编号10的氨基酸序列第2位的谷氨酰胺，e)以丝氨酸取代序列编号8的氨基酸序列第1位的苏氨酸，f)以缬氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第14位的丙氨酸，g)以精氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第18位的赖氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号6的氨基酸序列第19位的天冬氨酸，i)以谷氨酰胺取代序列编号11的氨基酸序列第5位的天冬酰胺，j)以苯基丙氨酸取代序列编号11的氨基酸序列第12位的酪氨酸。于本发明中，「单克隆抗体的抗体片段」是指本发明的单克隆抗体的一部分，并且其是与该单克隆抗体同样地特异性结合于人类ccr8且选择性阻碍人类ccr8的片段。本发明的单克隆抗体的抗体片段会识别人类ccr8的氨基酸序列第17位的酪氨酸。具体而言，可列举例如对于人类ccr8为特异性结合的fab(抗原结合片段，fragmentofantigenbinding)、fab’、f(ab’)2、单链抗体(singlechainfv；以下标记为scfv)、二硫化物安定化抗体(disulfidestabilizedfv；以下标记为dsfv)、二聚物v区域片段(以下标记为diabody)、含有cdr的肽等(expertopinionontherapeuticpatents,第6卷,第5号,第441至456页,1996年)。fab为分子量约5万的具有抗原结合活性的抗体片段，其是通过将在igg铰链区域交联有2支h链的2个双硫键(s-s键)的上部的肽部分以酵素木瓜蛋白酶进行分解而获得，并且由h链n末端侧约一半及l链全体所构成。本发明所使用的fab，可通过将本发明的单克隆抗体进行木瓜蛋白酶处理而获得。此外，也可通过将编码本发明单克隆抗体的fab的dna插入至细胞用表达载体中，将该载体导入至细胞并表达，从而制造fab。fab’为通过将f(ab’)2铰链间的s-s键切断而成的分子量约5万的具有抗原结合活性的抗体片段。本发明所使用的fab’，可通过将本发明的单克隆抗体的f(ab’)2进行还原剂二硫苏糖醇处理而获得。此外，也可通过将编码本发明单克隆抗体的fab’的dna插入至细胞用表达载体中，将该载体导入至大肠杆菌、酵母或动物细胞中并表达，从而制造fab’。f(ab’)2为分子量约10万的具有抗原结合活性的抗体片段，其是通过将igg的铰链区域的2个s-s键的下部以酵素胃蛋白酶进行分解而获得，并且2个fab’区域是以铰链部分进行结合而构成。本发明所使用的f(ab’)2，可通过将本发明的单克隆抗体进行胃蛋白酶处理而获得。此外，可通过将编码本发明单克隆抗体的f(ab’)2的dna插入至细胞用表达载体中，将该载体导入至大肠杆菌、酵母或动物细胞中并表达，从而制造f(ab’)2。scfv为具有抗原结合活性的抗体片段，其是通过将1支vh与1支vl使用适当的肽连接链(peptidelinker，以下标记为p)而链接成的vh-p-vl或vl-p-vh多肽。本发明所使用的scfv中所含有的vh及vl，只要是本发明的单克隆抗体即可。本发明所使用的scfv，也可通过使用编码本发明单克隆抗体的vh及vl的cdna来构筑表达scfv的载体，将其导入至大肠杆菌、酵母或动物细胞中并表达，从而制造的。dsfv为将多肽经由s-s键而结合者，所述多肽是将vh及vl中的各1个氨基酸残基取代成半胱氨酸残基而得。关于要被取代成半胱氨酸残基的氨基酸残基，可依照reiter人等所示的方法(proteinengineering,7,697(1994))，依据抗体的立体构造预测而加以选择。本发明所使用的dsfv中含有的vh或vl，只要是本发明的单克隆抗体即可。本发明所使用的dsfv，可通过使用编码本发明单克隆抗体的vh及vl的cdna，插入至适当的表达载体中来构筑表达dsfv的载体，将该表达载体导入至大肠杆菌、酵母或动物细胞中并表达，从而制造的。diabody为由抗原结合特异性相同或不同的scfv形成二聚物而成的抗体片段，且为具有对于相同抗原的2价抗原结合活性或对于不同抗原的2种特异性抗原结合活性的抗体片段。例如，对于本发明的单克隆抗体为特异性反应的2价的diabody，可通过使用编码本发明单克隆抗体的vh及vl的cdna，来构筑编码具有3至10个残基的肽连接链的scfv的dna，将该dna插入至细胞用表达载体中，将该表达载体导入至大肠杆菌、酵母或动物细胞中并表达diabody，从而制造的。含有cdr的肽含有vh或vl的cdr的至少1个区域以上而构成。多个cdr可直接或经由适当的肽连接链而结合。本发明所使用的含有cdr的肽，可通过使用编码本发明单克隆抗体的vh及vl的cdna来构筑编码cdr的dna，将该dna插入至动物细胞用表达载体中，将该载体导入至大肠杆菌、酵母或动物细胞中并表达，从而制造的。此外，含有cdr的肽可通过fmoc法(芴甲氧基羰基法)、tboc法(叔丁氧基羰基法)等化学合成法而制造的。本发明的单克隆抗体或其抗体片段的特征为结合于人类ccr8。特别优选为特异性结合者。特异性结合的特征可为至少约1×10-6m以下的平衡解离常数(例如kd越小，则表示越紧密结合)。kd值优选为1×10-7m以下，更优选为1×10-8m以下，进一步优选为1×10-9m以下。关于测定2个分子是否有特异性结合的方法，于该
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：为周知，可列举竞合elisa法、表面电浆子共振(surfaceplasmonresonance)及同样者。本发明中，关于对于人类ccr8的结合，包含与本说明书中记载的单克隆抗体或其抗体片段竞合的单克隆抗体或其抗体片段。「竞合的单克隆抗体或其抗体片段」是指阻碍本发明的单克隆抗体或其抗体片段(优选为本说明书的实施例所述的抗体。特别优选为10a11。例如一种抗体，其包含：具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区；一种抗体，其包含：具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，并且以谷氨酰胺取代序列编号42的氨基酸序列第58位的天冬酰胺，以精氨酸取代序列编号42的氨基酸序列第34位的甘氨酸)特异性结合于人类ccr8的抗体或其抗体片段。决定某一单克隆抗体或其抗体片段是否与本发明的单克隆抗体或其抗体片段竞合。在经确认于同型对照组抗体(isotypecontrolantibody)共存下与抗原(人类ccr8)结合的抗体中，可将「于本发明单克隆抗体或其抗体片段共存下的结合讯号显著降低的抗体」鉴定为与本发明的单克隆抗体或其抗体片段竞合的抗体。该结合讯号的降低优选为50％，更优选为70％。此外，「与本发明的单克隆抗体或其抗体片段竞合的抗体」的相对于「该本发明的单克隆抗体或其抗体片段与抗原的结合」的ki值优选为1×10-7m以下，更优选为1×10-8m以下，进一步优选为1×10-9m以下。由如此操作而获得的与本发明的单克隆抗体或其抗体片段竞合的抗体的人类ccr8的中和活性，优选ic50值为10nm以下。本发明的单克隆抗体或其抗体片段的特征为阻碍ccr8与ccr8配体的任一者的结合。「ccr8配体」只要是ccl1、ccl8、ccl18等结合于ccr8的物质即可，并无特别限制，优选为ccl1、ccl18，特别优选为ccl1。关于ccr8与ccr8配体的结合阻碍能力，例如若为人类ccl1，则使用人类ccr8表达293细胞，测定因添加人类ccl1所致的ca2+流入，以未添加人类ccl1时的讯号作为阻碍率100％，并以添加人类ccl1及未添加抗体时的讯号作为阻碍率0％，计算ic50值而决定的。关于其他的ccr8配体的结合阻碍能力，亦以与上述人类ccl1的情况相同的方式决定。人类ccl1具有uniprotkb/swiss-protno.p22362等表示的氨基酸序列。人类ccl8具有genbankno.aai26243.1等表示的氨基酸序列。人类ccl18具有genbankno.eaw80102.1等表示的氨基酸序列。本发明的单克隆抗体，可使用本说明书所述的cdr或重链可变区/轻链可变区并通过该技术区域的常法而制作的。本发明的单克隆抗体亦包含嵌合体、人源化、完全人源化、抗体低分子复合体(adc)及双重特异性抗体。人源化单克隆抗体由于在人类体内的抗原性降低，故可在以治疗为目的等给药于人类时使用。人源化单克隆抗体通过将人类以外的哺乳动物(例如小鼠)抗体的互补性决定区域(cdr；complementaritydeterminingregion)移植到人类抗体的框架区域(fr；frameworkregion)而成者。因此，人源化单克隆抗体的fr源自人类。适当的fr可参照kabate.a.人等文献而加以选择。此时的fr选择使cdr可形成良好的抗原结合部位者。必要时，可以使再构成的人源化单克隆抗体的cdr形成适当的抗原结合部位的方式，将抗体的可变区的fr的氨基酸取代(sato、k.人等，cancerres.1993年,第53卷,851页)。经取代的fr的氨基酸的比例为全fr区域的0至15％，优选为0至5％。