一种对虾肝肠胞虫专杀药物及其制备方法与应用与流程

本发明属于海水养殖病害防控技术领域，具体涉及一种对虾肝肠胞虫专杀药物及其制备方法与应用。

背景技术：

白便综合症(whitefecessyndrome,wfs)是近几年危害东南亚地区南美白对虾养殖的主要病害之一。该病发病初期病虾症状不明显，只是吃料减慢，摄食量减少；随着病情发展，池塘下风口水面可见漂浮的白色线状黏性粪便(俗称“白便”)，病虾肠道“断肠”、空肠，严重时整个肠道变成乳白色，呈“白肠”，肝胰腺萎缩、模糊，池塘内的虾大小规格相差悬殊，产量低，饵料系数高，严重影响经济效益。

2009年，tourtip等首次发现一种新的微孢子虫——肝肠胞虫(enterocytozoonhepatopenaei，ehp)可以感染斑节对虾的肝胰腺小管上皮细胞，造成肝胰腺明显的病变。2016年，tang等发现南美白对虾白便主要由大量的虾肝肠胞虫、肠粘液、脱落的肝胰腺小管组织以及少量的杆状细菌(例如：弧菌属)组成。将感染ehp的对虾肝胰腺组织进行he染色后，发现肝小管上皮细胞内存在大量孢子样颗粒，肝小管存在脱落的上皮细胞。tang等认为白便形成的原因很可能是：ehp在肝胰腺小管上皮细胞中快速大量繁殖，然后导致上皮细胞退化和大量ehp孢子进入粪便中。

经过对中国南方沿海白便样品采集并进行电镜观察发现，白便对虾体内肝胰腺及粪样中存在大量的ehp孢子，孢子长约1.1μm，呈卵圆形，外被孢囊，再次证实了国外研究者的推断。2017年，通过pcr方法抽检发现，超过60％的南美白对虾养殖池对虾及市场采集对虾感染ehp，养殖成功率明显下降，表明ehp的危害呈愈发严重之势。估计ehp感染造成的病害将成为当今以及未来一段时间内，危害我国南美白对虾及斑节对虾养殖，成为最严重的病害。

目前市面上并无针对ehp感染引起白便综合症的治疗药物。

技术实现要素：

本发明目的在于提供一种有效控制对虾肝肠胞虫的专杀药物及其制备方法与应用。

所述的对虾肝肠胞虫专杀药物，包括以下重量百分比计的组分：阿苯达唑30～60％、胆汁酸10～30％、叶下珠粉5～15％、青蒿粉10～20％和维生素c5～15％。

优选，所述的对虾肝肠胞虫专杀药物，包括以下重量百分比计的组分：阿苯达唑50％、胆汁酸15％、叶下珠粉10％、青蒿粉15％和维生素c10％。

本发明的对虾肝肠胞虫专杀药物的制备方法为：按配方量分别称取阿苯达唑、胆汁酸、叶下珠粉、青蒿粉和维生素c，充分混匀，过筛，即得药物。

本发明的对虾肝肠胞虫专杀药物可以抑制ehp在细胞内的增殖并最终清除ehp，同时也可以对受损的肝胰腺组织进行修复，恢复对虾肝胰腺的功能和形态，可用于制备防治对虾白便综合症饲料或饲料添加剂，将所述的对虾肝肠胞虫专杀药物拌和饲料(或加工到饲料当中)结合外用的清毒剂以及正确的养殖病害隔离防控措施可以实现对ehp感染的有效控制。

具体的，所述的应用的具体方法为：取上述的对虾肝肠胞虫专杀药物按1～2wt％的比例与饲料均匀混合，再喷洒稀释的粘合剂，晾干后使用，连续使用2周以上，或取上述的对虾肝肠胞虫专杀药物作为饲料添加剂，按0.5～1wt％的添加量添加至饲料中使用。

