DYZ-9在制备抗心肌肥厚产品中的应用的制作方法

本发明属于药物技术领域，涉及dyz-9在制备抗心肌肥厚产品中的应用。

背景技术：

大叶桃花心木种子作为传统药物在东南亚国家经历了漫长岁月中当地居民的治疗验证，证明其可能具有一定的抗炎等作用。而其被引进中国南方省份后，如海南省，目前仅作为行道树观赏使用，其果实的价值并未充分利用。如能被合理开发利用，将创造巨大价值。在印度尼西亚，大叶桃花心木种子作为一种传统草本药物被用于治疗高血压、糖尿病等疾病，但对于其中的确切有效成分缺乏系统性研究。

dyz-9(swietenine)，分子式为c32h40o9，结构式见式i(暂标记为dyz-9，以区别于市场上现有同名类似产品，其casno:4802-04-4)于1990年首次从大叶桃花种子里分离得到。

为数不多的成功分离dyz-9的研究证实提取的若干种物质对相应疾病有治疗作用，其中dyz-9已被报道的实验研究显示，其能治疗糖尿病和血小板聚集症，对其他疾病的作用也不甚了解。

心肌肥厚是心脏在各种机械应力或者神经激素刺激下的代偿性反应，表现为心脏尺寸的增大和室壁的增厚。随着刺激因素的持续，心肌细胞的凋亡及间质纤维化的发生从而导致心力衰竭。β肾上腺素受体阻滞剂如倍他乐克、阿替洛尔等已经广泛用于临床治疗心力衰竭及高血压等疾病，但其逆转心室肥厚的效果欠佳。而dyz-9在心肌肥厚中的研究未见报道。

技术实现要素：

发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种潜在的更好的治疗心肌肥大(尤其是合并糖尿病者)的治疗药物。dyz-9在制备抗心肌肥厚产品中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明公开了dyz-9在制备抗心肌肥厚产品中的应用。

其中，dyz-9的化学结构如式ⅰ所示，

上述dyz-9的制备方法

(1)大叶桃花心木种子晒干后粉碎(1.6kg)，用体积分数为95％的乙醇室温浸提3次，每次7天，减压回收乙醇至无醇味得到乙醇提取物；

(2)将乙醇提取物分散于水中制成悬浊液，依次用乙酸乙酯和正丁醇各萃取3次，分别减压浓缩后得到乙酸乙酯浸膏(110.0g)和正丁醇浸膏(19.0g)。

(3)选取乙酸乙酯浸膏(110.0g)经mci柱层析，以50％～100％的甲醇水溶液梯度洗脱，最后经丙酮洗脱，薄层层析检测，合并相同馏分，得到4个组分(fr.1～fr.4)。

(5)组分fr.2分别经减压柱层析，然后经反相柱层析(甲醇-水)，sephadexlh-20凝胶柱层析(甲醇，氯仿-甲醇)和正相硅胶柱层析反复洗脱得到dyz-9。参考：plateletaggregationinhibitorsfromtheseedsofswieteniamahagoni:inhibitionofinvitroandinvivoplatelet-activatingfactor-inducedeffectsoftetranortriterpenoidsrelatedtoswietenineandswietenolide.hisaoeimoto.yukioiri,etal.plantamecl.57(1991):56-58.

其中，所述的心肌肥厚为异丙肾上腺素所诱导的心肌肥厚。

其中，所述的抗心肌肥厚为有效预防、缓解、治疗心肌肥厚。

其中，所述的抗心肌肥厚是通过dyz-9抑制异丙肾上腺素(iso)所导致的蛋白激酶b(akt)和环磷腺苷效应元件结合蛋白(creb)的磷酸化，降低心肌肥厚标志物心房钠尿肽(anp)及脑钠肽(bnp)的水平、心脏重量指数，改善心肌肥厚。

其中，iso可以通过g蛋白偶联受体激活其下游pi3k/akt及pka/creb信号通路而导致心肌肥厚。

其中，所述的产品为药品、食品和保健品中的任意一种。所述的产品，其剂型优选为散剂、颗粒剂、片剂和胶囊剂中的任意一种。

一种抗心肌肥厚的药物单体，其含有有效量的dyz-9。

一种抗心肌肥厚的药物组合物，其含有有效量的dyz-9或其药学上可接受的盐、水合物以及药学上可接受的载体、辅剂或它们的组合物。

其中，所述药物单体、组合物的剂型优选为散剂、颗粒剂、片剂和胶囊剂中的任意一种。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优势：

(1)本发明研究的dyz-9能够通过已知的方法合成，制备工艺成熟，能够提供可靠的化合物来源，具有物质来源可靠性、生产成本低、作用机制新颖、市场前景良好等优势。

(2)本发明具有抑制异丙肾上腺素(iso)导致的akt及环磷腺苷效应元件结合蛋白的磷酸化，降低心肌肥厚标志物anp及bnp的水平、心脏重量指数，改善心肌肥厚，逆转心室肥厚。