本发明的人源化单克隆抗体优选为包含下述轻链可变区及重链可变区：该轻链可变区由序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列，或者，与序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成；该重链可变区由序列编号41或46的氨基酸序列，或者，与序列编号41或46的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成。更优选为包含下述1)、2)、3)、4)、5)、6)、7)、8)、9)、10)、11)或12)：1)具有序列编号40的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，2)具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，3)具有序列编号43的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，4)具有序列编号44的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，5)具有序列编号45的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，6)具有序列编号47的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，7)具有序列编号40的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区，8)具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区，9)具有序列编号43的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区，10)具有序列编号44的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区，11)具有序列编号45的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区，或12)具有序列编号47的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号46的氨基酸序列的重链可变区；并且，可具有1种以上的下述的任意取代：a)以赖氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第33位的天冬酰胺，b)以谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸或精氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第34位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第58位的天冬酰胺，d)以异亮氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第59位的亮氨酸，e)以异亮氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第97位的亮氨酸，f)以苯基丙氨酸取代序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列第99位的酪氨酸，g)以苏氨酸取代序列编号41或46的氨基酸序列第65位的丝氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号41或46的氨基酸序列第68位的天冬氨酸。进一步更优选为包含下述1)或2)：1)具有序列编号40的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，或2)具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区；并且，可具有1种以上的下述的任意取代：a)以赖氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第33位的天冬酰胺，b)以谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸或精氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第34位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号40或42的氨基酸序列第58位的天冬酰胺，d)以异亮氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第59位的亮氨酸，e)以异亮氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第97位的亮氨酸，f)以苯基丙氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第99位的酪氨酸，g)以苏氨酸取代序列编号41的氨基酸序列第65位的丝氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号41的氨基酸序列第68位的天冬氨酸。特别优选为包含下述1)或2)：1)具有序列编号40的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区；或2)具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区；并且，可具有1种以上的下述的任意取代：a)以赖氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第33位的天冬酰胺，b)以亮氨酸或精氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第34位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代序列编号40或42的氨基酸序列第58位的天冬酰胺。最优选为包含下述1)或2)：1)具有序列编号40的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区，或2)具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区；并且，以谷氨酰胺取代序列编号40或42的氨基酸序列第58位的天冬酰胺，再者，可具有下述的任1种取代：a)以赖氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第33位的天冬酰胺，b)以亮氨酸或精氨酸取代序列编号40或42的氨基酸序列第34位的甘氨酸。最优选为一种人源化单克隆抗体，其包含：具有序列编号42的氨基酸序列的轻链可变区、及具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区；并且，以谷氨酰胺取代序列编号42的氨基酸序列第58位的天冬酰胺，以精氨酸取代序列编号42的氨基酸序列第34位的甘氨酸。本发明的人源化单克隆抗体中的轻链可变区及重链可变区的序列，可列举例如表1的组合。[表1]此处，上述表1的「取代的种类」中的各符号分别意指以下的取代：(1)具有序列编号40或42的氨基酸序列的轻链可变区：a)以赖氨酸取代氨基酸序列第33位的天冬酰胺，b1)以谷氨酰胺取代氨基酸序列第34位的甘氨酸，b2)以苏氨酸取代氨基酸序列第34位的甘氨酸，b3)以丙氨酸取代氨基酸序列第34位的甘氨酸，b4)以赖氨酸取代氨基酸序列第34位的甘氨酸，b5)以亮氨酸取代氨基酸序列第34位的甘氨酸，b6)以精氨酸取代氨基酸序列第34位的甘氨酸，c)以谷氨酰胺取代氨基酸序列第58位的天冬酰胺，d)以异亮氨酸取代氨基酸序列第59位的亮氨酸，e)以异亮氨酸取代氨基酸序列第97位的亮氨酸，f)以苯基丙氨酸取代氨基酸序列第99位的酪氨酸；(2)具有序列编号41的氨基酸序列的重链可变区：g)以苏氨酸取代氨基酸序列第65位的丝氨酸，h)以谷氨酸取代氨基酸序列第68位的天冬氨酸。本发明的人源化单克隆抗体的其他态样，包含下述轻链可变区及重链可变区：其中，该轻链可变区由序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列，或者，与序列编号40、42、43、44、45或47的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成，该氨基酸序列第26位为丝氨酸、第27位为赖氨酸、第30位为亮氨酸、第98位为谷氨酸；该重链可变区由序列编号41或46的氨基酸序列，或者，与序列编号41或46的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成，该氨基酸序列第33位为丙氨酸、第35位为酪氨酸、第52位为精氨酸、第56位为天冬酰胺、第62位为酪氨酸、第102位为精氨酸、第103位为苯基丙氨酸、第104位为酪氨酸、第109位为甘氨酸、第113位为天冬氨酸。