优选，所述的粘合剂包括但不限于羧甲基纤维素、海藻酸钠、蛋清、动物胶、淀粉、谷蛋白、魔芋精粉。

一种防治对虾白便综合症的饲料或饲料添加剂，含有上所述的对虾肝肠胞虫专杀药物。

本发明的有益效果为：

(1)本发明的药物包含了阿苯达唑，可以有效驱杀对虾体内的肝肠胞虫。阿苯达唑作为脂溶性苯并咪唑类广谱驱虫药物，广泛用于线虫、绦虫和吸虫等肠道蠕虫的治疗，因此安全可靠。对虾肝肠胞虫主要感染部位为肝胰腺，本发明通过实验证实了阿苯达唑在杀灭对虾体内的肝肠胞虫中的重要作用，开辟了阿苯达唑新的使用领域。

(2)对虾没有胆囊，不能合成胆汁酸，对虾长期摄食配合饲料容易引起的脂肪肝，造成肝损伤，加剧肝肠胞虫引起的损伤。本药物组合中添加了胆汁酸，可促进对虾肠道及肝胰腺对脂肪的代谢，减少脂肪在对虾肝胰腺的积累，从而减轻肝胰腺损伤。

(3)本发明的药物包含了叶下珠粉，其具有明显的保肝护肝作用。研究表明，叶下珠对化学系肝损伤和免疫性肝损伤具有明显的保护作用；同时，叶下珠还具有明显的免疫调节作用，能增强肝脏对病毒、细菌以及其他有害刺激的抵抗能力。叶下珠是一种传统的中草药，可全株入药，材料易得，价格低廉，易于在生产实践中推广应用。

(4)本发明的药物包含了青蒿粉，青蒿的有效成分是青蒿素，具有抗疟、抗菌、解热和增强免疫等药理活性，对恶性疟疾等有特效，未见其应用于对虾肝肠胞虫的治疗。青蒿素粉可以增强阿苯达唑对对虾肝肠胞虫的杀灭效果。

(5)本发明的药物添加了维生素c，它是对虾体内一种必不可少的微量元素，它对于促进对虾类生长和繁殖、免疫应答、抗病力和抗应激能力等方面有重要作用。

(6)上述药物虽均为常规药物，但本专利所述的药物配合产生的特有效果为本发明独创。本发明的药物组合搭配合理、科学，各成分药效协同作用，可以起到保护对虾肝胰腺，驱杀对虾肝肠胞虫，加快对虾生长，提高对虾免疫力等效果，这是单独使用其中任何一种所不能达到的。

附图说明

图1为分别给对虾投喂正常饲料(对照组)、含阿苯达唑的饲料(阿苯达唑)、含青蒿粉的饲料(青蒿粉)及含本发明对虾肝肠胞虫专杀药物的饲料(实验组)，对虾的成活率检测结果。

图2为分别给对虾投喂正常饲料(对照组)、含阿苯达唑的饲料(阿苯达唑)、含青蒿粉的饲料(青蒿粉)及含本发明对虾肝肠胞虫专杀药物的饲料(实验组)，对虾的体长变化检测结果。

图3为分别给对虾投喂正常饲料(对照组)、含阿苯达唑的饲料(阿苯达唑)、含青蒿粉的饲料(青蒿粉)及含本发明对虾肝肠胞虫专杀药物的饲料(实验组)，对虾的体重变化检测结果。

图4为分别给对虾投喂正常饲料、含本发明对虾肝肠胞虫专杀药物的饲料，对虾的外观规格检测结果。

图5为分别给对虾投喂正常饲料、含本发明对虾肝肠胞虫专杀药物的饲料，对虾的肝胰腺外观变化检测结果。

图6为分别给对虾投喂正常饲料、含本发明对虾肝肠胞虫专杀药物的饲料，对虾进行ehp携带pcr检测结果；m：分子大小标准；“+”检测阳性；“-”检测阴性。

具体实施方式

根据下述实施例，可以使本领域的技术人员更好地理解本发明。实施例所描述的仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

