一种款冬花多酚类化合物的提取方法与流程

本发明涉及中药有效成分制备，特别涉及一种利用新型提取溶剂从款冬花中提取多酚类化合物的方法。

技术背景

款冬花为菊科植物款冬tussilagofafaral.的干燥花蕾，具润肺下气，止咳化痰的功效，临床上主要用于咳嗽、气喘、抗炎等。款冬花化学成分包含黄酮类、甾醇类、酚酸类、生物碱类、挥发油类、倍半萜类等。其中黄酮类和酚酸类属于多酚类化合物，前期研究表明这类成分具有化痰止咳作用(journalofpharmaceuticalandbiomedicalanalysis,2013,75:158-164)，具有进一步新药开发的前景。

现有技术从款冬花中制备多酚类化合物的方法需要通过有机溶剂提取，然后萃取或经大孔树脂分离，而提取或萃取过程中一般会大量使用甲醇、乙醇，乙酸乙酯、正丁醇等有机试剂，这些有机试剂的挥发性强、易燃、易爆，且存在污染环境的问题。

技术实现要素：

本发明的目的是针对上述存在的问题，提供一种利用新型提取溶剂提取款冬花中的多酚类化合物的方法；该方法可避免已有方法有机试剂污染大、挥发性强，易燃，易爆等问题。

本发明提供的一种款冬花多酚类化合物的提取方法，包括以下步骤：

(1)氯化胆碱和甘油以摩尔比1：2置75-85℃的水浴中生成提取溶剂；

(2)按照质量比1:6-10将款冬花加入上述提取溶剂，超声提取30-60min，离心后取上清液；

(3)上清液通过hp-20大孔树脂洗脱除去提取溶剂，依次采用0.1％的甲酸水和50％乙醇溶液进行洗脱，收集50％乙醇洗脱馏分，浓缩得到款冬花多酚类化合物。

所述步骤(1)中水浴温度优选为80℃。

所述步骤(2)中款冬花和提取溶剂的质量比优选为1:6。

所述步骤(2)中超声提取时间优选为40min。

与现有技术相比，本发明的有益效果：本发明所提供的一种新型提取溶剂(氯化胆碱和甘油生成的提取溶剂)从款冬花中选择性一步提取制备多酚类化合物，方法步骤简单、成本低，而且避免了大量使用有机试剂污染大、挥发性强，易燃，易爆等问题。

附图说明

图1为款冬花经氯化胆碱-甘油提取溶剂提取后的色谱图

图2为款冬花经95％乙醇提取后的色谱图

图3为款冬花经70％乙醇提取后的色谱图

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细、完整的说明。

各实施例中使用到的试剂和器材如下：

1仪器

agilent1260高效液相色谱仪(agilent公司)，g7111a四元泵，g7117cdad检测器，超声波清洗器(kq5200e，昆山市超声仪器有限公司)，venusilmpc18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)，低速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)。

2试剂

氯化胆碱(纯度≥98％，萨恩化学技术公司)，甘油(纯度≥99％，天津大茂有限公司)，乙腈(色谱纯，fisher公司)，磷酸(色谱纯，天津大茂有限公司)，hp20大孔树脂(绿百草有限公司)。

实施例1

1、取氯化胆碱28g，甘油36.8g(摩尔比1：2)混合，置80℃的水浴中加热至生成均匀透明的溶液即为提取溶剂；

2、称取10克款冬花，加入上述提取溶剂60g，超声提取40min，3500rmp下离心5min，取上清液；

3、将hp20大孔树脂用95％乙醇浸泡过夜后装柱，柱体积为100ml，蒸馏水冲至无醇味，取上述得到的上清液上样，依次用0.1％的甲酸水1000ml和50％乙醇1000ml洗脱，收集50％乙醇洗脱液浓缩干燥，得到款冬花多酚类化合物。

对比例1款冬花经95％乙醇超声提取

称取10克款冬花，加入95％乙醇60ml，超声提取40min，3500rmp下离心5min，取上清液，过0.45μm的滤膜，通过高效液相色谱法检测。

对比例2款冬花经70％乙醇超声提取

称取10克款冬花，加入70％乙醇60ml，超声提取40min，3500rmp下离心5min，取上清液，过0.45μm的滤膜，通过高效液相色谱法检测。

对比实施例和对比例，采用本发明提供的氯化胆碱-甘油提取溶剂可选择性提取黄酮类和酚酸类化合物(图1)，峰1为绿原酸，峰2为芦丁，峰3为金丝桃苷，峰4为异绿原酸b，峰5为异绿原酸a，峰6为异绿原酸c；而传统的乙醇提取无选择性(图2，图3)。

技术特征：

1.一种款冬花多酚类化合物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)氯化胆碱和甘油以摩尔比1：2置75-85℃的水浴中生成提取溶剂；

(2)按照质量比1:6-10将款冬花加入上述提取溶剂，超声提取30-60min，离心后取上清液；

(3)上清液通过hp-20大孔树脂洗脱除去提取溶剂，依次采用0.1％的甲酸水和50％乙醇溶液进行洗脱，收集50％乙醇洗脱馏分，浓缩得到款冬花多酚类化合物。

2.如权利要求1所述的一种款冬花多酚类化合物的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中水浴温度为80℃。

3.如权利要求1所述的一种款冬花多酚类化合物的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中款冬花和提取溶剂的质量比1:6。

4.如权利要求1所述的一种款冬花多酚类化合物的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中超声提取时间为40min。

技术总结
本发明提供了一种款冬花中多酚类化合物的提取方法，涉及中药有效成分制备领域。多酚类化合物的提取方法，步骤如下：(1)氯化胆碱和甘油以摩尔比1：2置80℃的水浴中合成提取溶剂；(2)款冬花按照质量比1:6的比例加入上述提取溶剂，超声提取40min，离心后取上清液；(3)上清液通过HP‑20大孔树脂洗脱除去提取溶剂，依次采用0.1％的甲酸水和50％乙醇溶液进行洗脱，收集50％乙醇洗脱馏分，浓缩得到款冬花中多酚类化合物。本发明的优点为：该提取方法可选择性一步提取制备多酚类化合物，方法步骤简单、成本低，而且避免了有机试剂污染大、挥发性强，易燃，易爆等问题。

技术研发人员：李震宇;李蓉蓉;秦雪梅
受保护的技术使用者：山西大学
技术研发日：2020.01.13
技术公布日：2020.05.08