更优选为包含下述轻链可变区及重链可变区：其中，该轻链可变区由序列编号40或42的氨基酸序列，或者，与序列编号40或42的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成，该氨基酸序列第26位为丝氨酸、第27位为赖氨酸、第30位为亮氨酸、第98位为谷氨酸；该重链可变区由序列编号41或46的氨基酸序列，或者，与序列编号41或46的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成，该氨基酸序列第33位为丙氨酸、第35位为酪氨酸、第52位为精氨酸、第56位为天冬酰胺、第62位为酪氨酸、第102位为精氨酸、第103位为苯基丙氨酸、第104位为酪氨酸、第109位为甘氨酸、第113位为天冬氨酸。进一步优选为包含下述轻链可变区及重链可变区：其中，该轻链可变区由序列编号42的氨基酸序列，或者，与序列编号42的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成，该氨基酸序列第26位为丝氨酸、第27位为赖氨酸、第30位为亮氨酸、第98位为谷氨酸；该重链可变区由序列编号41或46的氨基酸序列，或者，与序列编号41或46的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成，该氨基酸序列第33位为丙氨酸、第35位为酪氨酸、第52位为精氨酸、第56位为天冬酰胺、第62位为酪氨酸、第102位为精氨酸、第103位为苯基丙氨酸、第104位为酪氨酸、第109位为甘氨酸、第113位为天冬氨酸。本发明的人源化单克隆抗体优选为包含下述轻链可变区及重链可变区：其中，该轻链可变区由序列编号54、55或56的氨基酸序列，或者，与序列编号54、55或56的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成；该重链可变区由序列编号57或58的氨基酸序列，或者，与序列编号57或58的氨基酸序列有95％以上的一致性的氨基酸序列所构成。更优选为包含下述1)、2)、3)、4)、5)、6)：1)具有序列编号54的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号57的氨基酸序列的重链可变区，2)具有序列编号55的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号57的氨基酸序列的重链可变区，3)具有序列编号56的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号57的氨基酸序列的重链可变区，4)具有序列编号54的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号58的氨基酸序列的重链可变区，5)具有序列编号55的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号58的氨基酸序列的重链可变区，6)具有序列编号56的氨基酸序列的轻链可变区及具有序列编号58的氨基酸序列的重链可变区；并且，可具有1种以上的下述的任意取代：a)以苏氨酸取代序列编号54、55或56的氨基酸序列第25位的丝氨酸，b)以苏氨酸取代序列编号54、55或56的氨基酸序列第26位的丝氨酸，c)以苏氨酸取代序列编号54、55或56的氨基酸序列第28位的丝氨酸，d)以天冬酰胺取代序列编号54、55或56的氨基酸序列第95位的谷氨酰胺，e)以丝氨酸取代序列编号57或58的氨基酸序列第31位的苏氨酸，f)以缬氨酸取代序列编号57或58的氨基酸序列第63位的丙氨酸，g)以精氨酸取代序列编号57或58的氨基酸序列第67位的赖氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号57或58的氨基酸序列第68位的天冬氨酸，i)以谷氨酰胺取代序列编号57或58的氨基酸序列第99位的天冬酰胺，j)以苯基丙氨酸取代序列编号57或58的氨基酸序列第105位的酪氨酸。进一步优选为包含：具有序列编号56的氨基酸序列的轻链可变区、及具有序列编号57的氨基酸序列的重链可变区；并且，可具有1种以上的下述的任意取代：a)以苏氨酸取代序列编号56的氨基酸序列第25位的丝氨酸，b)以苏氨酸取代序列编号56的氨基酸序列第26位的丝氨酸，c)以苏氨酸取代序列编号56的氨基酸序列第28位的丝氨酸，d)以天冬酰胺取代序列编号56的氨基酸序列第95位的谷氨酰胺，e)以丝氨酸取代序列编号57的氨基酸序列第31位的苏氨酸，f)以缬氨酸取代序列编号57的氨基酸序列第63位的丙氨酸，g)以精氨酸取代序列编号57的氨基酸序列第67位的赖氨酸，h)以谷氨酸取代序列编号57的氨基酸序列第68位的天冬氨酸，i)以谷氨酰胺取代序列编号57的氨基酸序列第99位的天冬酰胺，j)以苯基丙氨酸取代序列编号57的氨基酸序列第105位的酪氨酸。此外，本发明的人源化单克隆抗体使用人源抗体的恒定区。优选的人源抗体的恒定区中，重链可列举cγ，例如cγ1，cγ2，cγ3，cγ4，轻链可使用cκ、cλ。另外，为了改善抗体或其产生的安定性，可将人源抗体的c区域加以修饰。人源化时所使用的人源抗体可为igg、igm、iga、ige、igd等任何同型的人源抗体，本发明中优选为使用igg，进一步优选为igg1或igg4。本发明的人源化单克隆抗体可于重链恒定区的c末端添加或未添加赖氨酸。优选为具有序列编号52的氨基酸序列的轻链恒定区及序列编号53的氨基酸序列的重链恒定区，并且于序列编号53的c末端添加或未添加赖氨酸。人源化单克隆抗体可通过一般的制造方法制造(例如参照wo95/14041号公报、wo96/02576号公报等)。具体而言，首先，使用经制作成使末端部具有重迭部分的数个寡核苷酸，通过pcr法，而合成编码「经设计成使小鼠抗体的cdr与人源抗体的fr链接的可变区」的dna序列(参照wo98/13388号公报)。将获得的dna与编码人源抗体的恒定区的dna链接，其次，编入至表达载体中。或是编码抗体的可变区的dna编入至含有抗体的恒定区的dna的表达载体中。若欲制造本发明所使用的抗体，则要将抗体基因编入至表达载体中，以在表达控制区域(例如增强子/启动子的控制处)表达。接着，通过该表达载体将宿主细胞转化，从而可使抗体表达。上述转化体的宿主细胞可列举例如cos细胞、cho细胞等脊椎动物细胞、原核细胞、酵母等。转化体可依照发明所属
技术领域：
：中具有通常知识者周知的方法进行培养，通过该培养，在转化体细胞内或细胞外产生本发明的单克隆抗体。该培养所使用的培养基，可对应所采用的宿主细胞而适当选择惯用的各种培养基，例如为cos细胞时，可使用于rpmi-1640培养基或达尔伯克改良伊格尔最低限度必需培养基(dulbecco'smodifiedeaglesmedium，dmem))等培养基中，视需要时添加牛胎儿血清(fbs)等血清成分者。培养该转化体时，培养温度只要是不使细胞内的蛋白质合成能力显著降低的温度即可，优选为32至42℃，最适合于37℃进行培养。此外，可视需要而于含有1至10％(v/v)的二氧化碳气体的空气中进行培养。含有如上述般在转化体的细胞内或细胞外产生的本发明的单克隆抗体的级分(fraction)，可通过利用该蛋白质的物理性质或化学性质等各种公知的分离操作法而分离/精制的。相关的方法，具体而言，可采用例如通过通常的蛋白质沉淀剂所进行的处理、超过滤、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、亲和层析、高速液体层析(hplc)等各种层析、透析法及它们的组合等。通过该方法，可容易地以高收率、高纯度制造本发明的单克隆抗体。本发明的单克隆抗体或其抗体片段，可更进一步通过聚乙二醇(peg)、放射性物质、毒素等各种分子加以修饰。抗体的修饰方法可利用该领域公知的方法。此外，就本发明的单克隆抗体而言，于其n末端或c末端可融合有其他蛋白质(clinicalcancerresearch,2004,10,1274-1281)。本领域技术人员可适当选择融合的蛋白质。本发明的单克隆抗体中，包含在抗体的fc区域结合有n-糖苷结合糖链的抗体。另外，于该n-糖苷结合糖链的还原末端的n-乙酰葡萄糖胺，可不结合岩藻糖。关于在抗体的fc区域结合有n-糖苷结合糖链且于该n-糖苷结合糖链的还原末端的n-乙酰葡萄糖胺未结合有岩藻糖的抗体，可列举例如使用缺失α1,6-岩藻糖转移酵素基因的cho细胞(国际公开第2005/035586号、国际公开第02/31140号)而制作的抗体。在抗体的fc区域结合有n-糖苷结合糖链且于该n-糖苷结合糖链的还原末端的n-乙酰葡萄糖胺未结合有岩藻糖的本发明的抗体，具有高adcc活性。