一种对虾肝肠胞虫专杀药物，包括以下重量百分比计的组分：阿苯达唑50％、胆汁酸15％、叶下珠粉10％、青蒿粉15％和维生素c10％。

制备方法：按配方量分别称取阿苯达唑、胆汁酸、叶下珠粉、青蒿粉和维生素c，充分混匀，过100目筛，即得对虾肝肠胞虫专杀药物。

实施例2

一种对虾肝肠胞虫专杀药物，包括以下重量百分比计的组分：阿苯达唑30％、胆汁酸30％、叶下珠粉15％、青蒿粉20％和维生素c5％。

制备方法：按配方量分别称取阿苯达唑、胆汁酸、叶下珠粉、青蒿粉和维生素c，充分混匀，过100目筛，即得对虾肝肠胞虫专杀药物。

实施例3

一种对虾肝肠胞虫专杀药物，包括以下重量百分比计的组分：阿苯达唑60％、胆汁酸10％、叶下珠粉5％、青蒿粉10％和维生素c15％。

制备方法：按配方量分别称取阿苯达唑、胆汁酸、叶下珠粉、青蒿粉和维生素c，充分混匀，过100目筛，即得对虾肝肠胞虫专杀药物。

实施例4

先将淀粉30g加入1l水中混合均匀制成稀释的粘合剂待用，将对虾肝肠胞虫专杀药物(实施例1制得)按1wt％的比例与市售商品饲料混合，再边喷洒稀释的粘合剂边将药物与商品料进行搅拌，搅匀后放在阴凉处晾干即制成药物饲料(实验组)。

将淀粉30g加入1l水中混合均匀制成稀释的粘合剂待用，将青蒿粉按1wt％的比例与市售商品饲料混合，再边喷洒稀释的粘合剂边将药物与商品料进行搅拌，搅匀后放在阴凉处晾干即制成含青蒿粉饲料(青蒿粉组)。

将淀粉30g加入1l水中混合均匀制成稀释的粘合剂待用，将阿苯达唑粉末按1wt％的比例与市售商品饲料混合，再边喷洒稀释的粘合剂边将药物与商品料进行搅拌，搅匀后放在阴凉处晾干即制成含阿苯达唑饲料(阿苯达唑组)。

实验组、青蒿粉组、阿苯达唑组及对照组(市售商品饲料)各三个桶，每桶随机分配ehp感染南美白对虾60尾。实验组投喂药物饲料，对照组投喂正常饲料(市售商品饲料)，青蒿粉组和阿苯达唑组分别投喂上述制备的含青蒿粉或阿苯达唑的饲料，实验周期为20天，每日吸除残饵粪便，并换清洁海水50％。实验结束后，计算存活率，并称量各桶中每尾对虾体重、体长，观察肝胰腺形态；同时，随机抽取对照组和实验组各8尾对虾，采用pcr方法(tangetal,2015)进行ehp感染检测。结果如下：

1、采用药物饲料连续投喂的实验组，对虾的存活率达到95％，明显高于对照组、青蒿粉组和阿苯达唑组对虾的存活率(图1)。

2、实验组对虾的平均体长为5.9cm，明显大于对照组、青蒿粉组和阿苯达唑组对虾的平均体长(图2)。

3、实验组对虾的平均体重为2.6g，明显高于对照组、青蒿粉组和阿苯达唑组对虾的平均体重(图3)。

4、从外观规格上观察，实验组的对虾体长均匀度及规格要优于对照组的对虾；(图4)。表明施用药物的实验组对虾生长速度明显优于未实施药物的对照组对虾。

5、实验组对虾的肝胰腺呈深褐色，饱满，边界清晰；对照组对虾的肝胰腺呈浅褐色，萎缩，边界模糊(图5)；表明本发明的对虾肝肠胞虫专杀药物的使用明显抑制了对虾肝胰腺的病变过程，并有利于已经感染ehp受损的对虾肝胰腺恢复正常。

6、对实验组和对照组对虾抽样进行pcr检测发现，对照组抽样的8尾虾均检测为ehp强阳性，而实验组抽样的8尾虾中有7尾为ehp阴性，仅有1尾虾呈现弱阳性(图6)

以上结果表明，使用本发明的对虾肝肠胞虫专杀药物可以有效阻止ehp对对虾肝胰腺的破坏，逐渐清除对虾体内的ehp，恢复对虾肝胰腺的功能和形态，维持对虾的正常生长。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。