(3)本发明有助于新型抗心肌肥厚药物的研发，可以带来直接经济效益，其已被报道的糖尿病等疾病治疗功能，将为同时受相关多种疾病困扰的病人治疗带来优势。其次此药物可以减少心肌肥厚进一步恶化进而形成心力衰竭和恶性心律失常的可能，从长远的角度来看可节约大量的卫生经费。

(4)本发明提高心肌肥厚患者临床治愈率及长期生存率，解除患者疾病痛苦及精神压力，提高患者劳动生产力。

附图说明

图1为各组间心超结果对比。

图2中a为各组间he染色对比；b为各组间心肌细胞横截面积对比。

图3为各组间心脏组织anp及bnpmrna表达水平比较。

图4中a为各组间h9c2α-sma免疫荧光；b为各组心肌细薄平均面积比较。

图5为各组h9c2中anp及bnpmrna表达水平比较。

图6中a为各组h9c2中westernblot水平；b为各组p-akt/akt及p-creb/creb蛋白表达水平比较。

图7中a为各组小鼠心脏组织中westernblot水平；b为各组p-akt/akt蛋白表达水平比较。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1：心肌肥厚动物模型的建立及检验dyz-9抗心肌肥厚的药效

一、材料与方法

1.标本的收集和制备：(1)选用8周龄雄性icr小鼠，持续皮下泵入药物异丙肾上腺素(iso，5mg/kg/day)，同时给予dyz-9(1、10mg/kg/day)一天一次腹腔注射，共持续2周。(2)将所有小鼠分为4组，即对照组(control组，没有心肌肥厚的健康的小鼠)，异丙肾上腺素组(iso组)，低剂量dyz-9治疗组(dyz-91mg/kg+iso组)，高剂量dyz-9治疗组(dyz-910mg/kg+iso组)。

2.利用心脏超声心动图测定左心室厚度及左室重量指数；处死动物后测量心脏及体重质量。

3.用苏木素-伊红(h&e)染色方法观察心脏组织学形态。

4.实时定量pcr方法检测心脏anp及bnpmrna表达水平。

二、实验结果

1.dyz-9逆转iso诱导的心肌肥厚。iso处理2周后，显著增加hw，hw/bw，ivsd，lvpwd，lvmass，这些都被高剂量dyz-9治疗组逆转(见图1、表1)。

表1：各组间心脏重量及心脏室壁厚度对比

注：hw＝心脏重量，bw＝体重，ivsd＝室间隔厚度，lvpwd＝左室游离壁厚度，lvmass＝左室重量指数。

#：相较control组，p<0.05；*相较iso，p<0.05。计量资料用表示，p<0.05认为差异具统计学意义。

2.心脏h&e染色同样也提示，同iso组相比，高剂量dyz-9治疗组可以显著改善心脏的大小及心肌纤维的横截面积(见图2a，b)。

3.dyz-9能逆转iso处理后小鼠心肌组织中anp、bnp的mrna表达的升高(见图3)。

实施例2：离体心肌细胞肥大模型的建立和dyz-9抗心肌肥厚作用机制的研究

一、材料与方法

1.选用iso(10μm)体外刺激大鼠心肌细胞系(h9c2)建立离体心肌细胞肥大模型。治疗组dyz-9(20μm，50μm，100μm)与iso共孵育24h。

2.α-sma免疫荧光观察h9c2细胞形态。

3.实时定量pcr方法检测h9c2细胞的anp及bnp的mrna表达水平。

4.westernblot检测p-akt，akt，p-creb，creb蛋白表达水平。

二、实验结果

1.免疫荧光α-sma检测提示iso刺激可使h9c2细胞体积明显增大，而dyz-9可以使其逆转(图4a，b)。

2.正常对照组相比，iso(10μm)可显著升高h9c2中anp、bnp的mrna表达水平。dyz-9组可显著改善iso导致的anp及bnp表达水平的升高(图5)。

3.iso刺激后可使akt、creb的磷酸化水平显著升高，而使用dyz-9治疗后逆转了akt和creb的磷酸化水平(图6a，b)。

实施例3：dyz-9作用靶标在整体动物水平的验证

一、材料与方法

选用8周龄雄性icr小鼠，持续皮下泵入药物异丙肾上腺素及给予dyz-9(1、10mg/kg/day)一天一次腹腔注射，共持续2周处死后，使用westernblot检测小鼠p-akt，akt蛋白表达水平。

二、实验结果

dyz-9治疗可显著逆转iso导致小鼠心脏组织中akt和creb的磷酸化水平的升高(图7a，b)。

本发明提供了dyz-9在制备抗心肌肥厚产品中的应用的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。