本发明的单克隆抗体或其抗体片段，从除去treg细胞或巨噬细胞的观点而言，优选为对于表达ccr8的细胞具有adcc(antibody-dependentcellmediatedcytotoxicity；抗体相关性细胞所介导的细胞毒性)活性的抗体或其抗体片段。adcc活性是指于生物体内，目标细胞等的细胞表面抗原等上所结合的抗体，通过抗体的fc区域与存在于效应细胞(effectorcell)表面上的fc受体的结合，将效应细胞予以活化，而伤害目标细胞等的活性。效应细胞可列举自然杀手细胞、经活化的巨噬细胞等。此外，于本发明中，亦包含下述情况：于生物体内，treg细胞或巨噬细胞等的细胞表面抗原(ccr8)所结合的抗体，通过抗体的fc区域与存在于效应细胞表面上的fc受体的结合，将效应细胞予以活化，而伤害treg细胞或巨噬细胞等，结果伤害肿瘤细胞等。本发明的单克隆抗体或其抗体片段优选为ccr8的中和抗体或中和抗体片段。所谓ccr8的中和抗体或中和抗体片段，是指对于ccr8具有中和活性的抗体或抗体片段。对于ccr8是否具有中和活性，例如可通过测定是否会抑制ccr8配体的任一者(例如ccl1)对于ccr8的生理作用来判定。关于其例子，可列举测定ccl1对于ccr8的结合、或由ccl1所致的ccr8表达细胞的游走、或对于细胞内ca2+增加或ccl1刺激有感受性的基因的表达变动等，但不只限于此等例。此外，也可依据后述实施例所述的方法来测定。本发明的单克隆抗体或其抗体片段对于ccr8与ccl1的结合的中和活性，可通过对于已预先摄入ca2+指示剂的人类ccr8表达293细胞，添加经培养基稀释的抗体稀释液而测定。关于ccr8与ccr8配体的亲和性，ccl1为最强，对于ccl1具有高阻碍活性的抗体为有用。本发明的单克隆抗体或其抗体片段的中和活性优选ic50值为10nm以下。中和活性更优选ic50值为5nm以下，进一步优选为2nm以下，特别优选为1nm以下，最优选为0.5nm以下。于识别人类ccr8的抗ccr8抗体或其抗体片段中，以强力识别人类ccr8的抗体或其抗体片段为优选。于选择强力识别人类ccr8的抗体或其抗体片段时，若以中和活性的强度作为指标来选择抗体或其抗体片段，则可选择更强力识别人类ccr8的抗体或其抗体片段。识别人类ccr8的氨基酸序列第17位的酪氨酸的抗ccr8抗体或其抗体片段，会阻碍ccr8与ccl1的结合，有用于作为具有中和活性的抗ccr8抗体或其抗体片段。此外，于选择更强力识别人类ccr8的抗体或其抗体片段的观点来看，优选为中和活性高的抗体或其抗体片段。例如，优选为如以下的抗体或其抗体片段：更优选为一种抗体或其抗体片段，其除了识别人类ccr8的氨基酸序列第17位的酪氨酸之外，还识别相当于人类ccr8的loop1的该氨基酸序列第94位至107位中的1个以上的氨基酸及/或相当于人类ccr8的loop2的该氨基酸序列第172位至202位中的1个以上的氨基酸；此外，更优选为一种抗体或其抗体片段，其除了识别人类ccr8的氨基酸序列第17位的酪氨酸之外，更进一步识别人类ccr8的氨基酸序列第20位的异亮氨酸、第22位的丝氨酸、第35位的赖氨酸、第181位的亮氨酸、第183位的半胱氨酸及第188位的天冬酰胺中的1个以上的氨基酸。关于识别人类ccr8的抗体，已知有以下的抗体：a)wo2007/044756记载的414b、414c、414e、433h、459m、464a、464b、433b及455al表示的抗ccr8抗体；b)qu人等的论文(j.exp.med.,(2004),200(10),1231-1241)记载的3b10、2d10及5b11表示的抗ccr8抗体；c)biolegend公司的产品编号l263g8的抗ccr8抗体；d)r&d公司的产品编号191704的抗ccr8抗体。关于a)的抗ccr8抗体，wo2007/044756揭示通过抗原表位解析而知其与人类ccr8的氨基酸序列第1位至39位结合。但是，对于详细的抗原表位部位则完全未分析亦未揭示。关于b)至d)的抗ccr8抗体，对于抗原表位部位完全未揭示。亦即，关于可将识别人类ccr8的氨基酸序列第17位的酪氨酸的单克隆抗体或其抗体片段用于阻碍ccr8与ccr8配体(例如ccl1)的结合一事，于任一文献都未揭示亦未启示。本发明的单克隆抗体或其抗体片段优选为具有除去肿瘤内浸润treg细胞的作用。关于本发明的单克隆抗体是否具有除去肿瘤内浸润treg细胞的作用，可依据例如专利文献2的实施例所述的方法测定。本发明的单克隆抗体或其抗体片段优选为具有除去肿瘤内浸润巨噬细胞的作用。关于本发明的抗体或其抗体片段是否具有除去肿瘤内浸润巨噬细胞的作用，可依据例如专利文献2的实施例所述的方法测定。本发明的单克隆抗体或其抗体片段作为医药组合物是有用的。尤其是识别人类ccr8的氨基酸序列第17位的酪氨酸的单克隆抗体或其抗体片段作为医药组合物是非常有用的。因此，含有本发明的单克隆抗体或其抗体片段的医药组合物可以经口或非经口的方式对于全身或局部进行给药。非经口的给药可选择例如点滴等静脉内注射、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、鼻腔内给药、吸入等。本发明的医药组合物非常有用于作为治疗及/或预防ccr8相关疾病的医药。尤其是非常有用于作为治疗及/或预防发生ccr8表达treg细胞的肿瘤内浸润的癌症的医药。例如，非常有用于作为治疗及/或预防例如乳癌、子宫癌、子宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、胃(胃腺)癌、非小细胞肺癌、胰脏癌、头颈部鳞状细胞癌、食道癌、膀胱癌、黑色素瘤、大肠癌、肾癌、非霍奇金氏淋巴瘤、泌尿上皮癌、肉瘤、血球癌(白血病、淋巴瘤等)、胆管癌、胆囊癌、甲状腺癌、睾丸癌、胸腺癌、肝脏癌等癌症，优选为乳癌、子宫癌、卵巢癌、肺癌、大肠癌、肾癌及肉瘤，更优选为乳癌、大肠癌、肾癌及肉瘤的医药。本发明的「癌症治疗用医药组合物」中的「癌症」包含所有的实体癌及血液癌。具体而言，可列举乳癌、子宫体癌、子宫颈癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、胃(胃腺)癌、非小细胞肺癌、胰脏癌、头颈部鳞状细胞癌、食道癌、膀胱癌、黑色素瘤、大肠癌、肾癌、非霍奇金氏淋巴瘤、泌尿上皮癌、肉瘤、血球癌(白血病、淋巴瘤等)、胆管癌、胆囊癌、甲状腺癌、睾丸癌、胸腺癌、肝脏癌等。优选可列举乳癌、子宫体癌、卵巢癌、肺癌、大肠癌、肾癌、肉瘤，更优选可列举乳癌、肺癌、大肠癌、肾癌、肉瘤。此外，本发明的「癌症治疗用医药组合物」中的「癌症」优选为表达肿瘤特异抗原的癌症。另外，本说明书所述的「癌症」不仅意指卵巢癌、胃癌等上皮性的恶性肿瘤，亦意指包含慢性淋巴性白血病或霍奇金氏淋巴瘤等造血器癌的非上皮性的恶性肿瘤，于本说明书中，「癌症(cancer)」、「癌(carcinoma)」、「肿瘤(tumor)」、「赘生物(neoplasm)」等用语互相无区别，可互相替换。本发明的单克隆抗体或其抗体片段为了下述三种目的而可与其他药剂加以组合并作为并用剂给药：(1)补充及/或增强本发明的医药组合物的治疗效果；(2)针对本发明的医药组合物，改善其动态、吸收，或减低给药量；及/或(3)减轻本发明的医药组合物的副作用。由本发明的单克隆抗体或其抗体片段与其他药剂所成的并用剂，可以将两成分调配于1个制剂中的调配剂的形态来给药，也可采用分别作成不同制剂而给药的形态。分别作成不同制剂而给药时，包含同时给药及有时间差的给药。此外，关于有时间差的给药，可先给药本发明的单克隆抗体或其抗体片段后再给药其他药剂，也可先给药其他药剂后再给药本发明的单克隆抗体或其抗体片段，各自的给药方法可相同也可不同。可与本发明的单克隆抗体或其抗体片段并用的其他药剂可列举例如抗pd-1抗体、抗pd-l1抗体或抗ctla-4抗体。优选为抗pd-1抗体或抗pd-l1抗体，更优选为抗pd-1抗体。于本发明中，抗pd-1抗体可列举例如尼莫单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)。于本发明中，抗pd-l1抗体可列举例如阿特朱单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、度伐鲁单抗(durvalumab)。于本发明中，抗ctla-4抗体可列举例如伊匹单抗(ipilimumab)。本发明的医药组合物的对象病患被设想为癌症病患或被认为有其疑虑者。本发明医药组合物的有效给药量，以每次每体重1kg计，从0.01mg至100mg的范围选择。或是可选择每位病患为5至5000mg(优选为10至500mg)的给药量。但是，含有本发明的单克隆抗体或其抗体片段的医药组合物不只限于该等给药量。此外，给药期间可根据病患的年龄、症状而适当选择。依据给药路径，本发明的医药组合物也可一起含有药学上可接受的担载体或添加物。这样的担载体及添加物的例子，可列举水、药学上可接受的有机溶剂、胶原蛋白、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、海藻酸钠、水溶性右旋糖酐、果胶、甲基纤维素、乙基纤维素、酪蛋白、二甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、人类血清白蛋白(hsa)、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、作为医药添加物而容许的表面活性剂等。使用的添加物可因应剂型而从上述例的中适当选择组合，但是不只限于这些。本发明包含编码本发明单克隆抗体的轻链可变区或重链可变区的多核苷酸。本发明还包含含有该多核苷酸的表达载体。就该多核苷酸而言，只要编码本发明单克隆抗体的轻链可变区或重链可变区，即无特别限制，为由多种脱氧核糖核酸(dna)或核糖核酸(rna)等核苷酸所构成的聚合物。也可含有天然以外的碱基。本发明的多核苷酸，可用于以基因工学手法制造抗体。此外，为了筛选具有与本发明的单克隆抗体同等功能的抗体，可作为探针使用。亦即，使用编码本发明单克隆抗体的多核苷酸或其一部分作为探针，通过杂交、基因扩增技术(例如pcr)等技术，获得与该多核苷酸于严苛条件下杂交且编码具有与本发明单克隆抗体同等活性的抗体的dna。如此的dna亦包含于本发明的多核苷酸中。杂交技术(sambrook,jetal.,molecularcloning2nded.,9.47-9.58,coldspringharborlab.press,1989)为本领域技术人员熟知的技术。杂交的条件可列举例如低严苛条件。低严苛条件是指于杂交后的洗净中例如42℃、0.1×ssc、0.1％sds的条件，优选为50℃、0.1×ssc、0.1％sds的条件。更优选的杂交条件可列举高严苛条件。高严苛条件是指例如65℃、5×ssc及0.1％sds的条件。于这些条件下，温度越上升，越可期待有效率地获得具有高同源性的多核苷酸。但是，关于影响杂交严苛性的要素，可认为是温度或盐浓度等多种要素，只要是本领域技术人员，即可适当选择这些要素而实现同样的严格性。将通过这些杂交技术或基因扩增技术而获得的多核苷酸予以编码且与本发明的单克隆抗体在功能性上为同等的抗体，通常与这些抗体在氨基酸序列中具有高的同源性。本发明的单克隆抗体中，包含与本发明的单克隆抗体在功能性上为同等且与该抗体的氨基酸序列具有高同源性的抗体。所谓高同源性，是指于氨基酸水平中通常至少有75％以上的一致性，优选为85％以上的一致性，更优选为95％以上的一致性。若欲确定多肽的同源性，可依照文献(wilbur,w.j.andlipman,d.j.proc.natl.acad.sci.usa(1983)80,726-730)所记载的算法。本发明的单克隆抗体或其抗体片段因特异性结合于ccr8，故可用于检测生物试样中的ccr8。生物试样可列举血液、血浆、血清、尿、脏器、组织、骨髓、淋巴节等。因此，含有本发明的单克隆抗体的试剂盒，可利用于作为ccr8检测用试剂盒。该试剂盒包含本发明的单克隆抗体或其抗体片段，再者，也可包含作为标识二次抗体、标识的检测所需的基质、担载体、洗净缓冲液、试料稀释液、酵素基质、反应停止液、作为经精制的标准物质的ccr8蛋白质、使用说明书等。于本发明中，亦包含识别本发明的单克隆抗体或其抗体片段所识别的抗原上的部位且结合于ccr8的单克隆抗体或其抗体片段。亦即，关于对于ccr8的结合，与本发明的单克隆抗体或其抗体片段竞合的单克隆抗体或其抗体片段亦包含于本发明中。例如，使用实施例3的cloneno.10a11等抗体或于轻链及长链可变区具有本说明书所述的cdr序列的抗体，通过进行竞合实验，可选择上述抗体。[实施例]以下，列举本发明的实施例以对本发明更进一步详细说明，但是本发明不只限于这些例。实施例1：制作产生抗人类ccr8抗体的小鼠杂交瘤将编码人类ccr8(uniprotkb/swiss-prot：p51685)全长的基因作为抗原，对于a/jjmsslc雌性小鼠进行dna免疫。dna免疫以2周间隔而反复进行2次或3次，于最终免疫1周后于腹腔内给药人类ccr8表达expi293细胞而进行加强。在其3日后摘出脾脏，将脾脏细胞及小鼠骨髓瘤细胞(p3×6363-ag8.、东京肿瘤研究所)使用peg法进行融合，于含有次黄嘌呤、氨蝶呤及胸苷的培养基进行选择。抗人类ccr8抗体及抗人类ccr8中和抗体使用该培养上清液并通过下述的方法进行选拔。关于抗人类ccr8抗体，使培养上清液分别与人类ccr8表达expi293细胞及人类ccr4表达expi293细胞进行反应，以alexa488标识抗小鼠igg抗体(赛默飞世尔科技(thermofisherscientific)公司制造)进行检测，选拔出只对于人类ccr8特异性结合的克隆(clone)。关于抗人类ccr8中和抗体，对于已预先摄入ca2+指示剂的人类ccr8表达293细胞使培养上清液充分反应后，通过flipr测定因添加200nmhccl1(biolegend公司制造)所致的ca2+流入，选拔出会阻碍因hccl1刺激所致的ca2+流入的克隆。将显示特别强的中和活性的克隆(％inhibition＞80％)与不具有中和活性的克隆予以分别克隆复制，树立杂交瘤。实施例2：制作产生抗人类ccr8抗体的大鼠杂交瘤关于作为免疫原的人类ccr8表达rat-1细胞，通过将在pqcxip(clontech公司制造)克隆复制有人类ccr8基因的表达载体转染至rat-1细胞后，以嘌呤霉素(puromycin)(1ug/ml)于1个月选择药剂而制作。将人类ccr8表达rat-1细胞对于大鼠进行1次免疫，约2周后回收淋巴节，通过常规方法制作杂交瘤。关于抗人类ccr8抗体，使杂交瘤培养上清液对于人类ccr8表达293细胞及293细胞分别进行反应，以alexa647标识抗大鼠igg抗体(赛默飞世尔科技公司制)进行检测，选拔出对于人类ccr8可特异性结合的克隆。实施例3：抗人类ccr8中和抗体及非中和抗体的抗原表位解析对于实施例1所树立的产生抗人类ccr8抗体的杂交瘤，从无血清培养基的培养上清液中，通过proteing纯化及凝胶过滤纯化而获得40种克隆的纯化抗体。在所获得的40种克隆中，使用27种中和抗体及13种非中和抗体的纯化抗体，通过使用下述方法实施抗原结合试验，而鉴定对于中和活性为重要的抗原表位。关于各克隆的中和活性，以实施例1所述的方法，通过flipr测定对于因添加100nmhccl1(biolegend公司制造)所致的ca2+流入的阻碍活性。就各中和抗体而言，对于因100nmhccl1刺激所致的ca2+流入的阻碍活性的ic50值为2nm以下。将编码人类ccr8(uniprotkb/swiss-prot：p51685，序列编号1)全长的基因、及编码人类ccr4(uniprotkb/swiss-prot：p51679，序列编号48)全长的基因、编码小鼠ccr8(uniprotkb/swiss-prot：p56484，序列编号39)全长的基因，分别克隆至pcdna3.4载体。通过将其进行转染，而制作暂时性表达人类ccr8、人类ccr4、小鼠ccr8的expi293细胞。通过将各克隆的纯化抗体的稀释系列与该细胞进行反应，以alexa488标识抗小鼠igg抗体(赛默飞世尔科技公司制)进行检测，评估其结合性。结果，任一抗体皆会结合至人类ccr8，但是完全未结合至人类ccr4、小鼠ccr8。此处，制作将相当于人类ccr8的细胞外区域的n末端区域(序列编号1的第1至35位氨基酸)、loop1区域(序列编号1的第94至107位氨基酸)、loop2区域(序列编号1的第172至202位氨基酸)、loop3区域(序列编号1的第264至280位氨基酸)取代成与其对应的人类ccr4的n末端区域(序列编号48的第1至39位氨基酸)、loop1区域(序列编号48的第98至111位氨基酸)、loop2区域(序列编号48的第176至206位氨基酸)、loop3区域(序列编号48的第268至284位氨基酸)的嵌合体(第1图)，通过与上述方法相同的方法评估各抗体的结合性。评估在5ug/ml、0.5ug/ml、0.05ug/ml时的结合，与野生型的人类ccr8(hccr8)做比较，结合活性显著降低者以△表示，结合降低至检测极限以下者以×表示。空白栏是指表示与野生型的人类ccr8(hccr8)同程度的结合活性。其结果如表2所示，具有中和活性的抗体皆通过将n末端区域取代成人类ccr4(n-terhccr4-hccr8)而使其结合活性成为检测极限以下，并且可明确得知n末端区域在发挥中和活性上为重要的抗原表位。再者，对于loop1人类ccr4取代人类ccr8及loop2人类ccr4取代人类ccr8，结合活性亦降低。从以上的结果可认为，具有强力中和活性的抗ccr8抗体会强力识别n末端区域，且进行也结合至loop1及loop2的立体构造识别。此外，使用不识别人类ccr8、人类ccr4及小鼠ccr8的任一者的抗体作为对照组，对照组抗体不会与各抗原结合。另外，于各抗原的n末端赋予标签，通过抗标签抗体进行检测，从而确认hccr8的表达不会因突变而降低。再者，对于具有强力中和的所有克隆，针对属于共通的抗原表位区域的n末端区域作更详细的解析，制作表2所示的人类ccr8点突变体。以与上述方法相同的方法评估各克隆对于此突变体的结合活性，结果，上述27种中和抗体，对于将人类ccr8的第17位的y取代成a的突变体(hccr8(y17a))的结合活性皆显著降低而成为检测极限以下，因此，可认为识别第17位的y。此外，表2仅显示cloneno.8f7，但是亦存在有多个中和抗体，其对于将人类ccr8的第20位的i取代成a的突变体(hccr8(i20a))的结合活性降低，故可认为亦存在有会进行也结合至第20位的异亮氨酸的立体构造识别的中和抗体。另一方面，由于上述13种非中和抗体对于hccr8(y17a)的结合活性未降低，故可认为虽识别相同的n末端区域，但不识别第17位的y。由此可认为第17位的y于发挥中和活性上为极重要的氨基酸。对于代表性的中和抗体(cloneno.10a11,27g1,1h4,8f7,2c7)及非中和抗体(cloneno.5b5)的结果表示于表2。[表2]cloneno.10a1127g11h48f72c75b5＊中和活性ic50(nm)0.080.090.321.560.40＞1000hccr8hccr4××××××mccr8××××××n-terhccr4-hccr8×××××△loop1hccr4-hccr8△△△××loop2hccr4-hccr8△△△△△loop3hccr4-hccr8hccr8(l5a)△△hccr8(d6a)hccr8(l7a)hccr8(s8a)hccr8(t10a)△hccr8(t11a)△hccr8(v12a)hccr8(t13a)hccr8(y15a)hccr8(y16a)hccr8(y17a)×××××hccr8(i20a)△hccr8(s22a)△hccr8(s23a)hccr8(l29a)hccr8(i30a)△hccr8(q31a)hccr8(t32a)hccr8(n33a)hccr8(g34a)hccr8(k35a)×△＊：非中和抗体实施例4：抗体序列的确定在所树立的克隆中，对于表3表示的小鼠抗体及表4表示的大鼠抗体，通过杂交瘤细胞，依照常规方法确定抗体的轻链可变区及重链可变区的氨基酸序列。[表3][表4]实施例5：抗体序列的比对对于实施例4记载的源自小鼠杂交瘤的抗人类ccr8中和抗体的轻链及重链的氨基酸序列，与使用抗体序列解析软件abysis的kabatnumbering实施比对(图2、图3)。结果，10a11、27g1、1h4、19d7，8f7的氨基酸序列如下所述，为含有类似于cdr的序列者。轻链的cdr1由序列编号2的16个氨基酸所构成。轻链的cdr2由r-xaa1-s-n-l-a-s(此处，xaa1为m或v：序列编号49)的7个氨基酸所构成(序列编号3或9)。轻链的cdr3由m-q-h-l-e-y-p-xaa1-t(此处，xaa1为l或f：序列编号50)的9个氨基酸所构成(序列编号4或10)。重链的cdr1由xaa1-y-a-xaa2-y(此处，xaa1为t或p，xaa2为l或m：序列编号51)的5个氨基酸所构成(序列编号5、8或12)。重链的cdr2由序列编号6的19个氨基酸所构成。重链的cdr3具有10a11、27g1、1h4共通的序列，由序列编号7的14个氨基酸所构成。实施例6：中和活性评估将所树立的杂交瘤以无血清培养基进行培养，将其培养上清液进行proteing亲和层析精制及凝胶过滤精制，获得纯化抗体。对于该纯化抗体，以下述方法测定中和活性。对于预先摄入ca2+指示剂的人类ccr8表达293细胞，添加经培养基稀释的抗体稀释液，通过flipr测定因添加200nmhccl1(biolegend公司制造)所致的ca2+流入。将未添加hccl1时的讯号作为阻碍率100％，将有添加hccl1及未添加抗体时的讯号作为阻碍率0％来计算，并将表示50％阻碍率的抗体浓度作为ic50。进行至少3次评估，将ic50标记为average±sd。(表5)[表5]克隆ic50(nm)10a110.23±0.1027g10.27±0.061h40.36±0.1019d70.18±0.068f73.03±0.912c71.19±0.642-7b0.23±0.10实施例7：抗体的人源化(10a11、2c7)对于10a11、2c7，以下述方法实施人源化。使用抗体序列解析软件abysis，实施kabat的numbering及cdr的定义。以序列解析软件absis查询与小鼠抗体氨基酸序列的重链及轻链的v基因区域序列类似的人类生殖系受体序列，并选择。此外，对于j链区域，以imgt(http：//www.imgt.org/)查询与小鼠抗体dna序列为同源性高的序列，作为人类框架序列。对于该人类框架序列，将经kabatnumbering(wu，t.t.andkabat,e.a.,jexp.med.aug1；132(2)：211-50.(1970))所定义的小鼠抗体重链cdr1、cdr2、cdr3及小鼠抗体轻链cdr1、cdr2、cdr3进行移植，设计人源化单克隆抗体序列(轻链；图4、重链；图5)。通过实施例6表示的方法测定中和活性，结果，表6表示的人源化单克隆抗体显示与小鼠抗体同等以上的亲和性。[表6]实施例7-2：抗体的人源化(19d7)对于19d7，以与实施例7相同的方法实施人源化(轻链；图6、重链；图7)。通过实施例6表示的方法测定中和活性，结果，表7表示的人源化单克隆抗体显示与小鼠抗体同等以上的亲和性。[表7]实施例8：对于人源化10a11的活性为重要的氨基酸的特定对于图4及图5表示的人源化10a11，制作在相当于cdr的氨基酸中导入点突变的突变体，通过实施例6表示的方法，算出各突变体的中和活性。对于各突变体进行多次中和活性评估，将其ic50值作为与wt的ic50值的比而标记为ic50ratio(wtic50/突变体ic50)。结果表示于表8及表9。n.d.(＝无法检测(notdetectable))表示突变体的ic50值为测定系统的极限值10nm以上，活性降低至检测极限以下。中和活性评估的结果，关于轻链，在由kabat的numbering所测得的l26、l27、l27c、l93氨基酸部位具有突变的s26t、k27r、l27ci、e93d的各突变体的活性降低10倍以上(表8)。关于重链，在由kabat的numbering所测得的h33、h35、h52、h53、h59、h96、h97、h98、h100c、h101氨基酸部位具有突变的a33v、y35f、r52k、n53q、y59f、r96k、f97l、y98f、g100ca、d101e的各突变体的活性降低10倍以上(表9)。这些氨基酸是对于活性极重要的氨基酸。[表8]※氨基酸部位为由kabat的numbering所测得的部位。[表9]※氨基酸部位为由kabat的numbering所测得的部位。实施例8-2：对于人源化19d7的活性重要的氨基酸的特定对于图6及图7表示的人源化19d7，制作在相当于cdr的氨基酸中导入点突变的突变体，通过实施例6表示的方法，算出各突变体的中和活性。对于各突变体进行多次的中和活性评估，将该ic50值作为与wt的ic50值的比而标记为ic50ratio(wtic50/突变体ic50)。结果表示于表10及表11。n.d.(＝无法检测(notdetectable)表示突变体的ic50值为测定系统的极限值10nm以上，活性降低至检测极限以下。[表10]※氨基酸部位为由kabat的numbering所测得的部位。[表11]※氨基酸部位为由kabat的numbering所测得的部位。实施例9：人源化10a11的活性提升在实施例7所发现的人源化框架中，将实施例8所发现的活性提升突变、以及相对于相当于脱酰胺化风险序列的由kabat的numbering所测得的l28氨基酸部位的n及l29氨基酸部位的g的突变加以组合，进行人源化10a11的优化(optimisation)。结果，发现表12表示的人源化10a11突变体。[表12]※氨基酸部位为由kabat的numbering所测得的部位。实施例9-2：人源化19d7的活性提升在实施例7-2所发现的人源化框架中导入点突变，进行人源化19d7的优化。结果，发现表13表示的人源化19d7突变体。[表13]实施例10：在肿瘤移植人类ccr8敲入小鼠(以下称为hccr8-ki(ki/ki)小鼠)中的抗人类ccr8抗体的抗肿瘤活性(1)制作hccr8-ki(ki/ki)小鼠小鼠ccr8基因(geneid：12776)及人类ccr8基因(geneid：1237)皆为由2个外显子所构成，于第2个外显子内含有orf(openreadingframe，开放阅读框)全长。在移除小鼠ccr8基因的orf(ccdsid：23621.1)全长的同时，亦插入人类ccr8基因的orf(ccdsid：2684.1)全长，从而制作将表达的ccr8蛋白质予以完全人源化的hccr8-ki(ki/ki)小鼠。作为同源重组臂使用的dna片段，通过将小鼠ccr8基因的orf上游下游各约2kb(千碱基)的小鼠基因组序列进行pcr扩增而取得，源自小鼠的基因组序列设计成只移除orf。于先前的人类ccr8基因的orf全长序列前后，将同源重组臂分别以无接缝的方式连接，从而制作靶向载体(targetingvector)，供于同源重组，制作hccr8-ki(ki/+)balb/c小鼠。对于制作的hccr8-ki(ki/+)balb/c小鼠，通过pcr及dna碱基序列解析来确认小鼠ccr8基因的orf全长与人类ccr8基因的orf全长是否正确置换且无多余的序列的插入或缺失。将hccr8-ki(ki/+)balb/c小鼠以通常交配而繁殖，制作hccr8-ki(ki/ki)小鼠。(2)确认在hccr8-ki(ki/ki)小鼠中的大肠癌ct26细胞株肿瘤内浸润细胞的人类ccr8表达将3.5×105个(50μl)的ct26细胞移植到hccr8-ki(ki/ki)小鼠(6周龄、雌性)的背部皮内，于移植第17日时从5例的个体回收肿瘤(n＝5)。将ct26细胞的肿瘤块以剪刀切细，使用市售的试剂盒(tumordissociationkit,mouse,miltenyi公司制造及thegentlemacs(tm)dissociator,miltenyi公司制造)，依照附带的试剂盒指南(kitprotocol)，制备肿瘤浸润细胞。制备的细胞在通过70um的细胞过滤器后，以10mmhepes/hbss/2％fbs洗净2次。然后，以红血球溶解液(bdbiosciences公司制造)处理5分钟，除去红血球，进一步以2％fbs/10mmhepes/hbss缓冲液洗净2次。肿瘤浸润细胞通过以下的方法及抗体进行染色。于冰中，使用zombienirfixableviabilitykit(biolegend公司制造)试剂，将浸润细胞进行染色30分钟。以2％fbs/10mmhepes/hbss洗净1次后，使用bv510标识抗小鼠cd45(30-f11、biolegend)、fitc标识抗小鼠cd4(rm4-4、biolegend)、pe/cy7标识抗小鼠cd8(53-6.7、biolegend)、percp/cy5.5标识抗小鼠tcrβ(h57-597、biolegend)、pe标识抗小鼠cd25(pc61、biolegend)、bv421标识抗人类ccr8抗体(433h、bdbiosciences)(或bv421标识同型对照组抗体)进行染色。染色于冰中实施30分钟。以2％fbs/hepes/hbss洗净2次后，使用流式细胞仪解析细胞。解析cd45+tcrβ+cd4+cd25+t细胞中的人类ccr8表达。通过使用同型对照组抗体的染色来确定阴性细胞区域，将在使用抗人类ccr8抗体时会成为阳性的细胞作为人类ccr8+细胞，于移植17日后算出存在频率。结果，于小鼠肿瘤内的cd45+tcrβ+cd4+cd25+细胞中的约47％检测出人类ccr8。(3)通过使用源自大肠癌的ct26细胞来评估由抗人类ccr8抗体给药所致的抗肿瘤效果将4×105个源自大肠癌的ct26细胞(50ul)移植到hccr8-ki(ki/ki)小鼠(8周龄、雌性)的背部皮内。于肿瘤移植第4日及第11日时，在静脉内给药人源化10a11抗体(轻链可变区：igkv4-1n53q+g29r(序列编号59)/重链可变区：ighv3-15t94r(序列编号41))100μg(100μl)或200μg(100μl)(n＝10)。对照组则给药介质(磷酸缓冲生理食盐水)100μl(n＝10)。于肿瘤移植4、7、10、11、14、16、18、21、24日后，测定肿瘤体积。肿瘤体积(mm3)以长径(mm)×短径(mm)×短径(mm)/2来计量。结果，于移植第11日、第14日、第16日、第18日、第21日、第24日，任一用量的抗人类ccr8抗体给药组的肿瘤体积都显著缩小(图8，显著水平使用welch’sttest，于任一用量都在第10日为**；p<0.01，第11日以后为***；p<0.001)。此外，于抗人类ccr8抗体给药组中出现显示完全萎缩的个体，于第24日时，于100μg抗人类ccr8抗体给药组中按10只中有5只的肿瘤几乎完全消失，于200μg抗人类ccr8抗体给药组中按10只中有6只小鼠的肿瘤几乎完全消失。实施例11：与10a11竞合的抗人类ccr8抗体的筛选使用人源化10a11抗体(轻链可变区：igkv4-1/重链可变区：ighv3-15t94r)，针对与hccr8的结合，实施与其竞合的抗体的筛选。以与实施例1所述的方法相同的方法，将编码人类ccr8(uniprotkb/swiss-prot：p51685)全长的基因作为抗原，对于a/jjmsslc雌性小鼠进行dna免疫，制作杂交瘤。将制作的杂交瘤播种于96孔板，对于培养9日后获得的培养上清液中的176孔实施与人源化10a11抗体的竞合结合试验。就竞合试验而言，通过对于以实施例1的方法制作的人类ccr8表达expi293细胞，将培养上清液与10nm的人源化10a11抗体或同型对照组混合，于室温进行反应3小时，以pbs洗净3次后，以alexa488标识抗小鼠igg抗体(赛默飞世尔科技公司制)进行检测，而实施的。将在同型对照组的共存下可确认到源自杂交瘤的抗体的结合者定义为通常的人类ccr8结合抗体。此外，在人类ccr8结合抗体中，将在人源化10a11抗体共存下的结合讯号显著降低的抗体鉴定为与人源化10a11抗体竞合的抗体。结果，170孔中有56孔为人类ccr8结合抗体。另一方面，该56孔中有7孔为与人源化10a11抗体竞合的抗体。再者，在经鉴定为竞合抗体者之中，将作为代表的3克隆进行克隆化，从经克隆化后的杂交瘤培养上清液中获得纯化抗体。对于该纯化抗体，通过实施例1的方法，测定对于人类ccl1-人类ccr8的中和活性。结果显示，任一种抗体都具有中和活性(表14)，并且与人源化10a11抗体竞合的抗体为强力的中和抗体。[表14]克隆ic50(nm)19b104.56d113.37f46.4实施例12人源化单克隆抗体的抗原表位解析与实施例3所述的内容同样地，对于人源化10a11抗体、人源化19d7抗体实施抗原表位的验证。除了对于实施例3制作的人类ccr4的嵌合体、人类ccr8n末端区域的点突变体实施结合评估之外，亦对于人类ccr8loop1、loop2区域的点突变体实施结合评估。就结合评估而言，通过使各突变体于expi293细胞中暂时性表达，将人源化10a11抗体(轻链可变区：igkv4-1/重链可变区：ighv3-15t94r)或人源化19d7抗体(轻链可变区：igkv3-20/重链可变区：ighv3-15t94r)从20μg/ml以每3倍逐次分成8阶段稀释调制的抗体溶液进行反应，而实施的。于室温进行反应3小时后，与alexa488标识anti-humanigg抗体(赛默飞世尔科技公司)进行反应，实施流式细胞术解析。此外，各突变体的表达量，通过对于各突变体的n末端赋予标签，以同样的方法使用抗标签抗体进行检测，而补正的。结果表示于表15及表16。与人类ccr8比较，其结合活性成为70％以下的突变体以△表示，成为20％以下的突变体以×表示。[表15]突变体h10a11h19d7hccr8hccr4××mccr8××n-terhccr4-hccr8××loop1hccr4-hccr8△△loop2hccr4-hccr8△△loop3hccr4-hccr8△hccr8(l5a)△△hccr8(d6a)hccr8(l7a)hccr8(s8a)hccr8(t10a)△hccr8(t11a)△hccr8(v12a)hccr8(t13a)△hccr8(y15a)△hccr8(y17a)××hccr8(i20a)△△hccr8(s22a)△△hccr8(s23a)△hccr8(l29a)△hccr8(i30a)hccr8(q31a)hccr8(t32a)△hccr8(n33a)hccr8(g34a)hccr8(k35a)△△hccr8(y94a)hccr8(l95a)hccr8(l96a)hccr8(d97a)△hccr8(q98a)hccr8(v100a)hccr8(t103a)[表16]hccr8(v104a)hccr8(m105a)hccr8(k107a)hccr8(y172a)hccr8(q173a)hccr8(v174a)hccr8(a175g)hccr8(s176a)hccr8(e177a)hccr8(d178a)hccr8(g179a)hccr8(v180a)△hccr8(l181a)△△hccr8(q182a)hccr8(c183a)××hccr8(y184a)hccr8(s185a)hccr8(f186a)hccr8(y187a)hccr8(n188a)△△hccr8(q189a)hccr8(q190a)hccr8(t191a)hccr8(l192a)hccr8(k193a)△hccr8(w194a)hccr8(k195a)hccr8(i196a)hccr8(f197a)hccr8(t198a)hccr8(n199a)hccr8(f200a)[产业上的利用可能性]本发明的单克隆抗体或其抗体片段，可用于检测生物试样中的ccr8。再者，含有本发明的单克隆抗体或其抗体片段的医药组合物，作为治疗或预防ccr8相关疾病的医药是非常有用的。序列表<110>盐野义制药株式会社国立大学法人大阪大学<120>新型抗ccr8抗体<130>19p00085wo<150>jp2018-245044<151>2018-12-27<150>jp2019-099923<151>2019-05-29<160>59<170>patentinversion3.5<210>1<211>355<212>prt<213>智人<400>1metasptyrthrleuaspleuservalthrthrvalthrasptyrtyr151015tyrproaspilepheserserprocysaspalagluleuileglnthr202530asnglylysleuleuleualavalphetyrcysleuleuphevalphe354045serleuleuglyasnserleuvalileleuvalleuvalvalcyslys505560lysleuargserilethraspvaltyrleuleuasnleualaleuser65707580aspleuleuphevalpheserphepropheglnthrtyrtyrleuleu859095aspglntrpvalpheglythrvalmetcyslysvalvalserglyphe100105110tyrtyrileglyphetyrsersermetphepheilethrleumetser115120125valaspargtyrleualavalvalhisalavaltyralaleulysval130135140argthrileargmetglythrthrleucysleualavaltrpleuthr145150155160alailemetalathrileproleuleuvalphetyrglnvalalaser165170175gluaspglyvalleuglncystyrserphetyrasnglnglnthrleu180185190lystrplysilephethrasnphelysmetasnileleuglyleuleu195200205ileprophethrilephemetphecystyrilelysileleuhisgln210215220leulysargcysglnasnhisasnlysthrlysalaileargleuval225230235240leuilevalvalilealaserleuleuphetrpvalpropheasnval245250255valleupheleuthrserleuhissermethisileleuaspglycys260265270serileserglnglnleuthrtyralathrhisvalthrgluileile275280285serphethrhiscyscysvalasnprovaliletyralaphevalgly290295300glulysphelyslyshisleusergluilepheglnlyssercysser305310315320glnilepheasntyrleuglyargglnmetproargglusercysglu325330335lyssersersercysglnglnhisserserargserserservalasp340345350tyrileleu355<210>2<211>16<212>prt<213>人工序列<220><223>10a11vl的cdr1<400>2argserserlysserleuleuhisserasnglyasnthrtyrleutyr151015<210>3<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>10a11vl的cdr2<400>3argmetserasnleualaser15<210>4<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>10a11的vlcdr3<400>4metglnhisleuglutyrproleuthr15<210>5<211>5<212>prt<213>人工序列<220><223>10a11vh的cdr1<400>5thrtyralaleutyr15<210>6<211>19<212>prt<213>人工序列<220><223>10a11vh的cdr2<400>6argileargserlysserasnasntyralathrtyrtyralaaspser151015vallysasp<210>7<211>14<212>prt<213>人工序列<220><223>10a11vh的cdr3<400>7alaargphetyrtyrserasptyrglytyralametasptyr1510<210>8<211>5<212>prt<213>人工序列<220><223>27g1vh的cdr2<400>8thrtyralamettyr15<210>9<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>19d7vl的cdr2<400>9argvalserasnleualaser15<210>10<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>19d7vl的cdr3<400>10metglnhisleuglutyrprophethr15<210>11<211>12<212>prt<213>人工序列<220><223>19d7vh的cdr3<400>11glyglytyrglyasntyrargtyralametasptyr1510<210>12<211>5<212>prt<213>人工序列<220><223>8f7vh的cdr1<400>12protyralamettyr15<210>13<211>8<212>prt<213>人工序列<220><223>8f7vh的cdr3<400>13glyhisglnglythrmetasptyr15<210>14<211>16<212>prt<213>人工序列<220><223>2c7vl的cdr1<400>14argserserglnserleuvalhisserasnglyasnthrtyrleuhis151015<210>15<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>2c7vl的cdr2<400>15lysvalserasnargpheser15<210>16<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>2c7vl的cdr3<400>16serglnserthrglnvalproleuthr15<210>17<211>5<212>prt<213>人工序列<220><223>2c7vh的cdr1<400>17alatyrglyvalhis15<210>18<211>16<212>prt<213>人工序列<220><223>2c7vh的cdr2<400>18valiletrpargglyglyserthrasptyrasnalaalaphemetser151015<210>19<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>2c7vh的cdr3<400>19lysglyglysertyralametasptyr15<210>20<211>15<212>prt<213>人工序列<220><223>2-7bvl的cdr1<400>20argalaserglnservalserileserargtyrasnilemethis151015<210>21<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>2-7bvl的cdr2<400>21argalaserasnleualaser15<210>22<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>2-7bvl的cdr3<400>22glnglnserarggluserproprothr15<210>23<211>5<212>prt<213>人工序列<220><223>2-7bvh的cdr1<400>23asptyrtyrmetala15<210>24<211>17<212>prt<213>人工序列<220><223>2-7bvh的cdr2<400>24thrilethrtyraspvaltyrserthrtyrtyrargaspservallys151015gly<210>25<211>14<212>prt<213>人工序列<220><223>2-7bvh的cdr3<400>25hisglyglyaspglytyrasnserglyasntrpphealatyr1510<210>26<211>113<212>prt<213>人工序列<220><223>10a11vl<400>26aspilevalmetthrglnalaalaproservalprovalthrprogly151015gluservalserilesercysargserserlysserleuleuhisser202530asnglyasnthrtyrleutyrtrppheleuglnargproglyglnser354045proglnleuleuiletyrargmetserasnleualaserglyvalpro505560asp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